外照射对体外培养的小细胞肺癌细胞系的总RNA及多药耐药基因的影响

目的 观察分次外照射对NCI－H446小细胞肺癌细胞系的总RNA及其MDR1基因的影响。方法 采用GWGP80型远距离^60Co治疗机对进入指数生长期的NCI－H446小细胞肺癌细胞系进行分次外照射，每次Cy，总剂量为50Gy。用Trizol分别提取未照射和已完成全部外照射剂量的NCI－H446细胞系的总RNA。通过RT－PCR，琼脂胶电泳，应用Gelbase电脑软件计算电泳条带的平均光密度值（光密度值愈大，表示产物愈多），求两组细胞的MDR1DNA与其β-actin DNA的平均光密度 比来确定两组细胞MDR1mRNA表达的高低。结果 在相同细胞数和相同体积的条件下，未照射组和照射组细胞总RNA的浓度分别为25．9μg/ml和16．6μg/ml；未照射组细胞其MDR1DNA/β-actin DNA为1．078，照射组为1．338。结论 对NCI－H446小细胞肺癌细胞系进行外照射可抑制其总RNA的生物合成；同时可提高其MDR1mRNA的表达水平。     

慢分割外照射对体外培养的小细胞肺癌细胞系放射敏感性的影响

目的：观察外照射前后NCI－H446小细胞肺癌细胞系放射敏感性的变化以及在外照射干扰下两组细胞生长和凋亡的特点。方法：采用GWGP80型远距离^60Co治疗机对进入指数生长期的NCI－H446小细胞肺癌细胞系进行分数外射，每次2Gy，总剂量为50Gy。然后对未进行过外照射的NCI－H446细胞和已完成了50Gy外照射的NCI－H446细胞再给予不同剂量的外照射，1周后计算各自的集落形成率和存活率；另外，对相同数量的未进行过外照射的MCI－H446细胞和已完成了50Gy外照射的NCI－H446细胞给予同一剂量的外照射，于照射后的不同时间点计算细胞总数和死亡细胞百分率，做出细胞生长曲线和死亡率曲线。结果：未进行过外照射的NCI－H446细胞和已完成了50Gy外照射的NCI－H446细胞的集落形成率分别为44．67％和13．11％，其差异具有非常的显著性（P＜0．01）；在分别给予2Gy和4Gy的外照射后，已完成了50Gy qh jvkotmdfr NCI-H446细胞的存活率分别为79．67％和23．73％，而未进行过外照射的NCI－H446细胞的存活率分别为51．24％和19．40％，其差异具有显著性（P＜0．05）。在外照射后的相同时间点，两组细胞的细胞总数和死亡细胞百分率相差无显著性（P＞0．05）。结论：经50Gy的外照射后，NCI－H446细胞的自然生存能力明显下降，同时其放射敏感性也有所下降；两组细胞在外照射的干扰下，其生长和凋亡的速率较为接近。     

维拉帕米对外照射导致的小细胞肺癌细胞系耐药性的逆转作用

目的 观察维拉帕米对分次外照射引发的小细胞肺癌细胞系NCI-H446耐药性的逆转作用.方法 采用GWGP80型远距离60Co治疗机对进入指数生长期的NCI-H446细胞进行分次外照射,总照射剂量为50Gy.用不同浓度的丝裂霉素(MMC)干扰,观察外照射前后NCI-H446细胞存活率的变化;同时观察在上述干扰条件不变的前提下,加入逆转剂维拉帕米后其存活率的变化.结果 在相同浓度MMC干扰下,照射组细胞的存活率均明显高于未照射组(P＜0.01);加入逆转剂维拉帕米后,两组细胞的存活率差别不大(P＞0.05)或者照射组细胞的存活率反而明显低于未照射组(P＜0.01).结论 经逆转剂维拉帕米作用后,照射组细胞的耐药性几乎完全被逆转甚至对MMC更敏感.     

