子宫平滑肌RhoA/Rho激酶表达与宫缩乏力性产后出血的关系

目的：探讨产妇子宫平滑肌组织RhoA/Rho激酶表达与宫缩乏力性产后出血的关系。方法：选择30例宫缩乏力性产后出血产妇为病例组,同期无产后出血产妇30例为对照组。采用肌条等长张力测定法检测子宫平滑肌自发收缩活动力、加入Rho激酶抑制剂Y-27632后子宫平滑肌收缩活动力;采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法及蛋白质印迹法检测子宫平滑肌组织RhoA,ROCKⅠ和ROCKⅡ mRNA及蛋白表达水平。结果：①病例组子宫平滑肌自发收缩活动力水平低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.01）;病例组和对照组加入Y-27632后收缩活动力水平均低于加入前,差异有统计学意义（P＜0.01）。②病例组子宫平滑肌组织RhoA,ROCKⅠ和ROCKⅡmRNA表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。③病例组子宫平滑肌组织RhoA,ROCKⅠ和ROCKⅡ蛋白表达水平均低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。④2组子宫平滑肌组织RhoA mRNA及蛋白与ROCKⅠ和ROCKⅡ mRNA及蛋白表达水平均呈正相关。⑤2组子宫平滑肌组织RhoA,ROCKⅠ和ROCKⅡ mRNA及蛋白水平均与子宫平滑肌基础收缩活动力水平呈正相关。结论：宫缩乏力性产后出血产妇子宫平滑肌组织RhoA,ROCKⅠ和ROCKⅡ水平均降低,且均与子宫平滑肌收缩活动力呈正相关,提示子宫平滑肌组织RhoA/Rho激酶信号通路表达降低可能是发生宫缩乏力性产后出血的分子机制之一。     

子宫平滑肌激活蛋白-1及间隙连接蛋白43在妊娠期的表达与分娩发动和早产的关系

目的　探讨激活蛋白-1(Activator protein-1,AP-1)、间隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)在足月产和早产子宫平滑肌中的表达情况及其相关性. 方法　应用免疫组化法检测15例足月未临产、15例足月临产、10例早产临产产妇的子宫平滑肌中AP-1的两个亚单位c-Jun、c-Fos蛋白及Cx43的表达情况. 结果 (1)Cx43免疫组化积分在早产临产组(4.204±0.42)及足月临产组(4.33±0.51)表达水平显著高于足月未临产组(3.15±0.41)(P<0.01).(2)c-Jun蛋白在早产临产组、足月临产组、足月未临产组标记指数分别为(52.34±4.18)%、(45.25±5.24)%、(34.14±4.26)%,三组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).(3)c-Fos蛋白在早产临产组、足月临产组、足月未临产组标记指数分别为(53.48±4.36)%、(43.32±6.21)%、(31.29±3.34)%,三组两两比较差异均有统计学意义(P<0.01).(4)妊娠子宫平滑肌中Cx43表达与c-Jun、c-Fos蛋白表达呈正相关关系,(r=0.65、0.63,P<0.01). 结论 Cx43在分娩发动中发挥着重要的作用.妊娠子宫平滑肌中Cx43的表达水平与AP-1表达有一定的相关性.     

