替米沙坦对大鼠急性心肌梗死后心肌成纤维细胞的影响

目的观察替米沙坦对大鼠急性心肌梗死(AMI)后梗死区和非梗死区的心肌成纤维细胞活化、增殖和心肌纤维化的动态影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支造成 AMI.术后24 h存活114只.随机分为 AMI 组和替米沙坦治疗组(治疗组),另设假手术组。治疗组于每天上午8时灌胃(替米沙坦60 mg·kg~(-1)·d~(-1)),其余均喂食等量蒸馏水,于4、7、14 d和28 d后测量大鼠心率、血压、心室重量/体重(VW/BW),并计算存活率及梗死区和非梗死区心肌成纤维细胞活化、增殖和胶原容积分数(CVF)。结果 (1)28 d时,治疗组的累积存活率明显高于 AMI 组(45%和40%,P<0.05);14、28 d时治疗组心室相对重量明显低于 AMI 组(P<0.05)。(2)梗死后4 d,AMI 组和治疗组大鼠的梗死区出现大量的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白 VA 表型阳性细胞,7 d后逐步降低;同时该区细胞增殖细胞核抗原(PCNA)染色阳性;28 d时,治疗组α-SMA 及 PCNA 阳性率明显低于 AMI 组(P<0.05),而在非梗死区,α-SMA 及 PCNA 阳性率较低,各组间差异无统计学意义。(3)28 d时,治疗组梗死区 CVF 明显低于 AMI 组(P<0.05);在非梗死区,14、28 d时,治疗组 CVF 明显低于 AMI 组(P<0.01)。结论替米沙坦可改善大鼠 AMI 后心室重构并降低病死率,可明显抑制梗死区成纤维细胞表型转化和增殖,并降低梗死区和非梗死区 CVF。     

替米沙坦改善高血压患者的胰岛素抵抗

目的观察替米沙坦对高血压患者胰岛素抵抗的影响。方法入选初诊为原发性高血压患者110例为研究对象,同期年龄和性别相匹配的健康体检者100例为对照组。高血压患者给予替米沙坦40～80mg/d,治疗12周。观察高血压患者治疗前后血压、空腹血糖和胰岛素(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平的变化。结果治疗前高血压患者血压、FINS和HOMA-IR水平明显高于对照组,ISI水平明显低于对照组(均P<0.05)。替米沙坦治疗12周后,高血压患者的血压明显下降,空腹血糖、FINS和HOMA-IR水平降低,ISI水平升高(均P<0.05)。结论替米沙坦可改善高血压患者的胰岛素抵抗。     

高脂高糖饮食诱导胰岛素抵抗大鼠心脏功能和心肌Ⅰ型胶原改变及替米沙坦干预的影响

目的 探讨高脂高糖饮食诱导胰岛素抵抗大鼠心脏功能和心肌Ⅰ型胶原改变及替米沙坦干预后对其影响。方法 27只Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=9只)、高脂高糖饮食组（n=18只）,高脂高糖饮食干预12周后确定胰岛素抵抗模型建立,将高脂高糖饮食组随机分为高脂高糖组（n=9只）和替米沙坦组（n=9只）。饮食干预34周后颈动脉插管测左室舒张末内压（LVEDP）、左室收缩压（LVSP）和左室内压最大下降速率（-dP/dtmax）。ELISA方法检测血浆中心肌Ⅰ型胶原代谢标志物Ⅰ型前胶原末端的前肽序列(PICP)和Ⅰ型胶原吡啶交联终肽(ICTP)的含量。心肌组织Masson染色进行心肌间质胶原定量分析。结果 与正常对照组比较,高脂高糖组大鼠LVEDP上升,-dP/dtmax下降(P<0.01),血浆PICP含量及PICP/ICTP升高(P<0.01),左室心肌胶原容积分数增高(P<0.01)。与高脂高糖组大鼠比较,替米沙坦组大鼠LVSP、LVEDP均显著下降(P<0.01),-dP/dtmax升高(P<0.05);血浆PICP含量、PICP/ICTP降低(P<0.05)。左室心肌胶原容积分数含量显著下降(P<0.01)。左室心肌组织胶原含量与胰岛素抵抗指数呈显著正相关(R=0.634,P<0.01),与-dp/dtmax呈显著负相关(P<0.01)。结论 胰岛素抵抗大鼠心肌Ⅰ型胶原合成增加,心肌间质胶原沉积增加,心脏舒张功能下降;替米沙坦可改善胰岛素抵抗,减少胰岛素抵抗大鼠心肌Ⅰ型胶原的合成,减少心肌间质胶原沉积,改善心脏舒张功能。     

