索拉非尼对耐药肝癌细胞株BEL-7402／FU逆转作用的研究

目的:研究索拉非尼对肝癌耐药细胞系BEL-7402/FU多药耐药性的逆转作用及可能机制.方法:采用流式细胞术检测罗丹明123(Rho123)的表达,免疫组化法观察细胞膜上P-gp的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因mdr1 mRNA水平的变化,Western blot法检测mdr1基因蛋白产物P-gp表达水平的变化.结果:经4 μmol/L索拉非尼处理后,增加了BEL-7402/FU对Rho123的蓄积并减缓其外排作用,使细胞表面P-gp的表达明显下降,mdr1 mRNA较用药前下降了35.4%,并可明显抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达水平,比BEL-7402/FU细胞减少14.3%.结论:索拉非尼可以抑制mdr1基因蛋白产物P-gp的表达,增加细胞内化疗药物的浓度,从而逆转了肝癌细胞的多药耐药性.     

核因子-κB在P-糖蛋白介导卵巢癌细胞多药耐药性中的作用

目的观察卵巢癌中核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)在活化及抑制状态时多药耐药基因1表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达情况,探讨二者之间的关系。方法用多西他赛(Docetaxel)及NF-κB活化抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用于卵巢癌SKOV-3细胞,Western Blot法分析胞核P65蛋白表达,流式细胞仪检测细胞膜P-gp表达及细胞凋亡,MTT法观察细胞生长抑制。结果单用Docetaxel组胞核P65蛋白、胞膜P-gp表达均增多,加用PDTC可逆转此现象;Docetaxel(≥1 mg/L)或PDTC(≥10μmol/L)均明显抑制SKOV-3细胞的生长,引起细胞凋亡;小剂量PDTC(2.5μmol/L、5μmol/L)和Docetaxel(0.01 mg/L)联合应用与单用Docetaxel比较,可明显抑制细胞生长,增加细胞凋亡率。结论P-gp表达可能与NF-κB活化有关;抑制NF-κB活化可增强卵巢癌细胞对Docetaxel的敏感性。     

多药耐药基因1及其表达产物在激素耐药系统性红斑狼疮患者淋巴细胞上的表达

目的探讨多药耐药基因1(multidrug resistance gene,MDR1)及其表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在激素耐药系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者淋巴细胞的表达及其意义。方法选取初发SLE患者60例,均给予激素和(或)免疫抑制剂治疗6个月,根据治疗后SLEDAI评分及症状改善情况,筛选出激素有效组(n=49)和激素耐药组(n=11),同时以健康体检者30例作为正常对照,RT-PCR检测各组患者外周血淋巴细胞MDR1 mRNA表达,流式细胞术检测P-gp的表达和罗丹明123(rhodamine123,R123)荧光流式细胞术检测P-gp的活性。以环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX,100μmol/L)、霉酚酸酯(mycophenolic acid,MPA,100μmol/L)和P-gp特异性封闭剂(Tariquidar,100μmol/L)干预培养激素耐药组患者(n=11)外周血淋巴细胞,R123荧光流式细胞术检测各组P-gp的活性。结果激素耐药组MDR1 mRNA和P-gp的表达明显高于激素有效组(t=3.43,P=0.002)、(t=3.792,P=0.001)和对照组(t=4.54,P0.001)、(t=4.631,P0.001);激素耐药组P-gp活性明显高于激素有效组(t=3.062,P=0.019)和对照组(t=5.563,P0.001)。CTX可以抑制淋巴细胞P-gp活性,MPA抑制P-gp活性的能力明显降低,两者比较差异有统计学意义(t=3.372,P=0.011)。结论 MDR1及其表达产物P-gp参与SLE激素耐药机制的形成,CTX可以通过抑制P-gp活性,在激素耐药SLE的治疗中发挥作用。     

