β-连环素在维生素A缺乏大鼠气道上皮鳞状化生中的作用

目的 探讨β-连环素（β-catenin.β-pcat）在β-维生素A缺乏所致气道上皮鳞状化生过程中的作用。方法 采用苏木精-伊红染色．光镜观察研究SD大鼠维生素A缺乏9周组（VAD 9w组）、13周组（VAD 13w组）气道上皮的形态学变化：应用原位杂交技术检测大鼠气道上皮β-cat mRNA的表达；应用免疫组化技术检测β-cat、原癌基因c-jun、PCNA和CK13蛋白的表达。结果 ①VAD 9w组和VAD 13w组大鼠气道气道上分别出现增生和鳞状化生。②VAD 9w组和VAD 13w组口β-cat蛋白在胞质内的表达均增加。β-cat mRNA的表达在各个实验组和对照组间差异没有显著性意义（P〉0．05）。③c-jun、PCNA在VAD 9w组和VAD 13W组的表达均较对照组高（P〈0．01）；CK13在对照组和VAD 9w组呈阴性表达．而在VAD 13W组气道上皮基底上层细胞呈阳性表达。结论 β-cat在维生素A缺乏所致气道上皮鳞状化生过程中发挥重要作用。β-cat蛋自表达变化不是其mRNA水平改变所致。     

β-连环素及其相关蛋白在致癌剂引起的大鼠气道上皮鳞状化生中的表达

目的研究β连环素、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）及c-jun蛋白在致癌剂引起的大鼠气道上皮鳞状化生中的表达，初步探讨鳞状化生的发生机制。方法Wistar大鼠46只，采用选择性左肺叶下部支气管灌注致癌剂3-甲基胆蒽（MCA）碘油法诱发气道上皮鳞状化生，以10只正常大鼠为对照。用免疫组织化学SP法检测β-连环素、GSK-3β及C-Jun蛋白的表达，并用原位杂交法检测β-连环素mRNA的表达。结果①实验组β-连环素膜表达较正常对照组降低（P〈0．01），出现胞质表达，未见胞核表达。β连环素mRNA的表达水平无明显变化（P〉0．05）。②GSK-3β表达实验组低于对照组（P〈0．05）。③C-jun阳性表达率实验组为50％，而对照组未见阳性表达。结论GSK-3β表达下调可引起β-连环素的异位表达，继而活化下游靶基因C-jun，使C—jun蛋白表达增高，β连环素可能通过Wnt信号通路参与MCA引起的大鼠气道上皮鳞状化生。     

Ki-67在宫颈高度上皮内瘤变与鳞状化生的表达及意义

目的:研究Ki-67在宫颈高度上皮内瘤变与鳞状化生的表达及意义。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测60例宫颈鳞状化生、100例宫颈低度鳞状上皮内瘤变(LSIL)及80例宫颈高度鳞状上皮内瘤变(HSIL)中Ki-67的表达。结果:在宫颈鳞状化生和HSIL中Ki-67表达比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Ki-67是否可应用于宫颈高度上皮内瘤变与鳞状化生的鉴别,值得进一步探讨,为两者鉴别提供新的思路。     

食管鳞状细胞癌组织中趋化因子受体-7和肾小球上皮整合膜蛋白的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中趋化因子受体-7(CCR7)、肾小球上皮整合膜蛋白(Podopla-nin)的表达。方法:采用免疫组化SP法检测40例ESCC组织及癌旁正常食管组织中CCR7及Podoplanin蛋白的表达,其中Podoplanin蛋白以其标记的微淋巴管密度(MLVD)值表示;分析ESCC组织中CCR7蛋白、MLVD值与临床病理特征的关系。结果:ESCC组织中CCR7蛋白阳性表达率高于癌旁正常食管组织(校正χ2=23.310,P<0.001);ESCC组织中MLVD值高于癌旁正常食管组织(Z=5.416,P<0.001);CCR7蛋白表达阳性癌组织的MLVD值高于CCR7阴性组织(t=3.478,P<0.001);CCR7蛋白、MLVD值与ESCC患者的病理分期和淋巴结转移有关(χ2=6.114,P=0.013;χ2=4.352,P=0.035;t=3.668,P<0.001;t=4.888,P<0.001)。结论:CCR7和Po-doplanin蛋白表达的上调可能促进了ESCC的侵袭与淋巴结转移。     

