小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析。结果47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4~10条,片段大小在200~2000 bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异。     

假丝酵母性阴道炎的病原菌检测及RAPD分析

目的：探讨女性假丝酵母性阴道炎的病原菌种类,分析其随机扩增DNA多态性（RAPD）,为该病的临床诊断及流行病学监测提供依据。方法：刮取106例疑似假丝酵母性阴道炎患者道分泌物,分离培养并鉴定病原菌;利用10种随机引物（RAPD 1~10）对分离病原菌进行RAPD分析。结果：①分离获得假丝酵母72株,其中白假丝酵母56株（77.78%）,非白假丝酵母16株（22.22%）,包括光滑假丝酵母6 株（8.33%）、热带假丝酵母4 株（5.56%）、克柔假丝酵母1 株（1.39%）及其他假丝酵母5 株（6.94%）;②RAPD分析表明：有2种引物（RAPD2和RAPD5）可以获得较清晰、稳定的特异性带型,具有较明显的种间遗传变异性和种内遗传相似性。结论：假丝酵母性阴道炎病原菌以白假丝酵母为主。随机引物RAPD2和RAPD5比较适于白假丝酵母和热带假丝酵母的分型、鉴定。     

DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles of Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae isolated from different tonsillar sites of children undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy

We did a comparative analysis between DNA-based subtypes and antimicrobial susceptibility profiles on Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae, isolated from multiple tonsillar sites per individual from patients with chronic recurrent tonsillitis and/or tonsillar idiopathic hypertrophy and undergoing tonsillectomy and/or adenoidectomy. A total of eighty-eight Haemophilus isolates were obtained aseptically from the surface and core of tonsils and/or adenoids of 32 out of 60 patients and identified at the species level by the X and V factors and the API NH Kit. The H. influenzae and H. parainfluenzae isolates as well as ATCC strains were tested for antimicrobial susceptibility using a panel of antimicrobial agents. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) was done on extracted DNA from all Haemophilus isolates and ATCC strains, using one 10 mer and one 18 mer primers to subtype the two species. Antimicrobial susceptibility testing data have shown a variation in generated susceptibility patterns to tested antimicrobial agents among H. influenzae and H. parainfluenzae isolates. This variation was demonstrated too among isolates obtained from different tonsillar sites (core and surface) in a single patient. RAPD analysis identified 58/88 (66%) different RAPD patterns. Variations in RAPD patterns among H. influenzae and H. parainfluenzae were also observed in isolates obtained from different tonsillar sites of the same individual. A correlation between RAPD patterns and antimicrobial susceptibility data, have shown: 1) the predominance of one strain (RAPD pattern) of either Haemophilus species among isolated organisms per patient, and exhibiting different antimicrobial susceptibility profiles or 2) the existence of multiple strains (RAPD patterns) of either Haemophilis species per patient, and showing either a single or multiple antimicrobial susceptibility profile(s). These observations question the validity of swab cultures obtained from a single tonsillar site per patient, for detection, identification and determination of antimicrobial profiles of the etiology of tonsillitis, since swab specimens taken from only one site may or may not reflect the etiology of infection.     

播散型马尔尼菲青霉病报告及分析

目的掌握马尔尼菲青霉病的临床和病理特点。方法结合文献，对3例播散型马尔尼菲青霉痛病例的临床和病理特点、诊疗经过进行综合分析。结果3例患者的临床表现为：发热、消瘦、贫血、皮损、肝脾淋巴结肿大、肺部损害等；其中2例合并于艾滋病。病变主要侵犯单核巨噬细胞系统。确诊有赖于涂片镜检、真菌培养及组织病理发现马尔尼菲青霉菌。其中1例不能耐受两性霉素B付反应，自动出院；另2例死亡。结论在艾滋病流行时期，对马尔尼菲青霉菌感染应高度誓惕，及早诊断治疗，以改善患者的预后。     

WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔遗传多样性的RAPD分析

目的 应用随机引物扩增多态性DNA技术 （random amplified polymorphic DNA,RAPD） 对大耳白黑眼兔（white hair black eyes rabbit,WHBE rabbit）、日本大耳白兔（Japanese white rabbit,JW rabbit）和新西兰兔（New Zealand white rabbit,NZW rabbit） 3个实验兔品系进行遗传分析。方法 选用90只实验兔的皮肤组织样品提取基因组DNA,用60个随机引物对实验兔基因组DNA进行PCR扩增,根据电泳结果筛选出多态性较高的引物进行RAPD-PCR分析,再利用Popgene 3.2统计软件对3个品系的扩增条带进行遗传分析,获得实验数据。结果 分析结果表明：（1） 60个随机引物中筛选出25个多态性较高的引物,3个品系实验兔共检测到493个扩增片段,长度在100 ~1800 bp之间,筛选的25个引物中,其中16个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出WHBE兔特有的特征条带;（2） WHBE兔位点数为234个,其中多态位点数166个,多态位点比为70.94%,JW兔位点数为228个,其中多态位点数122个,多态位点比为53.51%,NZW兔位点数为231个,其中多态位点数94个,多态位点比为40.69%;（3） 三个群体的Shannon多样性指数分别为0.3385,0.2222和0.1905;（4） JW兔和NZW兔的遗传相似系数最高,为0.8443,其次为WHBE兔和JW兔的遗传相似系数,为0.8204,WHBE兔和NZW兔的遗传相似系数最低,为0.7862。结论 结果表明WHBE兔与JW兔和NZW兔之间有遗传的相似性,也存在着遗传差异,应用RAPD技术可以很好地检测实验兔不同品系之间以及同一品系不同个体之间的亲缘关系。     

我国三带喙库蚊的随机扩增多态性DNA研究

目的：探讨我国4省三带喙库蚊的遗传多态性。方法：分别用8种随机引物对采自我国广东、福建、海南和贵州的12只三带喙库蚊的基因组DNA进行聚合酶链反应（PCR）扩增，1.5％琼脂糖凝胶电泳检测结果。用PHYLIP软件包中的NEIGHBOR程序对随机扩增多态性DNA数据进行聚类分析，然后用软件TREEVIEW绘制出系统发育树。结果：8种随机引物共扩增出RAPD片段270个，RAPD谱带均为单型。系统发育树显示，海南的2只三带喙库蚊聚为一枝，而其余标本中同一省份的标本均未能聚为独立的分枝。结论：三带喙库蚊个体间的遗传变异较大；不同省份三带喙库蚊的变异具有交叉。     

仅黏菌素敏感的多重耐药铜绿假单胞菌分子流行病学研究

目的从基因水平了解多重耐药铜绿假单胞菌中仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(COS-PA)的流行情况。方法①收集本院灼伤科2001年3月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌52株,其中COS-PA 32株。②收集外科重症监护病房(SICU)2003年1月至2003年12月临床分离的铜绿假单胞菌57株,其中COS-PA 22株;收集SICU水池下水口非仅黏菌素敏感铜绿假单胞菌(non-COS-PA)1株。③采用多种引物随机扩增DNA多态性(RAPD)技术和统计学方法分析其流行情况。结果①灼伤科2001~2003这3年的COS-PA,经RAPD(引物ER IC2、325、272)分型均为同一型别(Burn-A型)。②SICU 2003年收集的COS-PA,经RAPD(引物325)分型为同一型别(SICU-A型);在SICU收集的non-COS-PA也多数呈同一型别(SICU-B型),自SICU水池下水口收集到的1株non-COS-PA也属于此型。③灼伤科及SICU经RAPD(引物325)联合分析证实,两个科室的COS-PA为不同型别,无同源性。结论灼伤科和SICU都存在科室内COS-PA流行,SICU还存在non-COS-PA流行。应严格消毒隔离措施,加强对铜绿假单胞菌在潮湿环境及患者中流行情况的严密监测。多种引物RAPD分析是判断铜绿假单胞菌流行情况的有利工具。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测30株临床分离白色念珠菌对5种抗真菌药物的敏感性,并用随机扩增DNA多态性(RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药,且它们的RAPD带型有着高度相似性,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