MiR-145-5p在大肠癌中的表达及与多药耐药的关系

目的 探讨大肠癌中miR-145-5p和多药耐药基因(MDR1)蛋白P-糖蛋白（P-gp）的表达及两者的关系。方法 分别在组织、细胞水平采用SP法、Real-time PCR法、Western blotting法检测50例大肠癌 (CRC)患者组织及30例癌旁正常组织患者中P-gp的表达,miR-145-5p的表达变化对MDR1 mRNA及P-gp的影响及两者与临床病理特征之间的相关性。结果 大肠癌组织中miR-145-5p表达量明显低于癌旁正常组织,MDR1 mRNA及P-gp的表达量明显高于癌旁正常组织(r=-0.403,P<0.01)。大肠癌细胞(HCT-15)中miR-145-5p 能够抑制MDR1 mRNA及P-gp的表达(P<0.05)。结论 MiR-145-5p对大肠癌多药耐药基因及蛋白的表达具有调控作用,参与了大肠癌的发生、发展及多药耐药。     

川芎嗪与环孢菌素A联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的逆转作用

目的研究中药川芎嗪(TMP)与环孢菌素A(CsA)联合应用对转基因多药耐药细胞K562/MDR的耐药性逆转作用及可能机制。方法应用非细胞毒性剂量的TMP和CsA单独及联合作用于K562/S和K562/MDR细胞,MTT法检测细胞对阿霉素(ADM)的药敏性,计算耐药倍数及逆转倍数。利用罗丹明123(Rh123)进行蓄积与排出试验,免疫组化检测P-gp的表达,RT-PCR方法检测MDR1基因的表达。结果与K562/S细胞相比,K562/MDR细胞的耐药倍数为19.2倍;TMP及CsA可显著降低ADM对K562/MDR细胞的IC50(P0.01),逆转倍数分别为4.9倍及9.2倍,两者联合应用,逆转倍数为15.4倍。TMP及CsA单独应用均能降低K562/MDR细胞P-gp的表达,联合应用使K562/MDR细胞P-gp的表达率明显低于单独应用(P0.01);TMP和CsA单独及联合应用,MDR1基因表达均有不同程度的下调。结论 TMP和CsA联合逆转K562/MDR细胞的多药耐药性具有协同作用,其机制可能与下调MDR1基因表达和降低P-gp水平有关     

ASON对急性早幼粒白血病细胞株HL60/VCR多药耐药的逆转作用

目的:探讨反义寡核苷酸(ASON)对耐长春新碱的急性早幼粒白血病细胞(HL60/VCR)多药耐药(mdr1)的逆转效果。方法:以HL60/VCR细胞为模型,合成正、反义寡核苷酸作用于HL60/VCR细胞,采用RT-PCR方法、流式细胞术及药敏试验等观察细胞mdr-1mRNA表达、mdr-1基因产物P-糖蛋白(P-gp)的表达和对药物长春新碱(VCR)的敏感性。结果:反义寡核苷酸处理的细胞mdr-1mRNA表达、P-gp表达较正义组及HL60/VCR细胞显著降低,且可明显提高HL60/VCR细胞株对长春新碱的敏感性。结论:反义寡核苷酸具有逆转HL60/VCR细胞多药耐药的作用。其作用机制可能是抑制mdr1mRNA的转录,使P-gp的表达受到明显抑制,提高对长春新碱的敏感性。     

沉默miR-8063促进结直肠癌细胞获得多药耐药性及机制研究北大核心CSCD

目的:探讨沉默miR-8063促进结直肠癌SW480、HT29细胞多药耐药性及分子机制。方法:分别采用miR-8063-inhibitor-GFP-PURO慢病毒载体和阴性对照病毒(NC-GFP-PURO)转染SW480、HT29细胞,建立实验组(SW480-sh-miR-8063、HT29-sh-miR-8063)和对照组(SW480-sh-NC、HT9-sh-NC),RT-qPCR检测miR-8063表达;CCK-8测定5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OXA)对两组细胞24 h、48 h及72 h的生长抑制率;RT-qPCR和Western blot检测耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA和蛋白表达;Western blot检测WNT/β-catenin信号通路关键指标WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达。结果:与对照组相比,实验组miR-8063基因表达显著降低(P<0.01),48 h、72 h时5-FU和OXA对细胞的抑制率显著降低(P<0.01),耐药基因P-gp、ABCG2 mRNA及蛋白表达显著提高(P<0.01),WNT3A、WNT5A及β-catenin蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:沉默miR-8063基因可促进CRC细胞耐药基因P-gp、ABCG2表达,使CRC细胞SW480和HT29获得多药耐药性,其分子机制可能与激活WNT/β-catenin信号通路有关。     