替米沙坦上调胰岛素抵抗大鼠心肌脂联素及其受体的表达

目的:探讨胰岛素抵抗(IR)大鼠心肌脂联素(APN)及其受体(AdipoRI和AdipoR2)表达改变和替米沙坦(TMST)的影响.方法:雄性SD大鼠50只随机选择10只作为对照组(用普通饲料喂养8周),其余40只大鼠用高果糖饮食喂养4周建立IR模型.从IR大鼠中随机选择10只作为IR组(用生理盐水灌胃4周,继续用高果...     

心肌营养素1对心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的探讨在高静水压条件下心肌营养素1(CT-1)对成纤维细胞增殖作用机制。方法3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组、助溶剂(二甲亚砜,DMSO)组、CT-1反义寡核苷酸组(ASODN)、正义寡核苷酸组(SODN)、MEK-EPK阻断剂PD98059组、JAK-STAT3阻断剂AG490组、PI3K阻断剂LY294002。利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160mmHg压力下培养8h。STAT3、ERK1/2和PI3-K的活性通过Westernblot分析测定;MTT测定心肌成纤维细胞增殖。结果高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖,CT-1表达上调,CT-1ASODN干预后,CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖,吸光度值(A值)为(0.132±0.013vs0.154±0.011,P<0.05),STAT3(2.09±0.25vs2.47±0.28,P<0.05)、ERK1/2(1.13±0.19vs1.61±0.22,P<0.05)和PI3-K(1.25±0.23vs1.71±0.25,P<0.05),蛋白表达水平明显低于对照组。AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用(0.118±0.018vs0.155±0.010,P<0.05);PD98059增强高静水压的促增殖(0.185±0.011vs0.155±0.010,P<0.05),PI3-K阻断剂LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响(0.157±0.015vs0.155±0.010,P>0.05);SODN与对照组相比对心肌成纤维细胞增殖无明显影响。结论高静水压下,可以激活STAT3、ERK1/2、PI3-K信号通路,心肌成纤维细胞增殖主要通过STAT3通路;ERK1/2通路起负向调节作用;PI3-K与细胞增殖关系不是很密切。     

心肌营养素1对心肌成纤维细胞增殖的作用机制

目的 探讨在高静水压条件下心肌营养素1(CT-1)对成纤维细胞增殖作用机制.方法 3～4代心肌成纤维细胞用于实验,分为对照组、助溶剂(二甲亚砜,DMSO)组、CT-1反义寡核苷酸组(ASODN)、正义寡核苷酸组(SODN)、MEK-EPK阻断剂PD98059组、JAK-STAT3阻断剂AG490组、PI3K阻断剂LY294002.利用自制压力培养装置,将各组细胞置于160 mm Hg压力下培养8 h. STAT3、ERK1/2和PI3-K的活性通过Western blot分析测定;MTT测定心肌成纤维细胞增殖.结果 高静水压明显促进心肌成纤维细胞增殖,CT-1表达上调,CT-1ASODN干预后,CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖,吸光度值(A值)为(0.132±0.013 vs 0.154±0.011,P＜0.05),STAT3(2.09±0.25 vs 2.47±0.28, P＜0.05)、ERK1/2(1.13±0.19 vs 1.61±0.22, P＜0.05)和PI3-K(1.25±0.23 vs 1.71±0.25,P＜0.05),蛋白表达水平明显低于对照组.AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用(0.118±0.018 vs 0.155±0.010,P＜0.05);PD98059增强高静水压的促增殖(0.185±0.011 vs 0.155±0.010,P＜0.05),PI3-K阻断剂LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响(0.157±0.015 vs 0.155±0.010,P＞0.05);SODN与对照组相比对心肌成纤维细胞增殖无明显影响.结论 高静水压下,可以激活STAT3、ERK1/2、PI3-K信号通路,心肌成纤维细胞增殖主要通过STAT3通路;ERK1/2通路起负向调节作用;PI3-K 与细胞增殖关系不是很密切.     

