人类精子库及冻精人工授精的初步经验

本文对我院人类精子库的建立及应用做了初步报道。较详细地介绍了自制的、简便的精液冷贮用设备,精液保护剂的配制,降温冻贮过程及其复温使用方法。从1985年1月至1986年2月我库用冷冻精液实施人工授精118例,确知怀孕及生育者33例。文章结合我国国情,对精子库的建立、管理、应用以及供精人工授精涉及的问题进行了讨论。     

冷冻保存对人精子运动特征的影响

目的研究冷冻保存前后供精者精子运动特征的变化,了解冷冻保存对人精子受精潜能的影响。方法供精者精液标本68例,按照世界卫生组织推荐的方法和仪器行精液常规分析和计算机辅助精子分析(CASA)。入选精液加入甘油-卵黄-柠檬酸钠精子冷冻保护剂,行液氮蒸汽冷冻,1个月后复温,再次行CASA。结果冷冻后精子运动学参数中精子头侧摆幅度(ALH)和鞭打频率(BCF)升高,其它所有运动学参数均降低。精子动动学参数中除中速动动(Medium)、慢速运动(Slow)、平均路径速度(VAP)、直线运动速度(VSL)、ALH外,人精子冷冻前和解冻后各个参数都有显著的正相关(P<0.05)。除Medium、Slow、(曲线速度)VCL、ALH外,供精者精子各项参数冷冻前和解冻后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。冷冻复温后VCL>25μm/s、VSL>25μm/s。结论冷冻保存后人精子运动能力降低,但仍具有受精潜能。CASA用于冷冻精液的评估有一定的临床应用价值。     

两种冷冻方法对形态正常精子百分率的影响

目前人类精液冷冻方法主要分为速冻和缓慢冷冻法两大类。精液冷冻保存过程中，精子经历了降温冷却、冻结、解冻复温，其中冰晶形成对精子结构不可避免造成损伤。精子形态是决定精子能否受精的重要因素。低温是否对精子形态产生影响，本研究比较了两种冷冻方法对人精子形态影响，现报告如下。     

速冻和缓慢冷冻法对精子运动特征的影响

目的了解冷冻方法对人精子运动特征的影响。方法精液标本进行速冻和缓慢冷冻保存,应用计算机精液分析仪进行精子运动特征分析。结果冷冻复温后精子运动能力与冷冻前精子运动能力比较明显下降(P<0.001,P<0.05);速冻与缓慢冷冻方法保存的精子运动参数相比较差异均无显著性(P>0.05)。结论冷冻保存易导致精子运动能力下降,速冻与缓慢冷冻方法对精子运动参数影响无明显差异。     

冷冻复温后低温保护剂和精子激活剂对精子功能影响的研究

本文对冷冻复温后精子的功能进行了研究观察，发现精液保护剂对冷冻复温后精子的存活有明显的保护作用，而单纯应用卵黄或甘油溶液却对精子功能存在不利的影响。体外处理精子时应用ＡＴＰ，肌苷对精子的功能无任何的改善。     

浙江省人类精子库供精者精液参数及精子耐冻性变化分析

目的 了解供精者捐精过程中精液参数、精子耐冻性变化以及为人类精子库实验室质量控制提供部分依据;方法 13261份精液样本均来自2006年9月至2010年12月浙江省人类精子库的1513例合格的供精者,年龄20～42周岁,职业以学生为主,对所有精液标本进行精液常规分析;达到冷冻标准的精液标本进行冷冻及冷冻复苏后精液常规分析.结果 1513例供精者中,每次捐精均合格的为343例,占22.7%;每次捐精(至少连续3次)均不合格的为68例,占4.5%;捐赠精液至少一次不合格的为1102例,占72.8%.捐赠的13261份精液中,有10158份冷冻复苏后达到外供标准,占76.6%;不合格的捐赠精液为3103份,占23.4%,其中,未达到冷冻标准的为1565份,占所有捐赠精液的11.8%;冷冻复苏后未达到外供标准(不耐冻精液)为1538份,占所有捐赠精液的11.6%.结论 人类精子库供精者每次捐赠的精液不仅精液参数变化较大,其耐冻性变化也很大;所捐赠的精液不合格比例较高.     