P-糖蛋白在永久性脑缺血大鼠脑内的表达

目的:研究脑缺血后多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在脑内血管及细胞中的表达变化,探讨P-gp与脑缺血的关系。方法:应用微创开颅法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,30只大鼠随机分为缺血后1、2、3 d共3个缺血组,以及正常对照组和假手术组(n=6)。用抗P-gp抗体进行免疫组化染色观测血管壁及脑内细胞是否表达P-gp以及缺血后不同时间点的表达变化。结果:缺血后1、2、3 d组中,在缺血坏死区可见大量表达P-gp的阳性细胞,3 d时达高峰;缺血区仅有少量血管表达P-gp,在缺血区周围皮质及纹状体中血管壁上大量表达P-gp,并随缺血时间的延长而显著增多,在3 d组达高峰。结论:脑缺血后大鼠脑内血管壁及细胞中大量表达P-gp,提示脑内受损后多药耐药蛋白合成增加,在自我保护的同时也影响了临床药物的进入。     

K562/AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562/AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法:采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P－糖蛋白（P-gp）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)、多药耐药基因1(〖STBX〗mdr1〖STBZ〗)、多药耐药相关蛋白1（〖STBX〗MRP1〖STBZ〗）以及肺耐药相关蛋白基因(lrp)表达水平的检测采用RT－PCR法。结果:K562和K562/AS2细胞表面P-gp任意荧光强度、K562/AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P>0.05）。K562/AS2细胞株〖STBX〗MRP1〖STBZ〗和Topo Ⅱ表达明显高于K562细胞（P<0.05），DNA 多聚酶，〖STBX〗mdr1〖STBZ〗和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P>0.05）。结论:ATO耐药细胞K562/AS2高表达〖STBX〗MRP1〖STBZ〗，并产生低倍数的多药耐药。K562/AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

卡马西平增加癫痫模型大鼠脑内P-糖蛋白的表达

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色对脑中P-gp进行半定量及定位分析。尼氏染色观察海马神经元的变化。结果模型大鼠脑电图及行为变化与人类癫痫相似,CBZ对癫痫发作没有作用。癫痫发作后第5天脑P-gp表达水平增加,7d时最高,21d后恢复到正常水平。阳性产物主要位于海马的毛细血管内皮细胞,也见于皮层的毛细血管及神经元。CBZ对正常大鼠P-gp的表达没有影响。CBZ KA组动物海马P-gp的表达与KA组动物相似,但7d时其表达明显增强。结论癫痫发作可诱导P-gp的表达;卡马西平在癫痫发作中也参与了P-gp的高表达。     

复发的急性白血病患者的多药耐药相关蛋白基因表达增强

鉴于多药耐药(MRD)基因的产物P-糖蛋白在临床耐药中起作用的观点难以得到直接证实;而近来又发现另一基因产物—多药耐药相关蛋白(MRP)的过度表达与某些细胞系的多药耐药产生有关,作者进一步采用定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对62例初诊或复发的急性白血病患者的MRP和MRD基因从mRNA表达水平进行了检测。     

多药耐药与肝细胞保护的研究进展

正常细胞表达多药耐药转运蛋白,从而表现出多药耐药的特性。细胞保护是指在不利因素下细胞对自身的保护能力。细胞保护除了需要增加有利因素外,减少细胞内的有害因素也是一个有效手段,多药耐药就是其中一个重要的因素。引起多药耐药的ABC转运蛋白在正常细胞中存在广泛的表达,尤其是排泄器官如肝、肾、肠道等,表明其作为防止药物渗透的屏障及在药物消除机制中的重要作用;肝细胞主要表达ABC(ATP-binding cassette)转运蛋白超家族中的P-糖蛋白(P-gp)及多药耐药相关蛋白(MRP)1,2,3,6。本文通过对相关研究进展的分析,从多个方面阐述了多药耐药与细胞保护,尤其是肝细胞保护的关系,从而为疾病的预防和治疗提供新的思路。     