转化生长因子-β1及其受体的表达与大鼠肝纤维化关系的研究

目的：探讨肝纤维化形成过程转化生长因子-β1(TGF-β1)及其受体的表达对胶原合成的影响。方法：采用免疫组化和斑点杂交技术,观察实验性大鼠肝纤维化过程肝内TGF-β1、TGF-β RⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白质表达的动态变化。结果：随着肝纤维化程度的加重,肝内TGF-β1、TGF-β RⅡ和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白质表达均明显增加,组间比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)。TGF-β1与Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白质表达之间均呈明显正相关;TGF-β RⅡ与Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及其蛋白质表达之间也均呈正相关。结论：TGF-β1是肝纤维化的重要介质,TGF-β RⅡ表达增加是肝纤维化发病机制中的重要环节。     

维甲酸相关孤儿核受体-γ蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其与上皮-间质转化的关系研究

目的 探讨维甲酸相关孤儿核受体-γ(retinoid-related orphan receptor-γ, ROR-γ)与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）临床病理特征及人肝癌细胞系HepG2上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的关系,并探讨其作用机制。方法 选取2016年6月至2020年5月赤峰学院附属医院90例肝癌组织及56例癌旁正常组织石蜡标本、20例肝癌组织及癌旁正常组织新鲜术后标本,采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法（Western blotting）检测ROR-γ在肝癌及癌旁正常组织中的表达。将ROR-γ小干扰RNA转染至HepG2细胞,采用Western blotting检测ROR-γ、Smad2以及EMT标志物（E-cadherin、vimentin）蛋白表达水平。结果 免疫组织化学染色和Western blotting结果显示,与癌旁正常组织比较,肝癌组织中ROR-γ蛋白阳性表达率显著升高（71.1%比42.9%）,差异有统计学意义（P<0.05）,且ROR-γ蛋白阳性表达...     

肺康颗粒对慢阻肺模型大鼠气道重塑及转化生长因子β_1的影响

[目的]观察肺康颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠气道重塑及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响.[方法]将清洁级SD大鼠40只随机分为正常对照组、COPD模型组,肺康颗粒高、低剂量组(剂量分别为13、3.25g·kg-1·d-1),每组10只.采用熏香烟、气道内多次滴入脂多糖及灌服番泻叶法复制大鼠COPD肺脾两虚型模型.光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学变化并测量肺组织小气道管壁厚度;采用免疫组织化学法并结合图像分析技术测定大鼠肺组织、肺泡巨噬细胞、支气管黏膜上皮TGF-β1的表达.[结果]与正常对照组比较,模型组大鼠小气道管壁厚度及支气管肺组织TGF-β1的表达均有显著性升高(P<0.05);肺康颗粒高、低剂量组上述指标均显著低于模型组(P<0.05);但肺康颗粒高、低剂量组间支气管肺组织TGF-β1表达无显著性差异(P>0.05).模型组大鼠气道和肺组织出现慢性炎症改变和结构破坏,肺康颗粒高、低剂量组对上述病理变化有明显改善作用.[结论]肺康颗粒治疗COPD的作用与其能在一定程度上改善模型大鼠的气道重塑,降低TGF-β1的表达有关.     

