Cl~-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法　采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果　① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论　 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS、NPPB敏感的Cl-通道开放有关     

多巴胺舒张猪冠状动脉及激活冠状动脉平滑肌细胞钾通道

采用血管环实验和膜片钳细胞贴附式技术分别在器官和细胞分子水平观察多巴胺舒张猪冠状动脉作用及对平滑肌细胞大电导型钙激活钾通道(BKCa)的影响 .结果表明多巴胺引起前列腺素 F2α(PGF2α)预收缩动脉环浓度依赖性舒张反应 ,而不引起高 K 预收缩动脉环舒张反应 .表明多巴胺引起的冠状动脉血管舒张反应依赖于 K 生理浓度梯度的存在 ,结果提示钾通道参与了多巴胺的血管舒张反应 .向细胞浴液内灌流多巴胺增强冠状动脉血管平滑肌细胞膜 BKCa通道活性 .用 DA1受体阻断剂 SCH2 3390预处理细胞 ,完全阻断多巴胺的这一作用 ,而用 β受体阻断剂普萘洛尔无影响 .提示多巴胺通过 DA1受体激活 BKCa通道引起 PGF2α预收缩动脉环舒张反应     

高血压大鼠主动脉平滑肌细胞Cl~-通道的改变

目的　探讨在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞Cl-通道的改变。方法　采用两肾两夹 (2kidney 2clip ,2K2C)肾血管性高血压大鼠 (renovascularhypertensiverats,RVHR)模型 ,在术后 1wk～ 12wk ,取大鼠胸主动脉平滑肌 ,做主动脉环张力实验 ,观察Cl-通道阻断剂DIDS(4,4 di isothiocyanato stilbene 2 ,2’disulphonate)和NPPB[5 nitro 2 (3 phenylpropy lamino)benzonicacid]对苯肾上腺素引起的主动脉平滑肌 (aorticvascularsmoothmuscle,AVSM )收缩反应的影响。结果　在术后 1wk和 4wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和 10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用与假手术组相比差异无显著性 ;在术后 8wk和 12wk ,30 0 μmol·L-1DIDS和10 0 μmol·L-1NPPB对苯肾上腺素引起的高血压手术组大鼠主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用低于假手术组 ;随术后时间的延长 ,血压的升高 ,DIDS和NPPB对主动脉平滑肌收缩反应的抑制作用逐渐降低。结论　在高血压状态下 ,大鼠主动脉平滑肌细胞DIDS和NPPB敏感的Cl-通道的活性发生了改变 ,DIDS和NPPB敏感的Cl-通道与高血压病的发生和发展密切相关。     

多巴胺舒张猪冠状动脉及激活冠状动脉平滑肌细胞钾通道

采用血管环实验和膜片钳细胞贴附式技术分别在器官和细胞分子水平观察多巴胺舒张猪冠状动脉作用及对平滑肌细胞大电导型钙激活钾通道(BK_Ca)的影响. 结果表明多巴胺引起前列腺素F_2α(PGF_2α)预收缩动脉环浓度依赖性舒张反应, 而不引起高K⁺预收缩动脉环舒张反应. 表明多巴胺引起的冠状动脉血管舒张反应依赖于K⁺生理浓度梯度的存在, 结果提示钾通道参与了多巴胺的血管舒张反应. 向细胞浴液内灌流多巴胺增强冠状动脉血管平滑肌细胞膜BK_Ca通道活性. 用DA₁受体阻断剂SCH23390预处理细胞, 完全阻断多巴胺的这一作用, 而用β受体阻断剂普萘洛尔无影响. 提示多巴胺通过DA₁受体激活BK_Ca通道引起PGF_2α预收缩动脉环舒张反应.     