P-糖蛋白抑制剂的研究进展

肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药(MDR，即肿瘤细胞对某种化疗药物产生耐药，同时对其他化学结构、机理不同的化疗药物亦产生交又耐药)是肿瘤患者化疗失败的主要原因，许多因素参与MDR的发生过程，而MDR基因编码的P-糖蛋白(P-gp)过渡表达是主要因素，因此通过抑制其过度表达，从而使肿瘤细胞的MDR产生逆转，对于提高疗效、降低毒副反应具有重要意义。近几年来P-gp抑制剂的研发较快，已发展至第3代。随着研究的不断深入，将有更多疗效突出，副作用少的P-gp抑制剂问世。     

小干扰RNA-紫杉醇固体脂质纳米粒克服肿瘤多药耐药性的体外细胞学研究

肿瘤多药耐药性(MDR)是临床上肿瘤化疗失败的主要原因,其中由多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(P-gp)又在MDR发生机制中占重要作用。本实验设计合成特异性沉默MDR1基因的小干扰RNA(siRNA),协同抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)共同包裹于固体脂质纳米粒(SLNs)中,利用基因治疗和化学治疗的协同作用,以期克服肿瘤多药耐药性。实验包括制备siRNA-紫杉醇固体脂质纳米粒(siRNA-PTX-SLNs);检测载药SLNs对肿瘤细胞的增殖抑制作用;测定给药后PTX的细胞摄取率;采用实时荧光定量PCR和流式细胞法评价siRNA-PTX-SLNs对MDR1表达的沉默作用。结果显示在耐药细胞MCF-7/ADR中siRNA-PTX-SLNs能够显著提高PTX细胞摄取率,有效沉默MDR1的表达,抑制P-gp的外排作用,促进P-gp底物在细胞的蓄积。因此siRNA-PTX-SLNs可发挥克服肿瘤多药耐药性的协同治疗作用。     

表遗传修饰对多药耐药基因1调控的研究进展

多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1，MDR1)的耐药机制与药物的泵出有关。过去的十年里，在有关耐药基因的调控方面已经做了大量的研究。MDR1基因表达受许多因素的影响。最近研究证实，表遗传修饰在调控MDR1基因表达中起重要作用。表遗传通过对DNA的甲基化和组蛋白脱乙酰化的修饰来调节MDR1基因的表达。应用化学物质可以逆转MDR1基因依赖性多药耐药，提高化疗敏感性，这将为癌症治疗提供新策略。     

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯（β-elemene）对多药耐药细胞株K562／阿霉素（ADM）的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS（10．0 production pacility）软件包对实验结果进行统计学处理。结果1．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P〈0．01）,逆转倍数为2．18倍;2．P-gp在耐药细胞株K562／ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论β-elemene能够明显逆转K562／ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。     

新型光敏剂治疗敏感及耐药胃癌的实验研究

目的 探讨一种新型光敏剂DTP对敏感胃癌细胞(SGC7901)及长春新碱耐药胃癌细胞(SGC7901/VCR)的光动力学治疗作用.方法 采用荧光显微镜间接确认SGC7901及SGC7901/VCR细胞膜上P-糖蛋白(P-gp)的表达情况,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测DTP对SGC7901及SGC7901/VCR细胞的光动力学杀伤作用,荧光分光光度计测定两种细胞内的DTP吸收量,激光共聚焦显微镜观察DTP在两种细胞内的分布位置.结果 SGC7901细胞膜上几乎无P-gp分布,而SGC7901/VCR细胞膜上存在P-gp高表达.新型光敏剂DTP对SGC7901及SGC7901/VCR细胞均具有较强的光动力学杀伤作用,其中对SGC7901/VCR细胞的作用相对较弱(P＜0.05),且P-gp抑制剂维拉帕米或环孢素A的存在均不能增强DTP光动力学治疗对SGC7901/VCR细胞的杀伤作用(均P＞0.05).SGC7901细胞内的DTP吸收量高于SGC7901/VCR细胞(P＜0.05),且P-gp抑制剂维拉帕米和环孢素A均不能增加SGC7901/VCR细胞内的DTP吸收量(均P＞0.05).DTP分布于SG-C7901细胞的溶酶体以及SGC7901/VCR细胞的溶酶体和线粒体内.结论 新型光敏剂DTP并非多药转运蛋白P-gp的底物,其对SGC7901/VCR细胞较弱的光动力学杀伤作用与其细胞膜上过表达的P-gp无关,可能与DTP在两种细胞内的分布位置不同有关.     

