高糖刺激血管平滑肌细胞表达cbfα-1和OC的实验研究

目的 研究高糖在刺激大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)转分化过程中对相关骨基质蛋白如核心结合因子α-1(cbfα-1)和骨钙索(OC)表达的影响,并探讨高糖在诱导血管钙化发生过程中可能的作用机制.方法 原代培养VSMC,分为正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄塘)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇组(5mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇),在不同时间点检测各组VSMC的钙沉积指标;茜素红染色了解各组VSMC钙化程度;实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测各组cbfα-1和OC的mRMA水平和蛋白表达变化;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平.结果 与正常糖浓度和甘露醇对照组相比较,高糖组VSMC钙沉积和钙化染色均明显增强,cbfα-1和OC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05),均呈时间依赖性.高糖刺激后VSMC的ALP的活性比对照组增加了近2倍.结论 高糖介导的平滑肌细胞钙化可能与高糖促进VSMC分泌骨基质蛋白cbfα-1和OC水平增加有关;高糖在促进VSMC钙化同时,使VSMC的α-SMA表达水平降低,促进其向成骨样细胞转分化.     

糖尿病大鼠血管钙化的实验研究

目的 观察实验性糖尿病对大鼠血管钙化的影响及其可能机制.方法 用肌注维生素D3和灌胃尼古丁建立大鼠血管钙化模型;采用腹腔注射链脲佐菌素(SIZ)方法,建立大鼠糖尿病模型.运用Von Kossa染色,原子吸收分光光度法测定钙含量,放射免疫分析法测定血浆、血管骨钙素(OC)和肿瘤坏死因子(TNF)含量,以及血浆、血管碱性磷酸酶(ALP)活性.结果 钙化组大鼠血管Von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚集;与对照组相比,主动脉钙含量、ALP活性、OC含量分别增高1.98、2.83倍和84.12%,主动脉TNF含量明显增加(P均相似文献   

绿茶对实验大鼠血管钙化的影响

目的观察饮用绿茶对大鼠血管钙化的影响及其可能机制。方法用肌注维生素D3和灌胃尼古丁诱导大鼠血管钙化模型。实验分为对照组、钙化组、低剂量和高剂量绿茶干预组。Von Kossa染色,原子吸收分光光度法测定钙含量,放射免疫分析法测定血浆、血管骨钙素(osteocalcin,OC)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,AngⅡ)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。结果钙化组大鼠血管染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量黑色颗粒聚集;与对照组相比,主动脉钙含量、ALP活性、OC和AngⅡ含量均有明显增加;采用50g/L和100 g/L绿茶防治大鼠均可抑制血管钙化,且高剂量时效应强于低剂量;与钙化组相比较,血管组织钙化指标均下降,而主动脉AngⅡ含量亦有减少。结论饮用绿茶可能部分通过拮抗血浆和血管组织局部的AngⅡ系统效应而产生抑制大鼠血管组织钙化的作用。     

血管紧张素-(1-7)对人脐静脉平滑肌细胞钙化的影响及其机制研究

目的复制人脐静脉平滑肌细胞(HUSMCs)钙化模型,观察血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对HUSMCs钙沉积的影响,探索Ang-(1-7)延缓或抑制HUSMCs钙化的机制。方法采用β-甘油磷酸盐(β-GP)复制HUSMCs钙沉积模型,Ang-(1-7)干预后,对细胞进行Von Kossa染色及图像分析、检测碱性磷酸酶(ALP)活性和细胞钙含量;检测细胞培养液中转化生长因子β1(TGFβ1)活性、骨钙素(OC)含量及细胞中核心结合因子1(Cbfα1)蛋白表达。结果 Ang-(1-7)可明显减轻钙化HUSMCs聚集生长,Von Kossa染色显示细胞聚集处棕褐色钙结节较钙化组明显减轻(P<0.01),且10-5、10-7、10-9mol.L-1Ang-(1-7)与钙化组相比钙化细胞百分比、细胞钙含量和ALP活性均明显降低(P均<0.01),细胞TGFβ1分泌水平、Cbfα1表达、骨钙素含量均较钙化组降低(P均<0.01)。结论 Ang-(1-7)可减轻HUSMCs钙化程度,其作用机制与减弱TGFβ1-Smads-Cbfα1信号通路中关键信号分子TGFβ1、Cbfα1的表达有关。     