Urocortin对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成作用的影响

目的 :探讨 urocortin对大鼠心肌成纤维细胞 （CFs）增殖和胶原合成作用的影响。方法 :消化法培养新生Sprague-Dawley （SD）大鼠的 CFs,采用四氮唑盐 （MTT）比色法测定细胞数目 ,流式细胞分析仪 （FCM）检测细胞周期 ,EL ISA法检测 型胶原合成 ,分别观察不同浓度 urocortin对 CFs增殖和胶原合成的影响。结果 :1随着 uro-cortin浓度的增高 ,CFs MTT比色法 A490 值呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10 、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 mol/L组的 A490值分别为 0 .183± 0 .0 0 4、0 .2 2 2± 0 .0 0 4、0 .2 51± 0 .0 0 7、0 .2 80± 0 .0 0 6和 0 .3 17± 0 .0 0 2 ,均较对照组 （A490 值 0 .167± 0 .0 0 4）显著升高 （P均 <0 .0 1）。 2 FCM细胞周期分析结果表明 ,10 - 7mol/L urocortin作用 48h,CFs的 G0 /G1期细胞百分率均较对照组显著降低 （P<0 .0 1） ,S期细胞百分率、G2 /M期细胞百分率和增殖指数则较对照组显著增高 （均 P<0 .0 1）。 3 CFs的 型胶原分泌随着 urocortin作用浓度的增高呈明显的递增趋势 ,其中 10 - 10、10 - 9、10 - 8、10 - 7和 10 - 6 m ol/L urocortin组的 型胶原 A值分别为 0 .576± 0 .0 10、0 .614± 0 .0 0 8、0 .771± 0 .0 47、0 .83 9±0 .0 54和 0 .90 8± 0 .0 0 6,均较对照组     

替米沙坦改善原发性高血压病患者心肌肥厚及早期肾功能失调

目的:评估替米沙坦在高血压病靶器官损害中的保护作用。方法:轻中度原发性高血压病左室肥厚患者60例服用替米沙坦40～80mg/d,共26周,服药前后行超声心动图,观察舒张末期室间隔厚度（IVST）,舒张末期左心室后壁厚度（LVPWT）及A/E比值的变化;并计算左室心肌质量指数（LVMI）的改变;同时放射免疫分析法测量血β2微球蛋白（β2MG）、尿β2MG含量。结果:替米沙坦能有效降低血压,降压有效率为72%,治疗后LVMI降低（146±12vs123±10）（P<0.01）,A/E值改善（P<0.05）,血、尿β2MG水平降低。结论:替米沙坦在降低血压同时能够有效地保护心肾功能。     

栀子苷抑制高糖诱导的乳鼠心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞的表型转化

目的探讨栀子苷(GE)对高糖诱导过程中体外培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CF)表型转化及胶原合成的影响及机制。方法提取新生大鼠原代CF,给予高糖刺激(葡萄糖浓度为33.3 mmol/L)和GE干预,24 h后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CF细胞内Ⅰ型胶原(ColⅠ)、ColⅢ及结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达水平;试剂盒检测氧化应激相关指标,包括超氧化物歧化酶(SOD)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)活性及丙二醛(MDA)的产量;Western blot检测转化生长因子β(TGF-β)、乙酰化的Smad3(ac-Smad3)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白质的表达水平。给予SIRT1抑制剂EX-527后,采用免疫荧光共染SIRT1及α-SMA。再次检测氧化应激及ac-Smad3信号通路相关蛋白的表达。采用SPSS 22.0统计软件进行统计学分析。结果不同浓度的GE处理高糖刺激后的大鼠CF 24 h后,ColⅠ、Ⅲ及CTGF mRNA表达有所降低,且随GE浓度的增加,抑制作用增强,在1～100μmol/L之间呈现浓度依赖性。GE可明显降低高糖诱导过程中NADPH的活性及MDA的含量,增强SOD活性。Western blot结果显示,高糖诱导下,TGF-β、ac-Smad3及α-SMA水平明显升高,而GE能明显抑制这3种蛋白的升高。同时,GE明显逆转了高糖条件下SIRT1的下调。免疫荧光结果显示,应用SIRT1抑制剂EX-527后,GE对高糖条件下α-SMA及氧化应激的抑制作用消失。结论 GE能够抑制高糖诱导的大鼠CF表型转化及胶原合成,其机制可能与SIRT1介导的TGF-β/ac-Smad3信号通路及氧化应激有关。     

