酶标记免疫吸附试验诊断肺吸虫病的研究

自1979年我室建立酶标记技术以来,曾试用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗肺吸虫抗体,初步显示其敏感性高于间接红细胞凝集试验以及对流免疫电泳法。1981年我们又进一步开展了ELISA对抗肺吸虫抗体的特异性、敏感性及其他方面的研究,以探索其在诊断及流行病学中的使用价值。材料和方法一、材料 1.制备可溶性肺吸虫成虫抗原。 2.试验血清:肺吸虫患者血清取自郧     

麻疹病毒抗原检测在儿童麻疹早期诊断中的应用价值

麻疹诊断一直以来依赖临床表现和麻疹病毒(MV)特异性IgM的检测.MV感染早期IgM抗体的临床实验室检出阳性率低,国内报道通常在50%左右[1],在儿童尤其是婴幼儿麻疹诊断中的应用有局限性.为此,我科于2003年3月～2004年12月间采用间接免疫荧光法(IFA)对238例麻疹患儿的鼻咽部分泌物或咽拭子进行MV抗原检测,并和ELISA法检测MV IgM抗体的结果进行比较,现报道如下.     

EB病毒不同抗原IgA抗体检测在鼻咽癌诊断中的作用

目的 探讨EB病毒壳抗原(VCA)、早期抗原(EA)和核抗原潜伏蛋白(EBNA1)免疫球蛋白A抗体(IgA)的检测对鼻咽癌血清学诊断的意义.方法 应用免疫酶法(IE)和酶联吸附试验(ELISA)检测326例鼻咽癌患者、1290例非鼻咽癌门诊患者、职工体检767例血清中EB病毒VCA/IgA、EA/IgA、NA1/IgA抗体.结果 鼻咽癌患者VCA/IgA、EA/IgA、EBNA1/IgA抗体阳性率分别为97.9%、81.9%、和87.7%;非鼻咽癌患者组为18.0%、0.2%、和15.3%;对照组为5.1%、0、13.8%.鼻咽癌组的三种IgA抗体阳性率均分别高于非鼻咽癌组和对照组(P<0.001),非鼻咽癌组的VCA/IgA抗体阳性率亦高于对照组(P<0.001).检测VCA/IgA的灵敏度和特异度为97.9%和94.9%;EA/IgA为81.9%和100%;EBNA1/IgA为87.7%和86.2%.结论 VCA灵敏度和特异度都在较高的水平;EA灵敏度低特异度高;EBNA1灵敏度和特异度不及VCA,提示免疫酶法检测VCA/IgA抗体仍然是鼻咽癌血清学诊断中理想的方法,ELISA法EBNA1/IgA检测灵敏度和特异度比前者低有待进一步改进.     

特异性抗血清致敏葡萄球菌提纯A蛋白检测脑脊液中脑膜炎球菌A群抗原的研究

目前可用于检测脑脊液中脑膜炎球菌抗原的敏感而快速的早期诊断方法研究尚不多。近年来,Beuvery等用酶联免疫吸附法(ELISA)与对流免疫电泳法(CIE)对比,检测了细菌性脑膜炎患者脑脊液中的流感杆菌、肺炎球菌和脑膜炎球菌的多糖抗原,认为ELISA较CIE敏感;蒋小萍等用FLISA双抗体夹心法检测脑脊液中的脑膜炎球菌A群抗原,     

ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用对比

目的:对比分析酶联免疫吸附试验(ELISA)法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法在麻疹病毒检测中的应用。方法:由本市各医院采集并送至本中心接受麻疹病毒检测的50例疑似麻疹患者为研究对象,所有患者标本均采用ELISA法和RT-PCR法进行麻疹病毒检测。对比两种检测方式在不同出疹时间段所取标本的阳性率、检测水平。结果:在50例疑似麻疹患者中,ELISA法检测麻疹病毒Ig M抗体阳性22例,Ig M抗体阴性28例,阳性率为44.00%;RT-PCR法检测,麻疹病毒Ig M抗体阳性26例,Ig M抗体阴性24例,阳性率为52.00%,两种检测方式阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。患者出疹第1天收集的标本,采用ELISA法检测阳性率为60.00%,采用RT-PCR法检测阳性率为80.00%。随着患者采样时间不断改变,两种检测方式的阳性率均逐渐降低,两种方法检测的阳性率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。50例麻疹疑似患者同一时间段采集血清和咽拭子标本,24例患有免疫史,不伴随有免疫史亦或者是不详的共26例。结论:RT-PCR法适用于出疹时间在2 d之内疑似麻疹患者的临床诊断中,而ELISA法则适合使用在出疹时间在2 d或以上疑似麻疹患者的临床检测中。     

