聚乳酸乙醇酸/RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性

目的:研究表明RNA Ⅲ抑制肽(RNA Ⅲ inhibiting peptide,RIP)是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂,作用机制与传统抗菌素明显不同,有着良好的应用前景.通过实验评价聚乳酸乙醇酸(polyaiticglycolic acid,PLGA)/RIP缓释微球的血液相容性.方法: 实验于2005-10/2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成.选择成年健康新西兰大白兔30只,按随机数字表法分组,每组6只.药品及试剂: PLGA,二甲基亚砜、MTT,DMEM,二硝基氟苯.实验方法:①PLGA/RIP微球制备:采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RIP纯品.再采用液相复乳法制备直径50～70 mm的PLGA/RIP微球.②洗提液制备:PLGA/RIP微球粉末按1 g/L在37 ℃无菌条件下用生理盐水洗提72 h,制得洗提液原液;加入同体积的无菌生理盐水制得0.5 g/L的稀释液.③溶血实验:以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率.④凝血实验及PLGA/RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验:以生理盐水为阴性对照,观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响.⑤PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验:观察PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响.结果:纳入动物30只, 均进入结果分析.①溶血实验结果显示PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液的溶血率分别为3.24%和2.67%,两者的溶血率均 < 5%,符合医用生物材料的溶血实验要求.②凝血实验结果表明PLGA/RIP洗提液原液和0.5 g/L洗提液对兔凝血时间无明显影响.③PLGA/RIP对各时间点兔凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间均无明显作用.④PLGA/RIP对兔白细胞、红细胞和血小板无明显影响.⑤PLGA/RIP对兔血小板聚集无明显影响.结论: PLGA/RIP缓释微球具有良好的血液相容性.     

聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的组织相容性(英文)

目的:通过实验评价聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的组织相容性.方法:采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RNA Ⅲ抑制肽粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RNA Ⅲ抑制肽纯品.再采用液相复乳法制备直径50-70 μm的聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽微球.以急性全身毒性试验、MTT细胞毒性试验、肌肉内植入试验、过敏试验、热原试验对其组织相容性进行初步评价.结果:①急性全身毒性试验结果显示3组动物无中毒反应,无动物死亡,体质量无明显变化.②MTT细胞毒性试验结果显示两种浸提液的平均细胞增殖率均大于85%,细胞毒等级1级,不具有细胞毒性.③肌肉内植入试验结果显示RNA Ⅲ抑制肽粉末和聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽微球植入4周后,组织未见明显充血、变性或坏死.RNA Ⅲ抑制肽粉末完全降解,微球部分降解,主要细胞成分为纤维母细胞,未见中性粒细胞及多核巨细胞等炎症细胞浸润.④过敏试验结果显示3组动物的平均原发刺激指数分别为0.38、0.33和0.31,3组间无显著差别.⑤热原试验结果显示每种材料测试的3只新西兰大白兔中,体温升高均在0.5℃以下,并且体温升高总度数在1.3℃以下,符合热原实验的评价标准.结论:聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽微球具有良好的组织相容性.     

聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的组织相容性

目的：通过实验评价聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽缓释微球的组织相容性。方法：采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽;采用反相液相色谱法对RNA Ⅲ抑制肽粗品进行纯化分析,按紫外吸收峰收集组分,冷冻干燥,得到RNA Ⅲ抑制肽纯品。再采用液相复乳法制备直径50～70μm的聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽微球。以急性全身毒性试验、MTT细胞毒性试验、肌肉内植入试验、过敏试验、热原试验对其组织相容性进行初步评价。结果：①急性全身毒性试验结果显示3组动物无中毒反应,无动物死亡,体质量无明显变化。②MTT细胞毒性试验结果显示两种浸提液的平均细胞增殖率均大于85%,细胞毒等级1级,不具有细胞毒性。③肌肉内植入试验结果显示RNA Ⅲ抑制肽粉末和聚乳酸乙醇酸/RNA Ⅲ抑制肽微球植入4周后,组织未见明显充血、变性或坏死。RNAⅢ抑制肽粉末完全降解,微球部分降解,主要细胞成分为纤维母细胞,未见中性粒细胞及多核巨细胞等炎症细胞浸润。④过敏试验结果显示3组动物的平均原发刺激指数分别为0.38、0.33和0.31,3组间无显著差别。⑤热原试验结果显示每种材料测试的3只新西兰大白兔中,体温升高均在0.5℃以下,并且体温升高总度数在1.3℃以下,符合热原实验的评价标准。结论：聚乳酸乙醇酸/RNAⅢ抑制肽微球具有良好的组织相容性。     

