不同剂量丹参对大鼠DEN肝癌模型HIF-1α的影响

肝细胞癌组织中的缺氧环境可能是肝细胞癌组织血管增生乃至肝癌生长的重要机制。缺氧诱导因子-1-1α（HIF-1α）是唯一能在低氧条件下具有转录活性的特异性蛋白调节因子，对缺氧反应基因的转录激活发挥关键作用，与肿瘤的进展、转移有着密切关系。祖国医学对慢性病毒性肝炎、     

加减驻景方含药血清对CoCl_2诱导ARPE-19细胞表达VEGF及HIF-1α的影响

目的探讨加减驻景方含药血清对二氯化钴(CoCl_2)诱导后人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19细胞系)中血管内皮生长因子(VEGF)及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达的影响。方法 1.体外培养ARPE-19细胞,取对数生长良好的细胞用于实验,分为正常组,缺氧模型组,阳性对照组、含药血清组,并设立不同时间点。2.酶联免疫吸附试验(ELISA)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞上清液中HIF-1α的表达。3.蛋白质印迹法(Western blot)观察CoCl_2诱导后不同时间、各组细胞中VEGF、HIF-1α的表达情况。结果缺氧损伤后可诱导ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达增加;与正常组比较,缺氧模型组VEGF及HIF-1α的表达高于正常组,差异具有统计学意义(P0.05);含药血清组与模型组比较,VEGF及HIF-1α的表达低于模型组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论加减驻景方含药血清对缺氧损伤后ARPE-19细胞中VEGF、HIF-1α蛋白的表达有抑制作用。     

姜黄素对低氧诱导的HaCaT细胞增殖以及HIF-1α蛋白的影响

目的 研究姜黄素对HaCaT细胞增殖的影响以及对HaCaT细胞在缺氧培养条件下细胞中低氧诱导因子(HIF)-1α蛋白表达的影响,探讨姜黄素对银屑病的作用机制.方法 用不同浓度的姜黄素作用于HaCaT细胞,观察其对细胞增殖的影响;以不同浓度的姜黄素作用于缺氧培养的HaCaT细胞后,免疫组化检测其对HIF-1α蛋白表达的影响.结果 姜黄素对HaCaT细胞的增殖具有明显的抑制作用,作用于缺氧培养的Ha-CaT细胞后其HIF-1α蛋白表达减弱.结论 姜黄素可抑制HaCaT细胞增殖及缺氧培养的HaCaT细胞HIF-1α蛋白的表达.     

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的 探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法 将HepG2细胞分3组：正常对照组、氯化钴（CoCl2）组和CoCl2加10 μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-time RT-PCR检测缺氧诱导因子－1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α） mRNA表达,Western blot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白（epithelial-cadherin,E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。3组HIF-1α mRNA表达比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。     

