丙泊酚抑制去甲肾上腺素诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度升高作用的机理

用荧光分光光度法及同位素放射免疫分析法检测丙泊酚(30-300 μmol·L^-1)影响大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)与肌醇-1,4,5-三磷酸(IP₃)合成作用,以探讨丙泊酚舒张肺动脉平滑肌的作用机理.结果表明,与丙泊酚共同培养72 h,对PASMC ［Ca²⁺］_i 基础水平无明显影响,但可浓度依赖性抑制去甲肾上腺素(NE 3 μmol·L^-1)引起的［Ca²⁺］_i升高作用;当细胞外液无钙或存在钙通道阻滞剂维拉帕米(30 μmol·L^-1)时,丙泊酚抑制NE升高［Ca²⁺］_i作用被增强;丙泊酚还可浓度依赖性抑制NE促进 IP₃合成作用. 结果提示丙泊酚舒张血管平滑肌作用与抑制IP₃介导的细胞内钙释放密切相关.     

细胞内游离钙在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的　研究 3 羟 3 甲戊二酰辅酶A (HMG CoA)还原酶抑制剂辛伐他汀诱导血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的机制。方法　以荧光染料Fura 2 /AM负载后荧光分光光度计法检测细胞内游离钙浓度 ,以DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪PI/膜联蛋白 (an nexin)V染色及半胱天冬酶 3激活来检测细胞凋亡。结果　辛伐他汀 30 μmol·L- 1孵育VSMC后 ,细胞内游离钙浓度显著升高 ,6h时达对照的 3倍以上 (P <0 .0 1) ,维拉帕米 80 μmol·L- 1与辛伐他汀 30 μmol·L- 1共同孵育VSMC 6h后细胞内游离钙浓度为 (14 4± 34)nmol·L- 1(P <0 .0 1)。辛伐他汀可诱导细胞凋亡率增高、“DNA梯状”样改变及半胱天冬酶 3的激活 ,这些变化均可被维拉帕米所逆转。结论辛伐他汀通过使细胞外钙大量内流而诱导VSMC凋亡。     

肺动脉高压模型大鼠肺动脉平滑肌细胞内钙的改变

目的分析肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞Ryanod-ine受体[Ca2+]i释放功能的改变。方法腹腔注射野百合碱建立大鼠肺动脉高压模型,原代培养肺动脉平滑肌细胞,Fura-2/AM负载培养细胞,荧光测钙技术测量Ryanodine受体激动剂对[Ca2+]i变化的影响。结果10nmol.L-1Ry-anodine使对照组[Ca2+]i平均增加(93.31±12.41)nmol.L-1,使PAH组[Ca2+]i平均增加(141.71±13.59)nmol.L-1。两组样本[Ca2+]i增加的数值差异有显著性(P<0.01);10mmol.L-1Caffine使对照组[Ca2+]i平均增加(149.02±13.02)nmol.L-1,使PAH大鼠PASMC的[Ca2+]i平均增加(191.2±21.26)nmol.L-1,两组样本[Ca2+]i数值的变化差异有显著性(P<0.01)。结论肺动脉高压大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞对Ryanodine受体激动剂的敏感性增强,提示肺动脉高压时Ryanodine受体释放[Ca2+]i的功能发生了异常改变。     

全反式维A酸对血管平滑肌细胞增殖,细胞内钙离子和氢离子含量的影响

全反式维Ａ酸对血管平滑肌细胞增殖，细胞内钙离子和氢离子含量的影响１余晨光章鲁２顾培坤３魏丕敬３金正均３（上海第二医科大学神经生物学教研室，２计算机室，３药理学教研室，上海２０００２５）血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ，...     