肿瘤坏死因子α对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制

目的: 探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激对新生大鼠心肌成纤维细胞（CFs）增殖的影响及其机制。方法: 采用消化法培养新生SD大鼠的CFs。实验分为4组,即5、10和20 μg/L TNF-α处理组及空白对照组。将CFs培养36 h后,用四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞的增殖;分别用半定量RT-PCR和Western blot技术检测在5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激下细胞周期蛋白D1（CyclinD1 mRNA及其蛋白）表达的变化。结果: 随着TNF-α浓度的增高,MTT比色法检测的A490值呈明显递增趋势,其中5、10及 20 μg/L组的A490值,分别为0.417±0.011、0.622±0.015和0.602±0.013,与对照组（0.235±0.013）相比,有显著差异（P<0.05）。RT-PCR和免疫印迹检测表明,以5 μg/L和10 μg/L TNF-α刺激36 h后,CyclinD1 mRNA(0.706±0.113,1.698±0.135)和其蛋白(1.270±0.168,2.749±0.170)的水平均明显高于对照组CyclinD1mRNA(0.192±0.039)和蛋白（0.658±0.101）的表达水平（均P<0.01）。结论: TNF-α可通过上调CyclinD1的表达促进心肌成纤维细胞增殖,这可能为应用TNF-α信号通路抑制剂进行抗心肌纤维化治疗提供实验依据。     

伊那普利拉对新生鼠心肌成纤维细胞增殖及作用机制的研究

目的 观察血管紧张素I转换酶抑制剂（angiotensin I converting enzyme inhibitor,ACEI）伊那普利拉（enal-aprilat,Ena）抗血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对细胞周期蛋白的影响,探讨Ena抗CFb增殖及机制。方法以培养的新生wistar大鼠乳鼠CFb为实验模型,实验分为对照组,AngII组,用药组3个剂量,采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb,四氮唑盐（MTT）比色法检测CFb增殖;羟脯氨酸法测定胶原量;流式细胞仪测定细胞周期和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p^27kip1（Cyclin dependent kinase inhibitor,CKI）表达。结果Ena能够抑制AngⅡ诱导的CFb增殖（P〈0.01,P〈0.05）,降低羟脯氨酸含量（P〈0.01,P〈0.05）,增加细胞周期中G0/G1期百分率,降低S期百分率,提高p27kip1表达（P〈0.01,P〈0.05）。结论Ena抑制AngII诱导的CFb增殖与提高p^27kip1表达有关。     

低氧对心脏成纤维细胞增殖迁移活性的影响及作用机制

目的 探讨低氧对乳鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFs)增殖和迁移活性的影响及其作用机制。 方法 原代分离培养C57BL/6J乳鼠CFs,给予低氧（10 ml/L O₂）、常氧（210 ml/L O₂）处理,CCK-8和免疫荧光法检测CFs增殖能力;划痕实验观察CFs的迁移活性;蛋白质免疫印迹法检测相关蛋白的改变;药物阻断和基因干预关键分子观察对CFs生物活性的影响。 结果 相较于常氧组,低氧可显著促进CFs的增殖、迁移活性;低氧下CFs中HIF1α 蛋白表达水平升高;应用药物特异性阻断以及siRNA抑制HIF1α 的表达均可显著降低CFs的增殖和迁移活性。 结论 低氧可通过HIF1α促进CFs增殖和迁移,这可能是心脏纤维化发生的重要机制之一。     

葡萄糖和醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的研究葡萄糖和醛固酮对大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响。方法差速贴壁法培养新生大鼠心脏成纤维细胞,不同葡萄糖浓度培养液及醛固酮干预24h后,采用水溶性磷酸化四唑盐（WS T-1）、溴尿苷5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）掺入法同步测定细胞的代谢活性和DNA合成。结果低糖组WST-1和BrdU两种方法测得的A_（450/690）值分别为0.270±0.016,0.206±0.018。与低糖组相比,高糖组细胞的代谢活性[WS T-1：（0.385±0.028）vs（0.417±0.034）]和DNA合成[BrdU：（0.270±0.029）vs（0.279±0.045）]均显著增加（P〈0.01）,两高糖组间细胞的代谢活性和DNA合成差异无统计学意义。低糖培养时,醛固酮（10~（-7）mol/L）显著促进成纤维细胞的增殖（WST-1：0.317±0.023,P〈0.01;BrdU：0.235±0.018,P=0.019）。高糖培养时,醛固酮的刺激成纤维细胞增殖作用不明显（P〉0.05）。在不同糖浓度,螺内酯均能显著抑制醛固酮引起的细胞代谢活性增强（P〈0.05）,但对DNA合成的抑制并不明显（P〉0.05）。进一步分析表明,葡萄糖和醛固酮对成纤维细胞的DNA合成有交互作用（P=0.012）。结论葡萄糖及醛固酮均可促进大鼠心脏成纤维细胞增殖;当以较高浓度的葡萄糖对心脏成纤维细胞培养时,醛固酮的刺激增殖作用可被掩盖。     

