不同剂量美托洛尔对心力衰竭大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响

目的探讨不同剂量美托洛尔对心力衰竭(以下简称心衰)大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响.方法用腹主动脉缩窄法建立心衰大鼠模型,正常大鼠为对照组.4个月时对心衰大鼠随机分为心衰组及美托洛尔低剂量组(10mg/kg·d)及高剂量组(15mg/kg·d).6周后行心脏超声、血流动力学检查及SERCA2a蛋白及活性测定.结果同对照组比较,心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)显著升高,短轴缩短率(FS)、左室收缩压(LVSP)、压力最大上升及下降速率(±dp/dtmax)显著降低(P＜0.05),左室收缩、舒张末直径(LVESD/LVEDD),左室后壁厚度(LVPWD)、室间隔厚度(VSD)及左室质量指数(LVWI)显著增加(P＜0.05);美托洛尔治疗后,LVSP、+dp/dtmax较心衰组显著增加(P＜0.05),LVEDD、VSD、LVWI显著减小(P＜0.05),但只有LVEDD达到对照组水平(P＞0.05);高剂量美托洛尔组FS增加,较低剂量组有显著差异(P＜0.05),但其他指标无显著差异(P＞0.05);同心衰组比较,美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,能显著升高其活性(P＜0.05),但未达到对照组水平(P＜0.05).结论不同剂量的美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,但能显著升高其活性,这可能是其改善心衰大鼠的心脏功能,抑制心肌重塑的机制之一.     

Improvement in cardiac function after sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase gene transfer in a beagle heart failure model

Background Heart failure （HF） is a major cause of morbidity and mortality worldwide, but current treatment modalities cannot reverse the underlying pathological state of the heart. Gene-based therapies are emerging as promising therapeutic modalities in HF patients. Our previous studies have shown that recombinant adeno-associated viral （rAAV） gene transfer of Sarco-endoplasmic reticulum calcium ATPase （SERCA2a） can be effective in treating rats with chronic heart failure （CHF）. The aim of this study was to examine the effects of SERCA2a gene transfer in a large HF animal model. Methods HF was induced in beagles by rapid right ventricular pacing （230 beats/min） for 30 days. A reduced rate ventricular pacing （180 beats/min） was continued for another 30 days. The beagles were assigned to four groups： （a） control group （n=4）; （b） HF group （n=4）; （c） enhanced green fluorescent protein group （n=4）; and （d） SERCA2a group （n=4）. rAAV1-EGFP （1×10^12 μg） and rAAV1-SERCA2a （1×10^12 μg） were delivered intramyocardially. SERCA2a expression was assessed by Western blotting and immunohistochemistry. Results Following 30 days of SERCA2a gene transfer in HF beagles its protein expression was significantly higher than in the HF group than in the control group （P 〈0.05）. Heart function improved along with the increase in SERCA2a expression. Left ventricular systolic function significantly improved, including the ejection fraction, left ventricular systolic pressure, maximal rate of rise of left ventricular pressure （＋dp/dtmax）, and the maximal rate of decline of left ventricular pressure （-dp/dtmax） （P 〈0.05）. Left ventricular end-diastole pressure significantly decreased （P 〈0.05）. The expression of SERCA2a in the myocardial tissue was higher in the SERCA2a group than in the HF group （P〈0.05）. Conclusions Intramyocardial injection of rAAV1-SERCA2a can improve the cardiac function in beagles induced with HE We expect further studies on SERCA2a＇s long-term safety, efficacy, dosage and the optimization before using it in humans with HF.     