布地奈德对哮喘大鼠气道重塑及气道平滑肌中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨布地奈德对哮喘大鼠模型气道重塑及平滑肌中Toll样受体4表达的影响。方法:将30只SPF级SD大鼠随机分为支气管哮喘组(A组)、健康对照组(B组)、布地奈德治疗组(C组)3组,每组10只。制备大鼠肺组织病理切片,HE染色后观察各组气道结构改变情况,并测定支气管壁厚度(WAt/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(WAm/Pi)及支气管平滑肌细胞核数(N/Pi),利用Western-Blot方法检测气道平滑肌中TLR4的蛋白表达。结果:光镜下可见A组支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、基底膜和平滑肌明显增厚,而C组上述改变较A组明显减轻。与B组比较,A组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及平滑肌细胞核数显著升高(P<0.01),与A组比较,C组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数显著降低(P<0.01)。A组的TLR4的蛋白水平明显高于B组及C组(P<0.01)。结论:吸入布地奈德可以防治气道重塑,可能通过抑制TLR4的表达实现。     

颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性

目的检测颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ的表达,分析其表达量与RA作用效果的相关性,探讨RA靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法 RT-PCR法检测31例体外培养的颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα的表达情况,MTT法测定RA对PPARβ/δ、RARα不同表达的颅咽管瘤细胞的抑制率,分析其表达情况与RA作用是否存在相关性.结果 (1)RT-PCR结果显示,不同颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα表达存在差别.31例原代培养的颅咽管瘤细胞按其核受体表达不同分为PPARβ/δ>RARα、RARα>PPARβ/δ、RARα>>PPARβ/δ3组;(2)MTT结果显示在相同RA药物作用下RARα>>PPARβ/δ组的抑制率明显高于RARα>PPARβ/δ组、PPARβ/δ>RARα和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)PPARβ/δ、RARα的表达可作为评估RA治疗颅咽管瘤效果的有效指标.PPARβ/δ表达低的颅咽管瘤细胞对RA更敏感;(2)靶向升高RARα或者靶向降低PPARβ/δ的表达都有益于颅咽管瘤的治疗.     

颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性

目的检测颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ的表达,分析其表达量与RA作用效果的相关性,探讨RA靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法 RT-PCR法检测31例体外培养的颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα的表达情况,MTT法测定RA对PPARβ/δ、RARα不同表达的颅咽管瘤细胞的抑制率,分析其表达情况与RA作用是否存在相关性.结果 RT-PCR结果显示,不同颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα表达存在差别.31例原代培养的颅咽管瘤细胞按其核受体表达不同分为PPARβ/δ>RARα、RARα>>PPARβ/δ、RARα>PPARβ/δ3组;MTT结果显示在相同RA药物作用下RARα>PPARβ/δ组的抑制率明显高于RARα>PPARβ/δ组、PPARβ/δ>RARα和对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PPARβ/δ、RARα的表达可作为评估RA治疗颅咽管瘤效果的有效指标.PPARβ/δ表达低的颅咽管瘤细胞对RA更敏感;靶向升高RARα或者靶向降低PPARβ/δ的表达都有益于颅咽管瘤的治疗.     

视黄酸受体基因在儿童胸腺中的表达

目的 观察视黄酸受体基因在儿童胸腺中的表达与分布，探讨其在儿童免疫系统发育中的意义。方法用地高辛素标记的反义RNA探针原位杂交法，测定5岁以下儿童胸腺中视黄酸受体RARα、RARβ、RARγ、RXRα、RXRβ、RXRγ6种亚型基因的表达与分布。同期的连续冰冻切片还用免疫组织化学法测定CDla、CD3的表达，分析视黄酸受体基因表达及分布与T淋巴细胞成熟的关系，并采用实时定量RT-PCR法对基因表达水平进行定量分析。结果 原位杂交结果显示，胸腺皮质及髓质均表达RARα、RARγmRNA，而RXRα、RXRβmRNA主要在胸腺髓质表达，尤其在哈氏小体外周成熟的胸腺细胞表达较高。胸腺中不表达RARβ、RXRγmRNA。实时定量RT-PCR分析结果显示RARα、RXRαmRNA在出生后第一年高表达，1岁后表达下降，但在1～5岁之间变化无显著差异。RARαmRNA则随年龄增长表达增高，RXRβmRNA在5岁以内变化不明显。结论 视黄酸受体基因在胸腺的表达随儿童免疫系统的发育而变化，不同受体亚型基因表达水平的调节在T淋巴细胞的分化发育中可能具有重要意义。     