聚乳酸乙醇酸／RNAⅢ抑制肽缓释微球的血液相容性

目的：研究表明RNA Ⅲ抑制肽（RNA Ⅲ inhibiting peptide，RIP）是葡萄球菌一种有效的全面抑制剂，作用机制与传统抗菌素明显不同，有着良好的应用前景。通过实验评价聚乳酸乙醇酸（polyaitlcglycolic acid，PLGA）／RIP缓释微球的血液相容性。方法：实验于2005-10／2007-10在解放军总医院临床药理研究所及医学动物实验中心完成。选择成年健康新西兰大白兔30只，按随机数字表法分组，每组6只。药品及试剂：PLGA，二甲基亚砜、MTT，DMEM，二硝基氟苯。实验方法：①）PLGA／RIF微球制备：采用Fmoc法由C端至N端先合成粗品肽：采用反相液相色谱法对RIP粗品进行纯化分析，按紫外吸收峰收集组分，冷冻干燥，得到RIP纯品。再采用液相复乳法制备直径50-70mm的PLGA／RIP微球。②洗提液制备：PLGA／RIP微球粉末按1g／L在37℃无菌条件下用生理盐水洗提72h，制得洗提液原液；加入同体积的无菌生理盐水制得0．5g／L的稀释液。③溶血实验：以蒸馏水和生理盐水分别为阳性、阴性对照，观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液的溶血率。④凝血实验及PLGA／RIP对凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响实验：以生理盐水为阴性对照，观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔凝血时间的影响和凝血酶原时间和活化部分凝血酶时间的影响。⑤PLGA／RIP对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响实验：观察PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔白细胞、红细胞和血小板及血小板聚集的影响。结果：纳入动物30只。均进入结果分析。①溶血实验结果显示PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液的溶血率分别为3．24％和2．67％，两者的溶血率均〈5％，符合医用生物材料的溶血实验要求。②凝血实验结果表明PLGA／RIP洗提液原液和0．5g／L洗提液对兔凝血时间无明显影响?     

负载可降解缓释微球壳聚糖支架的生物相容性

背景:负载缓释转化生长因子β1微球壳聚糖支架在体外能够促进软骨细胞生长,且可以诱导骨髓间充质干细胞向软细胞分化,有望作为软骨缺损修复的组织工程材料,然而要进行相应体内实验,其生物相容性是不容忽视的.目的:制各负载缓释微球壳聚糖支架并对其生物相容性进行体内外评价.方法:以溶血试验、急性毒性实验、皮内刺激实验、热源性实验、肌内植入实验,评价自制负载缓释微球壳聚糖支架的生物相容性.结果与结论:支架溶血率为1.6%,镜下未见明显红细胞破坏;材料急性毒性评价程度为无毒;皮内原发刺激记分及原发刺激指数均为0;热源性实验体温升高为(0.17±0.06)℃;肌内植入实验大鼠均成活,全身良好、无感染,4周左右新生毛正常分布,8周大体观察支架周围血管明显增多,与周围肌组织整合良好,心肝肺肾等内脏均无特殊变化,随时间延长,淋巴细胞浸润逐渐减少,可见血管及纤维长入支架,包裹逐渐变薄,支架渐降解.结果说明负载微球多孔壳聚糖支架具有优良的生物相容性.     