加味通幽汤对食管癌Eca-109细胞mTOR/HIF-1α通路及肿瘤缺氧相关因子的影响

目的研究加味通幽汤对食管癌Eca-109细胞雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通路及肿瘤缺氧相关因子的影响及干预机制。方法采用加味通幽汤、生理盐水分别灌胃大鼠14 d制备含药和对照血清。实验分为常氧组、缺氧组、常氧含药血清组和缺氧含药血清组,常氧组加入10%对照大鼠血清培养;缺氧组加入10%对照大鼠血清、10%CoCl 2缺氧诱导液培养;常氧含药血清组加入10%含药大鼠血清培养;缺氧含药血清组加入10%含药大鼠血清、10%CoCl 2缺氧诱导液培养。Western blot法检测各组中mTOR、HIF-1α及血管内皮生长因子(VEGF)、骨桥蛋白(OPN)、血管内皮细胞钙黏连蛋白(VE-cadherin)表达情况;实时荧光定量RT-PCR法检测各组中mTOR、HIF-1α、VEGF、OPN、VE-cadherin mRNA表达情况;免疫荧光法分析各组中VE-cadherin与HIF-1α共表达情况。结果Western blot分析显示,缺氧组细胞中mTOR、HIF-1α、VEGF、OPN、VE-cadherin蛋白表达水平均显著高于常氧组(P均<0.05),缺氧含药血清组mTOR、HIF-1α、VEGF、OPN、VE-cadherin蛋白表达水平均显著低于缺氧组(P均<0.05)。实时荧光定量RT-PCR检测显示,缺氧组细胞中mTOR、HIF-1α、VEGF、OPN、VE-cadherin mRNA相对表达水平显著高于常氧组(P均<0.05),缺氧含药血清组mTOR、HIF-1α、VEGF、OPN、VE-cadherin mRNA相对表达水平显著低于缺氧组(P均<0.05)。免疫荧光结果显示,缺氧组HIF-1α与VE-cadherin荧光强度较常氧组明显增强,缺氧含药血清组HIF-1α与VE-cadherin荧光强度较缺氧组均显著降低。结论加味通幽汤可显著抑制缺氧微环境下食管癌Eca109细胞mTOR/HIF-1α通路及肿瘤缺氧相关因子VEGF、OPN和VE-cadherin蛋白和mRNA表达。     

黄芩苷抑制THP-1细胞NF-κB-HIF-1信号轴缓解痛风炎症的机制研究

目的 观察黄芩苷对单钠尿酸盐（MSU）诱导THP-1巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)-缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号轴激活的调节作用，探讨其缓解痛风炎症的作用机制。方法 使用佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞分化为M0巨噬细胞，以MSU刺激诱导体外炎症模型，再分别予黄芩苷、HIF-1α特异性siRNA进行干预。噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芩苷对细胞活力的影响；RT-PCR检测各组HIF-1α、RELA/NF-κB p65及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达水平；Western blotting及细胞免疫荧光法检测HIF-1α、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白含量及表达定位。结果 0～10μmol/L黄芩苷对细胞活力基本无影响；与对照组比较，MSU组HIF-1α、RELA及IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平上调（P <0.05），信号轴关键蛋白HIF-1α、p65、p-p65表达水平显著升高（P <0.05）,HIF-1α、p-p65在细胞核中荧光强度明显增强；...     

蕨麻正丁醇部位下调缺氧内皮细胞HIF-1α及ET-1表达

[目的]探讨蕨麻正丁醇部位对内皮细胞缺氧损伤的保护机制。[方法]采用人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)建立缺氧损伤实验模型,实验设常氧对照组、缺氧模型组、高(3.00 g/L)、中(1.50 g/L)、低浓度(0.75 g/L)蕨麻正丁醇部位组,复方丹参(3.0 g/L)组。胎盘兰染色法测定各组细胞存活率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)m RNA和内皮素-1(ET-1)m RNA表达,免疫细胞化学染色及Western Blot方法检测HIF-1α蛋白表达。放免法测定培养基中ET-1的活性。[结果]与对照组比较,缺氧模型组细胞存活率显著降低,HIF-1α和ET-1m RNA及蛋白表达增加(P0.01);蕨麻正丁醇部位各剂量组与缺氧模型组比较,细胞存活率显著升高,高、中、低剂量蕨麻正丁醇部位组、复方丹参组细胞HIF-1α和ET-1 m RNA及蛋白水平显著降低(P0.01)。[结论]在缺氧状态下,蕨麻正丁醇部位可能通过HIF-1α途径调控靶基因的表达,从而发挥保护作用。     

