TGF-β1对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的TGF-β1（0．5μg／L，1μg／L，2μg／L）与体外培养的老年人牙周膜细胞-同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，TGF-β1各浓度组细胞裂解液和培养液中碱性磷酸酶活性均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，除TGF-β1（0．5μg／L）组细胞培养液外，无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有7d时的TGF—β1（0．5μg／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）；在青年组，7d时各组和21d时TGF—β1（1μg／L）组骨钙素分泌均明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d时TGF-β1（1μg／L）、（2μg／L）组和21d时的TGF-β1（0．5μg／L）、（1μg／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：合适浓度的TGF-β1不仅可以促进青年人而且可以促进老年人牙周膜细胞向成骨样细胞转化，增强其成骨能力；其对青年人牙周膜细胞的作用强于老年人。     

甲壳胺对老年人牙周膜细胞分化功能的影响

目的：探讨甲壳胺（Chi）对老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌的影响。方法：将不同浓度的Chi（0．05g／L，0．1g／L，0．2g／L）分别与体外培养的老年人牙周膜细胞一同培养后，采用酶动力学方法和放射免疫法检测老年人牙周膜细胞碱性磷酸酶活性和骨钙素分泌水平，并与青年人牙周膜细胞进行比较。结果：①在老年组，Chi（0．05g／L）组细胞裂解液中和Chi（0．1g／L）及Chi（0．2g／L）组细胞培养液中碱性磷酸酶活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，甲壳胺各组无论是细胞裂解液还是培养液中碱性磷酸酶活性青年组均明显高于老年组（P〈0．05，P〈0．01）。②在老年组，只有21d时的Chi（0．1g／L）组、Chi（0．2g／L）组骨钙素分泌高于对照组（P〈0．05）。在青年组，7d时Chi（0．05g／L）和Chi（0．1g／L）组、14d时Chi（0．1g／L）组及21d时Chi（0．1g／L）组骨钙素分泌均明显强于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。老年组和青年组差值比较，7d和21d时Chi（0．05g／L）、（0．1g／L）组骨钙素分泌青年组明显高于老年组。结论：一定浓度的甲壳胺不论对青年人还是老年人的牙周膜细胞向成骨样细胞转化和成骨能力均有明显的增强作用，对青年人牙周膜细胞的作用程度强于老年人。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

不同生长因子对大鼠牙乳头细胞生物学特性的影响

目的：探讨bFGF＋IGF1、TGFβ1＋BMP4、bFGF＋IGF1＋TGFβ1＋BMP4对体外培养的大鼠牙乳头细胞（rDPCs）增殖、分化的影响并筛选出最佳的组合因子。方法：分离培养、鉴定rDPCs,应用四唑盐（MTT）比色法和酶动力学法分别检测不同组合因子刺激后的第1/4/7/10/14天rDPCs的增殖活性、细胞内总蛋白合成量、碱性磷酸酶（ALP）的分泌水平,应用罗式诊断分析法和放射免疫分析法检测细胞上清液内钙、磷浓度和骨钙素含量。结果：组①bFGF（10ng/mL）＋IGF1（100ng/mL）在P4d能最显著地促进rDPCs的增殖、分化与矿化,并在P10d能显著地升高细胞外液的钙离子、磷离子浓度;组②TGFβ1（5ng/mL）＋BMP4（10ng/mL）在P4d能最大程度地促进rDPCs的分化、矿化并显著促进细胞外液骨钙素的分泌合成,且在P7d能最显著地促进rDPCs内总蛋白的合成（P〈0.05）。结论：bFGF＋IGF1、TGFβ1＋BMP4两组因子均可促进rDPCs的增殖活性和分化潜能,为体外牙齿再生提供实验依据。     