纳米级二氧化锆增韧羟基磷灰石的生物相容性

背景:作者前期实验观察了纳米级二氧化锆增韧的羟基磷灰石(ZrO_2-HA)对兔骨髓基质干细胞的增殖、分化的影响.目的:评价自行研制的纳米级二氧化锆增韧的羟基磷灰石生物复合陶瓷的生物相容性.方法:实验根据卫生部的有关标准,采用纳米级二氧化锆增韧的羟基磷灰石材料对新西兰大白兔、健康成年昆明小鼠、成年大白鼠进行了急性毒性实验、亚急性毒性实验、热原实验、溶血实验及肌肉内植入实验.结果与结论:急性毒性试验结果:所有受试实验动物均没有死亡,实验前后体质量差异无显著性差异意义(P>0.05).热原实验结果:没有致热作用.溶血实验:受试标本在1 h之后大体观察判断均无明显溶血现象,酶标仪检测溶血度测得溶血率均小于5％.肌肉内植入实验:伤口均无感染发生,也未见材料排出.4周后,肌肉组织和材料结合紧密,材料孔隙里面有一定量的组织长入,周围肌肉组织始终保持正常形态结构.亚急性毒性试验:2周后复查体质量和血常规,与实验前的数据做比较差异无显著性意义.心,肝,肾组织苏木精-伊红染色光学显微镜观察没有发现坏死灶或其他病变.结果提示纳米级二氧化锆增韧的羟基磷灰石材料是一种无毒、无溶血性、不含热原物质的生物医用材料,对肌肉无刺激作用,在兔体内没有发生炎性排斥反应,与肌肉结合牢固,具有良好的生物相容性.对于将来骨缺损的修复,可能可以作为假体替代材料试用于临床,但还需要全面的评估.     

新型生物可降解材料聚乳酸凝胶的生物相容性

目的:研究新型生物可降解材料聚乳酸凝胶的生物相容性,为此种材料的应用提供生物学依据。方法:实验于2002-11/2003-02在四川大学华西医院移植免疫实验室和动物实验外科完成。通过动物急性毒性试验、溶血试验、遗传毒性试验、肌腱鞘管内及硬膜外长期植入试验测定材料的动物毒性;并通过细胞毒性测定、细胞与材料混合培养,综合评价新材料的生物相容性。结果:聚乳酸凝胶注射入小鼠无急性毒性;材料浸提液无溶血反应(溶血率为0.22%)及遗传毒性(微核率为0.24%);材料在动物体内长期埋植后局部和全身各器官无组织损伤,局部无明显粘连;材料浸提液(1000,500,100g/L)的细胞毒性及分级与阴性对照差异无显著性意义(P>0.05),材料与细胞的混合培养中细胞生长良好。结论:聚乳酸凝胶具有良好的生物相容性。     

转化生长因子β1缓释壳聚糖微球制备及体外的细胞相容性

背景:利用缓释系统释放生长因子,是目前生物活性因子应用研究的方向之一.目的:应用离子交联沉淀法制备壳聚糖-转化生长因子β1缓释微球,观察其体外缓释性能以及细胞相容性.设计、时间及地点:观察性实验,于2006-10/2007-09在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室完成.材料:壳聚糖,脱乙酰度90%,由清华人学化学工程系提供:转化生长因子β1,由晶美公司提供;大鼠由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供.方法:①离子交联沉淀法制各壳聚糖微球,并包裹转化牛长因子β1,制备可体外缓释转化生长因子β1 的壳聚糖-转化生长因子β1缓释微球.②选择传代二三次、生长良好的大鼠胸降主动脉中层肌成纤维细胞,调节细胞密度至1 × 108 L-1,分别加入不同浓度(4,2,1 g/L)壳聚糖微球浸提液,不含浸提液的培养基作为对照培养.主要观察指标:扫描电镜、激光粒度分析仪、Elisa法观察微球表面形态,测定药物载药率、包封率、体外缓释效率等指标:阳甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖情况,评估壳聚糖微球体外细胞相容性.结果:所得微球球形良好.表面光滑,粒径分布集中,平均粒径272 nm.壳聚糖微球有较高的药物包封率,达80.60%.体外释放试验提示,转化生长因子β1初期存在突释现象,前24 h释放达27%,其后可从壳聚糖微球中稳定释放,7 d累计释放达41%.四甲摹偶氮唑盐法提示该壳聚糖微球对细胞体外生长无不良影响,相容性好.结论:离子交联沉淀法制备壳聚糖缓释微球方法简单易行,所得壳聚糖-转化生长因子β1微球具有良好的缓释效能及细胞相容性.     