中医药干预慢阻肺患者肺组织中缺氧诱导因子内皮生长因子的研究进展

缺氧是慢性阻塞性肺疾病重要的致病因素,缺氧引起低氧性肺血管收缩,长期缺氧以及慢性炎症导致肺血管发生重塑,引起持续性肺动脉压力增高。缺氧诱导因子(HIF)广泛存在于慢性缺氧细胞中,HIF-1是机体缺氧反应的关键核转录因子,内皮生长因子(VEGF)是HIF-1α的靶基因,其表达受HIF-1α的调控。VEGF通过诱导细胞增殖和微血管通透性在肺动脉高压的发病机制中发挥作用。缺氧诱导因子、内皮生长因子与肺动脉高压密切相关,中医药干预缺氧诱导因子、内皮生长因子有可能成为治疗COPD新的靶点。     

宁心涤痰汤通过STAT1/LXR-α通路介导的巨噬细胞内质网应激治疗支架内再狭窄的机制研究

目的 观察宁心涤痰汤对STAT1/LXR-α信号通路介导的巨噬细胞内质网应激的影响，从而阐明其抑制支架内再狭窄的分子机制。方法 人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）体外诱导分化成巨噬细胞后分为空白组、模型组、宁心涤痰汤组和辛伐他汀组。通过ox-LDL诱导构建泡沫细胞模型，并给予相应的药物进行干预。分别采用Western blotting和ELISA法检测各组巨噬细胞STAT1/LXR-α通路与内质网应激相关蛋白的表达水平和炎症因子的含量。构建巨噬细胞与血管平滑肌细胞共培养体系，通过CCK8法和划痕实验检测各组平滑肌细胞增殖和迁移能力的改变。结果 与空白组相比，模型组巨噬细胞中p-STAT1、p-PERK、p-elf2α及CHOP蛋白的表达及细胞上清中肿瘤坏死因子-6(IL-6)、人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量均显著升高，LXR-α蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（P <0.01）；与模型组比较，宁心涤痰汤组能够显著抑制巨噬细胞中p-STAT1、p-PERK、p-elf2α及CHOP蛋白的表达和上清中IL-6、MCP-1和TNF-α的...     

以缺氧诱导因子-1为靶点的肿瘤治疗研究进展

缺氧微环境是多数实体瘤的固有特征之一.缺氧诱导的基因受缺氧诱导因子-1(HIF-1)的调控. 1.HIF-1分子结构[1] HIF-1是1992年Semenza等在低氧的肝细胞癌细胞株Hep-3B细胞的核提取物中发现一种蛋白,并通过纯化证实其以异源二聚体的形式存在,由120kD的α亚单位(HIF-1α)和91～94kD的β亚单位(HIF-1β)组成.HIF-1α和β亚基均属于转录因子的碱性螺旋-环-螺旋/PAS(bHLH.PAS)蛋白家族的成员,α亚基的羧基末端含有2个转录活化结构域(TAD-N和TAD-C),参与转录活化.α亚基含有826个氨基酸,β亚基由于位于bHLH结构域N端的一个编码15个氨基酸的外显子的可选择性表达,可含有774或789个氨基酸.     

siRNA沉默HIF-1α在缺氧状态下对鼻咽癌细胞VEGF表达的影响

目的观察体外乏氧培养条件下鼻咽癌细胞系CNE-Ⅱ中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨HIF-1α在低氧条件下对鼻咽癌血管生成的调控作用。方法CoCI2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,RT-PCR、免疫印迹法(Western blot)分别检测缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA(siRNA)介导的RNA干扰技术(RNAi)转染CNE-Ⅱ细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果低氧条件下,CNE-Ⅱ细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。siRNA转染CNE-Ⅱ后能够显著下调HIF-1α的基因表达,同时VEGF基因的表达也受到明显抑制。结论缺氧促使CNE-Ⅱ细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的机制调控鼻咽癌血管生成。     