冷冻精子受精能力的综合评价

目的：观察不同冷冻期冷冻精子的受精能力。方法：应用精液常规分析（ＳＦＡ）、精子尾部低渗肿胀试验（ＨＯＳ）、去透明带地鼠卵穿透试验（ＨＯＰ）及冷冻精液人工授精（ＡＩＤ）对冷冻前后及不同冻存期的精液标本进行综合性检测。结果：１０份正常精液标本的冷冻精子活动率、ＨＯＳ值、ＨＯＰ值均明显低于冷冻前（Ｐ＜０．００１），而不同冻存期的精液行ＡＩＤ术后的总妊娠率与新鲜精液ＡＩＤ术的总妊娠率比较，则基本相同。结论：精子细胞膜虽在冷冻复温过程中受到一定的损伤，使精子活动率和受精能力下降。但是，精液的长期冻存及精子细胞膜部分改变并不完全影响精子的受精能力。     

男性肿瘤患者精液冷冻保存后常规参数分析

目的:了解男性肿瘤患者精液质量现状,探索保存男性肿瘤患者生育能力的方法。方法:对来源于2005~2013年浙江省人类精子库43例肿瘤自精保存患者的精液质量进行回顾性分析,检测项目包括精液体积、精子浓度、精子活力、精子冷冻复苏率等指标。比较肿瘤患者与供精志愿者(248例)之间精液质量的差异;并将肿瘤患者分为睾丸肿瘤组(22例)和非睾丸肿瘤组(21例),比较两组之间精液质量的差异。结果:43例肿瘤患者精液的平均精子浓度(60.90×106/ml)、前向运动精子百分率(41.07%)及精子冷冻复苏率(49.98%)均显著低于供精志愿者(分别为74.27×106/ml、51.79%和57.33%),P均<0.05;睾丸肿瘤组的冻后平均前向运动精子百分率(15.68%)与冷冻复苏率(42.81%)均显著低于非睾丸肿瘤组(分别为28.36%和57.53%),P均<0.05。结论:肿瘤患者精液质量普遍下降,进行自精保存的时机非常重要,应该加强自精保存的宣传力度。另外,睾丸肿瘤患者精液冷冻保存效果较差,精子库应对其冷冻复苏率低下的原因进行深入研究,优化冷冻保存技术,为患者提供更好的生育力保护。     

复温方法及保护剂对人冷冻精液复温后精子存活率的影响

作者对冷冻精液的四种复温方法及两种保护剂分别进行了202例和194例次的对比观察。结果表明:冷冻的复温效果受复温方法影响.快复温比慢复温效果好,37℃水浴和48℃水浴复温效果明显优于室温(22℃)空气中和孵箱(37℃)内放置(P<0.001),并结合观察结果,对快速复温及效果良好的机制进行了讨论。甘油和甘油-卵黄-柠檬酸钠复合剂两种冻精复温后,精子存活率十分接近(P>0.05).表明两种保护剂对精子的保护效能大致相同.     

冷冻复温后低温保护剂和精子激活剂对精子功能影响的研究

本文对冷冻复温后精子的功能进行了研究观察，发现精液保护剂（甘油－卵黄－枸橼酸钠）对冷冻复温后精子的存活有明显的保护作用，而单纯应用卵黄或甘油溶液却对精子功能存在不利的影响。体外处理精子时应用ＡＴＰ、肌苷对精子的功能无任何的改善。两种浓度的苯甲酸钠咖啡因（１２ｍＭ和４ｍＭ）对冷冻复温后精子在不同时间内的存活和ＣＭ穿透力均有明显的提高作用     