丹酚酸B镁抑制ATP和KCl诱导大鼠主动脉平滑肌细胞内钙的升高

目的研究丹酚酸B镁(M agnesium lithosperm ate B,MLB)对去内皮离体血管舒缩反应以及对血管平滑肌细胞内游离钙浓度[Ca2+]i的影响。方法去内皮大鼠胸主动脉血管环等张收缩实验和采用钙离子荧光指示剂F luo-3,运用F-4500阳离子测定系统动态检测胸主动脉平滑肌细胞[Ca2+]i。结果血管舒缩实验显示,无钙或常钙条件下MLB对血管基础张力均无作用。MLB 50~200μmol.L-1预给药组抑制无钙条件下苯肾上腺素(PE)1μmol.L-1诱导的血管收缩以及常钙条件下KC l 60 mmol.L-1诱导的血管收缩,并呈浓度相关性。而钙离子通道阻滞剂维拉帕米(Ver)10μmol.L-1则完全阻断KC l诱导的血管收缩。在复钙实验中观察到,MLB 50~200μmol.L-1不仅抑制PE 1μmol.L-1诱导的内钙依赖性血管收缩,而且对复钙后外钙依赖性的血管收缩也有抑制作用。细胞内钙测定实验表明,MLB预孵育的AVSMCs静息态[Ca2+]i没有变化。无钙条件下,MLB 50、100和200μmol.L-1抑制ATP20μmol.L-1诱导内钙释放引起的[Ca2+]i升高,抑制率分别为17.4%、32.4%和61.1%,显示较好的浓度相关性。AVSMCs于常钙条件下用Thapsigargin耗竭钙库后,KCl 60 mmol.L-1诱发外钙内流,引起[Ca2+]i升高,10μmol.L-1的Ver则能完全阻断这种外钙内流。在MLB预给药组,KCl诱导的[Ca2+]i升高降低,抑制率分别为20.0%、32.8%和52.6%。结论MLB能够抑制PE、高K+和复Ca2+诱导的血管收缩,并能抑制ATP和KCl诱导的血管平滑肌细胞内钙的升高,提示MLB对血管平滑肌细胞内钙的影响可能与抑制细胞内钙释放和电压依赖性钙通道有关。     

舒马曲坦对大鼠肺动脉平滑肌细胞的促有丝分裂作用

目的　观察 5 HT1B/1D受体激动剂舒马曲坦对肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)的促有丝分裂作用 ,探讨其作用机制和诱发肺血管构型重建的可能性。方法　分离培养大鼠PASMC ,用噻唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖 ,用流式细胞术法分析细胞周期和DNA合成。结果　MTT法检测 5 羟色胺 (5 HT) 0 .0 1,0 .1,1.0 μmol·L- 1可促进PASMC增殖 ,增殖率分别增加2 0 1% ,2 2 8%和 2 5 6 %。舒马曲坦 0 .0 1,0 .1,1.0μmol·L- 1可促进PASMC增殖 ,增殖率分别增加199% ,2 2 0 %和 2 4 5 %。流式细胞术分析 5 HT 0 .1和1.0 μmol·L- 1组的细胞增殖指数分别为 2 2 .2 %和2 5 .9% ,S期细胞分数分别为 7.2 %和 9.8%。舒马曲坦 0 .1和 1.0 μmol·L- 1组的增殖指数分别为2 1.2 %和 2 3.9% ,S期细胞分数分别为 6 .6 %和8.8% ,均较对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。 5 HT和舒马曲坦能够促进PASMC从G0 /G1期进入S期 ,5 HT的促有丝分裂作用可能有 5 HT1B/1D受体的参与。结论　舒马曲坦能促进PASMC的增殖。 5 HT1B/1D 受体在PASMC增殖和肺血管构型重建中有重要作用。舒马曲坦有致肺动脉高压的风险     

钾通道开放剂降低血管平滑肌细胞内游离钙浓度(英文)

目的:研究PCO—Pin,Nic,Lem及RP对VMSC内[Ca~(2 )]_i的改变及其可能机制。方法:VSMC加入Fura-2 AM 2.5μmol·L~(-1)37℃下孵育50min,[Ca~(2 )]_i用荧光分光光度计检测。结果:4种PCO能较弱地抑制K~ 30 mmol·L~(-1)诱导的[Ca~(2 )]_i增加,但明显抑制ATP 0.1mmol·L~(-1)诱导的[Ca~(2 )]_i峰相及持续相增加,且呈剂量依赖性。格列苯脲完全阻断Pin,Lem及RP的作用,只部分抑制Nic的作用。无钙液中先给4种PCO,能显著抑制ATP诱导的[Ca~(2 )]_i峰相增加。结论:4种PCO均抑制ATP诱导的[Ca~(2 )]_i增加,此作用与减少细胞外钙内流及细胞内钙释放有关。     