Cl~-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的　研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法　通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果　Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论　DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 + 内流及血管平滑肌细胞增殖的调控上都起着重要的作用     

氯通道阻断剂对大鼠主动脉环收缩和舒张反应的影响

目的　观察氯通道阻断剂DIDS和呋塞米(furosemide)对苯肾上腺素 (phenylephrine,PHE)引起的收缩反应和ATP引起的内皮依赖性舒张效应的影响。方法　采用内皮完整和去内皮的大鼠离体主动脉环 ,进行等长张力实验。结果　DIDS(1～ 30 0 μmol·L-1)和furosemide(10～ 32 0μmol·L-1)均浓度依赖性抑制PHE引起的收缩反应 ,但对内皮完整的血管环抑制率和去内皮的血管环抑制率不同 ,DIDS的IC50 分别为 (12 0± 8 0 ) μmol·L-1和 (2 8 3± 7 3)μmol·L-1;furosemide的IC50 分别为 (17 9± 6 6 ) μmol·L-1和 (41 0± 15 6 ) μmol·L-1。DIDS(10 0 μmol·L-1)对 10μmol·L-1和 10 0 μmol·L-1的ATP舒张无影响 ,但可增加 1mmol·L-1ATP引起的舒张效应 (P <0 0 5 ) ;furosemide(2 0 0μmol·L-1)对 10 μmol·L-1的ATP舒张无影响 ,但可使 10 0μmol·L-1ATP和 1mmol·L-1ATP引起的舒张效应增强 (P<0 0 5 )。结论　DIDS和furosemide可抑制PHE引起的收缩 ,且对带内皮血管环的抑制率均大于去内皮血管环的抑制率 ,并可增加ATP引起的内皮依赖性舒张。     

氯通道阻断剂对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的观察氯通道阻断剂对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响,探讨氯通道在RIN-mβ细胞凋亡中的作用。方法采用H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡模型,观察氯通道阻断剂(DIDS、NPPB和NFA)对细胞存活率、形态学变化、凋亡的影响。结果氯通道阻断剂单用时对胰岛RIN-mβ细胞活力无明显影响,但能明显提高H2O2处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。与模型对照组相比,氯通道阻断剂DIDS、NPPB和NFA对抗组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论氯通道阻断剂对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

山楂水提取物对猪离体冠状动脉环的舒张作用研究

目的:研究山楂水提取物对猪离体冠状动脉环的舒张作用。方法:观察0.1、0.3、0.5mg·mL-1山楂水提取物对KC(l30mmol·L-1)诱发的猪离体冠状动脉环收缩的舒张作用。以Na+/Ca2+交换体阻滞剂KB-R7943(1×10-6mol·L-1)、电压依赖性钾通道(KV)阻滞剂四胺基吡啶(4-AP,1×10-3mol·L-1)、K+-ATP通道阻滞剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)、K+/Ca2+通道阻滞剂乙胺(TEA,1×10-2mol·L-1)、内向整流钾通道(KiR)阻滞剂氯化钡(BaCl2,1×10-3mol·L-1)预处理血管环,观察其对山楂水提取物舒血管作用的影响。结果:山楂水提取物对KCl预收缩的猪离体冠状动脉环产生浓度依赖性的舒张作用。用KB-R7943、4-AP、Gli预处理的血管环对山楂水提取物的舒张反应与未经处理时比较无显著性差异(P>0.05)。TEA和BaCl2预处理的血管环对山楂水提取物的舒张反应与未经处理时比较有显著性差异(P<0.01)。结论:山楂水提取物对KCl预收缩的猪离体冠状动脉环具有浓度依赖性的舒张作用,其舒张反应可能与K+/Ca2+通道和KiR通道有关,与Na+/Ca2+交换体、KV通道和K+-ATP通道无关。     