外照射对体外培养的小细胞肺癌细胞系药物敏感性的影响

观察分次外照射对小细胞肺癌NCI H44 6细胞系药物敏感的影响并探讨其机制。采用GWGP80型远距离6 0 Co治疗机对进入指数生长期的NCI H44 6细胞进行分次外照射 ,每次 2Gy,总剂量为 5 0Gy。通过不同浓度丝裂霉素的干扰来观察外照射前后NCI H44 6细胞存活率的变化。结果显示 ,在相同浓度丝裂霉素的干扰下 ,照射组细胞的存活率均明显高于未照射组 (P <0 0 1)。提示对小细胞肺癌细胞系NCI H44 6进行外照射可抑制其总RNA的生物合成 ,提高其MDR1mRNA的表达水平 ;同时明显降低其对化疗药物的敏感性     

介入治疗对耐药基因在原发性肺癌表达的影响

目的 探讨介入治疗对耐药基因在原发性肺癌表达的影响。方法 通过支气管镜和手术获得未行化疗和进行过介入治疗的肺癌标本共118例。小细胞癌（SCLC）26例，非小细胞癌（NSCLC）92例（鳞癌48例，腺癌44例）；其中，非化疗组50例；单纯行支气管动脉灌注化疗药物的非栓塞组28例；应用碘油抗癌药乳剂栓塞支气管动脉的栓塞组40例。运用免疫组织化学两步法检测各组标本中的鼠抗人P－糖蛋白（PgP)和谷胱甘肽硫转移酶－π（GST－π）的阳性率。结果 非化疗组的PgP与GST－π的阳性率分别为32．0％与34．0％，非栓塞组分别为75．0％与78．6％；栓塞组则分别为50．0％与52．5％。非化疗组与非栓塞组的PgP与GST－π阳性率差异均有非常显著性意义（P＜0．01）。非化疗组与栓塞组的PgP与GST－π阳性率差异均无显著性意义（P＞0．05）。在NSCLC中分化程度高的I级癌细胞的耐药基因的表达高于分化程度低的Ⅱ、Ⅲ级癌细胞（P值均＜0．01）。结论 检测癌组织中的PgP与GST－π对肺癌化疗的个体化方案制定有重要的指导意义，支气管动脉灌注化疗可使肺癌多药耐药性的阳性表达率增高，碘油抗癌药乳剂栓塞支气管动脉对癌细胞耐药性产生的诱导性较小。     

放疗对广泛期小细胞肺癌预后影响的多因素分析

目的探讨影响广泛期小细胞肺癌（SCLC）放疗后预后的各种相关因素。方法回顾性分析63例广泛期SCLC放疗后患者的临床资料并随访,采用Cox模型行多因素分析。结果63例患者的1年生存率为39．89％,2年生存率11．81％,中位生存期为10．77个月。单因素分析显示患者KPS评分、是否脑转移、有无接受胸部放疗、接受化疗周期数对患者的生存期有影响。多因素分析显示接受化疗周期数、有无接受胸部放疗、KIPS评分是预测预后的独立因素。结论未发生脑转移、化疗周期数≥4、接受过胸部放疗、KPS评分≥80分均提示广泛期SCLC患者的预后较好。     

顺铂诱导人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI-H446/CDDP的建立及其生物学特征分析

目的　建立人小细胞肺癌多药耐药细胞系 ,鉴定其细胞生物学特性。方法　以顺铂为诱导药物 ,人小细胞肺癌细胞系NCI H4 4 6为诱导对象 ,采用首次大剂量冲击和逐步增加剂量结合的方式 ,建立人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI H4 4 6 /CDDP。细胞计数法绘制生长曲线 ,计算其倍增时间 ;MTT法测定细胞IC50 ,计算其耐药指数 ;光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察其形态。结果　经过 8个月的诱导 ,成功建立了人小细胞肺癌多药耐药细胞系NCI H4 4 6 /CDDP ;生长曲线测定结果表明 ,亲代和耐药细胞增殖速度接近 ,其倍增时间分别为 4 0 72h和 4 1 80h;流式细胞仪检测细胞周期发现 ,耐药细胞系中S期细胞所占比例为 2 0 2 4 % ,亲代细胞系中S期细胞所占比例为18 4 2 % ,二者比较差异有统计学意义 (P <0 0 5 ) ,而G0 /G1和G2 /M期细胞无显著性变化 ;MTT结果表明 ,耐药细胞系对顺铂、羟基喜树碱、长春新碱、5 氟尿嘧啶和拓扑替康等 5种化疗药物有不同程度的耐受性 ,其耐药指数分别为 85 0 0、4 2 75、6 0 2 8、2 4 31、12 4 7;细胞超微结构显示 ,耐药细胞较其亲代体积增大 ,核浆比例降低 ,线粒体、高尔基体、粗面内质网和游离核糖体增多 ,细胞表面指状突起增多。结论　NCI H4 4 6 /CDDP细胞生物学性状稳定 ,是一     