TGF-β1影响钛表面成骨细胞增殖分化的体外研究

目的动态观测TGF—β1和钛片表面微形态对胎鼠成骨细胞增殖分化的影响以及两者之间的相关关系。方法将传代后的成骨细胞接种于不同处理（机械打磨、喷砂处理TPS）钛片表面，加入外源性TGF-β1（浓度为10ng／ml）后MTT法检测细胞增殖，并检测细胞内ALP和细胞外OC的合成分泌状况；设置玻片对照组。结果外源性TGF—β1后对各组钛片表面的成骨细胞增殖均有不同程度的抑制作用，细胞接种后期抑制作用更明显。细胞接种早期，ALP活性和OC分泌量各实验组和对照组与未加因子相比有明显增加（P〈0．05）。细胞接种后期，成骨细胞ALP合成在机械组与未加因子相比明显减少（P〈0.05），喷砂组和TPS组则仍然增加；OC分泌量在机械组和对照组变化不明显，而喷砂组和TPS组OC分泌与未加因子相比明显增加（P〈0．05）。结论浓度为10ng／ml的外源性TGF—β1对不同钛片表面成骨细胞增殖有一定抑制作用。外源性TGF-β1和粗糙钛片表面对成骨细胞分化有一定协同促进作用。     

转化生长因子-β1和甲壳胺联合作用对老年人牙周膜细胞生长分化功能的影响

目的探讨转化生长因子(TGF)-β1和甲壳胺(chitosan,Chi)联合作用对老年人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法用原代培养的老年人牙周膜细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和酶动力学方法检测Chi 0.1 g/L、TGF-β1 1μg/L和Chi(0.1 g/L)加TGF-β1(1μg/L)对老年人牙周膜细胞增殖和ALP的作用。结果①与对照组比较,3 d和5 d时Chi加TGF-β1组和TGF-β1组及7d时Chi加TGF-β1组和Chi组均能明显增强老年人牙周膜细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01),Chi加TGF-β1组的促增殖能力明显强于Chi组和TGF-β1组;②3个实验组的细胞裂解液和Chi加TGF-β1组和TGF-β1组细胞培养液中牙周膜细胞ALP活性均高于对照组(P<0.05,P<0.01),以Chi加TGF-β1组最高(P<0.01)。结论Chi和TGF-β1单独都能增加老年人牙周膜细胞增殖的能力和ALP活性,Chi和TGF-β1联合使用增强老年人牙周膜细胞增殖和ALP活性的能力强于单独使用Chi和TGF-β1。     

bFGF、TGF-β对人牙髓干细胞增殖和分化能力的影响

目的：探讨bFGF和TGF-β对体外培养的人牙髓f细胞增殖和分化能力的影响。方法：采用MTT法分别测定了bFGF和TGF-β作用不同浓度、不同时间单独或联合作用对人牙髓干细胞增殖能力的影响。通过碱性磷酸酶活性检测、细胞形态学观察及DSP、DMP-1免疫组化染色来检测这两种因子对人牙髓十细胞分化能力的影响。结果：0～40ng／mL范围内，bFGF单独作用能显著促进人牙髓干细胞的增殖，EL具有浓度和时间依赖性，而TGF～8促增殖作用较弱；两肯联合作用，促增殖作用无显著提高，而促分化作用显著增强，不仪细胞形态明显改变，而且碱性磷酸酶活性显著提高，DSP、DMP-1呈阳性表达，向成牙本质细胞样细胞分化。结论：bFGF和TG-β对体外培养的人牙髓干细胞增殖和分化具有重要作用，为对探讨影响人牙髓干细胞增殖和分化的因素提供参考依据。     

不同浓度bFGF对犬骨髓基质细胞增殖、分化影响的实验研究

目的：研究不同浓度的碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factot,bFGF）对体外培养的beagle犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal ceils,BMSCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养第2代BMSCs的培养液中分别加入不同浓度（25、50、100、200ng／mL）的bFGF,连续6d倒置显微镜下动态观察BMSCs的形态和生长情况．行MTT比色、碱性磷酸酶（alkalin ephosphatase,ALP）活性定量检测、ALP和Von Kossa染色。结果：浓度为50ng／mL的bFGF可明显促进犬的BMSCs增殖（P〈0．05）,但无显著促进犬BMSCs分化的作用（P〉0．051。结论：bFGF能有效促进犬BMSCs的增殖,且与bFGF剂量有关。     