缬沙坦对心力衰竭幼鼠心功能及肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响

目的：研究缬沙坦对心力衰竭（Heartfailure,HF）（简称心衰）幼鼠心功能及肌浆网（Sarcoplasmic reticulum,SR）Ca^2＋-ATP酶（Ca^2＋-ATPase,SERCA2a）活性和Ca^2＋重吸收量的影响。方法：采用腹主动脉-下腔静脉造瘘术建立幼鼠心衰模型,术后8周随机分为2组：心衰组和缬沙坦治疗组,另设假手术组;缬沙坦灌胃给药,每日观察幼鼠的呼吸、皮毛颜色、活动量等发育情况;术后12周高频超声检测心功能;定磷法测定SR膜SERCA2a酶活性;荧光分光光度仪检测钙离子（Ca^2＋）的重吸收量。结果：与假手术组（n=15）比较,对照组（n=20）幼鼠左室舒张末期内径（LVIDd）、左室收缩末期内径（LVIDs）、左室舒张末期容积（LVEDV）、左室收缩末期容积（LVESV）均明显升高（P〈0．01）,左室射血分数（EF）、左室短轴缩短率（Fs）均明显降低（P〈0．01）;与对照组比较,缬沙坦治疗组（n=15）,LVIDd、LVIDs、LVEDV、LVESV均明显降低（P〈0．01）,FS、EF升高（P〈0．01）;对照组的SERCA2a活性较假手术组明显降低（P〈0．01）,而经缬沙坦治疗后,酶活性接近假手术组（P〉0．05）;若分别向含有3组SR的缓冲液加入0．5mmol/L ATP后,对照组的Ca^2＋的重吸收量同假手术组比较,明显降低（P〈0．01）,与对照组比较,缬沙坦组Ca^2＋的重吸收量显著提高（P〈0．01）。结论：对照组幼鼠心功能显著降低,心肌细胞SERCA2a活性降低,Ca^2＋重拾量减少,缬沙坦可提高SERCA2a的Ca^2＋重拾能力,改善细胞收缩、舒张功能,进一步提高心脏功能并有效抑制心室重塑。     

美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响

目的 探讨美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响.方法 腹主动脉缩窄法建立心衰大鼠模型,同时设假手术组.对心衰大鼠随机分为心力衰竭组及美托洛尔组10 mg/(kg·d),观察6周,行心脏超声、血流动力学检查及SERCA2a蛋白及活性测定.结果 同假手术组比较,心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)显著升高,短轴缩短率(FS)、左室收缩压(LVSP)、压力最大上升及下降速率(±dp/dt max)显著降低(P＜0.05),左室收缩、舒张末直径(LVESD/LVEDD),左室后壁厚度(LVPWD)、室间隔厚度(VSD)及左室质量指数(LVWI)显著增加(P＜0.05);美托洛尔治疗后,LVSP、±dp/dt max较心衰组显著增加(P＜0.05),LVEDD、VSD、LVWI显著减小(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05);同心衰组比较,美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,能显著升高其活性(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05).结论 美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,但能显著升高其活性,这可能是其改善心衰大鼠的心脏功能,抑制心肌重塑的机制之一.     

肌浆网内钙容量减少对心肌细胞钙释放的影响

目的:较系统地研究肌浆网(SR)内钙容量的减少对心肌细胞钙释放的影响.方法:采用肌浆网膜的钙泵抑制剂thapsigargin(TG)耗减SR内钙容量,以喷咖啡因的方法估测SR内钙容量,以局部场刺激的方法诱发全细胞的钙释放.胞内钙信号的变化均采用激光共聚焦显微镜的方法记录.结果:SR钙泵抑制剂TG以剂量依赖和非线性的时间依赖方式引致心肌细胞SR内钙容量的耗减,而钙容量的耗减可相应地引起全细胞水平的钙释放减少.但二者的变化不完全平行,SR内钙容量的少量减少即可引起胞内钙释放的显著减少,而当SR内钙耗减到一定程度后(虽然此时SR内Ca2 仍远高于胞质内钙),场刺激已很难或无法引致钙释放.结论:心肌细胞SR内钙容量对胞内钙释放具有重要的非线性调节作用.     

卡维地洛干预心衰对大鼠心肌细胞凋亡和肌浆网钙泵活性的影响

目的　从细胞内钙调节和细胞凋亡角度探讨卡维地洛治疗心力衰竭的机制。方法　采用结扎冠状动脉复制心力衰竭大鼠模型 ,对照观察非选择性 β 受体阻滞剂卡维地洛和α1 受体阻滞剂特拉唑嗪干预心衰对左室心肌细胞凋亡率和肌浆网钙泵 (SERCA2a)活性的影响。结果　与对照组 (C组 )相比 ,心衰组 (F组 )SERCA2a活性显著降低 (P <0 .0 1) ,心肌细胞凋亡率显著升高 (P <0 .0 1) ;特拉唑嗪组 (T组 )心肌细胞凋亡率、SERCA2a活性与F组无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;卡维地洛剂量依赖地降低心肌细胞凋亡率 ,增高SERCA2a活性。SERCA2a活性与心肌细胞凋亡率显著负相关 (r =-0 .814 ,P <0 .0 0 1) ,与 +dp/dtmax、-dp/dtmax显著正相关 (r =0 .691、0 .64 5 ,P <0 .0 0 1)。结论　SERCA2a活性异常 ,可能参与心力衰竭心肌细胞凋亡的调节。增加SERCA2a活性 ,抑制心肌细胞凋亡 ,可能是卡维地洛治疗心力衰竭的重要机制。卡维地洛的上述效应与α1 受体阻滞作用无关。     