雌激素减轻大鼠血管钙化的实验研究

目的探讨雌性激素在血管钙化中的作用。方法制备30例维生素D3加尼古丁诱导雌性大鼠血管钙化模型,比较去势和去势补充雌激素对血管钙化的影响。放射免疫法测定血浆雌激素水平,并进行VonKossa染色、钙含量、45Ca2+沉积及碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性测定。结果钙化组大鼠血管主动脉平滑肌细胞及其间质内有大量黑色颗粒沉积,主动脉钙含量、45Ca2+沉积及ALP活性分别较对照高2.5倍、3.3倍和2.4倍(均P<0.01)。预先去势的动物(去势+钙化组)钙含量、45Ca2+沉积及ALP活性分别较单纯钙化组升高28%、34%和20%(均P<0.01)。补充雌激素减轻去势+钙化组钙含量、45Ca2+及ALP活性分别低37%、37%和31%(均P<0.01)。结论去卵巢大鼠主动脉钙化程度加重,补充雌激素能减轻钙化,提示雌激素具有保护血管、拮抗钙化的效应。     

脂质体携载精氨酸对大鼠钙化血管精氨酸/NO途径的影响

目的:观察钙化血管精氨酸/NO途径的改变和脂质体携载精氨酸对血管钙化及精氨酸/NO途径的影响。方法:维生素D3注射制备大鼠血管钙化模型,检测血管钙含量、血浆精氨酸和亚硝酸盐含量、血管环磷酸鸟苷(cGMP)含量、血管一氧化氮合酶(NOS)活性及血管精氨酸水平。结果:钙化组大鼠血管钙含量较对照组升高7.5倍(P<0.01),血浆NO生成减少,血管cGMP水平降低,血管NOS活性增高(P<0.01),但精氨酸含量明显减少(-19.1%,P<0.01)。脂质体携载精氨酸治疗后血管钙含量较钙化组降低51.2%(P<0.01),血浆NO生成增加,血管cGMP含量增加5.1%(P均<0.05),血管精氨酸含量增加15.7%(P<0.05)。结论:给予脂质体携载精氨酸治疗可以减轻大鼠的血管钙化程度,改善钙化血管L-Arg/NOS/NO/cGMP途径紊乱,提示脂质体携载精氨酸对防治动脉粥样硬化等疾病的血管钙化可能具有潜在临床意义。     

染料介导光氧化法处理的同种异体动脉体内近期抗钙化性能评价

目的：观察染料介导光氧化法（DMP）处理的家兔胸主动脉用于同种异体腹主动脉置换后,在体内血流环境下的抗钙化性能。方法：以经染料介导光氧化反应处理的家兔胸主动脉为研究对象,以戊二醛(GA)处理的家兔胸主动脉以及自体腹主动脉原位移植(OT)作为对照,建立家兔胸-腹主动脉移植模型;实验动物观察饲养1个月后,取出标本,通过原子吸收光谱法测定血管组织钙含量,扫描电镜观察血管壁钙化情况。结果：DMP组血管壁钙含量为(3.58±0.22)μg/mg,GA组血管壁钙含量为(22.5±0.53)μg/mg,自体动脉移植组组织钙含量(2.99±0.33)μg/mg,DMP组组织钙含量虽较OT组高,但差异无统计学意义（P＞0.05）,DMP组组织钙含量较GA组低（P＜0.01）;扫描电镜下观察可见,GA组有大量的钙沉积,DMP组仅见少量钙沉积。结论：光氧化反应处理的家兔胸主动脉在家兔胸 腹主动脉移植的动物模型中,抗钙化性能优于戊二醛固定的胸主动脉。     

氧化苦参碱对大鼠血管平滑肌细胞钙化抑制作用的研究

目的 观察氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)对血管钙化的影响,探讨血管钙化的发生机制.方法 以a-甘油磷酸盐诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)钙化,OMT干预.采用磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法测定细胞钙含量,硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 a-甘油磷酸盐可诱导VSMCs发生钙化,钙化组细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量明显增高,OMT呈浓度依赖性地降低细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量,VSMCs的钙化程度亦明显减轻.结论 OMT能有效抑制a-甘油磷酸盐诱导的大鼠主动脉VSMCs钙化,其机制可能与减轻细胞的氧化损伤有关.     