促肾上腺皮质激素释放激素、c-Fos及间隙连接蛋白43与分娩发动的相关性

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、c—Fos和间隙连接蛋白43（Cx43）在足月妊娠子宫平滑肌细胞中的表达变化及其与分娩发动的相关性。方法选择2006年2—9月在中南大学湘雅二医院住院的足月临产产妇30例（临产组）,足月未临产产妇30例（未临产组）,因宫颈上皮内瘤样病变行子宫切除术患者30例（对照组）。应用放射免疫方法测定3组妇女静脉血中CRH的水平;用核酸原位杂交技术和免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接（SP）法检测3组妇女子宫平滑肌细胞中c—Fos、Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平。结果（1）CRH水平在临产组产妇为（81．8±11．9）pmol／L,未临产组为（34．5±18．6）pmol／L,对照组为（1．3±0．7）pmol／L,临产组明显高于未临产组及对照组,未临产组明显高于对照组,差异均统计学意义（P〈0．05）。（2）c—Fos mRNA及其蛋白的阳性染色主要定位于子宫平滑肌细胞核内,少量位于细胞质内;子宫平滑肌细胞中c—Fos mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5．4±1．7及5．4±1．5,未临产组分别为4．1±0．9及3．9±0．9,对照组分别为1．0±0．4及1．2±0．4,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;未临产组也明显高于对照组（P〈0．05）。（3）Cx43 mRNA及其蛋白的阳性染色定位于子宫平滑肌细胞质内;子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白表达水平,临产组分别为5．5±1．4及5．6±1．3,未临产组分别为4．1±0．6及4．1±0．5,对照组分别为1．5±0．6及1．1±0．6,临产组明显高于未临产组及对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）;未临产组也明显高于对照组（P〈0．05）。（4）3组妇女的CRH水平与子宫平滑肌细胞中c—Fos mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关（r5=0．61,r6=0．50;P〈0．05）;与子宫平滑肌细胞中Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平呈明显正相关（r3=0．52,r4=0．68;P〈0．05）;子宫平滑肌细胞中c—Fos mRNA及其蛋白的表达水平与Cx43 mRNA及其蛋白的表达水平也呈明显正相关（r5=0．51,r6=0．60;P〈0．05）。结论产妇血浆中CRH水平、子宫平滑肌细胞中c—Fos和Cx43的表达与分娩发动有一定的关系,且3者间水平变化均呈明显正相关。     

胎盘和子宫平滑肌组织中尿皮质素mRNA表达水平变化及其与分娩发动的关系

目的探讨胎盘和子宫平滑肌组织中尿皮质素(urocortin,UCN)对子宫平滑肌收缩功能的影响,及UCN mRNA表达变化在分娩发动、进展中的作用。方法(1)采用半定量RT-PCR技术检测10例未临产妇女(未临产组)及20例临产妇女(临产组,其中10例潜伏期、10例活跃期)的胎盘组织和子宫平滑肌组织中UCN mRNA表达水平;(2)另取24例剖宫产术分娩产妇的子宫平滑肌组织(实验样本)行离体收缩实验,观察不同剂量UCN对子宫平滑肌的收缩作用,以及对由前列腺素F2α(PGF2α)、缩宫素诱发的子宫平滑肌收缩活动的影响,以收缩曲线下面积表示。结果(1)临产组胎盘组织中UCNmRNA的表达水平为1·23±0·52,高于未临产组的0·83±0·38,两组比较,差异有统计学意义(P<0·05);临产组子宫平滑肌组织中UCN mRNA的表达水平为1·32±0·22,高于未临产组的0·94±0·13,两组比较,差异有统计学意义(P<0·05)。临产组活跃期产妇的胎盘组织及子宫平滑肌组织中UCN mRNA表达水平明显高于潜伏期产妇,两者分别比较,差异有统计学意义(P<0·05)。(2)实验样本对不同剂量UCN均无反应,收缩曲线下面积无变化;但在加入UCN的基础上再加入PGF2α,可引起子宫平滑肌收缩曲线下面积由(2·12±0·15)cm2增加到(3·90±0·33)cm2,两者比较,差异有统计学意义(P<0·05);但UCN对缩宫素引起的子宫平滑肌收缩曲线下面积无影响。结论UCN本身对子宫平滑肌收缩功能无影响,但可以增加PGF2α及缩宫素对子宫平滑肌的收缩作用,从而参与分娩的发动和维持。     