精液白细胞与精子功能间关系的研究

为探讨精液中白细胞与精液质量的关系，对１１例生育男性、１８例生殖道感染性不育及１６例特发性男性不育患者，分别进行精液常规分析、精液白细胞计数、ＭＤＡ测定、精子活力测定及精子细胞膜完整性的测定。结果显示：（１）生育组白细胞密度为７３．２±２９万／ｍｌ，显著低于感染组（１４６．１±９２．２万／ｍｌ）及弱精子症组（１１１．３±５３．４万／ｍｌ），同时精子活动率、ＳＶＴ、精子头部膜完整率、尾部膜完整率均显著高于其它二组；生育组精液中ＭＤＡ值为４．５９１±２．５２１ｎｍ／ｍｌ，显著低于不育组。死亡率显著低于其它二组。（２）相关分析显示ＭＤＡ与白细胞密度成正相关，与精子活动率、ＳＶＴ、膜完整率成负相关。研究结果显示：（１）精液白细胞可通过膜脂质过氧化反应对精子功能造成损伤；（２）膜脂质过氧化反应可伴随白细胞的增加而增加，但同时又受精液中ＳＯＤ的抑制。结论：在病理情况下，白细胞增多可通过ＭＤＡ导致精子运动力、活动率下降，精子膜完整性受损，从而使精子受精能力下降。     

人精液颗粒法冻贮与应用

人类精子库的建立对治疗男性不育、实行优生优育有实用价值。我院自1988年建库以来,用颗粒法直接冷冻精液125份,复温后达到AID标准104份(83.2％),行AID治疗34例。妊娠10例,现报告如下。材料与方法一、供精人员选择和精液标准:供精者<35岁,已婚已育有健康子女的志愿者。中等以上文化水平,身高>170cm,五官端正,     

冷冻保存的人类精子超微结构变化

利用塑料细管法对９例在生育力供精者的精液进行冷冻保存，复温后在透射电镜下观察，发现精子的超微结构发生程度不同的损伤性变化，表现为精子外膜变薄、扭曲变形或破损，顶体肿胀，线粒体透亮度增加，嵴内间隙增宽，但顶体内膜和顶体中纬段仍保持完整。本文指出：冷冻复温导致精子外膜和顶体膜的通透性增加或破损，引起精子内容物漏失和线粒体功能障碍，精子能量代谢降低或停止，因而精子的活动率和运动速度在复温后低于新鲜精子。     

慢性细菌性前列腺炎对精液质量和精子功能的影响

为了探讨慢性细菌性前列腺炎引起不育的机理，本文对１７例经细菌学检查诊断为慢性细菌性前列腺炎（ＣＢＰ）的不育患者和７例正常生育力者进行了研究。包括精液常规检查、ＳＶＴ和精子低渗肿胀试验，精液丙二醛（ＭＤＡ）和精浆ＳＯＤ测定，抗精子抗体与精浆Ｔ细胞ＣＤ４／ＣＤ８比例测定等。结果提示：１．ＣＢＰ可通过多方面机制影响精液质量和男性生育力；２．ＣＢＰ患者精液中白细胞及其活性产物在精子膜过氧化机制中发挥重要作用，并影响精子功能。     

不同精浆浓度对精子冷冻复苏后活动能力的影响

为了评价冷冻保护剂中不同的精浆浓度是否影响精子冷冻复苏后的活动能力，作者对已育和不育男子的精液标本分别以含精浆浓度为０％，２５％，５０％，７５％和１００％的冷冻保护剂处理，并对复苏后精子的活动能力和存活时间进行比较。结果显示：健康组中含５０％和７５％精浆保护剂的解冻精子活动率显著高于其他组，不育组中７５％精浆保护剂高于其他组；结果提示：一定的精浆浓度对精子的冷冻复苏有帮助；对某些不育患者的异常精液作冷冻处理时，利用供者精浆置换原精液的精浆可能收到相对较好的复苏效果。     