染料木素对狗基底动脉环舒张作用及其机制的离体研究

目的：探讨血管张力变化对染料木素的脑血管保护作用及相关机制的比较。方法：（1）制备狗基底动脉血管环固定于恒温肌槽内,待平衡后,加入各种药物观察血管张力的变化。结果：（1）200μmol／L GST可浓度依赖性地压低氯化钾（KCl）量效曲线,使其明显右移,最大收缩反应和肌条对KCl的敏感性明显降低。（2）无Ca^2＋K—H液中。染料术素对去甲肾上腺素（NA）诱发产生第一时相收缩和CaCl2产生第二时相收缩均具有明显的抑制作用。（3）染料木素可使60mmol／L KCl预收缩基底动脉血管环产生明显的舒张作用,除内皮细胞或加入一氧化氮合酶抑制剂Nω—L-硝基精氨酸1×10^-4mol／L．甲烯兰1×10^-5mol／L．1×10^-5mol／L吲哚美辛或格列本脲1×10^-5mol／L温育后,染料木素对60mmol／L KCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用无明显改变（P〉0．05）。结论：（1）染料木素对基底动脉血管舒张可能是直接作用于平滑肌而引起的,即抑制电压依赖性的钙通道。无Ca^2＋K—H液中,抑制NA从细胞内释放贮存的Ca^2＋。（2）染料木素对基底动脉血管的舒张作用与内皮细胞及其释放的一氧化氮无关。前列腺素类物质的合成和KATP通道亦无关。     

氯通道参与姜黄素诱导的乳腺癌MCF-7凋亡

目的： 探讨姜黄素（curcumin）诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡性途径中氯通道是否参与。方法： MTT检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用,及用氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropyl-amino）-benzoate （NPPB）预孵2 h后再加入姜黄素的增殖抑制作用;流式细胞术验证姜黄素诱导细胞的凋亡;采用全细胞膜片钳技术记录加入姜黄素后,细胞氯电流的变化。结果： （1）姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。NPPB组与单加入姜黄素组相比,细胞生存率存在明显差异,提示阻滞氯通道可导致姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的作用减弱。（2）流式结果表示,加入姜黄素（25 μmol·L^-1）24 h后凋亡率33.16%;而姜黄素（25 μmol·L^-1）+NPPB （100 μmol·L^-1）组凋亡率仅为9.16%,相比对照组（6.26%）、NPPB组（7.31%）,氯通道阻断剂明显抑制姜黄素诱导的MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,且对早期凋亡的抑制作用明显。（3）全细胞膜片钳技术结果,细胞外灌流姜黄素（25 μmol·L^-1）可激活乳腺癌细胞MCF-7氯通道的开放,产生氯电流,翻转电位（－3.18±1.30） mV,外向电流密度（3.16±1.42） pA·pF^-1,内向电流密度为（－2.76±1.38） pA·pF^-1,该电流可被氯通道阻断剂NPPB、DIDS完全抑制,细胞外灌流高渗溶液亦可完全抑制该电流。结论： 姜黄素可能通过激活容积敏感性氯通道而诱导细胞的凋亡,氯通道的激活可能在姜黄素诱导肿瘤凋亡通路中起着重要的作用。     

氯通道阻断剂对T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨氯通道开放在Ｔ淋巴细胞增殖过程中的作用。方法新鲜分离成人外周血Ｔ淋巴细胞,以ＣｏｎＡ诱导其增殖,用［３Ｈ］ ＴｄＲ参入法测定并比较氯通道阻断剂ＤＩＤＳ、ＮＰＰＢ、９ ＡＣ、ＮＦＡ、Ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ对Ｔ淋巴细胞增殖的作用;测定钙通道阻滞剂ＳＫ＆Ｆ９６３６５、硝苯吡啶以及免疫抑制剂环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）对Ｔ淋巴细胞增殖的作用;比较ＤＩＤＳ、ＮＰＰＢ与ＳＫ＆Ｆ９６３６５或ＣｓＡ的相互作用。结果９ ＡＣ,ＮＦＡ,Ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ对Ｔ细胞增殖无明显抑制作用;ＤＩＤＳ、ＮＰＰＢ呈浓度依赖性地抑制Ｔ细胞增殖,ＩＣ５０分别为１６８２３±３３６和（１２４３５±４２４）μｍｏｌ·Ｌ－１,并显著增强ＳＫ＆Ｆ９６３６５及ＣｓＡ抑制Ｔ细胞增殖的作用,且ＮＰＰＢ增强抑制作用强于ＤＩＤＳ。结论阻断氯通道可抑制ＣｏｎＡ诱导的Ｔ淋巴细胞增殖活化,氯通道开放影响细胞钙运动。     

Differing calcium sensitivities of human cerebral and digital arteries, human metatarsal veins, and rat aorta

