单侧隐睾对侧睾丸损害与HIF-1α和VEGF的关系

目的探讨单侧隐睾对侧睾丸损害与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的关系。方法24只SD雄性大鼠(35d龄)随机分为3组:单侧隐睾并生殖股神经离断组(A组),单侧隐睾组(B组),假手术组(C组),每组8只。动物模型建立30 d后,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测对侧睾丸的生精细胞凋亡,免疫组织化学SP法检测睾丸组织中HIF-1α和VEGF基因的表达。结果B组对侧睾丸生精细胞凋亡指数、HIF-1α和VEGF的含量均显著升高(P<0．01),C组与A组各项指标无明显差异。结论HIF-1α和VEGF在单侧隐睾对侧睾丸的损害中起重要的作用,而生殖股神经离断能防止对侧睾丸的损害。     

隐睾睾丸生精功能的损害

目的 研究大鼠隐睾睾丸组织生精功能,了解睾丸生殖细胞凋亡.方法 建立隐睾大鼠动物模型,获得单侧隐睾大鼠(A组)12只,双侧隐睾大鼠(B组)10只,空白对照正常大鼠(C组)10只.当日龄为60 d时,切取大鼠双侧睾丸组织,行HE染色、Johnsen评分;采用原位缺口末端标记法检测生殖细胞凋亡.结果 A、B组隐睾睾丸组织Johnsen评分较对照组显著降低(P<0.05),生精功能明显破坏,生殖细胞凋亡指数显著增加(P<0.05).结论大鼠隐睾睾丸组织生精功能受到损害,生殖细胞凋亡增加.     

单侧隐睾复位大鼠血清性激素及抗精子抗体的检测

目的探讨单侧隐睾复位大鼠血清性激素及抗精子抗体(AsAb)的水平。方法将21日龄SD雄性大鼠48只随机分为假手术组和单侧隐睾组各24只,2周后行隐睾大鼠睾丸下降固定术,于40日龄、60日龄采集血清后处死。采用ELISA间接法测定血清AsAb水平。用放射免疫方法测血清雌二醇(E2)、睾酮(T)水平。结果40日龄、60日龄时2组血清E2和T水平比较均无显著差异(P>0.05);2组60日龄时的E2、T水平均较40日龄时显著增高(P<0.05)。单侧隐睾组大鼠40日龄、60日龄时血清AsAb IgG、IgA、IgM水平均显著高于假手术对照组(P<0.05);60日龄时隐睾组大鼠血清AsAb水平高于40日龄(P<0.05),而假手术组血清AsAb水平无显著差异(P>0.05)。单侧隐睾组大鼠AsAb的检出率明显高于假手术组(P<0.01)。结论隐睾大鼠行睾丸下降固定术后,存在高雌激素血症;AsAb产生可能是导致男性不育的原因之一。     

还原型谷胱甘肽对大鼠隐睾生精上皮保护作用的实验研究

目的:探讨单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞变化和还原型谷胱甘肽(GSH)对睾丸的保护作用。方法:30只SD雄性大鼠分为对照组(A组),隐睾组(B组),隐睾加GSH组(C组),每组各10只。采用化学比色法测定双侧睾丸GSH、丙二醛(MDA)含量;生物素-dUTP/酶标亲和素法检测睾丸生殖细胞的凋亡;透射电镜观察Sertoli细胞的超微结构。结果:术后2周,与A组比较,B组双侧睾丸GSH明显降低,MDA和细胞凋亡明显增加(P<0.01),Sertoli细胞线粒体和滑面内质网扩张。C组这种变化则明显减轻(P<0.01),与A组比较无差别(P>0.05)。结论:外源性GSH对单侧隐睾鼠双侧睾丸生殖细胞和Sertoli细胞有保护作用。     