转染肿瘤坏死因子-α及MDR1反义RNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的：转染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)cDNA和多药耐药基因(MDR1)的反义RNA到乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达，并观察它们在乳腺癌耐药逆转中的作用。 方法：应用RT-PCR和DNA重组技术构建反义绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体，分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达，检测转染前后细胞的生长曲线、细胞凋亡程度、MDR1-mRNA和P糖蛋白（P-gp）表达情况及对ADR敏感性的变化。 结果：转染后的细胞生长明显减慢，凋亡率显著增加，MDR1-mRNA和P糖蛋白（P-gp）表达明显降低，对ADR的耐药性明显下降，敏感性增加。 结论：联合运用不同的逆转耐药机制，将TNF-α cDNA及MDR1反义RNA分别或同时导入乳腺癌耐药细胞中，能有效达到逆转耐药的目的。     

细胞因子诱导杀伤细胞转MDR1基因诱导耐药研究

目的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced-killer,CIK)进行临床免疫治疗能够杀伤肿瘤细胞,将MDR1基因转入CIK细胞,观察其是否产生耐药性并且保持其肿瘤杀伤活性.方法用Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,分别加入IFN-γ,CD3Mab,IL-2,IL-1等细胞因子体外培养获得CIK细胞.在细胞呈对数生长期时,采用电穿孔方法将多药耐药基因PHAMDR质粒转入细胞.转染后72h提取细胞总RNA,RT-PCR鉴定耐药基因表达;流式细胞仪方法检测细胞膜泵蛋白P-gp.四唑蓝比色法(MTT Assay)检测转基因CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性,同时检测转染前后CIK细胞对人类乳腺癌细胞系(MCF7)的杀伤活性变化.结果转染后CIK细胞出现MDR1基因的转录产物mR-NA;流式细胞仪检测,转染后的CIK细胞表达耐药蛋白P-gp,阳性细胞约为21%.阿霉素对转染后CIK细胞的IC50为0.11mg/ml,转染后CIK细胞对阿霉素的耐受性较转染前CIK细胞(IC50为0.0024mg/ml)增强了45.8倍;秋水仙碱对转染后CIK细胞的IC50为1.34ng/ml,转染后耐受性较转染前CIK细胞增强了11.35倍(IC50为0.118ng/ml).比较转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无显著性差异(P＞0.05).结论用电穿孔方法可以成功地将MDR1基因转入CIK细胞,并使其表现出多药耐药性,转染前后细胞杀伤活性无变化.     

人质膜型唾液酸酶与人红白血病细胞多药耐药相关

目的探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)与人红白血病细胞多药耐药的关系。方法分别或联合柔红霉素(DNR)与唾液酸酶特异性抑制剂(NeuAC2en)处理K562和K562/ADM细胞,MTT法检测细胞生存率;RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、多药耐药相关蛋白(MRP)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、BCL-xl、BAX和BCL-2mRNA表达;Western blot法检测MDR基因蛋白产物P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;TBA法检测唾液酸酶活性。结果与K562细胞相比,K562/ADM细胞对DNR具有一定的抵抗性,NeuAC2en与DNR有协同作用(P<0.01);应用NeuAC2en或DNR后K562和K562/ADM细胞Neu3活性均明显下降,两种药物联合应用Neu3活性下降最明显(P<0.01);相同处理条件下,与K562细胞相比,K562/ADM细胞中Neu3、MDR1、BCL-xl和BCL-2表达增加,BAX无明显变化;应用DNR后,MDR1、Neu3、BCL-xl、BCL-2表达均下降,而DNR与NeuAC2en联合应用,以上基因表达水平下调最明显。...