心衰大鼠心肌SR Ca2+泵活性和Ca2+释放通道密度的变化及培哚普利干预的影响

目的　探讨ACEI干预慢性心衰对心肌肌浆网(SR)Ca     

阿霉素对实验兔心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响

目的：探讨治疗剂量阿霉素（ADR）对心脏血流动力学及心肌肌浆网Ca^2 －ATP酶活性的影响。方法：实验兔每周静脉注射ADR（2mg/kg）1次，共8周，以健康同龄兔静脉注射等量生理盐水为对照组。这药3周后多普勒测定降主动脉血流量，以代表心输出量（CO），左颈总动脉和左心室插管测定血压（BP），平均动脉压（MAP），左心室收缩压（LVSP），左心室舒张末压（LVEDP）。应用荧光分光光度计测定心肌细胞内游离钙（MyoCa^2 ）浓度，无机磷酸根法测定心肌肌浆网（SR）Ca^2 －ATP酶活性。结果：阿霉素组CO、BP、MAP、LVSP均较对照组低，而VEDP则明显增高。阿霉素组使MyoCa^2 浓度显著增高，同时SR Ca^2 -ATP酶活性明显低于对照组。结论：治疗剂量阿霉素可使心脏功能下降，心肌细胞内钙超载及SR Ca^2 －ATP酶活性降低。     

心衰大鼠心肌SR Ca2+释放通道数量及其mRNA表达的变化及培哚普利干预的影响

目的　探讨慢性心衰心肌肌浆网 (SR)Ca2 + 释放通道 (RyR2 )数量及其mRNA表达的变化及ACEI干预的影响及意义。方法　通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心衰模型 ,以培哚普利进行干预 ,对照观察血流动力学、[3 H]-ryanodine与左室心肌RyR2 最大结合量 (Bmax)和Kd 值、RyR2 mRNA表达水平。结果　与对照组 (C组 )相比 ,心衰组 (F组 )LVEDP显著升高 (P <0 .0 1) ,+dp/dtmax、-dp/dtmax显著降低 (P <0 .0 1) ,培哚普利组 (P组 )LVEDP显著低于F组 (P <0 .0 1) ,+dp/dtmax、-dp/dtmax显著高于F组 (P<0 .0 1)。F组 [3 H]-ryanodine与RyR2 最大结合量Bmax显著低于C组 (P <0 .0 1) ,P组显著高于F组 (P <0 .0 1) ,三组Kd 值无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;F组RyR2 mRNA表达水平显著低于C组 (P <0 .0 1) ,P组显著高于F组 (P <0 .0 1)。结论　慢性心衰心肌SRCa2 + 释放通道数量及其mRNA表达水平降低 ,培哚普利长期干预慢性心衰 ,能够增加RyR2 基因表达 ,增加RyR2 数量 ,可能与其改善心肌收缩功能有关     

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

目的 评价缺血再灌注（I／R）对心肌肌浆网（SR）钙释放功能的影响。方法 将16只新西兰兔完全随机平分为对照组、缺血再灌注组；采用langendorff离体心脏灌注模型；蔗糖密度梯度离心法制备心肌肌浆网；微孔滤过滤技术测定心肌肌浆网钙转运功能改变；并定量RT－PCR检测相应蛋白质mRNA表达水平改变。结果与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平改变。结果 与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平明显减少。结论 缺血再灌注后心肌肌浆网Ryanodine受体2基因表达减少，然后总的释钙量未见减少。     

低频复合生理频率慢性电刺激对肺气肿兔膈肌肌浆网Ca2+-ATP酶活性及Ca2+摄取和释放动力学的影响

目的 研究低频复合生理频率慢性电刺激后肺气肿兔膈肌肌浆网(SR)Ca2 -ATP酶及钙离子摄取和释放动力学的适应性变化.方法 采用木瓜蛋白酶雾化吸入法建立肺气肿模型:测定正常对照组、肺气肿组和肺气肿慢性电刺激(CES)组SR Ca2 -ATP酶的活性及Ca2 的摄取和释放动力学变化.结果 (1)(10 40)Hz慢性电刺激后,膈肌SRCa2 -ATP酶活性增高(P＜0.05).10Hz组Ca2 -ATP酶活性降低(P＜0.05).(2)(10 40)Hz慢性电刺激后,膈肌SRCa2 摄取和释放功能增强(P＜0.05);10Hz组膈肌SRCa2 摄取和释放功能减弱(P＜0.05).结论 不同频率的CES可导致膈肌SRCa2 -ATP酶的活性及Ca2 的摄取和释放动力学产生不同的适应性变化,慢性低频复合生理频率电刺激能增强膈肌SRCa2 -ATP酶活性,提高肺气肿兔膈肌SRCa2 摄取和释放能力,可能是体外膈肌起搏对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者膈肌康复治疗的较好频率模式之一.     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+转运的影响