FEV1/FVC对局限期小细胞肺癌预后的影响

 目的 探索FEV₁/FVC对于局限期小细胞肺癌的预后影响。方法 采取回顾性分析对西安交通大学医学院第一附属医院及武警陕西总队医院2012-01至2015-03收治的小细胞肺癌患者 109例,均经EP方案化疗及放疗,治疗前测量肺功能,分为实验组(FEV₁/FVC＜0.70)及对照组(FEV₁/FVC≥0.70),评价FEV₁/FVC与临床因素,生存期及其影响因素的相关性。结果 FEV₁/FVC与患者死亡(P=0.008),小细胞肺癌的局部进展(P=0.018)及远处转移(P=0.025)均有密切的相关性,FEV₁%与患者死亡有一定相关性。单因素分析发现,化疗周期、FEV₁%、FEV₁/FVC对局限期小细胞肺癌的总生存期有明显影响,差异具有统计学意义(P＜0.05)。多因素分析发现化疗周期、FEV₁/FVC是影响局限期小细胞肺癌总生存期的独立影响因素。年龄、化疗周期、FEV₁%及FEV₁/FVC对局限期小细胞肺癌的无进展生存期有明显影响,差异具有统计学意义(P＜0.05)。多因素分析结果显示:化疗周期及FEV₁/FVC是影响局限期小细胞肺癌无进展生存期的独立影响因素(P＜0.05)。实验组(FEV₁/FVC＜0.70)总生存期明显缩短,两者比较差异具有统计学意义(χ²=5.429,P＜0.05)。结论 治疗前肺功能FEV₁/FVC可能是评价局限期小细胞肺癌患者预后的良好指标。     

治疗后生存状态变化对Ⅳ期非小细胞肺癌化疗同期三维放射治疗生存的影响

目的 探讨Ⅳ期非小细胞肺癌（NSCLC）同期放化疗后生存状态（karnofsky performance status of posttreatment,KPSpost）变化对生存的影响及其相关因素。方法 322例中纳入分析279例,病理学确诊的初治Ⅳ期NSCLC,其中男性198例、女性81例;鳞癌166例、腺癌87例、未分型22例;中位年龄58岁（22~80岁）;完成化疗≥2个周期同期原发肿瘤剂量≥36 Gy治疗。Kaplan-Meier法并Log-rank检验和Cox回归模型进行总生存（OS）的单因素和多因素分析,χ²检验及Logistic回归分析探讨KPSpost的相关因素。结果 KPSpost改善198例、降低81例。单因素及多因素分析均显示KPSpost改善,生存期延长。χ²检验和logistic回归多因素分析均显示KPSpost改善与完成化疗4~6个周期同期原发肿瘤剂量≥63 Gy、获得近期疗效呈正相关,与血小板不良反应、放射性食管炎分级呈负相关。结论 Ⅳ期非小细胞肺癌同期放化疗KPSpost是OS的独立影响因子。化疗4~6个周期同期原发肿瘤剂量≥63 Gy、近期疗效获益有利于KPSpost改善,3~4级的血小板不良反应和放射性食管炎显著降低KPSpost。     