间接免疫荧光法检测麻疹抗原在麻疹早期诊断中的临床应用

目的:探讨间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence Assay,IEA)检测麻疹病毒抗原对儿童麻疹病毒(measles virus,MV)感染的早期诊断价值.方法:观察86例临床诊断麻疹的患儿,在发病的不同阶段IFA检测痰液MV抗原和酶联免疫吸附试验(engymelinked imgmunosorbent assay,ELISA)检测血清中MV特异性LgM抗体,采集30份上呼吸道感染患者痰液进行IFA麻疹病毒抗原检测,比较分析检测结果.结果:86例中发病7 d内IFA测抗原ELISA测抗体两种方法的阳性率为分别为97.1%和16.2%;7 d后为33.3%和88.9%,P均＜0.01.IFA测抗原阳性率与检测时间的相关系数为-0.91,P=0.02;ELISA测抗体阳性率与检测时间的相关系数为0.97,P=0.04.30份对照组的标本MV抗原检测均为阴性,IFA测抗原的特异性与敏感性分别是100%和97.1%.结论:IFA测抗原在疾病早期检出阳性率高,阳性检出率与检测时间成负相关,IFA测抗原痰液麻疹病毒抗原是一种早期快速、特异敏感的实验室检测方法.     

107例麻疹疑似病例血清学检测结果分析

目的检测麻疹疑似病例血清中的IgM抗体,为该病的预防控制消除和临床诊断提供科学依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对2007-2009年麻疹疑似病例的血清标本进行特异性抗体检测分析。结果107例病例中,麻疹IgM抗体阳性42例,阳性率39.3%,各年龄组阳性率差异无统计学意义。麻疹抗体阳性率明显高于风疹抗体阳性率。结论血清学诊断是科学鉴别RFIs的重要手段,采血时间与检出率密切相关。加强实验室监测可提高麻疹实验室检测的及时性、准确性和敏感性。     

酶联免疫吸附法检测人类抗七种口腔厌氧细菌抗原的IgG、IgA及IgM抗体

本文应用酶联免疫吸附法检测人类抗七种口腔厌氧细菌抗原的IgG、IgA和IgM三类抗体,研究了不同抗原包被条件对ELISA检测抗体的影响,发现了多种最适包被浓度,并提出了几项对ELISA的改良意见。     

介绍一种提高IgA/EA敏感性的免疫酶标法

采用免疫酶标法检测血清中抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白A抗体(IgA/VCA),有助于鼻咽癌的早期发现和早期诊断,业已获得广泛的应用。虽然,抗EB病毒早期抗原的免疫球蛋白A抗体(IgA/EA)对鼻咽癌的诊断更为     

应用酶免疫分析法检测甲胎蛋白的研究

近年来国外广泛应用酶免疫分析技术(ELISA)对多种抗原、抗体及生物活性物质进行定量测定。认为酶免疫分析法结合免疫萤光技术和放射免疫测定两法的优点,而克服了它们的很多缺点。酶标记试剂制备的费用少,稳定性高,有效期长,所用仪器较放射免疫法简单,而敏感性两者又接近。国外近年开展ELISA检测甲胎蛋白用于临床诊断,国内有关这方面方法学研究的报导尚少见。我们借鉴于R.Hevey等人报导的方法建立了检测甲胎蛋白的ELISA方法,并应用于临床。本文着重介绍我们建立的检测甲胎蛋白的ELISA双抗体夹心法(Double-antibody Sandwish ELISA)。     

犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用

目的 建立犬CDV抗体ELISA检测方法.方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10 μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25%.结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于犬CDV抗体的检测.     

EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值

目的 评价VCA/IgA,EA/IgA,Rta/IgG和EBNA1/IgA等EB病毒抗体联合检测在鼻咽癌血清学诊断中的价值.方法 收集211例初治鼻咽癌和203例相似症状的非鼻咽癌病例伪血清,采用免疫酶法检测VCA/IgA及EA/IgA,酶联免疫吸附法检测Rta/IgG和EBNA1/IgA.应用ROC曲线分析确定各抗体检测的最佳截断值,采用复合阳性判断方法评价联合检测对鼻咽癌的诊断价值.结果 采用复合阳性判断方法,联合检测的敏感度及特异度比单项抗体的指标基本上均有提高.VCA/IgA+Rta/IgG+EBNA1/IgA组合的敏感度(98.1%)较其它3种组合高,特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.7%,93.5%,0.868,90.0%;而EA/IgA+Rta/IgG+EBNAI/IgA组合的特异度(95.1%)、准确度(94.9%)、约登指数(0.899)及阳性预测值(95.2%)最高,敏感度为94.8%,显示其在鼻咽癌血清学诊断中可能具有更高的准确性.四抗体组合有最高的敏感度(98.6%),特异度、准确度、约登指数及阳性预测值分别为88.2%,93.5%,0.868,89.7%.结论 抗立即早期抗原Rta/IgG抗体、抗早期抗原EA/IgA抗体、抗晚期抗原VCA/IgA和抗潜伏期抗原EBNA1/IgA抗体联合检测可更大范围地反映EB病毒溶解感染期及潜伏感染期的抗原表达,具有很好的互补作用,是鼻咽癌血清学诊断的合适组合.     

协同凝集试验快速诊断流行性脑脊髓膜炎的研究

目前可用于检测脑脊液中脑膜炎球菌菌群的敏感而快速的诊断方法研究尚不多,采取血标本快速诊断流脑也未见文献报道。近年来,Beuvery等用酶联免疫吸附法(ELISA)与对流免疫电泳法(CIE)对比,检测了细菌性脑膜炎患者脑脊液中的流感杆菌、肺炎球菌和脑膜炎球菌的多糖抗原,认为ELISA较CIE敏感;蒋小平等用ELISA的双抗体夹心法检测脑脊     

应用McAb ELISA双抗体法检测肺吸虫病循环抗原

酶联免疫吸附试验(ELISA)应用于肺吸虫病的诊断,国内已有报道,刘纪伯又报道了应用单克隆抗体(McAb)斑点试验检测斯氏肺吸虫循环抗原的研究;但尚未有应用McAb ELISA双抗体法检测卫氏肺吸虫病循环抗原。为此,我们应用McAb ELISA双抗体法检测了38例肺吸虫病人循环抗原,现将结果报道如下。材料和方法一、试验血清分二组第一组:卫氏肺吸虫病患者血清38份,     

丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的临床应用

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原检测[酶联免疫吸附试验(ELISA)]法的临床应用价值。方法采用聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法对临床HCV感染者血浆进行HCV-RNA检测,并用ELISA对标本进行HCV抗体和HCV核心抗原的检测。结果87例HCV感染者HCV-RNA的检出率为75%(65/87);HCV抗体的检出率为95%(83/87);HCV核心抗原的检出率为67%(58/87)。另有2例标本HCV抗体阴性,而HCV核心抗原阳性,HCV-RNA也为阳性。结论HCV核心抗原的检测对HCV感染的早期诊断有重要价值。     

惠州市麻疹患者血清流行病学调查

目的 了解惠州市麻疹病例血清流行病学特征，探讨麻疹发病原因。方法 对2003～2005年收集的390例麻疹疑似病例血清标本，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测麻疹IgM抗体，麻疹IgM抗体阳性病例再用ELISA法检测麻疹IgG抗体。结果麻疹IgM抗体阳性率为76．6％，合格标本采集率34．1％。麻疹IgM抗体阳性病例麻疹IgG抗体阳性率64．9％；出疹与采血间隔天数长，IgG抗体阳性率和GMT高，≤1岁组病例IgG抗体阳性率和GMT水平最低。结论 麻疹发病主要原因是未接种麻疹疫苗（MY）和接种后原发性免疫失败，提高血清样本采集率和开展风疹血清学鉴别诊断是惠州市加强麻疹实验室监测亟待解决的问题。     