PRF 及所含三因子对大鼠脂肪干细胞增殖和黏附的影响

目的：研究富血小板纤维蛋白（PRF）及其所含三因子 TGF-β1、PDGF-AB、VEGF 分别对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）增殖和黏附的影响。方法：将 ADSCs 培养在含有 PRF 膜和不同浓度的 PDFG-AB、TGF-β1、BEGF 中,细胞黏附实验检测培养2 h 后细胞黏附能力,CCK-8法检测培养1～7 d 细胞增殖。结果：黏附实验显示,PRF 组的黏附细胞数显著高于阴性对照组（P ＜0．05）;不同浓度的 PDGF-AB 组内黏附细胞数的差异无统计学意义（P ＞0．05）;不同浓度的 TGF-β1、VEGF 组内黏附细胞数的差异有统计学意义（P ＜0．05）。CCK-8实验表明,PRF 组的细胞增殖在各个时间点（1、3、5、7 d）显著高于阴性对照组（P ＜0．05）;不同浓度的 PDGF-AB、VEGF 组内细胞的增殖差异有显著性（P ＜0．05）;不同浓度的 TGF-β1组细胞增殖的差异无显著性（P ＞0．05）。结论：PRF 能提高 ADSCs 的增殖和黏附的能力。PDGF-AB 和 VEGF 可促进 ADSCs 的增殖;TGF-β1和 VEGF 均可促进 ADSCs 的黏附,并呈一定的量效正相关。     

bFGF和壳聚糖对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的:探讨水溶性壳聚糖和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)二者联合应用,对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)的生长增殖和成骨性能的影响。方法:原代培养HPDLFs,观察bFGF和壳聚糖联合作用于HPDLFs后,细胞的增殖情况(MTT比色测定法)、碱性磷酸酶(ALP)活性及骨钙素(OC,放免法检测)的变化情况,并进行统计学分析。结果:bFGF(10ng/ml)和低剂量壳聚糖(0.2mg/ml)组促进细胞增殖,不降低碱性磷酸酶活性,且提高骨钙素合成量。相对bFGF单独作用组,bFGF和壳聚糖联合作用组可上调ALP活性,bFGF(10ng/ml)和高剂量壳聚糖(2mg/ml)组抑制细胞增殖,不降低碱性磷酸酶活性,且有较高的骨钙素合成量。结论:bFGF和低剂量壳聚糖联合作用既可促进细胞增殖,又可促进HPDLFs向成骨细胞转化。bFGF和壳聚糖联合应用可能是一种新型的牙周组织再生的诱导材料。     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶（ALP）活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。方法：采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度（0．1－10ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5％和10％胎牛血清（FBS）体外培养的第3代人牙周膜细胞（PDLCs）的作用。结果：与对照组比较,①10％FBS,5ng／ml和10ng／ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖（P＜0．01－0．05）,5％,10ng／ml的bFGF在24、48小时,5ng／ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用（P＜0．01）。②10％FBS,1ng／ml的bFGF在48、72小时,5ng／ml的bFGF在24、48、72小时,10ng／mlbFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0．01－0．05）;5％FBS,10ng／ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用（P＜0．05）。结论：以上结果提示：在一定的作用时间内一定条件下,5ng／ml和10ng／ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化。     

表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人牙髓干细胞分化的影响

目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响。方法确定EGF与bFGF最大效应浓度后,对细胞分组,根据EGF和bFGF单独或联合应用,分为4组:EGF组、bFGF组、EGF联合bFGF组、不加任何生长因子的对照组。作用1、3、5、7、14 d后,采用ALP活性检测法(酶动力法)检测hDPSCs细胞ALP活性。结果 1～14 d bFGF组ALP活性与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);在5、7、14 d,EGF组和EGF联合bFGF组ALP活性显著高于对照组(P<0.05);EGF联合bFGF组的ALP活性明显高于bFGF组(P<0.05),但EGF联合bFGF组ALP活性与EGF组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 bFGF单独应用不能诱导hDPSCs分化,EGF在hDPSCs的分化中发挥作用,EGF和bFGF无明显协同作用。     