慢性肾病大鼠血管钙化与骨代谢标志物的相关性研究

目的研究慢性肾病(CKD)大鼠血管钙化与血清骨代谢标志物的相关性。方法将36只雄性SD大鼠随机分为对照组(18只)和CKD血管钙化组(18只)。钙化组予以腺嘌呤联合高磷饲料,对照组予以生理盐水和普通饲料。实验第2、4、6周末处死大鼠,留取主动脉行Von Kossa染色和钙含量检测钙化程度,留取血、尿检测尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和骨代谢标志物:钙(Ca)、磷(P)、1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)、甲状旁腺素(PTH)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、总Ⅰ型前胶原氨基末端肽(tPINP)、β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)及24 h尿蛋白定量(24 h-Upro)。结果对照组各时间点主动脉Von Kossa染色均未见黑色物质沉积,CKD血管钙化组随时间进展黑色物质沉积逐渐增多。与对照组相比,CKD血管钙化组BUN、Scr、24 h-Upro、主动脉钙含量升高(P<0.05);Ca、1,25(OH)2D3、PTH、tPINP、β-CTX、TRACP-5b降低(P<0.05),P、Ca*P升高(P<0.05),BALP、OC升高(P>0.05);经二元logistic回归发现血清Ca*P升高、PTH和TRACP-5b降低是血管钙化的独立危险因素。根据主动脉钙化程度,将CKD血管钙化组进一步分为轻中度钙化(2 W和4W)和重度钙化(6 W)两个亚组。与轻中度钙化组相比,重度钙化组BUN、Scr、主动脉钙含量升高(P<0.05),24 h-Upro升高(P>0.05);Ca、P、1,25(OH)2D3、tPINP、TRACP-5b升高(P>0.05),Ca*P、PTH、BALP、β-CTX升高(P<0.05),OC降低(P<0.05);进行血管钙化严重程度的危险因素分析发现血清Ca*P升高和OC降低是血管钙化严重程度的独立危险因素。相关性分析显示血清Ca*P、PTH、BALP、β-CTX水平与血管钙化程度呈正相关,OC与血管钙化程度呈负相关。结论 CKD大鼠血管钙化与骨代谢密切相关,检测血清骨代谢标志物有助于评估血管钙化的发生和判断血管钙化的严重程度及进展。     

实验性血管钙化大鼠血浆的抗氧化能力的研究

目的观察实验性血管钙化大鼠血浆抗氧化能力的变化。方法将16只雄性SD（Sprauge Dawley）大鼠随机分两组，其中一组进行血管钙化处理。6周后取出胸、腹主动脉，用于Von Kossa染色，并测定血管组织钙含量和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）活性、血浆超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（maleic diadehyde．MDA）、总抗氧化能力变化。结果钙化组大鼠主动脉平滑肌细胞内及其间质有大量黑色颗粒沉积，主动脉钙含量及ALP活性分别较对照组增高102．7％和259％（P〈0．01），血浆SOD和总抗氧化能力分别比对照组下降26．2％和67．4％（P〈0．01），MDA增加584．1％（P〈0．01）。结论血管钙化大鼠血浆抗氧化能力降低。     

不同年龄对维生素D_3和尼古丁诱导大鼠血管钙化的影响

目的:比较不同年龄大鼠对维生素D3和尼古丁诱导血管钙化的反应性,以利于血管钙化动物模型制备的合理选择。方法:不同月龄大鼠用维生素D3肌肉注射(300 000 IU/kg)和尼古丁灌胃(25 mg/kg)处理后6周,测定各组大鼠颈动脉血压和心功能、血管钙含量及碱性磷酸酶活性;用Von Kossa染色方法检测血管钙沉积;用竞争性半定量逆转录聚合酶链反应方法测定主动脉骨标志蛋白骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、基质Gla蛋白(matrixGla protein,MGP)、骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)的mRNA水平;用Western blot的方法检测主动脉平滑肌肌动蛋白-α(smooth musule actin-α,α-SMA)水平。结果:2、8和16月龄钙化组大鼠收缩压(systolic blood pressure,SBP)分别升高了20.7%、29.4%和22.2%(P<0.05);左心室收缩末压(left ventricular systolic pressure,LVSP)分别升高13...     