局部晚期非小细胞肺癌体部伽玛刀治疗剂量调整的临床价值

目的在等效生物学剂量的原则下,观察局部晚期非小细胞肺癌体部伽玛刀治疗剂量调整后的疗效、生存情况。方法2001年12月～2003年6月期间收治的158例局部晚期非小细胞肺癌患者于我科行全身伽玛刀治疗。治疗中根据患者年龄、临床卡氏评分、肿瘤侵及范围、背景健康因素、治疗中副反应进行剂量调整,对于肉眼肿瘤范围≤60cm3、临床卡氏评分≥80分,没有明确的心肺基础疾病者治疗剂量每次4～5.5Gy,共计8～10次;60cm3<肉眼肿瘤范围<100cm3,70分<卡氏评分<80分,无或有轻度的心肺基础疾病者治疗剂量每次3.5～4.2Gy,共计10～12次;肉眼肿瘤范围体积≥100cm3,60分≤卡氏评分≤70分,无或有轻度心或肺基础疾患病史者,治疗剂量每次3～3.5Gy,共计12～14次;每天或隔天治疗,所有患者均完成全程治疗,随访12～24个月。结果治疗后3个月复查计算机体层摄影术或核磁共振成像显示病灶总有效率(完全缓解+部分缓解)82%。全组1、2年生存率分别为52.5%、30.4%;毒性反应:Ⅰ+Ⅱ级急性放射性肺炎发生率8.2%(13/158),Ⅲ级为1.9%(93/158);Ⅰ+Ⅱ级急性放射性食管炎发生率17.7%。随访过程中未发现严重并发症。结论根据瘤体肿瘤范围、结合临床卡氏评分和所做的剂量调整,在局部晚期非小细胞肺癌体部伽玛刀治疗中,对确保治疗完成,剂量到位,器官组     

人HUT78细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

为了检测人HUT78细胞是否存在褪黑素受体（melatonin receptor,MR)及其亚细胞分布特点，采用异硫氢酸胍－苯酚－氯仿一步法抽提总RNA，进一步通过RT－PCR方法检测MR亚型mt1和MT2的mRNA，并将RT－PCR的阳性产物通过自动测序仪测序；同时应用免疫组化染色方法检测mt1和MT2受体亚型蛋白在HUT78细胞内的分布特点，RT－PCR方法则得到了368bp mt1 cDNA片段，无321bp MP2 cDNA片段，同时将mt1阳性条带通过胶回收，测序，结果显示扩增产物与人mt1受体亚型的基因序列相吻合，免疫组化结果显示，人HUT78细胞存在mt1受体蛋白，主要分布于细胞膜和细胞浆，呈棕褐色阳性颗粒，而细胞上未见阳性颗粒，MT2受体蛋白则未检出，提示褪黑素（melatonin,Mel)对T淋巴细胞具有直接调节作用，为研究生理及病理情况下Mel调节免疫系统的作用机制奠定了基础。     

PPMP调控KBv_(200)细胞株mdr1基因表达逆转其多药耐药

为研究糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇 (DL threo 1 phenyl 2 palmitoylamino 3 morpholi no 1 propanol·HCl,PPMP)对人恶性肿瘤多药耐药细胞株KBv2 0 0 多药耐药mdr1基因的mRNA表达的调控 ,以及PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药性的逆转作用 ,作者应用体外细胞培养技术对细胞株KBv2 0 0 进行PPMP处理 ,用RT PCR技术分析PPMP处理前后细胞mdr1的mRNA表达 ,以流式细胞仪检测PPMP处理前后KBv2 0 0 及其敏感株KB细胞内罗丹明 12 3的药物浓度变化。结果显示 5 μmol/L、15 μmol/LPPMP可部分抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ,2 5 μmol/LPPMP可完全抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ;PPMP可增加KBv2 0 0 细胞内罗丹明荧光强度 ,随着PPMP浓度的增加 ,耐药细胞内的罗丹明荧光强度逐渐增大。提示PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药基因mdr1有抑制作用 ,并可以逆转KBv2 0 0 的多药耐药性 ,逆转作用与PPMP浓度呈正相关     