体内实验评价新型关节软骨修复材料聚乙烯醇/纳米羟基磷灰石+聚酰胺66的生物相容性

目的:采用动物体内实验的方法评价新型修复关节软骨及软骨下骨的复合材料PVA/n-HA PA66的生物相容性.方法: 实验于2006-09/2007-03 在四川大学华西医院组织工程实验室完成.制备PVA/n-HA PA66浸提液,进行以下实验:①急性全身毒性实验:取SD大鼠随机分为2组,分别腹腔注射20%浸提液和生理盐水1 mL,观察动物行为学及体质量变化.②溶血实验:取抗凝兔血加入复合材料粉末后测溶血率.③皮内刺激实验:在新西兰大白兔背部皮内注射浸提液,观察注射浸提液后注射部位的红斑和水肿状况.④皮下植入实验及慢性毒性实验:在SD大鼠背部皮下植入材料,术后2,4,8周取材,观察材料植入皮下后与周围组织的反应情况.术后12周抽血行肝肾功能检测,评价材料对动物有无长期毒性.结果:①急性全身毒性实验小鼠活动正常,大鼠体质量均呈上升趋势,且两组体质量增加比较差异无显著性意义.②3 种浓度梯度的复合材料,溶血率均未超过5%,达到标准要求.③皮内刺激实验:实验侧及阴性对照侧各注射点均未见明显皮肤刺激症状. ④长期毒性实验:术后12周小鼠肝肾功能与正常对照组及术前比较无显著性差异(P > 0.05),组织学切片显示血管和纤维组织进入复合材料网孔中,与复合材料连为一体,未产生排斥反应.结论: 双相生物复合材料PVA/n-HA PA66具有良好的生物相容性.     

生物衍生骨支架材料制备及在体内的组织相容性

背景:理想的支架材料必须对机体无毒性,无免疫排斥反应,并能适时地降解,具有良好的生物相容性,生物衍生骨支架材料能否长期存留体内并发挥功能值得研究.目的:观察生物衍生骨支架材料植入鼠体内后机体局部组织生物相容性及对免疫功能的影响.设计:随机对照动物实验.单位:吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室.材料:实验于2006-03/2006-07在吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室完成,选用18只雄性BALB/C小鼠,体质量(202)g,雌雄各半;1只昆明小鼠,体质量20 g;1只雌性家兔,体质量2.5 kg,以上实验动物均由吉林大学基础医院实验动物部提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.猪松质骨(髂骨)为市售.实验用IMDM 培养基为美国Hycolone公司产品,FBS购自美国GIBCO公司,四甲基偶氮唑盐及ConA均为美国Sigma公司产品.方法:采用猪髂骨制备生物衍生骨支架材料.①采用随机抽签法将BALB/C小鼠分成支架材料植入组、异种骨植入组及对照组,每组6只.支架植入组将支架植入到BALB/C小鼠的下肢肌肉内,异种骨植入组将昆明鼠骨植入到BALB/C小鼠下肢肌肉内,对照组仅将局部肌肉损伤.②术后21 d取材料植入部位及周围组织,大体及苏木精-伊红染色法进行观察材料与组织相容性;采用刀豆蛋白A诱导各组脾淋巴细胞转化,酶联免疫检测仪在λ570 nm波段检测并记录淋巴细胞刺激指数.以补体依赖性细胞毒实验评估各组小鼠免疫功能,即采用酶联免疫检测仪在λ570 nm波段检测并记录各组吸光度值,计算细胞杀伤率.主要检测指标:①植入物周围组织相容性.②刀豆蛋白A诱导后淋巴细胞刺激指数.③补体依赖性细胞毒实验各组细胞杀伤率.结果:18只BALB/C小鼠均进入结果分析.①植入物周围组织相容性:支架材料植入组植入21 d后,支架材料组肉眼可见,埋植物周围软组织均无明显充血、变性、坏死、化脓及积液等表现,大量纤维结缔组织长入材料的孔隙之中,包裹并形成纤维囊.苏木精-伊红染色结果显示埋植物周围未见大量中性粒细胞及多核巨细胞等炎细胞浸润.材料周围有大量纤维结缔组织增生,材料被纤维囊包裹.同时有部分材料已经开始降解,材料降解后的空间有纤维结缔组织增生.异种骨组肉眼见肌肉剖面有坏死组织,苏木精-伊红染色结果显示埋植物周围有大量的中性粒细胞和巨噬细胞浸润,并可见坏死组织.②淋巴细胞刺激指数:异种骨植入组淋巴细胞刺激指数高于对照组,差异有显著性意义(P ＜ 0.05),支架材料组与对照组之间差异无统计学意义(P ＞ 0.05).③细胞杀伤率: 异种骨植入组的细胞杀伤率明显高于对照组,差异有显著性意义(P ＜ 0.05),支架材料组的细胞杀伤率与对照组差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论:本实验获得的生物衍生骨支架材料引起的免疫反应较弱,无明显细胞毒性,不产生明显的炎症反应,具有良好的生物相容性和生物安全性.     