中国男性生育力保存：多中心六年回顾性分析

精子低温冷冻技术可有效保存男性生育能力，中国在此方面的开展情况目前尚无研究报道。本研究对中国多家人类精子库及生殖中心（上海市人类精子库，湖南省中信湘雅生殖与遗传专科医院人类精子库，浙江省人类精子库，沈阳东方集团菁华医院）自2003年1月至2008年12月期问的白精保存资料进行回顾性研究，内容包括：冻存原因、精液冷冻前参数、冻存精液使用率、辅助生殖方式及结局等。在过去六年期间，共有l548名男性在上述4家医疗机构行精液冷冻。其中1．9％（30／1548）系肿瘤患者，在肿瘤种类分布中，以睾丸肿瘤和何杰金氏病最为常见。88．9％（1374／1548）男性准备行辅助生殖（ART）治疗，主要原因为预防取卵当日无法顺利取精，或夫妻分居期间有生育要求。8．6％（134／1548）男性患有生殖系统疾病，如不射精症、严重或极度少弱精子症、梗阻性无精子症等。另有0．8％（15／1548）的男性近期无生育计划，出于规避未来精液质量下降风险行精液冻存，其中7N为高危职业者，3例为计划行输精管结扎节育术者，5N为有未来生育可能者。冷冻精液的总利用率为22．67％（352／1548），共生育子代119例，其中肿瘤患者组为6．7％（2／30），采用ICSI技术出生子代1例；辅助生殖患者组为23．2％（319／1374），出生子代106例，男性生殖疾病组为23．1％（31／134），出生子代12例。各组精液参数均不同，肿瘤患者组及生殖疾病组男性精液质量较差，绝大多数使用冷冻精液结合IVF或ICSI技术受孕。精液冷冻是一种有效的补救和预防措施，但大多数情况下，特别是肿瘤患者未能充分利用这一医疗手段，对其缺乏认知，肿瘤治疗的急迫性和经济因素是使用率低下的主要原因。在中国大力推行生殖保险概念普及化可使生殖保险得以充分利用。     

己酮可可碱和2—脱氧腺苷提高冷冻复温后精液质量的研究

在光学显微镜下观察和测定了己酮可可碱（ＰＦ）和２－脱氧腺苷（２－ＤＡ）在体外对冷冻复温后精液精子的活率、活力及其毛细管穿透值的影响。结果显示ＰＦ和２－ＤＡ均能提高冷冻复温后精子的活率、活力及其毛细管穿透值，其最适浓度分别为４．０ｍｍｏｌ／Ｌ和２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，与对照组比较均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）。两组间比较，２－ＤＡ优于ＰＦ（Ｐ〈０．０１）。提示ＰＦ与２－ＤＡ合用不具有协同作用，反而有相互     

冷冻保存的人类精子超微结构变化

利用塑料细管法对9例有生育力供精者的精液进行冷冻保存,复温后在透射电镜下观察,发现精子的超微结构发生程度不同的损伤性变化。表现为精子外膜变薄、扭曲变形或破损,顶体肿胀,线粒体透亮度增加,嵴内间隙增宽,但顶体内膜和顶体中纬段仍保持完整。本文指出:冷冻复温导致精子外膜和顶体膜的通透性增加或破损,引起精子内容物漏失和线粒体功能障碍,精子能量代谢降低或停止,因而精子的活动率和运动速度在复温后低于新鲜精子。但冷冻复温并不影响精子对宫颈粘液和卵子透明带的穿透能力。     

体外受精后未受精卵再行卵细胞浆内单精子注射初探

应用经典体外受精技术（ＩＶＦ）治疗女性输卵管阻塞性不育的历史已经有十几年了［１］,但受精的成功率并不十分稳定。本实验将经ＩＶＦ后未受精卵再行卵细胞浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）,试图探讨提高ＩＶＦ受精率的途经。材料与方法　　一、材　料１．对象　已经有２年以上不育史的夫妇１０对,女方年龄在２８～３５岁。均经输卵管造影诊断为输卵管不育患者。男方年龄在２６～５０岁,其精液经常规检查,包括：精子计数、精子活动率、活力和畸形率、精子免疫学及精液ｐＨ检查等均未发现异常。配偶双方性交后试验均呈阳性结果。２．标本收…     

慢性细菌性前列腺炎对精液质量和精子功能的影响

为了探讨慢性细菌性前列腺炎引起不育的机理，本文对１７例经细菌学检查诊断为慢性细菌性前列腺炎（ＣＢＰ）的不育患者和７例正常生育力者进行了研究，包括精液常规检查、ＳＶＴ和精子低涌肿胀试验，精液丙二醛（ＭＤＡ）和精浆ＳＯＤ测定，抗精子抗体与精浆Ｔ细胞ＣＤ４／ＣＤ８比例测定等。结果提示：１．ＣＢＰ可通过多方面机制影响精液质量和男性生育力；２．ＣＢＰ患者精液中白细胞及其活性产物在精子膜过氧化机制中发挥重要