临产前后子宫平滑肌组织中G蛋白偶联受体30的表达及其临床意义研究

目的 探讨G蛋白偶联受体30（GPR30） mRNA和蛋白在临产前、后子宫平滑肌组织中的表达及其与分娩发动的相关性。方法 2011年3月至2012年3月在青岛市市立医院选取临产前进行选择性剖宫产的足月妊娠妇女作为未临产组（n=40）,自然临产进入产程活跃期后进行急症剖宫产的足月妊娠妇女作为临产组（n=50）,于剖宫产术中取少量子宫平滑肌组织,采用实时荧光定量PCR技术和Western blot技术检测两组子宫平滑肌组织中GPR30 mRNA和蛋白的表达量;并于术前取静脉血,采用放射免疫法测定血清中雌二醇（E2）、雌三醇（E3）以及孕酮（P）的含量。结果 实时荧光定量PCR方法检测临产组和未临产组子宫平滑肌组织中均有GPR30 mRNA表达,临产组样本△Ct为3.08±0.35,未临产组样本△Ct为4.02±0.67,差异具有统计学意义（P＜0.05）,用双△Ct法进行相对定量分析,临产组GPR30 mRNA表达量是未临产组的1.92倍。Western blot技术检测临产组和未临产组子宫平滑肌组织中均有GPR30蛋白表达,临产组GPR30蛋白相对表达量4.06±0.25明显高于未临产组1.94±0.23,差异有统计学意义(P＜0.05)。临产组血清E2、E3浓度[（7882.41±921.76）pmol/L,（544.12±15.58）nmol/L]均显著高于未临产组[（5210.72±873.13）pmol/L,（326.36±12.26）nmol/L]。结论 足月妊娠分娩发动时GPR30高表达可能参与介导雌激素对子宫收缩的调节作用。     

人胎膜组织中E26转录因子1的表达及其与胎膜早破的关系

目的 检测人胎膜组织中E26转录因子1(Ets-1)的表达及定位,探讨其与胎膜早破发生的关系.方法 选择2007年2-11月在重庆医科大学附属第一医院住院分娩的产妇100例为研究对象,按足月与否、有无胎膜早破、分娩方式将其分为早产临产、未足月胎膜早破(PPROM)、足月临产、足月胎膜早破(TPROM)组,以足月择期刮宫产产妇为对照组,每组各20例,分娩后采集其胎膜组织,用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测Ets-1蛋白的表达水平及定位,每组选取6例以逆转录(RT)-PCR技术检测Ets-1 mRNA的表达水平,并进行半定量分析.结果 (1)各组胎膜组织中Ets-1 mRNA的表达:早产临产、PPROM、足月临产、TPROM、对照组胎膜组织中Ets-1mRNA表达水平分别为0.342±0.016、0.603±0.027、0.325±0.013、0.582±0.075、0.139±0.012,PPROM组和TPROM组均高于对照组.分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);早产临产组与足月临产组,PPROM组与TPROM组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)Ets-1蛋白在胎膜组织的定位:Ets-1蛋白集中在羊膜和绒毛膜的间质层、滋养层细胞的胞质和胞核中表达;细胞内可见清晰的棕黄色颗粒.在羊膜上皮细胞中未见Ets-1蛋白表达.(3)各组胎膜组织中Ets-1蛋白的表达:早产临产、PPROM、足月临产、TPROM、对照组胎膜组织中Ets-1蛋白表达水平分别为0.552±0.018、2.853±0.174、0.538±0.042、2.731±0.090、0.214±0.013,PPROM组与TPROM组均高于对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);但早产临产组与足月临产组,PPROM组与TPROM组胎膜组织分别比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Ets-1在人类胎膜组织中有表达,且在胎膜早破时表达水平升高.     

子痫前期患者胎盘组织中Rho激酶Ⅱ表达与滋养细胞凋亡的研究

目的探讨Rho激酶Ⅱ(Rho-associatedProteinKinaseⅡ,ROCKⅡ)在正常妊娠和子痫前期患者胎盘的分布和表达及与滋养细胞凋亡的关系。方法采用免疫组织化学法检测30例子痫前期(轻、重度)孕妇和15例正常妊娠妇女胎盘中ROCKⅡ的分布和表达,采用TUNEL法检测三组胎盘滋养细胞的凋亡情况。结果ROCKⅡ在正常妊娠和子痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞中均有表达,以滋养细胞表达为主。子痫前期重度和轻度组以及正常妊娠组ROCKⅡ的免疫组化积分分别为(4.53±0.58)、(3.18±0.59)和(2.06±0.63),P<0.01。正常妊娠和子痫前期患者胎盘的滋养细胞、内皮细胞、基质细胞均存在凋亡,以滋养细胞凋亡为主。重度子痫前期组胎盘滋养细胞凋亡(0.28±0.03)%显著高于子痫前期轻度组(0.22±0.04)%,子痫前期轻度组显著高于正常妊娠组(0.16±0.05)%(P<0.01)。滋养细胞ROCKⅡ表达和滋养细胞凋亡具有相关性(r=0.96,P<0.01)。结论子痫前期患者胎盘组织中Rho激酶Ⅱ的高表达可能与其滋养细胞凋亡增加有关。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对细胞滋养细胞侵袭能力的研究