明胶/白芨胶载药多孔材料的组织相容性评价

背景:一些实验已证明,某些中药制剂在与人体组织、体液或血液接触和相互作用时,具有良好的生物相容性,因此可以与生物材料复合,使材料的理化性能以及功用得到改善。目的:评价明胶/白芨胶载药多孔材料的组织相容性。设计:单一样本实验。单位:湖北中医学院针灸骨伤系。材料:实验于2005-02/04在华中科技大学同济医学院骨科完成。选择小白鼠12只,雌雄各半,体质量18～24g;日本大耳白兔6只,兔龄9～10个月,体质量2.8～3.0kg,饲养温度:(18±1)℃,单笼饲养。方法:冷冻干燥法制备海绵状明胶/白芨胶载药多孔材料,把中药黄连、丹参提取物复合到其中;急性全身毒性实验:12只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组动物由腹腔注射标准浓度材料浸提液,剂量为50mL/kg;对照组注射与浸提液同批号的生理盐水,剂量为50mL/kg,注射后24,48,72h观察动物的一般状态,并记录注射后24,48,72h体质量变化。通过体内植入法,将该载药材料植入兔背部肌肉内,术后1,2,6周麻醉后各处死2只兔,取材。通过大体观察和组织学检查观察生物材料在体内的组织反应。主要观察指标:生物材料在兔体内组织反应的大体观察和组织学检查观察。结果:12只小鼠和6只大耳白兔全部进入结果分析。急性全身毒性实验:所有实验小鼠一般情况良好,活动、食欲正常,呼吸平稳,无腹部刺激症状、衰竭、发绀以及死亡现象。注射后24,48,72h小鼠体质量均呈增长趋势,实验组与对照组比较未见明显差异(P>0.05)。植入实验:①大体观察:1周时的取材标本与肌肉纤维组织结合紧密,4周时的取材标本与肌肉纤维组织已融合在一起,不易分离;8周时取材在兔原来的材料植入部位已经看不见明胶/白芨胶载药多孔材料的存在。②组织学观察:明胶/白芨胶载药多孔材料植入1周时,材料标本周围有较多的炎性细胞和间充质细胞,4周时材料部分降解,标本周边炎性细胞浸润减少,植入12周材料周围炎性细胞进一步减小,材料被吸收,被肌肉组织替代。结论:明胶/白芨胶载药多孔材料作为创面修复和皮肤、肌腱组织工程支架材料具有安全可靠性。     

