姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞表达Survivin、Bcl-2、Bax的影响

为探讨姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的抑制生长和诱导凋亡的作用机制,应用MTT法检测姜黄素对肿瘤细胞的杀伤效应;用流式细胞术（FCM）分析姜黄素作用后肿瘤细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR方法检测Survivin、Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果表明：姜黄素明显抑制RPMI8226细胞的增殖,并表现为时间、剂量依赖性,24、48小时IC50值分别为12.15μmol/L、4.9μmol/L;凋亡率由10.6%增加到36.9%（p〈0.05）,细胞发生G2/M期阻滞;RPMI8226细胞细胞强表达Survivin、Bcl-2,弱表达Bax。RPMI8226细胞经10μmol/L姜黄素处理24小时后,survivin、Bcl-2 mRNA表达下调,而Bax表达上调。结论：姜黄素抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226增殖,并诱导凋亡。姜黄素的抗瘤机制可能与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2、bax在转录水平的调节有关。     

TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响

本研究旨在观察TIEG1对HL-60细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响。用不同浓度的TIEG1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用12.03 ng/ml TIEG1处理HL-60细胞,以流式细胞术检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测Bcl-2及Bax的表达变化。结果表明,TIEG1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。TIEG1 12.03 ng/ml增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势(P<0.05)。结论:TIEG1可以抑制HL-60细胞增殖,进而诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TIEG1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,Bcl-2/Bax与TIEG1诱导HL-60细胞凋亡相关。     

姜黄素诱导Hep-2细胞凋亡及其对细胞周期各时相的影响

目的探讨姜黄素对Hep-2（人喉癌细胞株）细胞诱导分化机制，为喉癌治疗提供理论依据。方法应用MTT（塞唑兰）比色法和流式细胞仪检测Hep-2细胞增殖抑制率及细胞周期各时相的变化和凋亡率，并通过电子显微镜观察经姜黄素诱导分化后的亚细胞结构改变。结果姜黄素对Hep-2细胞增殖有明显的抑制作用，且呈剂量依赖性，流式细胞仪分析，G1期细胞增多，S期细胞减少，C2／M期细胞相对增多，亚细胞结构、细胞空化，染色质趋边凝集。结论姜黄素能够抑制Hep-2细胞增殖，阻止G1期细胞向S期的进程，促进Hep-2细胞凋亡。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

大蒜素对膀胱癌细胞增殖和B细胞淋巴瘤-2表达的影响

目的探讨大蒜素对膀胱癌BIU-87细胞的增殖及B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响。方法用不同浓度的大蒜素处理膀胱癌BIU-87细胞36h,以噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bcl-2 mRNA的表达,蛋白免疫印迹技术检测Bcl-2蛋白表达的变化。结果与对照组比较,经大蒜素处理的BIU-87细胞的生长抑制率增加(P0.05),且效应呈浓度和时间依赖性(P0.05);大蒜素处理细胞后,BIU-87细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白质的表达水平下调(P0.01)。结论大蒜素能抑制BIU-87细胞的增殖,且呈剂量和浓度依赖性,其机制可能与大蒜素下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达有关。     

姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的：探讨姜黄素对人急性髓系白血病细胞株K562增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：取对数生长期人急性髓系白血病K562细胞,用MTT法测定细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR法和Western blot分别检测Bax、BCL-2和Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果：姜黄素10、20和40μmol/L组培养24 h和48 h细胞增殖抑制率均高于对照组（姜黄素0μmol/L）,且细胞增殖抑制率呈浓度-时间依赖性（r=0.879,r=0.914）。姜黄素10、20和40μmol/L组G0/G1细胞比例和细胞凋亡率均高于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.856,r=0.782）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax和Caspase-3 mRNA表达高于对照组,而BCL-2 mRNA表达低于对照组,且呈药物浓度依赖性（r=0.861,r=0.748,r=-0.817）。姜黄素10、20和40μmol/L组Bax蛋白表达灰度值高于对照组,而BCL-2和Caspase-3蛋白表达灰度值低于对照组,且呈药物浓度依赖...     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

