CD133/1及Klf4蛋白免疫荧光共定位分析鉴定结直肠癌肿瘤干细胞

目的建立新鲜肿瘤组织的肿瘤干细胞筛选方法,寻找结直肠癌组织中肿瘤干细胞。方法收集新鲜结肠癌组织40例,常规冰冻切片后,以CD133/1和Klf4抗体行免疫荧光双染色。比较免疫荧光染色双阳性细胞数量。结果 40例结直肠癌组织中,33例CD133/1阳性,阳性样本中,癌细胞CD133/1阳性率约5%;27例样本Klf4阳性,其内癌细胞的阳性率约10%。其中CD133/1和Klf4双表达的病例样本有26例,样本内CD133/1和Klf4双表达的细胞约占2%。结论 CD133/1和Klf4蛋白共表达细胞可能是候选的结直肠癌干细胞,为肿瘤干细胞筛选及相关抗肿瘤治疗提供保障。     

结直肠癌CD133+细胞定量评估的意义

目的研究CD133+结直肠癌干细胞与肿瘤增殖、转移的相关性。方法取得术后新鲜的结直肠癌组织后,立刻进行清洗、消化、培养等过程,得到了具有活性的原代结直肠癌单细胞。特异性抗体CD133标记后运用流式细胞技术检测癌干细胞分布比例。癌组织同时进行免疫组化和分子生物学研究,确定增殖蛋白Ki-67、抑制肿瘤转移相关蛋白e-cadherin和细胞凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果结直肠癌原代细胞分离、纯化和检测技术简明可行,所得数据客观准确。研究病例按照CD133+癌干细胞比例≥3%和<3%分成两组。结果显示CD133+癌干细胞≥3%组在肿瘤大小和淋巴转移有增大和增多趋势;肿瘤增殖特异性蛋白Ki-67增高具有显著性差异;抑制肿瘤转移相关蛋白e-cadherin的表达降低;凋亡相关蛋白caspase-3的表达降低。结论本研究成功建立了一套可行性高的结直肠癌CD133+干细胞准确定量评估系统。结直肠癌干细胞的准确定量检测可以作为评估患者预后和化疗敏感度的一项重要指标。本技术也为进一步提纯结直肠癌干细胞,并且最终研究对此靶点的攻击提供了平台。     

CD133在肝癌中的研究进展

肝癌恶性程度高、病情进展快.肿瘤干细胞被认为可能是癌症产生、转移和复发的关键.CD133作为公认的肿瘤干细胞标志物,在多种肿瘤组织中表达.同样也有望成为肝癌干细胞的特异性标记物,成为肝癌治疗的新靶点.     

Ki-67阴性结直肠癌细胞的增殖和自我更新能力的研究

目的观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用。方法通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/lowEpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力。结果从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)%的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)%的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)%和(4.57±1.05)%PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞主要是G0/G1期细胞,在体内处于慢增殖状态;荧光定量PCR证明Ki-67-/low细胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平为Ki-67+细胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差异有统计学意义(P<0.05),体外成球实验,Ki-67-/low及Ki-67+细胞的成球数量分别为(83.00±9.54)和(8.00±2.66)(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞高表达CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关标记物,并具有显著的自我更新能力,富集肿瘤干细胞。结论 Ki-67阴性的结直肠癌细胞具有慢增殖的特点,较Ki-67阳性结直肠癌细胞具有更强的成球能力,在结直肠癌的自我更新中起重要作用,并有可能作为肿瘤干细胞的标记物。     

MsrA在结直肠癌干细胞中的表达及意义

目的探讨MsrA 在结直肠癌干细胞中的表达及与结直肠癌发生、发展的关系。方法免疫磁珠分选结直肠癌细胞株
SW480细胞中CD133+/CD44+/ESA+亚群细胞,RT-PCR检测癌细胞、癌干细胞和正常大肠粘膜细胞中MsrA的表达以及MsrA过
表达对VEGF、MMP-13和CXCR4表达的影响,MTT检测过表达MsrA对结直肠癌干细胞增殖的影响。结果癌干细胞中MsrA
的表达水平明显高于癌细胞,癌细胞中MsrA的表达水平明显高于正常大肠粘膜细胞。MsrA过表达会抑制结直肠癌干细胞的
增殖以及下调VEGF、MMP-13和CXCR4的表达。结论MsrA可能通过下调VEGF、MMP-13和CXCR4的表达和抑制细胞增
殖来抑制结直肠癌的发生、发展。
     

