细胞周期因子4抑制因子a和星形细胞上调基因-1与少突胶质细胞瘤的预后关系

目的 探讨细胞周期因子4抑制因子a(inhibitor of CDKda,p16INK4a)和星形细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)在少突胶质细胞瘤中的表达,以及其与少突胶质瘤预后的关系.方法 回顾性分析经病理证实的42例少支胶质瘤资料,采用EnVision免疫组化法检测p16INK4a和AEG-1表达,随访患者生存情况.结果 42例中6例失访,p16INK4a总阳性表达率为66.7%,不同级别肿瘤p16INK4a表达阳性率随肿瘤恶性程度增加而降低,而AEG-1阳性率随肿瘤恶性程度的增加而增高,其总阳性表达率为45.2%.p16INK4a表达与生存时间呈正相关,而AEG-1表达则呈负相关.AEG-1与p16INK4a表达之间呈负相关.结论 p16INK4a和AEG-1的表达强度对判断少支胶质瘤恶性程度和预后具有参考价值,可作为临床评估预后的生物学指标之一.     

少突胶质细胞在脊髓损伤中的病理反应和作用

长期以来的研究认为少突胶质细胞的主要功能是形成中枢神经系统轴突髓鞘、营养和保护轴突,但近年研究发现少突胶质细胞尚有为中枢神经系统提供多种神经营养因子和生长因子、表达轴突生长抑制因子等作用,从而调节神经元、星形胶质细胞,甚至少突胶质细胞本身的生长、发育和存活.少突胶质细胞的凋亡、再生、髓鞘化和形成胶质瘢痕等反应在脊髓损伤继发性病理过程中扮演极其重要的角色,针对少突胶质细胞这一角色制定继发性脊髓损伤治疗新策略,有望成为解决这一医学难题的新切入点.该文就少突胶质细胞的生物学功能及其在脊髓损伤后的反应的研究进展作一综述.     

少突胶质前体细胞移植治疗脊髓损伤

脊髓损伤(spinal cord injuries,SCI)是常见的中枢神经系统损伤,可以造成感觉、运动等神经功能严重丧失。迄今为止,临床上尚无有效方法治疗脊髓损伤。以往研究表明,脊髓损伤后继发性病理生理变化不仅导致神经元丢失及轴突断裂,同时也影响着星形胶质细胞和少突胶质细胞(oligoden     

胰岛素样生长因子-1诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化研究

目的探讨胰岛素样生长因子（IGF），1对多能神经干细胞分化的影响。方法取3～5代神经干细胞培养至对数生长期后接种于多聚赖氨酸包被的盖玻片上，在含有或无IGF-1的培养基条件下贴壁培养7～10d，进行免疫组织化学检测和免疫荧光显色，观察分化为少突胶质细胞、神经元及星形细胞的数量，进行对照分析。结果神经干细胞在不含IGF-1培养基的条件下分化7～10d，分化为少突胶质细胞的数量较少，而在含有IGF-1的培养基的条件下分化为少突胶质细胞的数量明显增加。结论IGF-1可以诱导神经干细胞向少突胶质细胞分化。     

少突胶质前体细胞分化的调节机制

少突胶质前体细胞形成中枢神经系统轴突的髓鞘。近年来,少突胶质前体细胞（OPC）以具有自我更新、分化及髓鞘化中枢神经系统轴突的潜能而引起关注。本文将综述在发育过程中调控OPC分化的分子机制．主要包括细胞骨架水平、转录水平、时空水平以及轴突水平等方面。     

复发性滋养细胞肿瘤预后因素分析

目的对影响滋养细胞肿瘤复发患者预后的因素进行分析,为临床复发患者的治疗及预后评估提供参考。方法回顾性分析1995年1月至2013年12月在北京协和医院接受治疗、至少复发1次且在本院随诊的滋养细胞肿瘤患者。采用SPSS 13.0软件,对复发患者的预后影响因素,包括年龄、末次妊娠性质、转移部位、FIGO分期、评分、首次术前β-HCG水平、首次术前化疗种类、化疗疗程、术后病理等进行分析。结果共纳入86例患者,复发患者的总完全缓解率为84.9%(73/86);单因素分析结果表明,初次于外院复发(P=0.038)及首次复发时间≤3个月(P=0.045)是影响复发患者的不良预后因素;多因素Cox回归模型的预后分析结果表明,首次复发发生于外院(P=0.025)、年龄≥31岁(P=0.048)是复发患者的不良预后因素。结论大多数复发患者能够通过化疗、手术与放疗的联合治疗治愈,对于有不良预后因素的患者仍期待有新的治疗方案。     