左旋棉酚体外诱导人前列腺癌LNCaP细胞凋亡的研究

目的研究左旋棉酚对人前列腺癌LNCaP细胞体外增殖和凋亡的影响。方法 MTT法检测左旋棉酚对LNCaP细胞增殖的影响,透射电镜观察细胞超微结构的改变,TUNEL染色观察细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期的改变,半定量RT-PCR检测Bcl-2及BakmRNA的表达水平。结果左旋棉酚在体外能显著抑制LNCaP细胞增殖,呈浓度-时间依赖性。左旋棉酚可以诱导LNCaP细胞发生典型的凋亡形态学改变和G0/G1期阻滞。RT-PCR显示Bcl-2mRNA表达水平降低,BakmRNA表达水平升高。结论左旋棉酚在体外能诱导前列腺癌细胞凋亡,其主要原因可能与BakmRNA的表达升高及Bcl-2mRNA的表达下调有关。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

姜黄素对人骨肉瘤MG-63细胞生长抑制及对MAPK基因调控作用的探讨

目的研究姜黄素对人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,并检测对骨肉瘤细胞中MAPK基因表达的调控作用,初步明确姜黄素对骨肉瘤细胞的作用机制。方法以人骨肉瘤细胞株MG-63为研究对象,采用不同剂量姜黄素处理。MTT法检测5、10、15、20、25、30、35、40、50μmol/L姜黄素作用24、48、72h对细胞的毒性作用;Transwell小室侵袭试验法检测5、10、15μmol/L姜黄素对细胞的侵袭能力,黏附试验法检测对细胞的黏附能力;Western blot法检测5、10、15μmol/L姜黄素作用后MAPK蛋白表达水平的影响,RT-PCR法检测对细胞中MAPK基因mRNA转录水平的影响。结果姜黄素(浓度15μmol/L,作用时间24h)对骨肉瘤细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性,浓度≤15μmol/L,作用时间为24h时,对骨肉瘤细胞无明显毒性作用;细胞侵袭能力和黏附能力随着姜黄素浓度的增加而逐渐降低,以15μmol/L姜黄素浓度处理效果最明显(P0.05);姜黄素可明显抑制MAPK基因mRNA转录水平,其抑制作用与剂量呈高度依赖性(P0.05)。结论姜黄素可以通过调控MAPK基因表达降低人骨肉瘤细胞株MG-63的侵袭性。     

吲哚美辛对喉癌细胞Hep-2增殖与凋亡及COX-2蛋白表达的影响

目的探索吲哚美辛对喉癌细胞增殖与凋亡的作用以及对细胞COX-2蛋白表达的影响。方法Hep-2细胞暴露于含吲哚美辛（125，250，500μM）的培养基中，培养24小时，用MTT方法检测各组药物与溶剂对照组相比对细胞增殖的影响；用台盼蓝染色法检测吲哚美辛对细胞活力的影响；吖啶橙染色法观察吲哚美辛（250μM）对细胞形态的影响；流式细胞仪分析法检测吲哚美辛（250μM）对细胞周期和细胞凋亡的影响，Western blot检测吲哚美辛对细胞COX-2蛋白表达的影响。结果吲哚美辛使Hep-2细胞增殖及细胞活力明显降低，细胞形态发生明显变化，细胞质萎缩而细胞核相对较大，S期细胞分数明显增加，细胞出现凋亡峰，而COX-2蛋白表达量增加。结论吲哚美辛强烈抑制Hep-2细胞增殖与细胞活力，明显改变细胞初始形态，阻滞细胞从S期向G2／M期转化，并诱导其凋亡，吲哚美辛对Hep-2细胞的上述作用机制与COX-2的特异性抑制途径无关。     

氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂诱导C6细胞损伤的作用

目的探讨氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂(DDP)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤中的作用。方法应用MTT法检测C6细胞的生存率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax及ClC-3的mRNA表达;Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Cyt-C的蛋白水平。结果与对照组相比,NPPB组C6细胞生存率、Bax/Bcl-2比值、ClC-3 mRNA及Cyt-C蛋白表达无明显变化;DDP组C6细胞生存率明显下降(P<0.05),ClC-3 mRNA表达降低,Bax/Bcl-2比值及Cyt-C蛋白表达明显增高。而DDP与NPPB联合组C6细胞生存率与DDP组相比明显增高,ClC-3 mRNA表达增高,Bax/Bcl-2比值呈下降趋势,Cyt-C蛋白表达明显降低。结论氯离子通道阻断剂NPPB可能通过降低Bax/Bcl-2比值,抑制Cyt-C的释放而拮抗DDP对肿瘤细胞增殖的抑制作用。     