TGF-β1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)在体外对根尖牙乳头干细胞(SCAP)增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代培养人SCAP,并对获得克隆化的SCAP进行免疫组化染色和多向分化能力的初步鉴定。用MTT比色法观察不同浓度的TGF-β1对细胞增殖情况,并通过检测ALP活性和矿化诱导后COL1、DSPP、OCN mRNA表达,分析TGF-β1对SCAP分化能力的影响。结果:5、10、20、40 ng/mL组的TGF-β1在SCAP培养1周内可显著促进细胞增殖(P<0.05);在TGF-β1作用8 d后,细胞ALP活性增强(P<0.05);SCAP矿化诱导2周后,TGF-β1组中COL1、OCN、DSPP的mRNA表达上调(P<0.05)。结论:TGF-β1促进SCAP细胞增殖,并通过提高ALP活性和上调COL1,OCN、DSPP mRNA的表达促进SCAP分化。     

体外培养碱性成纤维细胞因子对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

目的：探讨体外培养过程中,碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）生物学特性的影响。方法：体外分离培养人牙周膜成纤维细胞并鉴定,加入不同浓度bFGF（1ng／ml、10ng／ml、50ng／ml、100ng／ml）培养,MTT方法检测细胞增殖情况;并对细胞进行矿化诱导,检测细胞的碱性磷酸酶活性。结果：hPDLFs呈星形或长梭形,免疫组化波丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证实该细胞来源可靠。bFGF在一定浓度范围内,与细胞增殖成正比,而在本实验培养条件下（10％FBS）bFGF最大效应浓度为10ng／ml。矿化诱导条件下,碱性磷酸酶活性明显增加,在联合应用bFGF的情况下,100ng／ml组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论：不同浓度bFGF对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的影响不同,在一定浓度条件下,低浓度bFGF促进人牙周膜成纤维细胞的增殖,而高浓度bFGF作用于人牙周膜成纤维细胞可能更易于分化。     

雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的：研究雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨其对成骨的影响。方法：体外培养4周龄雌性大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度雌激素作用于成骨细胞,用噻唑蓝法测定细胞增殖情况;对硝基酚磷酸酯法测定细胞碱性磷酸酶活性;检测培养液中羟脯氨酸含量,了解细胞Ⅰ型胶原的分泌情况;通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果：雌激素促进成骨细胞增殖,增加碱性磷酸酶活性;提高培养液中羟脯氨酸含量,峰值浓度为10^-7mol／1,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）;雌激素显著提高细胞的矿化能力,10^-7mol／L浓度作用最显著（＋45．4％,P〈0．05）。结论：雌激素促进成骨细胞增殖和分化,提高其矿化能力,从而刺激骨形成。     

TGF-β3对成骨细胞的增殖和成骨能力的影响及其机制初探

目的 观察不同浓度的转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3, TGF-β3)对成骨细胞增殖和成骨能力的影响及其机制。方法 分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞,纯化并鉴定后用不同浓度的TGF-β3(0.1、1、10、100μg/L)诱导成骨细胞,CCK-8法检测增殖活性,定量检测法测定碱性磷酸酶(ALP)含量;免疫细胞化学染色观察Ⅰ型胶原Α1(COL-1A1)、Runt相关骨形成蛋白-2(Runx-2)和骨钙素(OCN)蛋白表达;qPCR法检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)和Smad4基因的表达;Western blotting法检测Smad2/3蛋白的表达情况。结果 成功分离获得并鉴定成骨细胞;10、100μg/L的TGF-β3能明显促进成骨细胞增殖(P<0.05);10μg/L TGF-β3组ALP含量始终高于对照组(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示10、100μg/L的TGF-β3组各蛋白表达均强于对照组;qPCR结果示10、100μg/L的TGF-β3能促进ALP、OPN、...     