维持性血液透析患者血管钙化相关因素研究

目的:观察维持性血液透析（MHD）患者的血管钙化情况,并分析相关检查结果,探讨影响MHD患者血管钙化的可能因素。方法:选取行MHD且透析时间>3个月的患者102例,行腹部侧位平片观察腹主动脉钙化情况,提示腹主动脉钙化为钙化组,未发现腹主动脉钙化为非钙化组。心脏及颈部血管彩超检查观察2组心脏瓣膜钙化及颈动脉内膜中层厚度（IMT）,根据Kauppila法进行血管钙化评分,同时计算心血管钙化指数。并抽血检查血全段甲状旁腺激素、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、血常规、肝肾功能、血糖、血脂、血钙、血磷、碱性磷酸酶等生化指标。结果:钙化组年龄、透析龄、血磷、是否糖尿病肾病、hs-CRP、IMT与非钙化组差异均有统计学意义（P < 0.05～P < 0.01）。相关性分析研究发现年龄、透析龄、hs-CRP、血磷和IMT与血管钙化评分均呈正相关关系（P < 0.05～P < 0.01）。logistic回归发现患者的年龄、透析龄、是否糖尿病和hs-CRP均是患者发生血管钙化的独立危险因素（P<0.01）。结论:MHD患者血管钙化现象较为常见,伴发糖尿病、高龄、长透析龄及微炎症状态可能是MHD患者血管钙化的独立危险因素。     

血管钙化与高脂血症的关系及辛伐他汀的干预

目的探讨血管钙化和高脂血症的关系及辛伐他汀的治疗作用。方法将SD大鼠随机分为正常组、钙化组、高脂组、钙化高脂组、钙化辛伐他汀组、钙化高脂辛伐他汀等6组,6周后分别测定各组大鼠血脂水平,血管碱性磷酸酶和钙含量,并对血管进行VonKossa染色观察钙沉积。结果钙化组血管钙含量和碱性磷酸酶比正常组增高288.89%和259%,高脂组血清总胆固醇比正常组增高520.11%,高密度脂蛋白降低22%。钙化高脂组钙含量和碱性磷酸酶比钙化组增高36.49%和21.94%,血清总胆固醇比高脂组增高571.56%,高密度脂蛋白降低30%。结论辛伐他汀能减轻血管钙化的程度,高脂血症和血管钙化间互为因果关系,辛伐他汀在降低血脂的同时能减缓血管钙化的进程。     

Bax抑制因子1可抑制体外培养的大鼠血管平滑肌细胞的钙化

目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）对血管平滑肌细胞钙化的具体作用机制。方法 使用β磷酸甘油和氯化钙诱导大鼠主动脉血管平滑肌细胞建立钙化模型。将模型分为对照组（使用常规培养基）、BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用常规培养基）、钙化组（使用钙化培养基）、钙化+BI-1过表达组（过表达BI-1蛋白后使用钙化培养基）4组。运用茜素红S染色测定血管平滑肌细胞钙沉积,酶联免疫吸附法测定细胞碱性磷酸酶活性和钙含量,Western blot法测定Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达水平。结果（1）随着钙化诱导时间的延长,BI-1蛋白表达明显下降,结果具有明显差异性（P=0.001）;（2）使用质粒转染方法过表达BI-1蛋白后,细胞钙含量、碱性磷酸酶活性明显降低（P=0.0006）,Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达明显下降（P=0.0001）,血管钙化减轻;（3）钙化诱导后血管平滑肌细胞凋亡率增加,而过表达BI-1后细胞凋亡率明显减少（P=0.01）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平下降（P=0.0003）。结论 BI-1抑制细胞凋亡、钙磷沉积和细胞骨型分化起到减轻血管钙化作用。     