目的：观察ＤＮＡ与骨骼肌肌质网蛋白结合后对肌质网功能的影响。方法：应用差速离心分离大鼠骨骼肌肌质网,并用４５ＣａＣｌ２作为示踪剂,观察质粒ＤＮＡｐｃＤＮＡ３和ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ对肌质网钙转运功能的影响。结果：两种质粒均可明显增加肌质网Ｃａ２＋摄取,呈明显的量效关系,并且也可促进肌质网钙释放。结论：外源质粒ＤＮＡ可影响肌质网钙转运功能。     

甲亢性心肌病中肾素-血管紧张素系统和肌浆网钙泵的变化

目的:探讨甲亢性心肌病的发病机制.方法:建立甲亢性心肌病模型,观察心肌肥厚指数、心肌细胞直径、心肌胶原容积分数、心肌羟脯氨酸含量、超微结构改变、肌浆网钙泵(myocardial sarco/endoplasmic Ca2+-ATPase,SERCA)活力及心肌血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱreceptor type 1,AT1)mRNA表达的变化,以氯沙坦和福辛普利阻断肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)的不同部位,观察RAS在甲亢性心肌病模型中的作用.结果:L-甲状腺激素腹腔给药二周可致左右心室肌明显肥厚,胶原组织增生,肌浆网钙泵活力下降,AT1受体上调,氯沙坦和福辛普利可防止甲状腺素诱导的心肌肥厚形成.结论:RAS和SERCA在甲亢性心肌病的发生中起重要作用.     

高血压左心室肥厚与心肌肌浆网钙调节蛋白相关性的实验研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ及肌浆网钙调节蛋白在高血压左心室肥厚形成中的作用和机制。方法 以自发性高血压大鼠,培哚普利治疗组和对照组为模型;分别测定左心室心肌血管紧张素Ⅱ含量,肌浆网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体密度和Ｋ受体亲和力及钙ＡＴＰ酶活力。结果左心室在肥厚与心肌ＡｎｇⅡ含量,肌浆网钙调节蛋白及钙ＡＴＰ酶活性相关（１）左心室心肌ＡｎｇⅡ含量：ＳＨＲ组「（１６．７±５．２ｐｇ／ｍｇ」比ＷＫＹ组升高「（１２     

心肌钙泵新的调节蛋白——sarcolipin 研究进展

Sarcolipin (SLN) 是新近发现存在于肌浆网中的小分子膜蛋白,分子质量为3 kD,由31 个氨基酸构成,与受磷蛋白(phospholamban, PLB) 属于同一蛋白家族。SLN 可抑制肌浆网钙泵( sarcoplasmic reticulum Ca²⁺ ATPase,SERCA ) 活性,降低其与Ca²⁺ 的亲和力,通过独立或与PLB 协同作用影响SERCA 活性,导致细胞内钙稳态失衡,降低心肌收缩力,从而发展为心衰。     

质粒DNA对大鼠骨骼肌肌质网Ca2+-ATPase活性及ryanodine受体结合反应的影响

目的：观察质粒ＤＮＡ 对离体大鼠骨骼肌肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性及ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体结合反应的影响。方法：参照Ｊｏｎｅｓ 等的方法比色测定肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性;以３Ｈｒｙａｎｏｄｉｎｅ 作为配基,液闪测定肌质网Ｃａ２＋ 释放通道ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体与配体的结合。质粒ＤＮＡ 处理组预先将肌质网蛋白与质粒ＤＮＡ３７ ℃共同孵育３０ ｍｉｎ ,而后再测定肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 活性和ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 结合反应。结果：预先用１０、２０ 和３０ μｇ ｐｃＤＮＡ３ 及ｐｃＤＮＡ３／ＡＮＦ处理后,肌质网Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 活性分别较对照组升高４５％ （Ｐ＜ ０．０５） ,６８ ％（ Ｐ＜ ０．０１） 和１０９ ％ （ Ｐ＜ ０．０１） 及１０９ ％ ,１１８％ 和１４５％ （Ｐ值均小于０ ．０１） ;质粒ｐｃＤＮＡ３ 可明显降低ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体的亲和力,并使Ｂｍａｘ 增强。结论：质粒ＤＮＡ可能通过增强肌质网Ｃａ２ ＋ＡＴＰａｓｅ 的活性促进肌质网对Ｃａ２ ＋ 的摄入,通过影响ｒｙａｎｏｄｉｎｅ 受体而调控肌质网Ｃａ２ ＋ 释放。     