目的 观察Rho激酶特异抑制剂Y-27632对体外培养的细胞滋养细胞侵袭能力的影响。方法2006年3月至8月在中国医科大学附属第二医院收集妊娠6～8周行人工流产术的健康妇女绒毛组织，通过免疫组化法检测细胞滋养细胞中RhoA和ROCKⅡ蛋白的表达；利用原代细胞培养技术，采用MTT、Transwell体外浸润实验和细胞运动实验检测Rho激酶抑制荆Y-27632对细胞滋养细胞生长和浸润运动能力的影响。结果在细胞滋养细胞有RhoA和ROCKⅡ蛋白的表达，原代培养的细胞滋养细胞经Y-27632处理后，侵袭及运动能力明显下降。结论Rho／Rho激酶信号转导系统对细胞滋养细胞侵袭有重要作用．可能参与由胎盘植入异常引起的妊娠相关疾病。     

子宫平滑肌组织中RhoA及Rho激酶的表达与分娩发动的关系

Objective To investigate the role of RhoA and Rho kinase system in the onset of labor. Methods Forty term pregnant women, who delivered through cesarean section at the Xiangya Second Hospital of Central South University from February 2007 to November 2007, were selected and divided into 2 groups: 20 in labor group and 20 in non-labor group. Another 20 non-pregnant women undergoing hysterectomy due to cervical intraepithelial neoplasia were chosen as the control. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR and western blot were applied to detect the expression RhoA and ROCKⅠ mRNA and protein in uterine smooth muscle tissue and the correlation between the mRNA and protein expression of RhoA and ROCKⅠ were analyzed. Results (1) The mRNA expressions of both RhoA and ROCKⅠ were detected in all groups, and higher levels were found in the labor group than in the non-labor group and the control [RhoA mRNA: (3.51±0.56)×10-3 vs. (2.75±0.52)×10-3 and (2.11±0.54)×10-3; ROCKⅠ mRNA: (4.07±0.66)×10-3 vs. (2.71±0.52)×10-3 and(2.01±0.23)×10-3, P<0.01]. (2) RhoA and ROCKⅠ proteins were also identified in all three groups, and the expressions in the labor and non-labor group were higher than those of the control (RhoA protein: 0.72±0.23 and 0.64±0.17 vs. 0.46±0.15; ROCKⅠ protein: 0.56±0.14 and 0.42±0.16 vs. 0.29±0.08, P<0.01). (3) The expression of RhoA mRNA and ROCKⅠ mRNA were positively correlated in each of the three groups (r=0.73,P<0.01), and the same was found in the expression of RhoA protein and ROCKⅠ protein (r=0.37,P<0.01). Conclusion The increased expression of RhoA and Rho kinase may play an important role in the initiation of labor.     