HA表位标记的人Axud1基因的构建及在肺腺癌SPC-A1细胞中的表达

构建在哺乳动物细胞中表达的血凝素HA表位标记的人Axud1融合蛋白表达载体。RT PCR从人外周血淋巴细胞中扩增Axud1全长cDNA ,用含HA序列的特异引物PCR扩增HA Axud1,经BamHⅠ、XbaⅠ酶切后插入到经BamHⅠ、XbaⅠ酶切的真核表达载体pcDNA3 .1( ) 中 ,重组质粒PCR、酶切和测序鉴定正确 ,最后将该质粒转染入肺腺癌SPC A1细胞中 ,Westernblot检测HA Axud1融合蛋白的表达。结果显示 ,筛选的G418抗性克隆SPC A1细胞中均有HA Axud1融合蛋白的表达 ,为进一步研究Axud1蛋白在肿瘤细胞中的功能提供了一个重要工具     

锌带蛋白基因ZNRD1高表达胃癌细胞模型的建立

为建立高表达ZNRD1胃癌细胞模型，通过分子克隆技术将ZNRD1基因全长cDNA片段克隆入真核表达载体pcDNA3.1^ 的多克隆位点之间，对重组质粒进行酶切鉴定，经显微注射将重组质粒导入人胃癌细胞SGC7901，G418筛选后应用Nothern blot检测ZNRD1基因的表达。结果经酶切鉴定证实正确地构建了真核表达质粒，转染SGC7901细胞后获得有效表达。表明已成功地构建ZNRD1基因真核表达载体，并经显微注射法建立了高表达锌带蛋白基因ZNRD1的胃癌细胞模型，为深入研究ZNRD1的作用和机制奠定了基础。     

肝叶部分切除术后肝细胞DNA合成及细胞周期变化的实验研究

肝叶部分切除术后肝细胞ＤＮＡ合成及细胞周期变化的实验研究６３００３８重庆第三军医大学西南医院陈平，韩本立，陈娟，段恒春关键词肝再生；肝叶切除术；ＤＮＡ；细胞周期中国图书资料分类号Ｒ６５７．３肝脏再生是肝叶部分切除术后最基本的病理过程。但目前对再生肝细...     

呼吸道合胞病毒M2-1基因表达对人肺腺癌PAa细胞生长的影响

探讨呼吸道合胞病毒（RSV）M2－1基因在人肺腺癌PAa细胞的表达及对其生长的影响。重组真核质粒PXJ－41／M2－1转染肺腺癌PAa细胞,应用RT－PCR,Western blot方法检测表达。通过MTT生长曲线、流式细胞光度术、细胞贴壁能力、集落形成、接种裸鼠等,观察PAa细胞体内外生长变化。结果显示：（1）转染阳性重组子经双酶切及RT－PCR扩增可见目的区带。（2）Western blot检测可见特异性条带;（3）PAa/M2-1细胞S期下降,G2／M期增加;贴壁能力下降,集落形成率增高,集落细胞数增多;（4）PAa/M2-1细胞成瘤时间晚,但生长速度快,瘤组织由腺癌向鳞癌分化。提示M2－1基因可能促进PAa细胞生长,为下一步研究RSV与肺癌的关系提供了有力证据。     

胃癌中MTS1／p16和p53蛋白表达与细胞增殖的关系

应用免疫组织化学S－P法研究50例胃癌组织中p16蛋白和p53的表达情况,并进行增殖细胞核核原（PCNA）检测,计算细胞增殖指数（PI）。结果表明,50例胃镜组织中p16蛋白和p53蛋白阳性率分别为64％和60％。p16蛋白表达：高分化胃癌明显高于低分化胃癌（P＜0.01）,淋巴结转移阳性组明显低于阴性组（P＜0.01）,PI分组I级明显高于III、IV级 （P＜0.01）,存活期＜3年者明显高于阴性组（P＜0.05）。PI分级I级明显低于III、IV级（P＞0.05）,存活期＜3年患者明显高于＞3年患者（P＜0.05）。p16低表达与p53过表达之间未见明显相关（P＞0.05）。结果提示p16蛋白低表达和p53蛋白过表达均有促进胃癌细胞增殖作用,且与胃癌细胞分化有关,可作为判断肿瘤生物学行为和患者预后的参考指标之一。