新生大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞的培养分离及鉴定

[目的] 探讨新生(sprague dawley,SD)大鼠大脑皮层少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况及培养分离,以获得纯化的少突胶质前体细胞,为今后细胞移植治疗研究提供良好的种子细胞.[方法] 出生48 h SD大鼠取大脑皮层进行混合胶质细胞的体外培养,原代培养第9～10 d时采用水平振荡、差速贴壁的方法分离、纯化少突胶质前体细胞,继续用定向培养基传代培养.相差显微镜观察少突胶质前体细胞在体外条件下的生长情况,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定.[结果] 混合胶质细胞原代培养第9～10 d时出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于单层的星形胶质细胞表面,胞体呈椭圆形或圆形,具有典型的双极突起,少数呈三极突起.经振荡分离后少突胶质前体细胞纯度达95%,少突胶质细胞特异性标记Olig02反应阳性,胶质纤维酸性蛋白抗体反应阴性.[结论] 新生SD大鼠大脑皮层原代培养中少突胶质前体细胞能够维持在未成熟阶段,细胞分层后通过振荡法及差速贴壁法可以获得较高纯度的少突胶质前体细胞.     

少突胶质前体细胞体外增殖与分化的实验研究

目的探讨体外条件下少突胶质前体细胞的增殖与分化特性。方法新生Sprague-Dawley（SD）大鼠取大脑皮层细胞行原代培养,第9～10天时分离少突胶质前体细胞,继续在化学条件培养基内生长。通过光、电镜及免疫化学技术研究少突胶质前体细胞的生长、分化情况,采用MTT法检测少突胶质前体细胞的增殖能力。结果原代培养第9～10天时混合胶质细胞出现明显的细胞分层,少突胶质前体细胞散布于星形胶质细胞表面。分离的少突胶质前体细胞呈Oligo2、PDGFR-α阳性,能进一步分化为成熟少突胶质细胞且表达MBP。MTT法检测显示少突胶质前体细胞在体外保持良好的增殖能力。结论少突胶质前体细胞在体外条件下继续保持定向分化及增殖生长的能力。     

脑源性神经营养因子前体抑制少突胶质细胞前体细胞活性的研究

目的 观察脑源性神经营养因子前体(progenitor of Brain-derive neurotrophic factor,proBDNF)对少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precusor cells,OPCs)增殖、分裂及迁移的影响,探讨proBDNF与p75神经营养因子受体(p75 neurotrophic receptor,p75NTR)信号转导通路的关系.方法 体外实验应用大鼠少突胶质细胞系OLN-93作为研究对象,测定不同浓度proBDNF对OLN-93细胞分裂、增殖活性的影响;应用免疫荧光染色方法观察OLN-93细胞表面p75NTR 、sortilin和内源性proBDNF 的表达;观察proBDNF抗体治疗对OPCs增殖活性的影响.体内实验应用proBDNF抗体对SD大鼠T9脊髓损伤模型进行治疗,观察BBB评分的改善情况;应用免疫荧光染色观察BrdU+/NG2+细胞在脊髓损伤后的数量及聚集部位,评估proBDNF及其抗体对OPCs生物学活性的影响,并观察p75NTR及sortilin 在治疗前后的表达水平变化.结果 proBDNF对OPCs的分裂、增殖具有明显的抑制作用,且可被proBDNF抗体所拮抗.p75NTR的表达水平可被proBDNF抗体下调.结论 内源性proBDNF对OPCs的分裂、增殖具有明显的抑制作用,极有可能通过p75NTR-sortilin通路介导.proBDNF抗体治疗可以拮抗proBDNF的作用,提高OPCs的活性并促进损伤后的功能恢复,具有重要的研究与应用价值.     

CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞迁移的影响及调控

[目的]研究CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)迁移的影响及其调控机制。[方法]通过boyden chamber小室检测不同浓度CXCL12(0 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)对大鼠OPCs迁移能力的影响,利用Western blotting实验检测相应条件下MEK1/2通路中ERK和p-ERK表达的变化;然后利用CXCR4 shRNA抑制CXCR4蛋白表达、U0126阻断MEK1/2通路,利用Western blotting实验检测相应条件下MEK1/2通路中ERK和p-ERK表达的变化,通过boyden chamber小室检测大鼠OPCs迁移能力的变化。[结果]CXCL12能够明显促进大鼠OPCs的迁移,随着胞外CXCL12浓度提高,OPCs内其特异性受体CXCR4表达逐渐增高,与0 ng/ml相比,CXCL12浓度为10 ng/ml和20 ng/ml时CXCR4蛋白相对表达明显增加,差异显著。并且明显促进MEK1/2通路蛋白ERK磷酸水平升高;抑制CXCR4蛋白表达后,CXCL12对少突胶质前体细胞迁移的促进作用受到明显抑制,并且MEK1/2通路蛋白ERK磷酸水平也受到明显抑制;用U0126阻断MEK1/2通路后,CXCL12对大鼠OPCs迁移的促进作用受到明显抑制。[结论]CXCL12/CXCR4能够通过MEK1/2通路调控大鼠OPCs的迁移,为后续深入探讨脊髓损伤治疗方法提供实验基础。     

少枝胶质细胞肿瘤星形细胞上调基因-1表达及其临床意义

目的 探讨少枝胶质细胞肿瘤AEG-1的表达,及其与肿瘤恶性程度和预后的关系.方法 回顾性复习42例经病理证实的少枝胶质细胞肿瘤患者的病史资料,随访患者的预后,采用免疫组织化学法检测42例肿瘤标本和4例正常脑组织AEG-1表达.结果 AEG-1总阳性率为45.2%(19/42),OG(WHOⅡ)组和AOG(WHOⅢ)组的表达率分别为35.5%(11/31)和72.7%(8/11)(x2=4.55,P<0.05),表达水平与肿瘤的级别呈正相关(r=0.392,P<0.05),4例正常脑组织中均无AEG-1表达.42例患者中,失访率14.3%(6例),AEG-1(-),(+)和(艹)组中位生存期分别为7.6、2.3、1.6年(x2=32.74,P<0.01),表明AEG-1的表达水平与少枝胶质细胞肿瘤患者的生存时间呈负相关(r=-0.876,P<0.01).结论 AEG-1可能是少枝胶质细胞肿瘤恶性程度的分子标志物之一,可作为临床评估预后的潜在指标之一.     

神经元与胶质细胞发育分化调控机制的研究进展

目前对神经系统的许多疾病如各种损伤、脱髓鞘性疾病等造成的神经功能严重障碍,其治疗还很不理想,主要归因于对疾病在损伤时的病理变化及修复再生机制了解不多。因此,为了提高神经再生和修复的效率,最大限度地恢复其功能,就必须首先了解神经元和胶质细胞的正常发生和增殖、分化的调控机制及损伤时的病理变化机制,本文就近几年国内外关于这方面的研究作一综述。     

AMPA受体亚基GluR在脊髓损伤导致少突胶质前体细胞凋亡中的作用

目的 观察AMPA受体亚基GluR2（AMPA-GluR2）在脊髓损伤（SCI）前后少突胶质前体细胞（OPC）中的表达,明确AMPA-GluR2在OPC凋亡中的作用。方法 采用胰酶消化法分离并培养原代新生大鼠OPC,建立SD大鼠SCI模型并获取受损脊髓组织。实验分为对照组、SCI组及谷氨酸受体拮抗剂2,3-二羟基6-硝基7-氨磺基苯基喹恶啉（NBQX）组和蜘蛛毒素（JSTX）组。对照组将OPC与正常脊髓组织共培养48 h,其余组将OPC与受损脊髓组织共培养48 h。NBQX组和JSTX组在加入受损脊髓前分别用NBQX（100 μmol/L）、JSTX（1 μmol/L）处理OPC 10 min后更换正常培养基培养。采用免疫细胞化学染色法和蛋白质印迹分析法检测对照组和SCI组AMPA-GluR2表达量,采用流式细胞术检测各组OPC凋亡情况。结果 AMPA-GluR2在OPC细胞膜和细胞质均有表达。SCI组OPC中AMPA-GluR2的表达量较对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）;NBQX组及JSTX组AMPA-GluR2的表达量与对照组相当,均明显高于SCI组,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,SCI组OPC凋亡率升高;与SCI组相比,NBQX组和JSTX组OPC凋亡率下降;差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 SCI诱发的OPC凋亡与AMPAR-GluR2的表达下降有关。     