己烯雌酚干预下围产期小鼠睾丸Leydig细胞INSL 3mRNA的表达变化

目的:通过体内、体外实验研究己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)对KM小鼠围产期小鼠睾丸Leydig细胞胰岛素样因子3(Insuliu-like hormone 3,INSL3)mRNA表达的影响,探讨隐睾发生的可能机制.方法:DES分别以低、中、高3组剂量(1、5、25μg/L)分别作用于原代培养的胎龄16 d小鼠胚胎Leydig细胞,应用RT-PCR和原位分子杂交技术检测DES对睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA 的表达水平;DES分别以低、中、高3组剂量[1μg/(kg·d)、10 μg/(kg·d)、100 μg/(kg·d)]灌胃作用于GD(Gestation day)12～PND(Postnatal day)3孕鼠,RT～PCR检测新生小鼠睾丸INSL3 mRNA表达的相对强度,并比较其差异性.结果:DES改变原代培养的小鼠胚胎Leydig细胞和新生小鼠睾丸的形态结构,以中、高剂量组改变尤为明显;体外实验中,DES中、高剂量组原代Leydig细胞INSL3 mRNA表达水平均明显低于对照组(P＜0.01)和DES低剂量组(P＜0.01);DES试验组Leydig细胞INSL3 mRNA表达相对强度低于对照组(P＜0.01) .体内实验中,DES试验组不同时间点的新生鼠睾丸INSL3 mRNA表达相对强度均明显低于对照组(P＜0.05,或P＜0.01),实验组组间两两比较也有差异(P＜0.05,或P＜0.01) .结论:DES可下调睾丸Leydig细胞INSL3 mRNA的表达水平,其可能是影响小鼠睾丸引带发育导致隐睾的机制之一.     

实验性大鼠隐睾中eNOS的表达与生精细胞凋亡

①目的 研究内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)的表达与实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的关系.②方法 通过手术建立单侧大鼠隐睾模型,术后第7天采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法及RT-PCR检测隐睾及对侧睾丸eNOS基因表达的变化.③结果 术后第7天隐睾侧重量明显减轻,生精细胞凋亡指数较对侧睾丸明显增加;RT-PCR显示隐睾中eNOS mRNA的表达较对侧睾丸增强;免疫组化显示对侧睾丸生精上皮内未见eNOS表达,隐睾侧睾丸生精上皮中有eNOS表达.④结论 隐睾生精细胞凋亡明显增加,eNOS参与介导生精细胞凋亡.     

雄性F344大鼠自发性Leydig 细胞瘤的比较医学研究

目的初步探讨雄性F344大鼠自发性Leydig细胞瘤与血清性激素含量及Leydig细胞AR、LH、ER表达之间的关系。方法26月龄雄性F344大鼠5只(L组),4、7、10、13月龄雄性F344、SD、Wistar大鼠各10只(分别记为A1、A2、A3、A4组,B1、B2、B3、B4组,C1、C2、C3、C4组)。各组睾丸组织切片HE染色,L组睾丸组织电镜观察,各组(除L组外)睾丸组织切片Leydig细胞雄激素受体、黄体生成素、雌激素受体免疫组化染色,放射免疫测定各组血清睾酮、黄体生成素、雌二醇、催乳素、卵泡刺激素、孕酮含量。结果1.A3组部分Leydig细胞轻度增生;A4组部分Leydig细胞中度增生,形成增生灶;L组5只大鼠双侧睾丸均发生Leydig细胞瘤。2.A4组Leydig细胞AR表达强于C3组、B4组和C4组(P<0.05)。A3组和A4组Leydig细胞LH表达均强于B3组、B4组、C4组(P<0.05)。A4组Leydig细胞ER表达弱于B1组、B4组、C4组(P<0.05)。3.血清睾酮含量A3组和A4组均显著高于B3、B4、C3、C4组(P<0.01);而L组极低,除了与C4组无统计学差异外,显著低于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清LH含量A4组、L组与B4组、C4组之间无统计学差异(P≥0.05)。血清E2含量L组除了与B1、B2组无差异(P≥0.05)外,明显高于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清PRL含量L组明显高于A4组(P<0.05),且此二组均显著高于其它组(P<0.05或P<0.01)。血清FSH含量三种品系大鼠相同月龄组之间无统计学差异(P≥0.05),A4组、B4组、C4组、L组基本相同。血清孕酮含量L组成倍高于其它组(P<0.01)。结论雄性F344大鼠Leydig细胞瘤绝大多数为良性,其应该是由Leydig细胞增生并形成增生灶到瘤变逐渐演变而成的。Leydig细胞LH、AR表达较强与大龄雄性F344大鼠Leydig细胞增生并形成增生灶有关。26月龄雄性F344大鼠Leydig细胞瘤可能与其血清T含量极低、血清E2和孕酮含量相对较高有关,而与其血清LH和FSH含量变化关系不紧密;血清PRL含量相对较高应该与其Leydig细胞增生和肿瘤发生过程有关。     