脑肿瘤干细胞的分布与肿瘤微血管的相关性

目的 探讨脑肿瘤干细胞(BTSC)标记物CD133、Nestin和血管内皮细胞标记物CD31在脑胶质瘤中的表达.方法 (1)按照世界卫生组织(WHO)2000年的神经系统肿瘤分类分级标准所有标本分为Ⅱ级18例,Ⅲ级23例,Ⅳ级24例,采用免疫组织化学SP法检测CD133和Nestin在65例胶质瘤组织中的表达.(2)采用免疫荧光双染法检测CD133/CD31、Nestin/CD31和CD133/Nestin共表达情况.计算CD133~+肿瘤干细胞、CD133~+血管、Nestin~+肿瘤干细胞和Nestin~+血管所占的百分率,并进行统计学分析.结果 CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞在各级别胶质瘤中均有表达,并且均可表达于血管内皮细胞.低级别组中,在CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞分布的区域可见CD133~+血管或Nestin~+血管分布较少.在高级别组中,该区域则有丰富的CD133~+血管或Nestin~+血管分布,同时可见肿瘤干细胞包绕着血管生长.并且,CD133~+细胞或Nestin~+细胞的百分比与CD133~+血管(r=0.945,P<0.01)或Nestin~+血管(r=0.727,P<0.01)的表达呈正相关.免疫荧光双染可见,CD133~+细胞或Nestin~+细胞均聚集于CD31~+血管周围,并且,CD133~+/CD31~+、Nestin~+/CD31~+细胞共表达于血管内皮细胞.结论 在脑胶质瘤组织中,血管内皮细胞可表达肿瘤干细胞的标记物,因此认为,肿瘤内微血管可能来源于肿瘤干细胞的分化,并且肿瘤干细胞聚集于微血管周围生长呈巢状分布.随着肿瘤病理级别的升高,CD133~+肿瘤干细胞或Nestin~+肿瘤干细胞的百分比与CD133~+血管或Nestin~+血管的表达呈正相关.     

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定

目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞（CSC）,培养并鉴定其干细胞特性。方法通过原代培养手术切除 结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人 结直肠癌细胞株SW480 的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480 的成瘤能力;并运用 Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型。结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使 CSC分化。软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64%和54.45%,对照组人结直肠癌细胞株SW480 的克隆形成率为4.41%,CSC与SW480集落形成率的差异具有统计学意义（P<0.01）。裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC 皮下注射500 个细胞可形成皮下瘤,而SW480 皮下注射500 个细胞不形成皮下瘤。CSC 表达CD133、CD44,不表达CK7; SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7。结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养 可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力。     

CD133+结直肠肿瘤干细胞中ABC转运蛋白的表达

目的 探讨CD133+结直肠肿瘤干细胞表面ABC转运蛋白的表达.方法 运用流式细胞仪(FACS)分析结直肠肿瘤细胞中CD133的表达,通过实时荧光定量PCR分析9种常见ABC转运蛋白在结直肠肿瘤细胞及正常组织细胞中的表达情况,并筛选出在肿瘤组织中高表达的ABC转运蛋白做免疫荧光分析,观察CD133+细胞中ABC转运蛋白的表达.结果 有(2.59±1.26)%的结直肠肿瘤细胞表达CD133表面标记,在9种ABC转运蛋白中,MRP1在结直肠肿瘤细胞中表达显著高于正常组织细胞,共聚焦显微分析后证明CD133+细胞为主要MRP1表达细胞.结论 MRP1为结直肠肿瘤中主要表达的ABC转运蛋白,并且这一转运蛋白集中表达在CD133+肿瘤细胞中.     