Effects of glucose and aldosterone on the proliferation of cardiac fibroblasts

Objective To investigate the effects of glucose and aldosterone on the proliferation of rat cardiac fibroblasts. Methods The neonatal SD rat cardiac fibroblasts （Cfs） were separated by the differential attachment technique. Cfs were incubated in different D- glucose concentrations for 24 hours, with or without aldosterone. DNA synthesis and metabolic activity of the Cfs were measured simultaneously with Brdu incorporation and WST-1 ELISA, respectively. Results Glucose at high concentrations （15 and 25 retool/L） significantly increased the proliferation of Cfs, compared with glucose at low concentration （5.6 retool/L, P〈0.01 ）, while no difference was shown on Cfs proliferation between the two high glucose concentration groups. Addition of aldosterone （10-Tmmol/L） to low- glucose media resulted in significant proliferation compared with those without aldosterone （WST- 1, P〈0.01; Brdu, P-4）.019）. However, when incubated in high glucose media, the stimulation effect of aldosterone for Cfs proliferation disappeared （P〉0.05）. Further analysis suggested that aldosterone have significant interaction on Cfs DNA synthesis （P=0.012）. Conclusions Both glucose and aldosterone could stimulate the proliferation of cultured Cfs. In high glucose concentration, the stimulatory effect for Cfs proliferation may be masked （J Geriatr Cardio12010; 7：36-39）.     

辛伐他汀对高浓度葡萄糖诱导心肌细胞炎症反应的干预作用及机制研究

目的 （1）观察高浓度葡萄糖对心肌细胞的作用,探讨高浓度葡萄糖损伤心肌的可能机制;（2）观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞炎症因子表达的影响,并探讨其可能机制。方法 （1）取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。（2）阴性对照组（blank）:培养基中不加任何刺激物,培养72小时。（3）阳性对照组（positive control）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖刺激乳鼠心肌细胞,培养72小时。（4）甲羟戊酸对照组（MVA）:培养基中加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（5）辛伐他汀干预组（Sim）:培养基内加入终浓度为25 mmol/L的高浓度葡萄糖,同时分为三组并分别加入浓度为10^-5 mol/L、10^-6mol/L、10^-7mol/L辛伐他汀培养72小时。（6）辛伐他汀+甲羟戊酸干预组（Sim+MVA）:培养基中加入终浓度为25mmol/L的高浓度葡萄糖,终浓度为10-5 mol/L的辛伐他汀和终浓度为200 umol/L的甲羟戊酸,培养72小时。（7）收集各组心肌细胞培养基上清液,用ELISA法测各组TNF-α、ICAM-1、MCP-1的表达;收集各组心肌细胞,用MTT法测定心肌细胞活力,RT-PCR法测心肌细胞AT1RmRNA、AT2R mRNA表达。结果 （1）与空白对照组比较,阳性对照组、MVA组心肌细胞活力显著下降（P<0.01）,TNF-α、ICAM-1、MCP-1表达均明显增加（P<0.01）。（2）与阳性对照组比较,辛伐他汀组心肌细胞活力明显提高（P<0.01）,TNF-oα、ICAM-1、MCP-1表达明显降低（P<0.05或P<0.01）,且呈浓度依赖性;加入甲羟戊酸后（Sim+MVA组）,上述指标与阳性对照组比较无统计学差异。（3）与阳性对照组比较,辛伐他汀组[Sim(10^-5mol/L)组和Sim(10^-6mol/L)组]心肌细胞AT1R mRNA表达显著降低（P<0.05）,AT2R mRNA表达轻度增加（P<0.05）。（4）AT1RmRNA表达与TNF-α表达呈正相?     