细胞骨架及相关蛋白在人牙周韧带细胞成骨分化过程中的表达模式

目的探讨人牙周韧带细胞（PDLCs）成骨分化过程中细胞骨架及相关蛋白的表达模式及其可能的功能作用。方法酶消化法培养PDLCs．免疫细胞化学染色检测vimentin的表达：取诱导前（对照组）及矿化诱导7、14和21d的PDLCs。实时荧光定量RT—PCR检测vimentin、actin、caldeSIllon（CaD）、tropomyosin（Tm）和annexin A4 mRNA的表达变化并进行统计分析，Western blot检测蛋白表达。结果PDLCs表达丰富的vimentin：Vimentin、actin、CaD和Tm mRNA的表达在诱导7d组下调．诱导14d组和21d组逐渐上调：Annexin A4 mRNA的表达在诱导7d组表现为上调，诱导14d组和21d组逐渐下调：Vimentin的mRNA表达在各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）：CaD和Tm在诱导7d组与14d组之间的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05），其余各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）：Actin和annexin A4在对照组与诱导21d组之间的mRNA表达差异无统计学意义（P〉0．05）．其余各组间差异均有统计学意义（P〈0．05）；Western blot检测蛋白表达显示类似的表达趋势。结论在PDLCs成骨分化过程中．一组细胞骨架及细胞骨架蛋白相关蛋白呈现相似的表达变化．提示其参与调节PDLCs成骨分化。     

甲状旁腺激素对去卵巢大鼠骨质疏松牙周炎模型骨代谢的影响

目的：观察甲状旁腺激素对去卵巢大鼠骨质疏松牙周炎模型骨代谢的影响。方法：4月龄健康雌性Wistar大鼠68只,随机分成4组,每组17只。即A组（健康对照组）、B组（伪手术组）、C组（去势牙周炎组）,D组（去势牙周炎加甲状旁腺激素治疗组）。模型建立成功后,A、B、C组腹腔内注射等量的生理盐水,D组间歇性小剂量腹腔内注射等量甲状旁腺激素,隔日注射一次,用药8周。治疗后处死大鼠并通过CBCT扫描测定上颌骨密度,检测血清中钙（Ca2＋）、磷（P3＋）、碱性磷酸酶（ALP）水平。结果：治疗8周后,经CBCT图像测量,D组上颌骨密度较C组明显升高,差异有统计学意义（P〈O．05）,与A、B组上颌骨密度无明显差异,无统计学意义（P〉0．05）。D组外周血中ALP水平高于A、B、C组（P〈0．05）,差异有统计学意义,各组血清钙、磷值没有明显改变（P〉0．05）。结论．小剂量注射甲状旁腺激素能够增加骨密度并改善外周血中ALP的水平,促进牙槽骨的形成,对绝经期后牙周炎有明显的治疗作用。     

Wnt／β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞牵张中的表达

目的：了解经典Wnt信号通路在骨髓间充质干细胞（BMSCs）加载牵张中的作用。方法：分离培养大鼠BMSCs,通过自行研制的细胞加载装置．对BMSCs施加机械张应力刺激。用实时荧光定量RT—PCR与Western印迹检测Wnt3A、B—catenin与Lef-1的表达,同时检测BMSCs细胞增殖及骨向分化转录因子Runx2与成骨因子碱性磷酸酶（ALP）的变化情况。所得数据应用SPSS19．0软件包进行配对￡检验。结果：在牵张力刺激下,经典Wnt信号通路的3个关键分子Wnt3A、β-atenin与IJef_因表达显著增强（P〈0．05）。BMSCs的增殖、Runx2表达以及ALP活性也在加力后增强（P〈0．05）。结论：张应力加载激活了经典Wnt信号通路．并刺激BMSCs增殖与骨向分化,提示Wnt／β-catenin参与了牵张成骨的分子调控过程。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响

目的：观察基因重组入碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF)牙龈成纤维细胞（GF）、人牙周韧带成纤维细胞（PDLF）及人牙槽骨细胞（ABC）的增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白含量及对3种细胞矿化结节形成能力的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶测定法、考马宙蓝法及茜素红染色法。结果bFGF能促进3种细胞的增殖,但对PDLF和ABC的ALP活性,蛋白含量及矿化结节的形成有抑制作用。结论bFGF可促进细胞的增殖,抑制细胞的分化成熟,从而促进牙周再生。