偶联 CD133 核酸适体的载紫杉醇 PLGA-PEG 纳米载体靶向清除CD133阳性肺癌干细胞

目的 构建偶联CD133核酸适体载紫杉醇的聚乳酸-乙醇酸-聚乙二醇（PLGA-PEG）纳米载体（N-Pac-CD133）拟清除肺癌干细胞。方法 采用乳液/溶剂蒸发的方法制备 N-Pac-CD133,同时对 N-Pac-CD133 进行表征,利用磁珠分离法分离出CD133+ 肺癌干细胞后并对该群体的肺癌干细胞特异性进行检测,同时对肺癌细胞的靶向性和杀伤活性进行检测。小鼠体内接种A549肿瘤后,肿瘤治疗分组：生理盐水,空纳米载体链接CD133核酸适体（N-CD133）,紫杉醇,负载紫杉醇的纳米载体（N-Pac）和N-Pac-CD133,8只/组,5 mg/kg紫杉醇,分别于第10、15和20天进行注射。在第40天时,处死小鼠后,对肿瘤进行摘除并称重,同时测量小鼠的体质量。结果 N-Pac-CD133的粒径为100 nm左右,包封率>80%,载药量>8%,在48 h内都显示出持续的药物释放。肺癌细胞的CD133+细胞群体表现出肺癌干细胞的特征：更快的肺癌生长速度（30 d,P=0.001）和更高的肿瘤干细胞基因表达：OV6（P<0.001）、CD133（P=0.001）、OCT3/4（P=0.002）、EpCAM（P=0.04）、NANOG（P=0.005）和 CD44（P=0.02）。与非靶向 N-Pac 和紫杉醇相比,N-Pac-CD133 对肺癌干细胞的靶向性（P<0.001）和细胞毒性作用显著增强。另外,N-Pac-CD133可显著减少肿瘤球的形成（P<0.001）。在治疗终点时,取小鼠肿瘤并对肿瘤进行称量,N-Pac-CD133治疗组和其他治疗组相比,肿瘤体质量显著减小（P<0.001）。结论 CD133核酸适体可以促进紫杉醇纳米载体靶向递送至CD133+肺癌干细胞并杀伤肺癌干细胞。N-Pac-CD133可能是一种有效的靶向肺癌干细胞的治疗手段。     

低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌肿瘤干细胞样特性

目的探讨低氧微环境和结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结直肠癌(CRC)肿瘤干细胞(CSC)样特性生物学行为的影响及机制。 方法将空载体(LV-ctrl组)、MACC1过表达载体(LV-MACC1)转染结肠癌细胞HCT116,同时在低氧微环境条件下培养LV-MACC1细胞(LV-MACC1+hypoxia组)。分别应用CCK-8法及免疫细胞化学法、划痕实验、Transwell侵袭实验、肿瘤球形成实验检测细胞增殖、迁移能力、侵袭能力及体外肿瘤形成能力。免疫印迹法检测MACC1、CD133、CD44、AKT和p-AKT蛋白的表达,740 Y-P验证PI3K/AKT在MACC1诱导的肿瘤干细胞样特性中的作用。 结果与LV-ctrl组比较,LV-MACC1组的细胞增殖、迁移和侵袭能力均增强,肿瘤球形成增多,CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与LV-MACC1组比较,LV-MACC1+hypoxia组的细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,肿瘤球形成增多(P＜0.05)；CD44、CD133和p-AKT蛋白的表达水平增高(P＜0.05)。与对照组比较,740 Y-P增加了细胞CD133和CD44蛋白表达水平(P＜0.05)。 结论低氧微环境增强MACC1调控PI3K/AKT信号通路促进结直肠癌细胞出现肿瘤干细胞样特性。     

Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及意义

目的 探讨Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的表达及其临床病理意义.方法 运用免疫组织化学法检测12份正常结直肠黏膜标本、30份结直肠腺瘤组织标本、50份结直肠腺癌组织标本,了解Notch3、DLL1、CD133在不同结直肠组织中的表达情况,分析其与临床病理特征间的关系.结果 Notch3、DLL1、CD133在结直肠腺癌中的阳性表达率分别为64.0％(32/50)、68.0％(34/50)和54.0％(27/50),均明显高于在结直肠腺瘤中的阳性表达率(26.7％、33.3％、36.7％)和正常结直肠组织中的阳性表达率(8.3％、16.7％、8.3％)(P＜0.05).腺瘤组与正常组相比,差异均无统计学意义(P＞0.05).以上指标在结直肠腺癌中的表达与患者年龄、性别、肿瘤发生部位、分化程度、肿瘤大小无关(P＞0.05),均与是否伴淋巴结转移相关,且Notch3和DLL1的表达与Dukes分期相关,此外DLL1的表达与肿瘤浸润深度也相关(P＜0.05).Notch3与CD133的表达呈正相关(r=0.478,P=0.000).结论 在结直肠腺癌组织中Notch3、DLL1、CD133的表达明显高于正常结直肠组织及结直肠腺瘤组织;Notch3可能通过对肿瘤干细胞的调控,影响结直肠癌的发生、发展.     