氨基酸聚合物复合硫酸钙材料的体内生物相容性

背景:氨基酸聚合物是一种新型的生物工程材料,具有多种优点,临床应用前景广阔.但现阶段针对此种新型材料的体内试验研究数据仍十分有限.目的:采用动物体内实验的方法,评价新型生物工程材料氨基酸聚合物复合硫酸钙的体内相容性.方法:将多元氨基酸聚合物与硫酸钙进行复合制备成多孔复合材料及其浸提液,进行以下实验:①全身急性毒性实验,10只SD大鼠分为两组,腹腔注射材料浸提液或生理盐水,观察记录1周内大鼠的活动及生长情况.②慢性毒性实验,材料植入新西兰兔背部肌肉,观察术后1,4,8周肝肾功能变化.③皮内刺激实验,5只新西兰大白兔背部皮内注射材料浸提液,观察注射部位红斑、水肿出现情况.④肌肉植入实验,材料植入新西兰兔背部肌肉,术后1,2,4,6,8周取材,观察材料与周围组织反应情况.结果与结论:①急性毒性实验显示大鼠注射材料浸提液后活动正常,两组大鼠体质量均呈上升趋势,且体质量增加率比较差异无显著性意义(P＞o.05).②新西兰兔背部肌肉材料植入后未见明显肝肾功能损害.③皮内刺激实验显示新西兰兔背部浸提液注射部位未出现红斑、水肿等刺激反应情况.④新西兰兔肌肉植入实验显示材料周围炎症反应轻微,包膜逐渐吸收,未见排斥反应.植入材料周边肌细胞的细胞色素氧化酶和乳酸脱氢酶等酶活性在各时间点均无明显减弱.结果提示新型材料氨基酸聚合物复合硫酸钙具有良好的体内安全性和相容性,在体内能够很好的降解、吸收,可望用作骨修复材料.     

重组人骨形态发生蛋白2缓释微球的制备与评价

目的:针对重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)在体内半衰期短、易被稀释代谢的问题,探讨利用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)制备载rhBMP-2微球的可行性和制备工艺,并观察其载药、释药特性.方法:①采用W/O/W型复乳化-溶剂挥发技术制备rhBMP-2/PLGA缓释微球,并对微球的粒径和形态、包封率和载药量,体外释放性质进行测定.②异位成骨实验:昆明小鼠12只,在右侧大腿股内侧肌袋内植入含rhBMP-2的50 mg PLGA微球,4周后取材,观察成骨情况以初步检测微球中的蛋白质活性.结果:①rhBMP-2/PLGA缓释微球形态良好,粒径主要集中在50～60 μm,包封率为(37.52±4.31)%,载药率为(5.12±1.32)%.②微球的释放存在突释,7 d内释放的药物量超过40%,大约90%的药物量于42 d内释放完全.③载药微球植入鼠股部肌袋4周,材料周围有明显的骨形成.结论:制备的rhBMP-2/PLGA微球可以缓慢释放有活性的rhBMP-2,具有临床应用的可行性.     

改性羟基磷灰石骨修复纳米复合材料的制备及生物学评价

目的:制备羟基磷灰石/聚乳酸聚乙醇酸骨修复材料,并对其进行生物学评价。方法:实验于2006-06/2007-02在中科院长春应用化学研究所完成材料制备,在吉林大学基础医学院实验动物中心完成动物实验。将低聚乳酸的羧基与羟基磷灰石表面的钙原子用化学键连接,得到表面接枝聚左旋乳酸的羟基磷灰石,将其与聚乳酸聚乙醇酸共混,得到复合材料PLLA-g-HA/PLGA。溶于氯仿后铺膜(厚0.2mm),用DMEM培养液浸泡材料膜制备浸提液。首先,进行材料生物安全性实验:①细胞毒性实验:将浸提液与培养液混合,接种兔成骨细胞,培养24h,MTT法检测细胞增殖,计算细胞增殖率和细胞毒性级(细胞毒性级0或1级为合格)。②全身毒性实验:小鼠以50mL/kg的剂量静脉注射浸提液,观察72h内小鼠中毒症状。③皮肤刺激实验:兔脊柱两侧皮内注射材料浸提液,观察72h内皮肤有无异常反应。④热原实验:自兔耳缘静脉注入浸提液(10mL/kg)。注射后每0.5h测肛温1次,共6次,以6次中最高的1次减去正常体温,计为升高度数。其次,对复合材料进行细胞黏附性检测:将复合材料制成1%氯仿溶液,涂于硅化的盖玻片上,置于6孔板,每孔接种1×105个成骨细胞,培养3d,在2,24,72h行FITC荧光染色,数码摄像系统拍摄细胞荧光照片。结果:制备了新型PLLA-g-HA/PLGA复合材料。①生物安全性实验结果:MTT实验检测复合材料细胞增殖率为94.8%,细胞毒性级为1级;全身毒性实验中动物无死亡、惊厥、瘫痪、呼吸抑制、腹泻和体质量下降等不良反应;热原实验中兔体温最大的变化值是0.25℃(国家标准为<0.6℃);皮肤刺激实验中未见任何刺激反应,无红斑、焦痂、水肿表现。②细胞黏附性实验结果:细胞接种后2h可见少量细胞开始贴壁;24h时可见贴壁细胞明显增多,并呈聚集生长;培养3d后可见细胞逐渐融合,细胞状态良好。结论:新型PLLA-g-HA/PLGA复合材料符合生物材料细胞毒性要求,按毒性剂量分级属无毒级,无致热原性、对皮肤无刺激作用,具有良好的生物相容性和细胞黏附性。     