氧化苦参碱对Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的影响

目的:探讨氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对Aβ_(1-42)诱导的原代星形胶质细胞的影响。方法:采用原代星形胶质细胞模型,随机将细胞分为正常对照组、模型组(Aβ_(1-42)30μmol/L)及OMT低(10μg/m L)、中(100μg/m L)、高(1 000μg/m L)浓度组。应用MTT比色法检测OMT对Aβ_(1-42)诱导原代细胞存活率的影响;应用ELISA试剂盒,检测细胞培养液中脑源性神经营养因子(BDNF)、神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量;应用Western blot法测定营养因子的特异性受体Trk B、Trk A、RET及凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达水平。结果:OMT可呈剂量依赖的提高原代星形胶质细胞的存活率(P0.05)。各浓度OMT均能提高营养因子分泌水平,抑制促炎因子的分泌,并呈剂量依赖性的上调Aβ_(1-42)诱导后原代星形胶质细胞Trk B、Trk A、RET、Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达。结论:OMT能缓解Aβ_(1-42)诱导原代星形胶质细胞的损伤,促进营养因子分泌,其机制可能与促进营养因子受体Trk B、Trk A、RET蛋白和抗凋亡蛋白Bcl-2表达并抑制凋亡蛋白Bax和促炎因子水平有关。     

虫草素抑制脂多糖诱导气道上皮细胞损伤作用机制研究

目的:研究虫草素抑制脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞损伤作用机制。方法:培养气道上皮细胞9HTZ,50μg/ml的LPS干预9HTZ细胞8h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,并收集细胞上清液和细胞,采用酶联免疫法(ELISA)法检测细胞上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),采用Western blot法检测细胞中和转录因子NF-κB、细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达。结果:虫草素(50,100μmol/ml)组能显著抑制LPS诱导的9HTZ细胞的凋亡,并能显著性抑制细胞上清液中的IL-6、IL-1β、TNF-α的含量,抑制细胞中NF-κB、ICAM-1蛋白的表达。讨论:虫草素能保护LPS诱导的气道上皮细胞损伤。     

缺氧诱导因子在类风湿性关节炎模型中的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在类风湿性关节炎组织中的表达情况.方法 采用RT-PCR、免疫组化法检测大鼠类风湿性关节炎模型关节组织中HIF-1α蛋白的表达情况.结果 HIF-1α蛋白在正常大鼠关节组织中不表达,但在RA模型中表达,且表达随模型时间的延长而增加.结论 HIF-1α在类风湿性关节炎组织中表达, 并与炎症严重程度呈正相关,提示HIF-1α对风湿性关节炎的发生发展起重要作用.     

大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的观察大黄对脂多糖致RAW264.7细胞炎症模型mTOR/HIF-1α/VEGF信号通路的影响,探讨其作用机制。方法实验细胞分为正常组、模型组、雷帕霉素组和大黄低、中、高剂量组,MTT法检测细胞毒性后,ELISA检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,实时荧光定量PCR检测缺氧诱导因子-lα(HIF-1α)、p70S6K1和eIF4E mRNA表达,Western blot检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞TNF-α、IL-6、IL-1β含量明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α、eIF4E和p70S6K1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),HIF-1α和VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄各剂量组细胞TNF-α、IL-6和IL-1β含量降低,HIF-1α、p70S6K1和eIF4E mRNA表达降低,HIF-1α、VEGF蛋白表达降低。结论大黄可下调炎症因子水平,其机制可能与其下调HIF-1α、VEGF蛋白表达及HIF-1α、eIF4E、p70S6K1 mRNA表达水平有关。     

细叶远志皂苷通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨细叶远志皂苷（Tenuifolin, Ten）对Aβ_25-35诱导PC12细胞氧化应激及炎症因子的影响。方法 根据前期实验结果,20μM Aβ_25-35作用于PC12细胞,建立细胞损伤模型。40μg/ml TEN予以细胞保护作用。实验分为空白组、模型组、TEN组。试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）表达水平;Western Blot检测白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）蛋白水平。结果 高与空白组比较,SOD、GSH水平下降,MDA水平升高;细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达升高;与模型组比较,TEN能提高SOD、GSH水平,降低MDA水平;降低细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平。结论 TEN能减轻Aβ_25-35诱导PC12细胞的细胞炎性反应及氧化应激,起到细胞保护作用。     