CD133在人结直肠癌组织中的表达及其与缺氧诱导因子1α和核心蛋白聚糖的相关性

目的探讨人结直肠癌组织中CD133、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、核心蛋白聚糖(DCN)的表达,分析CD133表达与结直肠癌临床病理特征及HIF-1α、DCN的相关性。方法收集2012年12月至2013年7月新乡医学院第一附属医院保存的结直肠癌组织及其相对应的癌旁组织标本各34例。应用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中CD133、HIF-1α及DCN的表达,分析CD133与HIF-1α及DCN表达的相关性,以及CD133表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。结果结直肠癌组织中CD133、HIF-1α、DCN的相对表达量分别为0. 123±0. 023、0. 117±0. 036、0. 049±0. 018,癌旁组织中CD133、HIF-1α、DCN的相对表达量分别为0. 26±0. 048、0. 018±0. 035、0. 211±0. 014;结直肠癌组织中CD133、HIF-1α的相对表达量高于癌旁组织(P <0. 05),结直肠癌组织中DCN的相对表达量低于癌旁组织(P <0. 05)。CD133表达与淋巴结转移、TNM分期、病理分级有关(P <0. 05),与患者年龄、性别无关(P> 0. 05)。Pearson相关分析显示,结直肠癌组织中CD133表达与HIF-1 a表达呈正相关(P <0. 05),与DCN表达无显著相关性(P> 0. 05)。结论结直肠癌组织中CD133与HIF-1α表达呈正相关; CD133可以作为判断结直肠癌恶性程度的指标,也可作为判断患者预后的潜在指标。     

CD133的研究现状及其与神经胶质瘤的相关性

CD133(prominin-1)是5次跨膜(5-TM)糖蛋白家族中的第1个成员,这种蛋白局限性分布于胞质膜的突出处。人CD133分子存在2种亚型:CD133-1和CD133-2。作为肿瘤干细胞表面标志之一的CD133分子,它可以联合其他组织特异性、细胞特异性的分子进行肿瘤干细胞的筛选,其抗原位点可能会成为肿瘤治疗的靶位点。CD133为寻找神经胶质瘤干细胞特异标志物提供重要线索,是现在分离、纯化神经胶质瘤干细胞最重要的标志物,为肿瘤的发生、发展和预后的判断提供重要线索。但是,CD133作为神经胶质瘤干细胞特异性标志物的可靠性仍颇受争议。本文就近年来CD133的研究现状及其与神经胶质瘤相关性予以综述。     

CD133和 E－cadherin 在结直肠癌组织中的表达及意义

目的：探讨结直肠癌组织中CD133和E－cadherin蛋白表达的关系及临床病理意义。方法应用免疫组化的方法检测CD133和E－cadherin在110例结直肠癌患者石蜡组织切片中的表达情况,并分析CD133、E－cadherin与患者临床病理资料及总体生存率的关系。结果两者的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤位置、肿瘤大小、分化程度及浸润深度均无关（ P＞0．05）;CD133与淋巴结转移及UICC分期密切相关（ P＜0．05） ,而E－cadherin与淋巴结转移、肝转移及UICC分期密切相关（P＜0．05）。 Kaplan－Meier生存分析结果显示,CD133阳性表达的患者5年生存率明显低于阴性表达者（P＜0．05）,E－cadherin阳性表达的患者5年生存率明显高于阴性表达患者。 Pearson 相关性分析结果显示CD133和E －cadherin呈负相关（ P ＜0．05）。结论结直肠癌组织中CD133与E－cadherin的表达呈负相关;CD133表达越高,E－cadherin的表达越低,患者的预后越差。     