煅烧骨的安全性

背景：经高温处理的煅烧骨具有类似自然骨的连续微孔结构,良好的生物相容性和降解性. 目的：观察牛煅烧骨的生物相容性、细胞相容性及毒性. 方法：①细胞相容性实验：将牛煅烧骨与第3代已诱导的Wistar大鼠骨髓间充质干细胞复合培养.②溶血实验：将煅烧骨浸提液、生理盐水与双蒸水加入兔血中.③凝血实验：将煅烧骨加入兔血浆中.④急性毒性实验：在昆明种小鼠尾静脉分别注射煅烧骨浸提液、生理盐水.⑤微核实验：在小鼠腹腔分别注射煅烧骨浸提液、生理盐水与环磷酰胺.⑥局部刺激性实验：将煅烧骨浸提液、生理盐水分别注射于兔两侧脊柱皮下.⑦热源检测实验：在兔耳静脉注射煅烧骨浸提液.⑧皮下植入实验：将煅烧骨材料植入Wistar大鼠背部皮下. 结果与结论：煅烧骨材料无细胞毒性,具有良好的细胞及血液相容性;对皮肤、肌肉无刺激作用;对心、肝、肾重要器官无毒性作用;皮下植入后对周围组织无刺激作用,能够部分降解吸收并被机体组织替代;无致热作用,对凝血功能无影响,对小鼠骨髓细胞无抑制及毒性作用.     

PLGA/甲壳胺无纺布三维生物支架的安全性及组织相容性观察

目的：观察新型三维生物支架聚丙交酯-乙交酯共聚物[poly（dl-lactide-co-glycolide）,PLGA]/甲壳胺无纺布的生物安全性及组织相容性.方法：将PLGA/甲壳胺无纺布三维生物支架植入兔皮下,分别于术后2、4、8、12周进行血常规、肝功能、肾功能检测,观察切口局部情况及心、肝、肾组织学变化,植入支架局部取材进行组织学检查.结果：术后不同时间血常规、肝功能、肾功能检测与术前比较无明显差异（P＞0.05）,心、肝、肾组织学检查观察均未见病理性改变.体内植入大体观察及组织形态学检查显示其具有良好组织相容性.结论：PLGA/甲壳胺无纺布新型三维生物支架具有良好的生物安全性及组织相容性.     

超声脂质微泡与聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米微球复合体在小鼠肝脏的定位释放

目的探讨新型超声微泡[荧光标记的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米微球与超声脂质微泡共价结合复合体]在一定声强的超声定位辐照下,PLGA纳米微球在小鼠体内肝脏组织的定位释放情况。方法用机械振荡法制备超声脂质微泡,双乳化法制备荧光标记的PLGA纳米微球,碳二亚胺法制备新型超声微泡。将实验小鼠分为3组:PLGA纳米微球组(NP组)、超声脂质微泡混合PLGA组(MB+NP组)、新型超声微泡组(MB-NP组),均用一定声强的超声经体表定点辐照小鼠肝脏。以激光共聚焦扫描荧光显微镜定性观察小鼠肝组织中PLGA纳米微球的分布。以DFY微泡测量软件对肝组织中荧光标记的PLGA纳米微球进行计数分析。结果 MB-NP组中的超声微泡周围布满数量不等的纳米微球,呈花环状,且PLGA纳米微球数量明显高于其他组(P均<0.01),MB+NP组的数量高于NP组(P<0.05)。结论新型超声微泡能够明显提高靶组织区内的PLGA纳米微球浓度,从而使PLGA携带的药物更多释放于靶组织中。     