全反式维甲酸对肾盂肾炎大鼠表面活性蛋白-A表达的影响

目的:探讨肾盂肾炎大鼠肾脏表面活性蛋白-A(SP-A)的表达变化及全反式维甲酸(ATRA)对肾脏SP-A表达的影响。方法:24只雌性Wistar大鼠随机分为4组,每组6只,A组:正常对照组;B组:假手术组;C组:肾盂肾炎组;D组:肾盂肾炎+ATRA治疗组。用致肾盂肾炎大肠杆菌肾筋膜下注射法制备肾盂肾炎模型,于造模后第14天处死大鼠。观察肾脏大体形态改变,PAS染色观察肾脏病理变化,免疫组化染色观察SP-A表达改变。结果:C组病理评分显著高于A、B组,D组病理评分较C组显著减轻。与A、B组相比,C组SP-A表达显著上升(P<0.05);D组SP-A表达较A、B、C组显著增加(P<0.01)。结论:全反式维甲酸可通过改变肾脏SP-A表达水平,减轻肾盂肾炎病理改变。     

ATRA对糖尿病大鼠心肌内iNOS表达的影响

目的:动态观察糖尿病(DM)大鼠心肌组织内诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平的变化及全反式维甲酸对其的干预作用。方法:链脲佐菌素(STZ)法复制SD大鼠实验性1型DM模型,并随机分为全反式维甲酸[ATRA,20 mg/(kg.d)]处理组或非ATRA处理组。造模型后30 d及60 d测量空腹血糖、心重/体重比值,HE染色观察心肌结构的改变,并用RT-PCR技术和免疫组化技术检测心肌组织中iNOS表达水平。结果:30 d和60 d时,DM大鼠心肌内iNOS表达率增加(P<0.05);ATRA处理后可以使心肌内iNOS表达率下降(P<0.05),而DM组和ATRA组大鼠血糖无明显差异(P>0.05)。结论:DM大鼠心肌内iNOS表达率增加,可能与高糖状态下心肌病变有关。ATRA处理后可以使心肌内iNOS表达率下降,这与延缓高糖状态下心肌病变有关。同时说明糖尿病心肌病的发生发展与iNOS再表达密切相关。     

吸烟对大鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶9表达的影响

目的 通过研究不同吸娴量、吸烟持续时间及戒烟对大鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA及其蛋白表达水平的影响,探讨吸烟及戒娴与COPD气道重塑的关系.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照组、长期大量吸烟组、短期大量吸烟组、长期小量吸烟组和长期大量吸烟后戒烟组,每组各8只大鼠.分别采用原位杂交和免疫组织化学方法 检测各组大鼠气道上皮细胞中MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平.结果 (1)各吸烟组大鼠均出现了肺气肿的病理学改变,长期大量吸烟组最严重.(2)长期大量吸烟组[(22.01±2.86)PU,(20.81±2.46)PU]、长期小量吸烟组[(6.92±2.71)PU,(8.84±1.80)PU]、短期大量吸烟组[(14.94±3.46)PU,(13.68±2.00)PU]及戒烟组[(19.00±3.36)PU,(14.82±1.74)PU]大鼠气道上皮细胞MMP-9 mRNA及其蛋白的表达水平均明显高于对照组[(0.88±0.88)PU,(2.80±1.66)PU,P均<0.01].(3)长期小量吸炯组、短期大量吸烟组和戒炯组大鼠气道上皮细胞MMP-9 mRNA及其蛋白的表达水平低于长期大量吸烟组(P均<0.05).结论 吸烟引起大鼠气道上皮细胞MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平升高,随吸烟时间和量的增加其表达增加,戒烟后其表达可下降.提示吸烟可以引起气道破坏和重塑;戒烟可减轻气道重塑,是防治COPD的有效措施之一.     