黄芪皂苷在大鼠血管钙化中作用及可能机制

摘要 目的：在大鼠血管钙化模型上用黄芪皂苷注射液腹腔注射观察对血管钙化的影响,并探讨黄芪皂苷在血管钙化中作用及可能机制。方法：采用维生素D3和尼古丁制备大鼠血管钙化模型;运用von Kossa染色、原子吸收测定钙含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定判断血管钙化程度;用生物化学方法测定血管一氧化氮、超氧化物歧化酶和丙二醛含量;原位缺口末端标记法检测血管平滑肌细胞凋亡。结果：VDN处理组大鼠血管von Kossa染色见平滑肌细胞内和细胞间基质有大量棕黑色颗粒聚集;主动脉钙含量和ALP活性分别较对照高3.6和1.7倍(P<0.01),血管钙化后可加重血管组织氧化性损伤,增加血管平滑肌细胞凋亡;而诱导钙化后注射黄芪皂苷明显改善上述指标,减轻血管钙化程度和组织氧化损伤,平滑肌细胞凋亡细胞数量明显减少。结论：黄芪皂苷主要通过抑制血管平滑肌细胞氧化应激和细胞凋亡而减轻血管钙化。     

钙化血管细胞凋亡基因的变化

目的：观察钙化血管细胞凋亡的现象和细胞凋亡基因的表达，以认识细胞凋亡在血管钙化发病中的意义。方法：利用维生素D3(Vitamin D3)和尼古丁（nicotine）制备大鼠血管钙化模型，检测血管钙含量、碱性磷酸酶（ALP）活性、^45Ca摄入和血管骨钙素含量；应用原位缺口末端标记（TUNEL）、免疫组织化学及DNA Ladder方法检测钙化血管的凋亡情况；应用免疫组织化学方法和^3H-TdR参入方法观察钙化血管的增殖情况。结果：血管的钙含量、ALP活性、^45Ca摄取、骨钙素含量均显著增高。钙化血管中存在凋亡细胞，表现为细胞缩小、核浓缩、核碎裂等。TUNEL结果显示，钙化血管的凋亡指数比正常组高36％，且Caspase-3和Bax的表达明显增强；Bcl-2的表达亦高于正常组；而NF-κB基因表达比正常组低26％。钙化组可见清晰的DNA阶梯状条带，正常组则未出现。钙化组主动脉平滑肌细胞的增殖指数较正常组增加，^3H-TdR参入量增加了2.5倍。结论：钙化血管细胞的凋亡及增殖基因的表达均增强。     

血管钙化大鼠肾动脉BMP2/Smad1/Runx2信号通路的表达

目的 观察血管钙化大鼠模型肾动脉上骨形态蛋白2（BMP2）/Smad1/Runt相关转录因子2（Runx2）信号通路的表达及其变化规律,探讨BMP2/Smad1/Runx2信号通路激活在肾动脉钙化中的作用。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组和钙化组,钙化组建立维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化模型,对照组给予生理盐水和花生油。6周后采用Von Kossa染色检测肾动脉钙化程度,钙离子试剂盒测定大鼠肾动脉钙含量,实时荧光定量PCR检测肾动脉组织中BMP2、Smad1、Runx2 mRNA水平,免疫组化法观察BMP2、Smad1、Runx2及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 Von Kossa染色见钙化组大鼠肾动脉有大量黑色颗粒沉淀。钙化组血管钙含量高于对照组（ P<0.05)。与对照组相比,钙化组大鼠肾动脉组织BMP2、Smad1、Runx2 mRNA的水平升高（P<0.05),BMP2/Smad1/Runx2信号通路蛋白在肾动脉的表达亦同步上调,而α-SMA的表达较对照组下降（P<0.05)。相关分析表明,大鼠肾血管钙含量与肾动脉组织BMP2 mRNA（r =0.655, P<0.05)、Smad1 mRNA (r =0.735, P<0.05)、Runx2 mRNA ( r=0.734, P<0.05)均呈正相关。结论 BMP2/Smad1/Runx2通路的表达变化与肾动脉钙化的严重程度相关,提示BMP2/Smad1/Runx2信号通路参与了肾动脉钙化的发生发展。