子宫平滑肌组织中RhoA及Rho激酶的表达与分娩发动的关系

Objective To investigate the role of RhoA and Rho kinase system in the onset of labor. Methods Forty term pregnant women, who delivered through cesarean section at the Xiangya Second Hospital of Central South University from February 2007 to November 2007, were selected and divided into 2 groups: 20 in labor group and 20 in non-labor group. Another 20 non-pregnant women undergoing hysterectomy due to cervical intraepithelial neoplasia were chosen as the control. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR and western blot were applied to detect the expression RhoA and ROCKⅠ mRNA and protein in uterine smooth muscle tissue and the correlation between the mRNA and protein expression of RhoA and ROCKⅠ were analyzed. Results (1) The mRNA expressions of both RhoA and ROCKⅠ were detected in all groups, and higher levels were found in the labor group than in the non-labor group and the control [RhoA mRNA: (3.51±0.56)×10-3 vs. (2.75±0.52)×10-3 and (2.11±0.54)×10-3; ROCKⅠ mRNA: (4.07±0.66)×10-3 vs. (2.71±0.52)×10-3 and(2.01±0.23)×10-3, P<0.01]. (2) RhoA and ROCKⅠ proteins were also identified in all three groups, and the expressions in the labor and non-labor group were higher than those of the control (RhoA protein: 0.72±0.23 and 0.64±0.17 vs. 0.46±0.15; ROCKⅠ protein: 0.56±0.14 and 0.42±0.16 vs. 0.29±0.08, P<0.01). (3) The expression of RhoA mRNA and ROCKⅠ mRNA were positively correlated in each of the three groups (r=0.73,P<0.01), and the same was found in the expression of RhoA protein and ROCKⅠ protein (r=0.37,P<0.01). Conclusion The increased expression of RhoA and Rho kinase may play an important role in the initiation of labor.     

内源性一氧化氮合酶抑制物及其水解酶变化与子痫前期发病的关系

目的 探讨子痫前期孕妇血浆内源性一氧化氮合酶抑制物--非对称性二甲基精氨酸(ADMA)的水平变化及胎盘组织中一氧化氮合酶抑制物水解酶--二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH-2)的表达变化与子痫前期发病的关系.方法 选择2004年1月至2005年1月在广州医学院第三附属医院住院分娩的子痫前期孕妇30例(子痫前期组),以同期正常晚期妊娠妇女10例(正常妊娠组)为对照.采用高效液相色谱(HPLC)分析法测定两组孕妇血浆ADMA水平;采用荧光定量PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中DDAH-2 mRNA的表达.结果 (1)血浆ADMA水平:子痫前期组孕妇血浆ADMA水平为(18.0±7.2)mg/L,高于正常妊娠组的(10.3±1.7)mg/L,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);子痫前期组中,发病孕周<34周者血浆ADMA水平为(22.0±7.0)mg/L,显著高于发病孕周≥34周者的(12.7±2.8)ms/L,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).(2)胎盘组织DDAH-2 mRNA的表达量:子痫前期组胎盘组织中DDAH-2 mRNA的表达量为1×10(5.23±0.45) copy/μ,显著低于正常妊娠组的1×10(5.65±0.08)copy/μ,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);子痫前期组中,发病孕周<34周者胎盘组织DDAH-2 mRNA表达量为1×10(5.02±0.46)copy/μ,显著低于发病孕周≥34周者的1 ×10(5.61±0.19)copy/μ,两者比较,差异也有统计学意义(P<0.01).结论 胎盘组织中DDAH-2 mRNA的低表达与血浆ADMA水平的升高,可能与子痫前期的发病有关.     

高氧暴露胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞线粒体蛋白质组学初步研究以及ND4动态表达

目的 初步分析高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial cellⅡ,AEC Ⅱ)线粒体蛋白质表达谱的改变并就NADH脱氢酶亚单位4(NADH-dehydrogenase subunit 4,ND4)的动态表达进行研究.方法 原代培养胎鼠AECⅡ并随机分为空气组和高氧组,采用双向电泳检测线粒体蛋白差异性表达,运用RT-PCR和Western blot方法分别检测ND4 mRNA及其蛋白表达.结果 与空气组比较,高氧暴露24 h导致55种AECⅡ线粒体蛋白质出现差异性表达;高氧暴露6、12、24和48 h,原代胎鼠AECⅡ ND4 mRNA(1.20±0.12,1.20±0.12,0.69±0.07和1.54±0.10)表达均较对照组(2.35±0.13,4.61±0.43,2.155=0.14和2.21±0.21)显著降低,差异均有统计学意义(P均<0.01).高氧暴露12和24 h时,原代胎鼠AECⅡ ND4蛋白表达(1.58±0.21和1.33±0.10)较对照组(2.77±0.19和2.23±0.05)下降,差异有统计学意义(P均<0.01).结论 高氧暴露导致AECⅡ线粒体(包括呼吸链)功能状态改变可能是促使肺损伤发生发展的重要因素.     