维甲酸调变早幼粒白血病细胞株NB4中G-CSF及其受体表达

目的进一步研究G-CSF在维甲酸致高白细胞症中的作用.方法用RT-PCR、Northemblotting方法检测NB4细胞经全反式维甲酸(ATRA)作用后G-CSF mRNA表达的变化,同时用ELISA方法检测细胞培养上清液中G-CSF蛋白水平的变化;采用流式细胞技术检测NB4细胞经ATRA作用后G-CSF受体蛋白表达的变化.结果ATRA可从基因水平上调NB4细胞中G-CSF表达,并可增加NB4细胞表面G-CSF受体的表达,G-CSF受体表达增加出现的时间虽然稍晚于G-CSF表达增加出现的时间,但仍然在较早期阶段,此时,细胞形态学和NBT实验均证实NB4细胞处于部分分化阶段.结论在ATRA治疗APL过程中,G-CSF及其受体表达增加可能协同参与了高白细胞症的发生.     

维甲酸调变早幼粒白血病细胞株NB4中G-CSF及其受体表达

目的：进一步研究G－CSF在维甲酸致高白细胞症中的作用。方法：用RT－PCR、Northernblotting方法检测NB4细胞经全反式维甲酸（ATRA）作用后G－CSF mRNA表达的变化，同时用ELISA方法检测细胞培养上清液中G－CSF蛋白水平的变化；采用流式细胞技术检测NB4细胞经ATRA作用后G－CSF受体蛋白表达的变化。结果：ATRA可从基因水平上调NB4细胞中G－CSF表达，并可增加NB4细胞表面G－CSF受体的表达，G－CSF受体表达增加出现的时间虽然稍晚于G－CSF表达增加出现的时间，但仍然在较早期阶段，此时，细胞形态学和NBT实验均证实BN4细胞处于部分分化阶段。结论：在ATRA治疗APL过程中，G－CSF及其受体表达增加可能协同参与了高白细胞症的发生。     

E-cadherin与PCNA在吸烟小鼠气道上皮中的表达

应用免疫组织化学和原位分子杂交方法，检测不同阶段吸烟小鼠细支气管上皮细胞上皮钙粘附素（Ｅ－ｃａｄ－ｈｅｒｉｎ，Ｅ－ｃｄ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达与分布。探讨吸烟气道Ｅ－ｃｄ表达变化对上皮增殖、重建的影响。结果：小鼠吸烟４周时，细支气管上皮Ｅ－ｃｄ表达与正常对照组比较明显下调，而ＰＣＮＡ阳性细胞率明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）；吸烟８周时，Ｅ－ｃｄ表达上调，而ＰＣＮＡ表达比吸烟４周时明显减少；吸烟１２周时，Ｅ－ｃｄ与ＰＣＮＡ表达阳性细胞率与吸烟４周时相比均明显减少（Ｐ＜０．０１）。而各组间的细支气管上皮细胞内的Ｅ－ｃｄｍＲＮＡ含量及表达强度均无明显变化。结论：吸烟引起气道上皮Ｅ－ｃｄ表达的调控发生在翻译后水平，其胞膜上Ｅ－ｃｄ表达的下调在吸烟早期气道上皮损伤后修复中发挥重要作用。     

维生素A缺乏对大鼠肺脏发育的影响

目的获得转α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因的小鼠。方法将α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因用显微注射的方法导入小鼠受精卵。结果移植注射胚853枚，其中移植312枚1．细胞胚于11只爱体鼠，6只受孕（54．5％）均中途流产（解剖发现子宫角明显增粗、充血、残骸）；移植注射胚541枚2-细胞胚于23只受体鼠，18只受孕（78．3％），11只受孕均中途流产了，3只足目剖宫产荻14只死胎，平均体重214g，未检测到阳性；4只12日龄左右剖宫获21只残骸有7只阳性。结论通过显微注射的方法，α-1，3-半乳糖苷转移酶沉默基因可以整合，但要得到整合成活个体还有待进一步研究。