CD133+ 胶质瘤干细胞化疗耐受机制分析

目的:探讨ABC超家族转运体蛋白在CD133 胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用机制.方法:选取30例人脑胶质瘤标本,利用免疫磁珠法分选标本中的CD133 胶质瘤干细胞(悬浮细胞)和CD133-肿瘤细胞(黏附细胞),并进行分选细胞的体外扩增培养、传代与鉴定,应用免疫组化和RT-PCR法分别检测细胞中 MDR1和MRP1的蛋白及其活性表达情况.结果:3例胶质母细胞瘤来源的CD133 细胞能在含血清培养基中形成肿瘤干细胞球,并进行1～3次传代;MDR1与MRP1耐药蛋白在CD133 细胞中高度表达,阳性细胞比例范围分别为18%～67%和23%～73%;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达活性分别为在CD133-细胞中的16.1倍和19.6倍;多药耐药蛋白的阳性细胞比例和其表达活性与肿瘤的恶性程度呈正相关,而表达阳性率与肿瘤的病理级别无关;MDR1与MRP1在CD133 细胞中的表达有明显的相关性.结论:神经上皮肿瘤中仅有小部分细胞亚型(CD133 胶质瘤干细胞)具有内在耐药性(天然耐药性),而ABC超家族转运体蛋白MDR1与MRP1在CD133 胶质瘤干细胞中的共同过度表达是胶质瘤多药耐药的主要原因之一;CD133 细胞是胶质瘤化疗的关键性治疗标靶.     

MRP-1、MDR1、GST-π mRNA在CD133~+肿瘤干细胞中的表达分析

目的分离鉴定CD133~+肿瘤干细胞,初步分析MRP-1、MDR1、GST-π在CD133~+胶质瘤干细胞多药耐药性中的作用。方法采用胶质瘤U+251细胞系、磁珠分离,培养CD133~+胶质瘤干细胞,RT-PCR技术分析MRP-1、MDR1、GST-π在CD133~+胶质瘤干细胞中的表达。结果培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物Nestin,分化后细胞表达GFAP、β-tubulin;MRP-1、MDR1、GST-π在CD133~+胶质瘤干细胞中呈高表达,与CD133-胶质瘤干细胞比较差异有统计学意义(P0.05)。结论培养、鉴定胶质母细胞瘤肿瘤干细胞、MRP-1、M DR1、GST-π在CD133~+胶质瘤干细胞中呈高表达,为下一步研究奠定基础。     

无血清培养CD133~+Colo205大肠癌细胞可高表达ALDH1

目的通过观察含生长因子的无血清培养基(serum-free medium,SFM)培养的Colo205细胞,研究其对CD133与ALDH1表达的影响。方法用含生长因子的无血清培养基对Colo205细胞进行培养,以含血清培养基(serum-supplimented medium,SSM)组作为对照,流式细胞术检测两组细胞表面标志物CD133表达的阳性率;流式分选SFM组CD133+细胞和CD133-细胞,倒置显微镜观察CD133+细胞和CD133-细胞在无血清培养基中的生长特性;利用细胞免疫荧光检测CD133+细胞和CD133-细胞CD133和ALDH1的表达;分别将CD133+细胞和CD133-细胞在NOD/SCID小鼠皮下进行成瘤实验,采用免疫组织化学方法对肿瘤组织检测ALDH1表达。结果 SFM组CD133+细胞比例明显高于SSM组(P<0.05);CD133+细胞在SFM中可以形成肿瘤干细胞球,而CD133-则不能形成;CD133+细胞高表达CD133和ALDH1,且两者共表达,而CD133-细胞则是阴性表达;CD133+细胞和CD133-细胞成瘤后,CD133+细胞组肿瘤组织ALDH1阳性表达,而CD133-细胞组阴性表达。结论含生长因子的无血清培养基培养CD133+Colo205大肠癌细胞能够形成肿瘤干细胞球及高表达ALDH1,ALDH1可能是大肠癌干细胞候选的标志物之一。     

桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的作用研究

  目的  探索桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的影响。  方法  流式细胞仪分选并检测CD133+喉癌干细胞比例;肿瘤球形成实验检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力;Transwell实验检测CD133+喉癌干细胞的迁移能力;改良MTT实验检测化疗药物对CD133+喉癌干细胞的细胞毒性作用;免疫荧光染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测CD133+喉癌干细胞的干细胞标志物表达;在不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞后（以桑辛素0 μmol/L为对照）,通过肿瘤球形成实验、Transwell实验、改良MTT实验及Western blot,分别检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力、迁移能力、化疗药物的细胞毒性作用及干细胞标志物表达变化。  结果  流式细胞仪分选结果显示,CD133+喉癌干细胞占喉癌细胞的比例为（3.50±0.34）%;经过培养富集后,其比例可达（93.20±5.23）%。肿瘤球形成实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞具有增强的自我更新能力 (P<0.001);Transwell实验显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞的迁移能力增强（P<0.05）;改良MTT实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞抵抗化疗药物（5-氟尿嘧啶及顺铂）的细胞毒性作用（P<0.05）;免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot结果显示,干细胞标志物（CD133、ALDH1、Sox2、ABCG2及N-cadherin）在CD133+喉癌干细胞中呈高表达水平。通过不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞,其自我更新能力降低（P<0.05）;迁移能力亦下降（P<0.05）;此外,桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞对化疗药物的细胞毒性作用更加敏感（P<0.05）;Western blot结果显示,不同浓度的桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞,其上述的干细胞标志物表达水平下调（P<0.05）。  结论  CD133+喉癌干细胞具有干性表型特征;桑辛素可减弱喉癌干细胞的干性表型,可能与下调其干细胞标志物表达相关。     

小细胞肺癌细胞系H446中肿瘤干细胞的分选与鉴定

 目的 明确能否以表面黏附分子CD133为干细胞标志物,使用免疫磁珠分选（magnetic cell separation,MACS）法分离小细胞肺癌细胞系H446细胞中的肿瘤干细胞。方法 以CD133为特异性分子标志物,使用MACS方法分选H446细胞,比较CD133阳性（CD133+）细胞与CD133阴性（CD133-）细胞在集落形成、自我更新、增殖分化、侵袭性、耐药性和成瘤性方面的不同。结果 CD133+细胞和CD133-细胞在集落形成能力、自我更新能力、增殖能力、分化能力、侵袭能力和耐药性方面基本相同。集落形成和成瘤性实验结果显示：CD133+或CD133-细胞中40%以上的细胞都能够形成含有100个细胞以上的大集落,增殖成为与未分选细胞相同的细胞群,并能在裸鼠身上成瘤。结论 表面黏附分子CD133不能作为分选小细胞肺癌H446细胞系中肿瘤干细胞的分子标志物,分选后的CD133+与CD133-细胞中含有相同的肿瘤干细胞。     

神经上皮肿瘤中脑肿瘤干细胞的分离培养和原发性多药耐药机制分析

目的 探讨ABC家族转运体耐药基因MDK1、MRP1和DNA修复酶耐药基因MGMT在脑肿瘤干细胞原发性多药耐药中的作用机制.方法 以CD133为脑肿瘤干细胞特异性标志物,利用免疫磁珠法分离30例人脑神经上皮肿瘤标本中的CD133+与CD133-细胞,并进行CD133+细胞的体外扩增培养,传代与鉴定.应用半定量RT-PCK法检测CD133+与CD133-细胞中耐药蛋白MDR1、MRP1、MGMT的活性表达情况.结果 免疫磁珠法能有效的分选出脑肿瘤干细胞,该类细胞具有异常的增殖能力.MDR1、MRP1与MGMT耐药基因在CD133+细胞中高度表达,并与肿瘤的病理级别正相关,其总体水平分别为CD133-细胞的16.1、19.6及34.0倍.并非所有的脑肿瘤干细胞均有耐药基因的表达,MDR1、MRP1与MGMT的总体阳性表达率分别为76.7%、86.7%t和73.3%.ABC家族转运体耐药基因和DNA修复酶耐药基因在CD133+细胞中的表达有明显的相关性.结论 神经上皮肿瘤中存在一定比例的CD133+脑肿瘤干细胞,免疫磁珠法能有效的分选出CD133+细胞.在异质性肿瘤中仅有小部分亚群细胞(CD133+脑肿瘤干细胞)具有原发耐药性.而ABC家族耐药蛋白和DNA修复酶在脑肿瘤干细胞中的共同过度表达是临床上脑肿瘤多药耐药的主要原因之一,脑肿瘤干细胞是神经上皮肿瘤原发性化疗耐药的根源和关键性治疗标靶.