抗苗勒管激素对卵巢黄素化颗粒细胞中芳香酶表达的影响

目的 探讨抗苗勒管激素(AMH)对卵巢黄素化颗粒细胞激素分泌和芳香酶P450mRNA表达的影响.方法 采集2006年6-12月在中山大学附属第二医院进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的10例不孕患者的卵巢黄素化颗粒细胞进行原代培养,按照加入AMH浓度的不同,将颗粒细胞分为A、B、C、D、E组及睾酮对照组、空白对照组,A～E组分别加入1、5、10、20、50μg/L的AMH及1×10-7mol/L睾酮,睾酮对照组加入1×10-7mol/L睾酮,空白对照组仅加入培养基.于培养24、48、72 h时分别检测各组细胞中的雌二醇水平;培养72 h后各组均进行细胞计数,并采用RT-PCR技术检测B、C、D、 E组及睾酮对照组细胞中芳香酶P450 mRNA的表达水平.结果 (1)培养24、48、72 h后颗粒细胞中的雌二醇水平,A组分别为(8.529±0.381)×104、(10.977±0.436)x 104、(13.309±0.506)×104pmo/L,B组分别为(7.027±0.276)×104、(9.167±0.300)×104、(10.794±0.555)×104 pmo/L,C组分别为(6.039±0.226)×104、(7.585±0.548)×104、(8.797±0.518)×104pmo/L,D组分别为(5.118±0.460)×104、(5.716±0.496)×104(6.205±0.667)x1044pmol/L,E组分别为(4.932±0.148)×104(5.323±0.184)×104(5.629±0.212)x 1044 pmol/L,各组分别与空白对照组[分别为(0.001±0.001)×104(0.006±0.003)×104(0.029±0.011)×1044pmol/L]比较,差异均有统计学意义(P<0.01);B、C、D、E组分别与睾酮对照组[分别为(8.418±0.569)×104(10.841±0.689)×104(13.301±0.637)×1044pmol/L]比较,差异也均有统计学意义(P<0.01);B组分别与C、D、E组比较,C组分别与D、E组比较,差异也均有统计学意义(P<0.01);D组与E组之间比较,差异无统计学意义(P40.05).A、B、C、D、E组及睾酮对照组培养24 h后颗粒细胞中的雌二醇水平,分别与培养48、72 h比较,差异均有统计学意义(P<0.01);培养48 h后的雌二醇水平与培养72 h比较,差异也均有统计学意义(P<0.01).空白对照组培养24、48、72 h后的雌二醇水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)培养72 h后,B、C、 D、 E组颗粒细胞中芳香酶P450 mRNA的表达水平分别为0.6148±0.0046、0.5156±0.0012、0.4698±0.0027、0.4282±0.0017,分别与睾酮对照组(0.8224±0.0021)比较,差异均有统计学意义(P<0.01);B组分别与C、D、E组比较,C组分别与D、E组比较,差异也有统计学意义(P<0.01);D组与E组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论AMH可能通过在卵巢局部抑制芳香酶活性而影响颗粒细胞的雌激素合成过程,促使卵泡内局部高雄激素环境的形成.     

氧化低密度脂蛋白及其受体与子痫前期发病的关系

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及血凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)与子痫前期发病的关系.方法 选择2007年6月至2008年1月在青岛大学医学院附属医院产科住院分娩的子痫前期孕妇73例,其中轻度子痫前期孕妇35例(轻度子痫前期组),重度子痫前期孕妇38例(重度子痫前期组).选取同期正常晚期妊娠妇女45例为对照组.采用酶联免疫吸附试验检测各组孕妇血浆中oxLDL水平;采用RT-PCR、蛋白印迹法分别检测各组孕妇胎盘组织中LOX-1 mRNA及蛋白表达水平;采用RT-PCR检测各组孕妇胎盘组织中半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA表达水平.结果 (1)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平分别为(0.42±0.11)及(0.68±0.12)mg/L,明显高于对照组的(0.35±0.14)mg/L,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(2)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1mRNA表达水平分别为0.70±0.10及0.84±0.08,明显高于对照组的0.58±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(3)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为0.79±0.15及0.90±0.12,明显高于对照组的0.68±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(4)轻度及重度子痫前期组孕妇胎盘组织中caspase-3 mRNA表达水平分别为3.82±0.18及5.39±0.14,明显高于对照组的2.19±0.20,差异有统计学意义(P<0.01);重度子痫前期组又明显高于轻度子痫前期组(P<0.01).(5)轻度及重度子痫前期组孕妇血浆中oxLDL水平与胎盘组织中LOX-1 mRNA表达水平呈正相关(r=0.93,P<0.05);胎盘组织中LOX-1 mRNA表达与胎盘组织caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.84,P<0.05).结论 子痫前期孕妇血浆中oxLDL水平升高,并上调胎盘组织中的LOX-1表达水平,从而参与子痫前期的病理生理过程.     