利用M-RAPD技术绘制不同病原微生物基因指纹图

目的探讨一种多重随机引物PCR方法(M-RAPD)对不同种株病原微生物进行鉴定的可能性。方法将10个碱基的随机引物进行随机组合,利用三条组合的随机引物在较高的退火温度下对不同种株病原微生物染色体。DNA进行扩增,通过15g／L琼脂糖凝胶电泳获得不同种株病原微生物的扩增图谱,并用软件Gelworks 1d Intermediate进行分析。结果初步实验表明,M-RAPD技术可以得到稳定的种株特异的DNA指纹图谱,其条带清晰、数目较多、片段大小分布均匀。三引物的扩增产物包含了其中任意两引物的绝大多数扩增产物,大、小片段均可出现增减,但小片段更易增加;对同一种病原微生物三引物所提供的基因信息要远多于两引物所提供的信息,增加的信息量约为原来的50％;不同耐药菌株问及其与相应标准株问差异亦很明显,但同种不同株问相同的扩增产物要多于不同的扩增产物。软件Gelworks 1d Intermediate的分析数据亦支持我们的实验结果。结论M-RAPD技术对不同种株病原微生物染色体DNA扩增时,能获取较丰富的遗传信息,可迅速、简便地鉴定不同种株的病原微生物。     

霍山石斛种内遗传稳定性的RAPD初探

目的 研究霍山石斛荚果内遗传稳定性及荚果间的差异大小。方法 利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对来自5个不同荚果的霍山石斛种群进行RAPD检测。结果 5个荚果内遗传相似系数较大,在92.5926%-100.00%,其中H1、H9、H10、H14存在一定程度的变异,H23是一个较为稳定的群体;5个荚果间H1、H9、H10、H23的遗传距离较小,H14与其他4个荚果的遗传距离则较大。结论 建立霍山石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的,同时说明霍山石斛种内存在一定的变异,H14与其他荚果的差异最大。     

皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析

目的 采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据。方法 以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性;TLC、HPLC检测发酵产物。结果 优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100%。遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类;在0.67水平,第I类又可分为5个亚类。采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲。结论 皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变。     

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。     

AIDS患者血液与脑脊液中真菌检测及药敏分析

目的 分析艾滋病(AIDS)患者血液及脑脊液中真菌种类及其耐药性,为临床诊疗AIDS患者机会性感染提供参考。方法收集2011～2014年某传染病医院接诊AIDS患者的血液和脑脊液标本,对其中病原性真菌进行分离、鉴定,并对新生隐球菌进行药敏分析。结果共分析AIDS患者血液培养阳性标本477份、脑脊液培养阳性标本109份,真菌检出率分别为66.88%(319/477)和66.97%(73/109),其中血液中以马内菲青霉菌检出率最高,为53.04%(253/477),脑脊液中以新生隐球菌检出率最高,占66.06%(72/109)。新生隐球菌对两性霉素B、氟康唑、5-氟胞嘧啶均高度敏感。结论AIDS患者合并真菌感染率较高,其中常见的是马内菲青霉菌和新生隐球菌。     

淋球菌RAPD分型的引物筛选与应用

目的为了研究不同淋球菌菌株的基因多态性,了解不同菌株之间的亲缘关系,选择适当的随机引物。方法以淋球菌基因组DNA为模板,对淋球菌进行RAPD扩增,选择多态性好、重复性好、稳定性强的随机引物,并用S38号引物对不同淋球菌基因组DNA进行指纹图谱区分。结果从Sagon公司50条RAPD随机引物中筛选出8条扩增效果良好的引物,经RAPD扩增出的淋球菌指纹图谱间有明显不同的DNA多态性,可对不同菌株进行聚类分析。结论利用RAPD技术对淋球菌进行随机引物的筛选,可为今后淋球菌的分子流行病学研究奠定基础。     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９     