脊髓源性少突胶质前体细胞在衰老过程中基因组甲基化总体调控模式的变化

目的 观察大鼠脊髓来源的少突胶质前体细胞(OPCs)在衰老过程中基因组DNA甲基化总体调控模式的变化.方法 原代培养新生大鼠、4周大鼠和32周大鼠脊髓组织来源的OPCs细胞,并用免疫荧光染色鉴定其表面标志物A2B5及NG2;采用酶联免疫吸附法检测各组细胞基因组甲基化水平及总体DNA甲基转移酶(DNMTs)活性;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot检测各组细胞DNMTs的3种主要亚型DNMTl、DNMT3a及DNMT3b的mRNA及蛋白表达水平.结果 免疫荧光染色结果显示,本研究培养的OPCs纯度达95％以上.新生组、4周组和32组细胞基因组DNA甲基化水平分别为0.87±0.12、0.79 ±0.14和0.37±0.07,其中32周组与新生组比较差异有统计学意义(P＜0.05);各组细胞总体DNMTs活性呈下降趋势,差异有统计学意义(P ＜0.05);DNMTs的3种亚型DNMT1、DNMT3a及DNMT3b的变化趋势为:与新生组比较,4周组DNMT1的表达下降43％,DNMT3a和DNMT3b的表达分别增高56％和36％;32周组DNMT1的mRNA表达下降69％,DNMT3b表达增高104％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠脊髓源性OPCs在衰老过程中,其基因组甲基化水平及总体DNMTs活性呈下降趋势,而在此过程中DNMT1活性的下降发挥了主要作用.     

CXCL12/CXCR4介导少突胶质前体细胞髓鞘化的作用及调控机制

[目的]体外条件下研究CXCL12/CXCR4介导大鼠少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)髓鞘化的作用及影响。[方法]振荡分离、差速贴壁和免疫细胞化学技术分离、培养、鉴定OPCs;Western blotting检测在不同浓度CXCL12(0、5、10、20 ng/ml)作用下,OPCs髓磷脂碱性蛋白(MBP)和髓鞘脂蛋白(PLP)的表达;CXCR4si RNA干扰CXCR4蛋白表达、LY294002抑制AKT通路活性、U0126抑制ERK通路活性,利用Western blotting检测在20ng/ml CXCL12作用下OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP的表达,并用免疫荧光标记MBP和PLP。[结果]随着细胞外CXCL12的浓度升高,CXCL12能够明显促进OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP的表达。与0 ng/ml相比,CXCL12在20 ng/ml作用后,OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达增加最明显(P<0.05);干扰CXCR4蛋白表达,抑制AKT、ERK通路活性,OPCs髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达受到抑制(P<0.05)。[结论]体外条件CXCL12/CXCR4对大鼠少突胶质前体细胞参与轴突髓鞘化有促进作用,并且能够通过ERK和PI3K/AKT信号通路对髓鞘形成相关蛋白MBP和PLP蛋白表达进行调控。     

AMPA谷氨酸受体亚基-2在大鼠脊髓损伤急性期对少突胶质前体细胞凋亡的影响

目的:探讨AMPA谷氨酸受体亚基-2 (AMPA-GluR2)在大鼠脊髓损伤急性期对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)凋亡的影响。方法:60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=15),脊髓损伤组(SCI组,n=15),AMPA受体拮抗剂NBQX组(n=15)和Ca2+通透性AMPA受体拮抗剂JSTx组(n=15)。SCI组、NBQX组和JSTx组应用Allen′s打击法建立大鼠脊髓(T9)损伤模型。采用BBB评分评估各组大鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况。HE染色观察脊髓损伤后病理学改变。免疫组化和免疫蛋白印迹(Western blot)法检测AMPA-GluR2在各组大鼠脊髓组织中的表达情况。免疫荧光标记OPCs并应用TUNEL法检测其在各组中的凋亡情况。结果:SCI组BBB评分较假手术组降低(P0.05),脊髓损伤后3d NBQX组(3.60±0.65)和JSTx组(3.80±0.76)BBB评分较SCI组(1.50±0.35)高(P0.05),NBQX组和JSTx组之间无差异(P0.05)。HE染色结果显示SCI组和两个拮抗剂组的脊髓组织均存在损伤,脊髓组织腹侧和腹外侧白质病理学损伤评分显示NBQX组(1.60±0.42)与JSTx组(1.50±0.35)评分较SCI组(2.30±0.20)低(P0.05)。AMPA-GluR2免疫组化结果显示,脊髓损伤后3d SCI组阳性细胞数(6.15±0.52)较假手术组(13.25±0.21)明显减少(P0.05),NBQX组(2.10±0.42)和JSTx组(4.45±0.54)阳性细胞数较SCI组少(P0.05),NBQX组阳性细胞数最少,与JSTx组比较有显著性差异(P0.05)。Western blot结果显示,脊髓损伤后3d SCI组和两个拮抗剂组AMPA-GluR2表达水平均较假手术组(0.94±0.07)降低(P0.05),NBQX组(0.37±0.07)及JSTx组(0.54±0.12)较SCI组(0.69±0.03)低(P0.05),且NBQX组AMPA-GluR2表达水平最低(P0.05)。免疫荧光显示,脊髓损伤后3d各组大鼠脊髓组织均存在免疫荧光标记的OPCs;TUNEL法检测OPCs凋亡指数表明,NBQX组(0.21±0.02)和JSTx组(0.17±0.01)较SCI组(0.42±0.02)均降低(P0.05),且JSTx组较NBQX组降低(P0.05)。结论:大鼠脊髓损伤急性期OPCs凋亡与脊髓组织中AMPA-GluR2表达下降有关。     