乙二醛酶Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的 了解乙二醛酶Ⅰ(GLO-Ⅰ)在子宫内膜癌组织和细胞中的表达情况,探讨GLO-Ⅰ对子宫内膜癌细胞增殖与凋亡的影响.　方法应用免疫组化抗生物素蛋白-生物素复合物(ABC)法检测子宫内膜癌(29份)、正常子宫内膜(19份)组织中GLO-Ⅰ蛋白的表达,紫外分光光度计检测子宫内膜癌及其癌旁组织、正常子宫内膜组织中GLO-Ⅰ的活性.GLO-Ⅰ小分子RNA(siRNA)转染子宫内膜癌细胞株lshikawa细胞后,采用蛋白印迹法及逆转录(RT)-PCR技术分别检测其GLO-Ⅰ蛋白及mRNA的表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪分别检测其细胞增殖及凋亡情况.结果 (1)子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ蛋白的阳性表达率为76%(22/29),正常子宫内膜组织为0/19,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).正常子宫内膜、子宫内膜癌癌旁组织中GLO-Ⅰ活性(分别为1.1、0.8 IU/mg)较弱,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性(92.3 IU/mg)明显升高,差异有统计学意义(P<0.01).(2)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ silRNA后,其GLO-Ⅰ mRNA的表达水平为0.25±0.06,低于阴性对照(转染与目的基因无关的siRNA)的0.93±0.10,差异有统计学意义(P<0.01);其GLO-Ⅰ蛋白的表达水平为0.38±±0.06,低于阴性对照的0.94±0.13,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)Ishikawa细胞转染GLO-Ⅰ siRNA后,其细胞增殖能力与空白对照(仅加转染试剂)比较明显降低(P=0.028);其细胞凋亡率为(6.7±0.8)%,高于阴性对照的(1.2±0.4)%和空白对照的(1.4±0.4)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 GLO-Ⅰ在子宫内膜癌组织和细胞中均呈过度表达,子宫内膜癌组织中GLO-Ⅰ活性异常升高.抑制GLO-Ⅰ基因表达可促进子宫内膜癌细胞凋亡,并抑制其增殖.     