基于常规引物靶向结核分枝杆菌Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位的恒温扩增

目的 探讨基于特异常规引物（即引物不需折叠成特定二级结构）靶向恒温扩增重复DNA序列的方法，并测试其检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，Mtb）的可能性。方法 以合成的重复DNA或以抽提的细菌基因组DNA为模板，用Bst 2.0 WarmStart DNA聚合酶进行恒温扩增。用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果 合成的重复DNA可用其特异常规引物进行恒温扩增。进一步，Mtb H37Rv Ⅱ型分枝杆菌散在重复单位（mycobacterial interspersed repetitive units，MIRUs）可用其特异常规引物对（即Ⅱ_MIRU-F和Ⅱ_MIRU-R）或单引物（即Ⅱ_MIRU-F）进行恒温扩增。相比于非分枝杆菌菌株、非结核分枝杆菌菌株、Mtb复合物菌株和临床分离株，Ⅱ_MIRU-F能够高特异地扩增Mtb菌株。Ⅱ_MIRU-F针对Mtb H37Rv基因组DNA的检测下限较高，且不能特异地区分Mtb阴性痰液样本和Mtb阳性痰液样本。结论 常规引物可恒温扩增重复DNA序列（包括Mtb Ⅱ型MIRUs）；Mtb Ⅱ型MIRUs特异引物Ⅱ_MIRU-F不适合用于痰液样本的检测。     

江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素和神经氨酸酶分子特征分析

目的:分析江苏省2013年甲型H1N1(09pdm)流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)变异情况,分析其遗传进化特征?方法:按照流感样病例定义,收集江苏省各哨点医院流感样病例标本,阳性样本经病毒分离培养及亚型鉴定?选取2013年不同时间段?不同地区具有代表性的14株甲型H1N1(09pdm)阳性毒株,利用特异性引物扩增HA?NA基因,测序并分析其遗传进化特征?结果:14株分离毒株与疫苗株A/California/07/2009(H1N1)的HA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~98.4%和96.5%~98.0%?NA基因核苷酸和氨基酸同源性分别为98.4%~98.9%和97.0%~98.5%?遗传进化分析表明,14株分离株HA和NA基因分属于不同的进化谱系?分子特征表现为HA氨基酸序列出现D114N?K300E?E516K的变异,NA分子特征表现为N44S位点变异?从2013年左右开始甲型H1N1(09pdm)流感基因多样性增加;通过FEL模型得到一个正向压力选择HA氨基酸位点310,一个正向压力选择NA氨基酸位点4,通过REL模型得到9个正向压力选择HA氨基酸位点179?180?239?301?303?310?311?312?313(含位点310),5个正向压力选择NA氨基酸位点4?23?52?287?374(含位点4)?HA蛋白具有9个潜在糖基化位点,7个位于HA1上,2个位于HA2上;NA蛋白共有9个潜在糖基化位点?14株分离毒株在NA蛋白酶活性中心及周围辅助位点上均未发现变异?结论:2013年江苏省甲型H1N1(09pdm)流感HA?NA基因变异加快,遗传多样性增加,未来的遗传进化值得进一步关注?     

山茱萸不同栽培品种的RAPD分析

目的分析山茱萸不同栽培品种之间的遗传关系,为山茱萸品种选育提供依据。方法采用改良后的CTAB法从山茱萸叶片中提取总DNA,进行RAPD分析;采用SPSS10.0软件计算DICE遗传相似性系数,Be-tween-groupslinkage方法聚类,构建亲缘关系树系图。结果共筛选出22个10个碱基随机引物用于PCR扩增,12个样品获得了133条带,其中多态性条带75条,占56.39%。聚类分析结果表明纺锤形果型自成一类,短梨形果型与短圆柱形果型聚为一类,其余几种较长大的果型聚为一类,反映了栽培过程中人为选择的后果。结论实验结果与山茱萸栽培品种的生物特性和区域分布基本一致;RAPD分析可作为对山茱萸品种选育的辅助手段。     

疏肝、健脾、补肾复方对慢性束缚应激大鼠行为学和免疫功能的影响

目的　研究慢性束缚应激时大鼠行为学和免疫功能的变化以及疏肝、健脾、补肾三种中药复方对其影响。方法　用特制束缚架连续束缚 2 1d(或 7d) ,每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,观察大鼠行为学和免疫功能的变化。结果　慢性束缚应激后 ,大鼠的行为学发生了明显的变化 ,血清IL - 1β 上升 ,IL - 2和IL - 6下降 ,并且随着束缚时间的延长变化越明显。结论　逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸能改善大鼠行为学的变化 ,明显增强慢性束缚应激大鼠的免疫功能。     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。