益气活络方对糖尿病肾病大鼠nephrin表达的影响

目的观察益气活络方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏组织中nephrin蛋白及mRNA表达的影响。方法将50只SD大鼠随机抽取10只作为空白对照组(A组);剩余大鼠行单侧肾脏摘除术后,链尿佐菌素(STZ)诱导糖尿病,维持长期(8周)高糖状态的方法进行DN大鼠模型复制,将模型复制成功的大鼠随机分为两组,分别为模型对照组(B组);益气活络方治疗组(C组),每组11只。C组大鼠连续给药6周进行治疗,实验结束后,检测各组大鼠24 h尿微量白蛋白;采用免疫荧光方法检测各组大鼠肾脏组织中nephrin蛋白表达水平;采用RT-PCR方法检测各组大鼠肾脏组织中nephrin mRNA表达水平。结果 B、C组大鼠的24 h尿蛋白量均明显高于A组(P<0.01),而C组则明显低于B组(P<0.05)。A组大鼠肾小球中nephrin阳性表达的细胞数显著多于B、C组(P<0.01),与B组比较,C组大鼠肾小球中nephrin阳性细胞显著增多(P<0.05)。A组大鼠肾皮质中nephrin mRNA表达水平显著高于B、C组(P<0.01),与B组比较,C组大鼠肾皮质中nephrin mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。结论上调nephrin基因及蛋白的表达水平可能是益气活络方减少尿蛋白的机制之一。     

淫羊藿苷对大鼠睾丸间质细胞射线损伤的保护作用

目的研究中药单体淫羊藿苷对于大鼠睾丸间质细胞60Co-γ照射后的保护作用。方法 50只成年雄性SD大鼠,完全随机分为A(正常对照组)、B(照射对照组)、C(3 d灌胃组)、D(7 d灌胃组)、E(15 d灌胃组)等5组(n=10)。A、B 2组以生理盐水灌胃15 d,C、D、E组于照射前以淫羊藿苷[80 mg/(kg.d)]分别灌胃3、7、15 d后,B、C、D、E 4组行60Co-γ射线8 Gy下腹部均匀照射1次。照射后空腹12 h处死大鼠,光镜下观察大鼠睾丸组织形态学变化,反转录PCR法检测睾酮合成限速酶胆固醇侧链裂解酶(P450scc)基因的表达量。ELISA法测定睾酮(T)、黄体生成素(LH)水平。结果B组睾酮较A组降低(P<0.05),黄体生成素升高(P<0.05)。C、D、E组较B组睾酮升高,其中D、E组与B组比较有统计学意义(P<0.05),黄体生成素水平较B组降低,其中E组与B组比较有统计学意义(P<0.05),P450scc表达量B组较A组降低,具有统计学意义(P<0.05),C、D、E组较B组升高,其中E组与B组比较具有统计学意义(P<0.05)。结论淫羊藿苷对大鼠睾丸间质细胞射线照射具有保护作用,且以15 d灌胃组效果最佳。     