家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究

观察小檗胺 (Ber) 对高钾除极,Bay K8644,5-羟色胺 (5-HT) 及咖啡因升高细胞内钙水平 (［Ca²⁺］_i) 的影响。以Fluo-3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 (VSMC),共聚焦显微术测定［Ca²⁺］_i,结果以荧光强度(FI)表示. 结果：(1) 在细胞外钙为1.3 mmol·L^-1时, VSMC胞浆静息FI明显高于核区, 且不受Ber的影响. (2) Ber 10-100 μmol·L^-1预处理可抑制KCl 60 mmol·L^-1或Bay K8644 100 μmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i,抑制5- HT 1 μmol·L^-1升高［Ca²⁺］_i的持续相,但不影响［Ca²⁺］_i的一过性升高。维拉帕米10 μmol·L^-1具有相似作用. (3) 在无钙Hanks液中,Ber预处理对咖啡因100 mmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i无明显抑制作用。结果表明,Ber可阻断外钙内流,但不抑制内钙释放,这可能与Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关.     

小檗胺对ATP诱导的培养平滑肌及心肌细胞内游离钙动员的影响

目的:研究小檗胺(Ber)对ATP诱导的细胞内钙动员的作用。方法:以Fura 3-AM负载培养的VSMC和心肌细胞,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化。结果:(1)ATP使VSMC和心肌细胞内钙升高,但VSMC核区不明显。(2)Ber对静息荧光强度无影响,但降低ATP升高的胞内钙(P<0.01),Ber 100μmol·L~(-1)延长达峰值的时间(P<0.01),并不能完全抑制ATP升高的胞内钙。(3)在无外钙时,Ber对ATP诱导的胞内钙升高无抑制作用(P>0.05)。(4)Ber的作用与维拉帕米(Ver)相似。结论:ATP引起细胞外钙内流和内钙释放,Ber可阻断ATP引起的外钙内流,对其内钙释放无影响。     

Effects of superoxide anion on intracellular Ca~(2 ) concentration in rabbit pulmonary arterial smooth muscle cells

目的：研究超氧阴离子对兔肺动脉平滑肌细胞内钙的影响．方法：采用Ｆｕｒａ２测定酶分离的兔肺动脉平滑肌细胞内钙．结果：ＡＴＰ３０μｍｏｌ·Ｌ－１诱导平滑肌细胞内钙瞬时性增加．Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ引起平滑肌细胞内钙缓慢的增加．超氧阴离子作用于平滑肌细胞后，使ＡＴＰ诱导细胞内钙增加的持续相升高，在ＡＴＰ作用后５和１０ｍｉｎ的比值（Δｒａｔｉｏ５ｍｉｎ和Δｒａｔｉｏ１０ｍｉｎ）分别由００９１±００２２和００２１±００２０升高至０１４９±００４８和０１１７±００４７．但超氧阴离子对ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ诱导的细胞内钙变化没有明显的影响．结论：超氧阴离子延迟ＡＴＰ诱导的平滑肌细胞内钙瞬时性增加，而不影响钙的泄漏途径．     

醋柳黄酮对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响

目的 :探讨醋柳总黄酮 (TFH)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度 ([Ca2 ]i)的影响。方法 :采用新一代钙荧光探针Fluo 3 AM检测在高钾、去甲肾上腺素 (NE)、血管紧张素II(AngⅡ )刺激下单层兔主动脉平滑肌细胞内游离钙水平的改变 ,并与传统的钙拮抗剂Verapamil(Ver)进行对照研究。结果 :TFH(10 0mg·L-1)对静息状态的血管平滑肌细胞[Ca2 ]i 无明显影响 ;TFH(6 0～ 10 0mg·L-1)呈剂量依赖性抑制高K 去极化引起的 [Ca2 ]i 升高 ,与Ver作用相似 ,但弱于Ver ;TFH (80、10 0mg·L-1)对NE、AngⅡ通过受体介导引起 [Ca2 ]i 升高均具有明显的抑制作用 ;在无细胞外Ca2 存在下 ,TFH (80、10 0mg·L-1)对NE引起的 [Ca2 ]i 升高也具有一定程度的抑制效应。结论 :醋柳总黄酮通过对电压依赖性钙通道和受体操纵型钙通道双重抑制降低血管平滑肌细胞内游离钙水平 ,这可能是醋柳黄酮产生舒血管降压作用机制之一。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞培养及对不同类型激动剂刺激产生的反应