缺血－再灌注兔心肌肌浆网自由基的测定

应用电子自旋共振波谱仪（ＥＳＲ）直接检测了缺血－再灌注兔心肌肌浆网自由基的变化，以探讨肌质网系统与氧自由基的关系。实验中将２０只兔随机分为再灌注对照组、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）组、ＡＴＰ－氯化镁组和人参皂甙Ｒｅ组。实验结果，ｇ值２．００４６处为半醌自由基波谱，其相对浓度各组依次为７８．９４±２．１２６，１４．４６±２．８６，２０．６５±７．６５，１４．６６±３．６７（ｘ±ＳＤ），对照组与用药组均有显著性差异（Ｐ＜０．０５），表明缺血－再灌注兔心肌肌浆网产生大量的自由基，用ＥＳＲ可以直接检测到半醌自由基，外源性高能磷酸盐制剂ＡＴＰ－氯化镁及人参皂甙Ｒｅ与超氧化物歧化酶一样，发挥清除兔心肌肌浆网自由基的作用。     

螺内酯联合美托洛尔治疗舒张性心力衰竭疗效观察

目的探讨螺内酯联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗舒张性心力衰竭(DHF)的临床效果。方法 60例DHF患者分为观察组和对照组,每组30例。2组患者在常规治疗的基础上,对照组患者给予琥珀酸美托洛尔缓释片治疗,观察组患者给予螺内酯联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗,治疗12个月后观察2组患者心功能改善情况。结果与治疗前比较,治疗后2组患者心功能均显著改善,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者心功能改善显著优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后2组患者左心室舒张末期内径(LVEDD)、A峰血流速度、左心房内径(LAD)显著低于治疗前(P<0.05),而E峰血流速度、E峰血流速度/A峰血流速度(E/A)、6 min步行距离(6MWD)显著高于治疗前(P<0.05);2组患者治疗前后心脏射血分数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后观察组患者LVEDD、A峰血流速度、LAD显著低于对照组(P<0.05),而E峰血流速度、E/A、6MWD显著高于对照组(P<0.05)。对照组治疗前后患者血清I型前胶原羧基端肽(PICP)、N-末端脑钠肽前体(NT-proBNP)和醛固酮(ALD)水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组患者血清PICP、NT-proBNP和ALD水平显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组患者血清PICP、NT-proBNP和ALD水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论螺内酯联合琥珀酸美托洛尔缓释片治疗DHF可显著改善患者心脏的舒张功能。     

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞肌浆网钙-ATP酶活性的影响及对心肌功能的调控

目的　研究不同甲状腺功能状态下,缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）过程中心肌细胞肌浆网钙－ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ,　　　　ＳＥＲＣＡ）活性的变化及三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）对其变化的影响,同时探讨心肌功能的调控。方法将实验大鼠分为甲状腺　　　　功能正常（Ａ组）和甲状腺功能减退（甲减,Ｂ组）两组,每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、Ｔ３灌注液　　　　组;建立高体心工作模型;测定各组心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性。结果甲减状态下大鼠心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性下降４３．２％　　　　（Ｐ＜０．０１）。缺血３０ｍｉｎ时,Ａ、Ｂ两组的ＳＥＲＣＡ活性均显著降低,并随着复灌进一步下降。但在复灌２０ｍｉｎ时,Ｔ３　灌注　　　　液组的酶活性较单纯灌组显著提高,Ａ组分别为（１１．２０±１．０７）和（７．３３±０．５６）μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０１）　;Ｂ组分别为　　　　（６．８９±０．５２）和（５．２３±０．７１）μｍｏｌ．ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０５）,甚至高于缺血组。结论甲减状态及Ｉ／Ｒ过程中,心肌细胞ＳＥＲＣＡ活　　　　性受到严重损害,可导致胞浆中Ｃａ２＋超负荷。Ｔ３可显著提高ＳＥＲＣＡ活性,降低胞浆中Ｃａ２＋