石斛碱抑制高钠盐诱导的心脏成纤维细胞增殖

目的探讨高钠盐诱导心脏成纤维细胞(CF)增殖的作用机制及石斛碱的干预效应。方法体外组织块贴壁法培养大鼠CF,实验分为3组:对照组(139 mmol/L Na+)、高钠盐组(161 mmol/L Na+)、石斛碱组(161 mmol/L Na++10-5mol/L石斛碱),培养48 h。CCK-8细胞增殖试剂盒与MTT比色法检测各组细胞增殖情况;Western blot检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)mRNA表达水平。结果与对照组比较,高钠盐组培养48 h后,CF增殖明显增加;与高钠盐组相比,10-5mol/L石斛碱显著抑制CF增殖。与对照组相比,高钠盐组CF中p-ERK1/2、p-NF-κB p65蛋白表达增高,炎性因子MCP-1、VCAM-1和ICAM-1 mRNA表达增加;与高钠盐组相比,石斛碱可明显降低PCNA、p-NF-κB p65蛋白表达及MCP-1 mRNA表达,但对p-ERK1/2、VCAM-1和ICAM-1表达无明显影响。结论高钠盐诱导CF增殖及炎性因子表达,其机制与p-ERK1/2、p-NF-κB p65表达上调有关;石斛碱抑制上述效应,其机制与抑制p-NF-κB p65有关。     

松弛素对高糖环境心脏成纤维细胞胶原基因表达的影响

目的探讨人重组松弛素（rhRLX）对高糖环境大鼠心脏成纤维细胞胶原基因表达的影响。方法原代培养Sprague-Dawley大鼠心脏成纤维细胞。用RT-PCR方法分别观察在正常糖（NG,5.6mmol/L）和高糖（HG,25mmol/L）环境下二代成纤维细胞胶原基因和松弛素基因的表达;rhRLX（100μg/L）分别与NG,HG共同作用72h后成纤维细胞胶原基因的表达。结果HG促进Ⅰ型前胶原mRNA和Ⅲ型前胶原mRNA的表达,rhRLX可以抑制上述作用。HG组松弛素基因的表达比较明显。结论rhRLX对HG促进的Ⅰ型和Ⅲ型胶原基因的表达具有抑制作用。     

肾上腺髓质素对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的观察肾上腺髓质素(AM)对高糖培养的肾小球系膜细胞HBZY-1增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法采用MTT法和流式细胞仪测定观察AM干预对HBZY-1细胞增殖和凋亡的影响,同时采用Western blot观察分裂素激活蛋白激酶(MAPK)信号传导途径中ERK和P38MAPK蛋白活性的变化。结果高糖状态下HBZY-1细胞增殖明显增强,凋亡轻度增加;AM干预后HBZY-1细胞增殖明显抑制,平均下降38.8%,同时凋亡明显增强。AM干预后,ERK1/2活性明显抑制,与高糖组比较平均下降约30%,而P38MAPK活性明显增强,较高糖组平均增高约70%。结论AM对高糖培养HBZY-1细胞增殖增强具有抑制作用,并促进其凋亡。这种作用是可能是通过MAPK信号传导途径所介导的。     

血管紧张素II对心脏成纤维细胞Ets-1表达的影响及机制研究

目的 研究血管紧张素II（AngII）对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)转录因子Ets-1及其下游促纤维化因子表达和细胞增殖的调节及相关的分子机制。方法 将原代培养的大鼠CFs分为对照组,AngII处理不同时间组以及不同剂量组,采用实时定量RT-PCR及western blotting实验技术检测AngII对Ets-1mRNA及蛋白表达的影响。用AngII受体拮抗剂、MAPKs、PKC及PTK抑制剂预处理CFs,测定其对AngII诱导的Ets-1、结缔组织生长因子(CTGF)、纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达及细胞增殖的影响。结果 在CFs中,AngII可呈时间及浓度依赖性诱导Ets-1表达(P<0.05),对其mRNA稳定性则无显著影响。血管紧张素II1型受体(AT1R)拮抗剂losartan、ERK抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125及PKC抑制剂BIM预处理可显著抑制AngII诱导Ets-1过表达(P<0.05),下调CTGF及PAI-1蛋白表达,抑制AngII诱导的CFs增殖(P<0.05)。结论 AngII通过AT1R及PKC,ERK、JNK信号通路介导诱导CFs Ets-1基因的表达。而且,转录因子Ets-1可能是心肌纤维化过程的一个重要介导因素,其发挥作用的主要途径可能是通过参与调控CFs增殖及促纤维化因子CTGF及PAI-1的表达。