益气养精方对人肺癌A549细胞糖酵解通路中HIF-1α和PFKFB3蛋白的调节作用

目的:研究益气养精方对人肺癌A549细胞糖酵解过程及糖酵解相关蛋白的调节作用。方法:采用不同浓度益气养精方干预A549后肺癌细胞,CCK-8法检测不同时间内的增殖抑制作用;采用乳酸试剂盒检测细胞乳酸生成量;Annexin V-PI双染法检测A549细胞的凋亡率; Western blot法检测A549细胞中糖酵解相关蛋白缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、6-磷酸果糖-2-激酶(PFKFB3)的表达。结果:益气养精方能抑制A549肺癌细胞株的增殖,高浓度的益气养精方对A549细胞具有明显的促进凋亡作用,益气养精方能降低肺癌细胞糖酵解产物即乳酸生成量,在蛋白水平对肺癌细胞糖酵解相关蛋白HIF-1α、PFKFB3的表达有下调作用。结论:益气养精方能抑制肺癌A549增殖作用,可能与抑制肺癌细胞糖酵解有关,其中抑制细胞糖酵解相关蛋白HIF-1α和PFKFB3可能是作用机制之一。     

缺氧诱导因子2α对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)对结肠癌细胞SW480增殖的影响。方法常规培养结肠癌细胞SW480,采用CoCl2处理细胞24 h制备细胞缺氧模型,通过绘制细胞生长曲线观察细胞生长速度和倍增时间的改变;通过流式细胞术观察细胞周期分布的改变。结果缺氧+RNA干扰组HIF-2αmRNA及蛋白的表达与单纯CoCl2处理组相比均明显降低(P均<0.05);单纯缺氧组与对照组、缺氧+siRNA1组和缺氧+siRNA2组相比,细胞生长速度明显加快,倍增时间显著缩短(P均<0.05),而对照组与缺氧+RNA干扰组相比生长速度和倍增时间无明显差异(P>0.05);单纯缺氧组与对照组和缺氧+RNA干扰组相比,未出现明显的G1期阻滞,S期和G2/M期细胞比例显著增加(P<0.05),缺氧+RNA干扰组与对照组相比无显著性变化(P>0.05)。结论 HIF-2α可促进结肠癌细胞SW480增值;靶向HIF-2α的siRNA能够抑制结肠癌细胞SW480中HIF-2α的表达,并抑制SW480细胞的增殖能力。     

温肾壮阳方含药血清调控HIF-1α/VEGF通路对髓核细胞凋亡与增殖的影响

目的 探讨温肾壮阳方含药血清对髓核细胞凋亡、增殖及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)通路的影响。方法 将25只SD雄性大鼠随机分为5组，分别用生理盐水、依托考昔溶液及低、中、高浓度温肾壮阳方进行灌胃7 d制备相应含药血清。取人髓核细胞，实验分为6组：空白对照组用正常大鼠血清培养，缺氧造模组用300μmol/L氯化钴(CoCl₂)溶液干预24 h诱导缺氧状态，依托考昔组用300μmol/L CoCl₂+依托考昔含药血清同时干预24 h,低、中、高浓度温肾壮阳方组分别用300μmol/L CoCl₂+相应浓度肾壮阳方含药血清同时干预24 h。采用CCK-8实验检测细胞生存率，采用Western blot法和qPCR法检测细胞中HIF-1α、VEGF、半胱天冬酶-1(Caspase-1)、p53蛋白与mRNA表达情况，流式细胞术检测髓核间充质干细胞(NPSCs)增殖情况。结果 缺氧诱导各组细胞存活率均明显低于空白对照组(P均<0.05),中浓度温肾壮阳方组、高浓度温肾壮阳方组的细胞存活率均明...