疑似麻疹、风疹病例血清学监测结果分析

目的了解麻疹风疹的流行病学特征,探讨麻疹与风疹之间的血清学鉴别诊断。方法通过网络直报系统与麻疹日常监测,揭示麻疹发病的流行病学特征;采用酶联免疫吸附法(ELISA)对431例麻疹疑似病例的血清标本进行麻疹IgM和风疹IgM抗体检测。结果431例麻疹风疹疑似病例,疑似麻疹血清检测率为92.43%,疑似风疹血清检测率为100%。麻疹抗体IgM(+)检出率为42%(181/431),风疹抗体IgM(+)检出率为17.63%(76/431),麻疹风疹抗体IgM双(+)检出率为1.86%(8/431)。麻疹发病主要集中在8月龄～2岁,占41.15%(86/209),其次是小于8月龄的婴幼儿占21.05%(44/209)。在出疹后第0～3d、4～7d、8～14d、15～28d前采集的血清标本其麻疹IgM抗体阳性检出率之间经检验有统计学意义(χ2=19.017,P0.001)。结论本地发热出疹性疾病以麻疹为主;发病年龄分布主要在2岁前,而16岁以后仍然占相当大比例;采血时间与检出率密切相关。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清单纯疱疹病毒抗体的研究

本文对ELISA间接法检测HSV抗体作了下列研究:以两种较简易的方法,即病毒感染细胞连同维持培养基一起(方法一)或经洗涤后在PBS中(方法二)反复冻融,分别从原代兔肾、原代鸡胚、传代Vero和FL细胞制备HSV抗原,结果以方法二制取的Vero细胞病毒抗原滴度最高;原代兔肾者次之。选取16份ELISA呈不同滴度的血清作中和试验,两法结果呈正相关关系(r=0.79,P<0.005)。初步得出△A492≥0.2可作为血清抗体阳性。以ELISA检测3组年龄人群血清抗体,婴儿组抗体阳性率6.6％,儿童组80％,成人组100％。最后,比较了酶联抗人IgG及酶联SPA ELISA检测的29份血清抗体含量,两种结合物测得的结果呈正相关关系(r=0.986,P<0.0005),并提出酶联SPA在鉴别两型HSV血清中具有重要意义。     

联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值

目的探讨EB病毒相关抗体和抗原联合检测在鼻咽癌临床诊断中的价值。方法采集2014年9月至2015年10月某医学检验机构存档的126例鼻咽癌患者的EB病毒检测报告,将此126例患者作为研究组,随机选取126例同期体检者作为健康对照组,采集静脉血进行VCA/IgA、EA/IgA抗体及EB病毒DNA(EBV-DNA)三项指标进行间接荧光免疫法检测,统计对比两组抗体抗原相关指标阳性率。结果研究组VCA/IgA、EA/IgA、EBV-DNA三项指标检测阳性率与对照组比较存在显著统计学差异(P0.05),单独检测时VCA/IgA敏感度最高,联合检测时阳性率为97.6%(123/126),检测阳性率明显高于任一指标单独检测阳性率(P0.05)。结论 EB病毒抗体抗原联合检测可显著提高鼻咽癌诊断敏感性,对提高早期检出率具有重要意义。     

ELISA法检测江门地区性病门诊患者生殖支原体抗原

目的应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测性病门诊患者泌尿生殖道生殖支原体（Mg）抗原,探讨江门地区性传播疾病（STD）门诊患者Mg感染状况。方法采用Mg多克隆抗体,标记酶结合物,建立检测Mg抗原的双抗体夹心ELISA法,对性病门诊患者泌尿生殖道分泌物进行MIg抗原检测。结果双抗体夹心ELISA法可检测到5μg／ml蛋白浓度,除肺炎支原体外与其他泌尿生殖道常见支原体和细菌无交叉反应;共检测了174例标本,Mg抗原阳性33例,阳性率为18．97％,其中男性和女性阳性率分别为19．88％和7．69％;男性患者中,非淋菌性尿道炎（NGU）、淋病、前列腺炎患者的Mg抗原阳性率分别为13．43％、62．5％和4．84％。结论STD门诊患者存在Mg感染,应用双抗体夹心ELISA法检测Mg抗原具有一定的灵敏度,且具有快速、简便的特点,适合临床筛查Mg抗原。