目的分离和培养SD大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCc）,并检测其功能状态。方法显微分离肺内小动脉,并在含胶原酶（1750 U&#183;mL^-1）和木瓜蛋白酶（9．5U&#183;mL^-1）的低钙HBSS溶液中酶解和培养PASMCs,采用动态细胞荧光成像技术检测PASMCs胞浆游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的变化。结果在18～24h内可获得PASMCs,并可观察到环匹阿尼酸和5-HT可引起PASMCs[Ca^2＋]i的升高效应。结论大鼠PASMCs一步酶消化法,方法简便实用。所分离的PASMCs细胞形态和功能正常,适用于动态细胞荧光成像技术检测实验及PASMCs信号转导功能的研究。     

左旋千金藤定碱对培养牛主动脉血管平滑肌细胞胞内游离Ca~(2+)的影响

目的：研究左旋千金藤定碱（ｌ－ｓｔｅｐｈｏｌｉｄｉｎｅ，ＳＰＤ）对血管平滑肌的作用。方法：采用Ｆｕｒａ－２和ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统测定培养牛主动脉血管平滑肌细胞内游离钙。结果：ＳＰＤ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１不影响静息［Ｃａ２＋］ｉ，但可剂量依赖地抑制高Ｋ＋引起的［Ｃａ２＋］ｉ增高，其ＩＣ５０为３９．６（９５％可信限２３．４～６７．１）μｍｏｌ·Ｌ－１，但其作用弱于尼群地平；ＳＰＤ１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１对去甲肾上腺素、血管紧张素Ⅱ、５－ＨＴ、ＡＴＰ引起的［Ｃａ２＋］ｉ增高也有明显的抑制作用；高浓度ＳＰＤ对无外钙时去甲肾上腺素引起的［Ｃａ２＋］ｉ增高也有一定的抑制作用。结论：左旋千金藤定碱对培养血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体调控性钙通道均有抑制作用；其对电压依赖性钙通道的抑制作用弱于尼群地平。     

埃他卡林对兔肺动脉平滑肌内皮细胞钙浓度的影响

目的观察埃他卡林(IPT)对内皮素1(ET-1)诱导培养的兔肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法应用细胞培养、氚-胸腺嘧啶核苷([3H]-TdR)参入实验、Fluo-3和激光扫描共聚焦显微镜技术评价IPT对ET-1诱导的兔PASMC增殖及PASMC[Ca2+]i调节的作用。结果ET-1(10-7mol.L-1)使PASMC[3H]-TdR参入量增加146.8%,与对照组比较,差异有显著性(P<0.01);在相同条件下,加入ET-1的同时,分别向培养基中加入IPT10-7、10-6、10-5mol.L-1,细胞[3H]-TdR参入量分别下降(19.8±4.6)%、(41.2±9.5)%、(54.7±10.1)%,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01);对照组PASMC[Ca2+]i荧光强度和荧光光密度值较低;ET-1组中[Ca2+]i荧光光密度值明显增高,从73.7±10.1增加到143.8±28.2,两者比较差异有显著性(P<0.01);而IPT组细胞内荧光光密度值明显降低,仅从74.30±10.2增加到86.03±9.82,与ET-1组比较差异有显著性(P<0.01)。结论IPT可明显抑制ET-1诱导的兔PASMC增殖、DNA合成;减少钙通道的开放时间,抑制细胞内Ca2+浓度增加。     

埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞［Ca2+］i， PKA和PKC活性的影响埃他卡林对大鼠尾动脉平滑肌细胞［Ca2+］i， PKA和PKC活性的影响

细胞内钙参与了对几乎所有类型细胞的各种生理活动的调节[1],并通过影响PKA和PKC等大分子蛋白,进一步调控细胞的分裂和增殖。以ATP敏感型钾通道(KATP)为靶点的钾通道开放剂(KCO)是一类新型的抗高血压药物[2,3]。KCO激活血管平滑肌KATP,间接抑制钙通道的开放,从而使[Ca2 ]i降低,