雌二醇诱导大鼠隐睾动物模型建立

目的为研究隐睾发生及其损害机制建立合理动物模型。方法对新生雄性SD大鼠,在出生后第3～30 d,分别每天给予皮下注射1．0μg17-β雌二醇(49只,干预组)和等剂量丙二醇(10只,对照组)。在第30～35 d观察隐睾发生情况。结果干预组隐睾的发生率为93．9％,其中单侧隐睾的发生率为24．5％,双侧隐睾的发生率为69．4％;丙二醇组隐睾发生率为0。结论通过外源性雌二醇个体干预雄性SD大鼠的方法可以获得理想的隐睾动物模型。     

Androgen receptor and calcitonin gene-related peptide in neurons of the genitofemoral nerve during testicular descent induced with human chorionic gonadotropin

BACKGROUND: Low levels of circulating testosterone during testis descent cause cryptorchidism in humans and rats. Treatment with human chorionic gonadotrophin (hCG) induces testis descent by stimulating production of testosterone (T). Neurons of genitofemoral nerve (GFN), which innervate testicular gubernaculum, may play a role in testis descent. METHODS: In the current study, putative correlations were made between T and GFN motor and sensory neuron activity during inguinoscrotal testis descent. Cryptorchidism was provoked in prepuberal rats with estradiol. Rats with testicular descent induced with hCG and cryptorchid controls were used. Cells of spinal cord and dorsal root ganglia were labeled by retrograde staining with fast-blue. Expression of androgen receptor (AR) and calcitonin gene-related peptide (CGRP) were detected with indirect immunofluorescence. RESULTS: Neurons labeled with fast-blue were found in the center of motor horn and dorsal root ganglia at levels L1 and L2. While number of motor neurons expressing AR was significantly higher in the group treated with hCG, number expressing CGRP was higher in controls. In dorsal root ganglion, number of cells immunostained with CGRP antibody was similar in both groups but AR was not detected. CONCLUSIONS: Present results support the hypothesis that motor nucleus of the GFN is a direct target of testosterone and that regulation of CGRP in sensory nucleus may be involved in testicular descent.     

小儿隐睾89例诊治临床分析

目的:探讨小儿隐睾的合理诊治方法,以减少并发症的发生。方法:89例小儿隐睾症,对其中16例<2岁和3例B超发现睾丸体积过小的3例患儿进行人绒毛膜促性腺激素(HCG)治疗,每次1500U肌肉注射,每周2次,总剂量15000U。对经HCG治疗失败以及年龄>2岁的患儿采用手术治疗。结果:9例患儿HCG治疗1个疗程后睾丸降至阴囊;7例经HCG治疗睾丸未降至阴囊,但睾丸比注射前增大。经手术治疗的患儿中76例1次手术完成,3例分2次手术,睾丸缺如1例;3例睾丸过小的患者尽管睾丸未降到阴囊,但是睾丸比注射前明显增大;本组中未发现癌变,无睾丸坏死及睾丸切除,无睾丸回缩等并发症。结论:尽早采取合理的治疗方法是有效治疗小儿隐睾、减少并发症的关键。     