肝内胆管细胞癌预后因素分析

目的研究影响肝内胆管细胞癌（ICC）手术预后的因素，探讨提高ICC疗效的途径。方法回顾分析1996年12月至2003年6月在我院手术治疗的183例ICC病人的临床资料，对成功随访到的132例病人用Cox回归模型，选择15个对预后可能产生影响的因素进行统计学分析。结果132例外科手术治疗病人1，3，5年生存率分别为51．3％、21．6％和11．8％，统计分析结果显示病人的预后与手术方式、病理分型、是否淋巴结转移以及术前血清CA19—9水平显著相关，而与是否输血、放疗、化疗、肿瘤大小、肝硬化、AFP、TBIL、A／G（白球蛋白比）、性别、年龄等无明显相关。结论规则性肝叶切除＋淋巴结清扫手术是ICC主要的治疗措施；对于术后肝内复发和淋巴结转移的积极预防和治疗是提高ICC生存率的主要策略。     

输尿管移行细胞癌预后影响因素分析

目的提高输尿管移行细胞癌的治疗效果。方法对获随访的３５例输尿管移行细胞癌预后影响因素作回顾性分析。结果输尿管肿瘤３年生存率为５４％，５年生存率为４６％，单发输尿管上中段癌３年、５年生存率分别为８６％和８６％，明显高于下段癌的４３％和２９％（Ｐ＜０．０５）。细胞分级：Ｇ１４例无１例死亡；Ｇ３３年、５年生存率分别为３１％和２３％，明显低于Ｇ２的６６％和５０％（Ｐ＜０．０１）。以临床分期统计其３年、５年生存率：Ｔ１１００％和８３％；Ｔ２６５％和５５％（Ｐ＞０．０５）；Ｔ３均于３年内死亡。结论输尿管移行细胞癌预后差，输尿管下段癌预后最差，肿瘤细胞分化程度及浸润深度是决定预后的主要因素。     

细胞移植与脊髓再生

脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）后，由于在中枢神经系统（centralnervoussystem,CNS）没有能提供断裂轴突有效再生的微环境而使SCI不能痊愈，给伤者留下严重的躯体功能障碍。人们从外周神经移植后轴突完全再生的成功经验中发现：外周神经系统（peripheralnervoussystem,PNS）之所以能完全再生，主要是由于神经轴突的髓鞘细胞———雪旺细胞（Schwanncell,SC，神经膜细胞）能有效地增殖形成引导通道，并分泌大量神经营养因子和细胞分子，促使轴突有效再生，功能恢复。而在CNS，与SC功能相近的少突胶质细胞却无此类功能，其增生迁…     

影响肾癌预后的因素

目的探讨影响肾癌预后的因素。方法对401例’肾癌患者,就20项临床病理因素作Kaplan—Meier单因素分析和COX多因素分析,所有数据用SPSS11．5统计软件处理。结果单因素分析,年龄、性别、病理类型等12项因素对生存率有影响（P〈0．01）。COX多因素分析,仅有年龄、肉瘤样变等7项因素是影响肾癌预后的独立因素（P〈0．05）。赔论老龄、有肉瘤样变、全身症状、腔静脉瘤拴、淋巴结转移、远处转移、TNM高分期。肾癌病人预后差。