脂氧素对滋养细胞氧化损伤的保护作用及其机制

目的研究脂氧素(lipoxinA4,LXA4)在孕妇血清中的表达及其对滋养细胞氧化损伤的保护作用和作用机制.方法 细胞实验分为6组,对照组;脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组:10 μg/ml LPS作用24 h;干预组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4作用24 h;LXA4组:100 nmol/L LXA4作用24 h;拮抗组:10 μg/ml LPS+100 nmol/L LXA4+100 μmol/L N-叔丁氧羰基吡咯烷(N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine,BOC-2)作用24 h;BOC-2组:10μg/ml LPS+100 μmol/L BOC-2 作用24 h.采用酶联免疫吸附试验检测正常孕妇与子痫前期患者血清LXA4含量;以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯为荧光探针检测滋养细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;逆转录-聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD) mRNA的表达;Western印迹分析SOD、转录因子NF-E2相关因子2(NF-E2-related factor,Nrf2)的蛋白表达水平;黄嘌呤氧化酶法测定滋养细胞中SOD活性.结果 (1)子痫前期患者血清LXA4水平为(165.53±18.89) pg/L,与正常孕妇[(545.67±30.91) pg/L]相比明显下降(t=40.64,P<0.01).(2)LPS组与对照组相比,滋养细胞内二氯荧光素(dichlorofluorescein,DCF)密度值明显升高(P<0.01),DCF密度值从53.00±3.08 上升至77.00±5.83( t=8.14,P<0.01);胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA和蛋白表达均显著下降(t分别为34.11、25.61和17.93,P均<0.01);滋养细胞上清中的SOD含量明显下调(t=12.16,P<0.01).(3)干预组与LPS组相比,滋养细胞内DCF密度值明显下降,DCF密度值从77.00±5.83降至62.00±3.39(t=4.97,P<0.01),胞核中Nrf2蛋白、SOD mRNA表达显著上升(t分别为11.74和13.17,P均<0.01),SOD蛋白表达也有所升高(t=4.67,P<0.05),滋养细胞上清中的SOD含量明显增加,酶活力上升至(8.93±0.53) U/ml(t=14.76,P<0.01).(4)拮抗组与干预组相比,滋养细胞上清中SOD含量下降至(6.23±0.41) U/ml(t=9.03,P<0.01),但仍高于LPS组(t=6.10,P<0.01);BOC-2组SOD含量为(4.90±0.32) U/ml,与LPS组相比差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05).结论 LXA4可明显减轻LPS引起的胎盘滋养细胞氧化损伤,且LXA4可通过脂氧素受体(lipoxinA4 receptor,ALX-R)激活Nrf2/抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)信号通路来发挥抗氧化损伤的作用.

Abstract：

Objective To explore lipoxinA4 (LXA4) expression in maternal serum of pregnant women and the protective effect and mechanism of LXA4 on trophoblastic cells from oxidative injury. Methods Trophoblastic cells were randomized into six groups: Control group; Lipopolysaccharides (LPS) group, cells were stimulated by 10 μg/ml LPS for 24 h; Intervention group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; LXA4 group, cells were treated with 100 nmol/L LXA4 for 24 h; Antagonistic group, cells stimulated by LPS were treated with 100 nmol/L LXA4 plus 100 μmol/L N-tert-butoxycarbonyl-2-pyrrolidine (BOC-2) for 24 h; BOC-2 group, trophoblastic cells stimulated by LPS were treated with 100 μmol/L BOC-2 for 24 h. The serum concentration of LXA4 in normal group and preeclampsia group was detected by ELISA. The intracellular formation of reactive oxygen species (ROS) was detected by 2,7-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) as a fluorescent probe. SOD mRNA was analyzed by RT-PCR. SOD and Nrf2 protein expressions were analyzed by Western blot. The levels of SOD in trophoblastic cells were detected by using detection kit. Results (1) The serum concentration of LXA4 was significantly lower in preeclampsia group (165.53±18.89) pg/L than in the control [(545.67±30.91) pg/L, P<0.01]. (2) Compared with control group, the levels of ROS in LPS group were significantly higher, DCF density of trophoblastic cells increased from 53.00±3.08 to 77.00±5.83 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA and protein in LPS group were obviously decreased (P<0.01). The levels of SOD in LPS group were also significantly lower (P<0.01). (3) Compared with LPS group, the levels of ROS in intervention group were significantly lower, DCF density of trophoblastic cells decreased from 77.00±5.83 to 62.00±3.39 (P<0.01). The expression of nuclear Nrf2 protein, SOD mRNA in intervention group were obviously increased (P<0.01), so did the SOD protein expression (P<0.05). The levels of SOD were significantly increased from (4.77±0.34) U/ml to (8.93±0.53) U/ml (P<0.01). (4) The levels of SOD in antagonistic group were lower than in intervention group, but still higher than LPS group. [(6.23±0.41) U/ml vs (8.93±0.53) U/ml (P<0.01) or (4.77±0.34) U/ml (P<0.01)]. No significant difference was found in the levels of SOD between BOC-2 and LPS group (P>0.05). Conclusions LXA4 can significantly reduce the oxidative stress of placental trophoblastic cells stimulated by LPS. LXA4 can bind to lipoxin receptors and activate Nrf2-ARE signaling pathway playing a protective effect. So LXA4 in pregnant women can affect the oxidative stress of placenta.