睾丸皮下埋藏对精子发生影响的可逆性探讨

目的 探讨新西兰大白兔睾丸皮下埋藏导致精子发生障碍后,将埋藏之睾丸放回正常阴囊内其精子发生障碍是否可逆.方法 育龄期雄性新西兰大白兔42只,曾有过生育史的雌性12只,将雄兔应用随机数字表法完全随机分成3组:空白组(12只);双埋组(双侧睾丸埋藏组12只);单埋组(单侧睾丸埋藏组18只).双埋组将睾丸埋藏于两侧腹股沟区皮下;单埋组将一侧睾丸置于腹股沟区皮下,另一侧睾丸保留在阴囊内;空白组不作任何处理.模型成功后第9周空白组、双埋组、单埋组分别随机取6只进行睾丸活检,均行HE染色及采用TUNEL法检测生精细胞凋亡情况,同时对空白组及双埋组的剩余6只与分别与雌兔一一配对喂养观察生育情况.同期将单埋组未取活检的12只动物的未处理侧睾丸从正常阴囊内移出埋藏至同侧腹股沟区皮下,而将前期埋藏之睾丸放回刚移走睾丸的对侧正常阴囊内.单埋组睾丸放回阴囊后第4周及第9周分别对放回阴囊之睾丸取6只取活检,HE染色及TUNEL法检测生精细胞凋亡情况.结果 与空白组相比双埋组模型建立后第9周的HE染色见曲细精管内生精细胞明显减少,排列紊乱,管腔内未见精子;TUNEL法检测结果显示精原细胞也有明显凋亡征象,生精细胞凋亡指数(apoptotic index,AI)明显高于空白组(P<0.05);配对喂养雌兔均无生育,生育率明显低于空白组(P<0.05).单埋组模型建立后第9周埋藏之睾丸活检HE染色结果与双埋组相似,TUNEL法检测结果生精细胞的凋亡指数与双埋组相比较差异无统计学意义.埋藏睾丸放回阴囊术后第9周的HE染色示曲细精管内生精细胞层数增多,可见成熟精子,凋亡指数与双埋组比较明显降低.结论 睾丸皮下埋藏与皮瓣重建阴囊一样会导致睾丸精子发生障碍,但这种损害是可逆的.     

Semen Quality in Infertile Men with a History of Unilateral Cryptorchidism

Objective To evaluate semen quality in infertile men with a history of unilateral cryptorchidism Methods Semen samples were obtained from 47 infertile men with a history of unilateral cryptorchidism. Semen analysis and membrane integrity including both eosin Y stain and hyo-osmotic swelling tests were performed using standard procedures. All men were divided into three groups according to their age at surgery of orchidopexy as follows： group A, 2-7 years （n=23）, group B, 8-13 years （n=14） and group C, 14-17years （n=10）. Results There was wide range for sperm count and motility for all the subjects studied. Majority of men had high percentage of abnormal sperm morphology. Among the three groups of men, group A and B had significantly higher sperm count, motility and membrane integrity than that of group C. Group C also had the highest frequency of oligoasthenoteraozoospermia （50%） than group A （17%） and group B （35%）. Conclusion Semen quality of men with a history of unilateral cryptorchidism appears to be related to their age of performing orchidopexy. Surgery at early age of childhood may improve spermatogenesis which results in better semen quality in adulthood.     

p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达

目的 探讨p53、p63在SD大鼠隐睾中的表达及其在隐睾所致生精障碍过程中的可能作用.方法 本实验将30只健康雄性SD大鼠随机分为隐睾组和假手术组,建立单侧隐睾模型.术后7天脱颈椎处死大鼠,留取各组大鼠双侧睾丸称湿重,常规组织学切片观察各组睾丸生精上皮形态,免疫组化分别检测p53、p63蛋白表达的变化.结果 术后第7天,与正常侧睾丸相比,隐睾侧睾丸重量明显减轻,生精小管内生精细胞排列紊乱,生精细胞与精子的数量减少,可见较多多核巨细胞;免疫组化显示p53在各组睾丸的生精小管的各级生精细胞的胞质中均有表达,尤其是在精母细胞胞质中,但在隐睾中表达最强;p63在假手术组表达较少且较弱,而在隐睾组中表达较多且较强.结论 隐睾能导致睾丸内p53、p63表达增高,从而促进生精细胞凋亡增加.     

Wistar鼠单侧隐睾对侧已降睾丸细胞DNA分析

选择Ｗｉｓｔａｒ雄性幼鼠２６只，日龄１４天时复制单侧隐睾模型。于日龄２８、５０和１００天时杀死，取两侧睾丸。取日龄配对的对照组和模拟组比较。应用流式细胞分析仪测定睾丸细胞ＤＮＡ及倍体细胞群。结果单侧隐睾各日龄组对侧已降睾丸细胞ＤＮＡ含量有显著异常并随日龄增长而加重，提示生殖细胞发育受阻。