沉默Survivin基因对鼻咽癌CNE1细胞增殖和凋亡的研究

目的：探讨 Survivin表达降低时,对鼻咽癌细胞的增殖及凋亡的影响。方法运用 RNA 干扰技术,结合 RT-PCR,Western blot技术,观察干扰 Survivin效果。干扰 Survivn后用 MTT法和 TUNEL法检测鼻咽癌细胞增殖,凋亡的情况。用 Western-blot方法检测凋亡相关蛋白 PARP,Bcl-2和Bax的表达。结果 RT-PCR检测显示 Survivin-siRNA干扰组,Survivin mRNA表达明显下调,其相对表达量为0.26±0.02,抑制率为43.7％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Western blot检测显示 Survivin-siRNA组蛋白表达下调,其蛋白相对表达量下降了57％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;MTT检测显示 Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用,在24,48和72 h的抑制率分别为21.9％,37.1％和29.6％,与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）;Tunel染色结果显示 Survivin-siRNA组细胞凋亡数明显增高。Western blot结果显示Survivin-siRNA组凋亡蛋白PARP（89KD）显著升高,为对照组的3.9倍,抑制凋亡蛋白Bcl-2降低,降低了70％,促进凋亡蛋白Bax升高,为对照组的2.4倍;同时也抑制AKT的磷酸化,磷酸化水平降低了57％,与对照组相比以上结果差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论干扰 Survivin表达,抑制鼻咽癌细胞增殖,促进细胞凋亡。Survivin基因可成为鼻咽癌基因治疗的一个潜在靶点。     

Curcumin induces G0/G1 arrest and apoptosis in hormone independent prostate cancer DU-145 cells by down regulating Notch signaling

ObjectiveCurcumin as an effective anticancer bioactive extract has been proved to induce apoptosis in many cancer cells. Notch signaling regulates prostate cancer apoptosis, but it is still unknown whether curcumin induces apoptosis in DU-145 cells by regulating Notch pathway. The aim of this study was to investigate the effect of curcumin on regulating Notch signaling and provide basic data for using curcumin in prostate cancer therapy.MethodsNotch pathway signal related proteins Notch 1, Jagged-1 and NICD were detected using Western blotting and RT-PCR. The proliferation and apoptosis were determined by MTT method and Elisa kits after curcumin treatment, respectively. Dual-Luciferase Reporter Assay was carried out to confirm that curcumin could target Notching signaling. In order to study whether Notch 1 expression could be downregulated by curcumin, Notch 1 siRNA and Notch 1 plasmid were used in Notch 1 down-regulation and over-expression. The effects of curcumin on cell cycle distribution and apoptosis related proteins expression were analyzed by flow cytometry and western blotting, separately.ResultsWe found that Notch 1 signaling was down regulated in Notch 1 siRNA or Notch 1 plasmid transfected 145 cells after curcumin treatment. Curcumin induced G0/G1 arrest in DU-145 cells, and G0/G1 phase related regulatory factors Cyclin D1 and CDK2 expressions were inhibited. Meanwhile, p21 and p27 were up regulated. The apoptosis related protein p53 expression was increased, and apoptosis suppressor Bcl-2 was inhibited in DU-145 after curcumin treatment. Additionally, Caspase-3 and Caspase-9 were activated by curcumin.ConclusionCurcumin induced apoptosis and G0/G1 arrest in DU-145 cells by down regulating Notch signaling.     

硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1诱导凋亡作用及其对Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达影响

本研究探讨蛋白酶抑制剂硼替佐米对急性单核细胞白血病细胞株SHI-1增殖和凋亡的影响及Bcl2112、Bcl-2和Bax基因在其中的作用。用MTT比色法观察硼替佐米对SHI-1细胞的生长抑制作用，用Annexin—V标记、线粒体跨膜电位（△ψm）和DNA凝胶电泳分析细胞凋亡，用RT—PCR方法检测0、6，12和24小时Bcl2112、Bcl-2和Bax基因表达。结果表明，硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制SHI-1细胞生长，24小时和48小时半数抑制浓度分别为54．13nmol／L和5．45nmol／L；硼替佐米能够诱导SHI-1细胞凋亡，在6小时Annexin-V阳性细胞就开始增高并呈时间依赖性，ACm减低，形态学可见明显细胞核凝聚、固缩和碎裂，DNA凝胶电泳显示DNA片段化；RT-PCR显示，Bcl2112表达增高，Bcl-2表达减低，但Bax表达无明显改变。结论：硼替佐米抑制SHI-1细胞增殖，并可能通过上调Bcl2112基因和下调Bcl-2基因，使线粒体膜电位下降而促使SHI-1细胞发生凋亡。