1. The effects of the voltage dependent calcium channel blocking agent nifedipine, and of a calcium free bathing medium, on the responses of human blood vessels obtained postmortem to various agonists have been compared with those of the rat aorta. The human vessels studied were digital arteries, basilar arteries and metatarsal veins. 2. Responses to potassium chloride (5-80 mM), noradrenaline (10(-9)-10(-4) M), 5-hydroxytryptamine (10(-8)-10(-4) M) and U46619 (10(-11)-10(-6) M), in the presence and absence of nifedipine (1, 10, and 100 nM) or in a calcium-free bathing medium, were assessed using an area-under-curve analysis. 3. In general, the order of sensitivity of the vessels to inhibition of agonist induced contractures by nifedipine was basilar arteries greater than metatarsal veins = digital arteries = rat aorta. 4. For all the vessels, the order of sensitivity for antagonism of responses to the agonists by nifedipine was potassium chloride greater than 5-hydroxytryptamine = noradrenaline greater than U46619. 5. A calcium free bath inhibited responses of digital arteries to potassium chloride more than noradrenaline, 5-hydroxytryptamine or U46619, and responses of rat aorta to a greater extent than responses of the digital arteries. 6. In the rat aorta, a calcium-free bath inhibited responses to all agonists (except KCl) to a greater degree than did nifedipine. 7. We conclude that inhibition of extracellular calcium entry through voltage dependent calcium channels affects contractile responses of different blood vessels to different extents, and, within the same blood vessel, responses to different contractile agonists to different extents.     

Vasorelaxant effect of quercetin on cerebral basilar artery in vitro and the underlying mechanisms study

The aim of this study is to investigate the vasorelaxant effect of quercetin on cerebral basilar artery in vitro and provide a preliminary discussion concerning the underlying mechanisms. Using a DMT-isolated micro vessel system, quercetin was found to exhibit a vasodilatory effect on basilar arteries contracted by potassium chloride (KCl), endothelin-1 (ET-1), and 5-hydroxytryptamine (5-HT). The vasorelaxant effect of quercetin was partially attenuated when endothelium cells were removed. L-NAME, indomethacin, and ODQ treatment also decreased the potency of quercetin. In endothelium-denuded rings, the vasorelaxant effect of quercetin was not influenced by K⁺ channel inhibitors. However, quercetin inhibited KCl induced extracellular calcium influx and ET-1 induced transient intracellular calcium release in a Ca²⁺-free solution. In conclusion, quercetin induced relaxation of the basilar artery in vitro is partially dependent on endothelium, which is mainly related to NO and COX pathways. It also induces relaxation through blockage of calcium channels.     

Contractile responses and calcium mobilization in renal arteries of diabetic rats.

The causes of diabetes-associated change of renal artery vasomotion have not been established. We investigated both contractile responses to KCl and norepinephrine (NE) in renal arteries of rats with streptozotocin-induced diabetes and age-matched controls and the effects on Ca2+ mobilization. Renal arteries from diabetics had greater maximum contractile responses to KCl and NE, but the threshold concentrations and EC50 values of KCl and NE were similar in controls and diabetics. The concentration-response for Bay K 8644, a dihydropyridine Ca2+ channel agonist in the presence of 20 mM KCl was significantly greater in diabetics than in controls. The maximum contractile responses to Ca2+ in the presence of 10(-6) M NE were significantly (P less than 0.05) greater in diabetics than in controls. The increased contractile response at low concentrations of Ca2+ (0.01-0.05 mM) was inhibited in both preparations by 10(-6) M nifedipine, but at high concentrations of Ca2+ (0.1-2.5 mM) the inhibition by nifedipine was significantly less in diabetics than in the controls. 45Ca2+ uptake had significantly greater resting levels in diabetics than in controls. The uptake of 45Ca2+ induced by 10(-5) M NE was significantly greater in diabetics than in controls, and 10(-7) M prazosin diminished both responses. The results suggest hyperreactivity of contractile responses to KCl or NE, and hyperpermeability of renal artery smooth muscle membrane to Ca2+ in streptozotocin-induced diabetics.