温敏凝胶聚-N-异丙基丙烯酰胺-co-N-羟甲基丙烯酰胺的制备及体内生物相容性评价

目的:制备聚-N-异丙基丙烯酰胺/N-羟甲基丙烯酰胺P(NIPAAm-co-NHMPA),并对其在体内的生物相容性进行观察,初步评价其作为医学植入物的安全性.方法:实验于2007-01/10在华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室、武汉大学化学系医用高分子材料教育部重点实验室完成.①温敏凝胶的制备:以过硫酸铵和四甲基乙二胺为氧化还原引发体系,N, N'-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂制备P(NIPAAm-co-NHMPA),反应体系中添加一定质量分数的N-羟甲基丙烯酰胺,溶涨率法测定低临界溶解温度.②安全性评价:进行过敏实验、急性全身毒性实验、遗传毒性实验、植入实验等一系列体内生物相容性动物实验以评估植入物的安全性.结果:①合成的凝胶材料符合预期的温敏特性要求,低临界溶解温度为38 ℃.②过敏实验结果证实材料没有致敏性;急性全身毒性实验显示该无毒性作用;遗传毒性实验结果初步证实该材料无致畸或致突变作用;体内植入实验表明,材料周围炎性反应轻微而局限.结论:温敏凝胶P(NIPAAm-co-NHMPA)的生物相容性良好,是一种有潜力的医学植入物的原材料.     

载微球骨水泥的体内生物相容性

背景:课题组在前期实验中已经证实了载聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球骨水泥具有较高的强度,良好的注射性能和体外可降解性能,但其生物相容性如何还不清楚.目的:选择急性毒性试验,溶血试验,微核试验等检测载微球骨水泥的生物相容性.方法:首先合成柱状骨水泥和包裹微球骨水泥,取1 g材料加入到100 mL的磷酸缓冲液中无菌条件下浸泡3 d后提取的上清液即为骨水泥浸提液和微球骨水泥浸提液.以急性毒性实验、溶血试验、微核试验和热原试验来考察材料的体内毒性.结果与结论:急性毒性实验结果显示,骨水泥浸提液组和微球骨水泥浸提液组(除高浓度微球骨水泥组外)与阴性对照组均无明显差异,说明该材料浸提液没有对小鼠产生明显的毒性反应.溶血实验显示,各组材料对健康人血的溶血率均未超过5%.微核实验结果显示除0.4 m L骨水泥组和0.4 mL微球骨水泥组的微核率与阴性对照组差异有显著性意义,其余各组差异无显著性意义,说明该微球骨水泥的浸提液无明显细胞遗传毒性作用,但是高浓度和高剂量组的微球骨水泥仍有较低的毒性作用,主要表现为溶血率和微核率的提高,因此在应用时要适当控制微球骨水泥的剂量和浓度.热原试验显示,注射后家兔平均体温升高为0.06℃,小于1.4℃,说明材料无致热作用.     

利福平/聚乳酸-聚羟基乙酸缓释微球的制备及特性

背景:虽然国内外有很多制备利福平/聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly lactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA)微球的报道,但这些微球粒径多在10 μm左右,不适合与磷酸钙骨水泥复合制备成具有良好降解性的抗结核修复材料.目的:制备大粒径利福平/PLGA缓释微球,观察其理化特性和体外缓释特性.方法:以PLGA为载体,将利福平分散于PLGA的有机溶剂中,采用复乳溶剂挥发法制备利福平/ PLGA缓释微球.光镜和扫描电镜下观察微球的形态特征,测定微球平均直径和跨距,高效液相色谱法测定载药量和包封率,以溶出法和高效液相色谱法观察其体外释药特性,并拟合药物体外释放曲线建立曲线方程.结果与结论:利福平/PLGA微球电镜观察呈圆球形,分散性好,粘连少,粒径分布集中,平均粒径(80.0±9.4) μm.载药量、包封率分别为(33.18±1.36)%,(54.79±1.13)%.体外缓释试验显示突释期内微球释放度为(14.66±0.18)%,前3 d累计释放度(18.09±0.45)%,到42 d体外累积释放度达到(92.17±1.23)%.提示利福平/PLGA微球具有良好的缓释效果,是一种较为理想的抗结核药物的载体材料和释放系统;PLGA是良好的药物缓释载体,可以用来制备载药缓释微球.