脂多糖上调CRH及其结构相关肽Ucn在大鼠腹腔巨噬细胞的表达

目的 观察促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)及其结构相关肽urocortin(Ucn)在大鼠腹腔巨噬细胞的表达及LPS对它们表达的影响.方法 体外培养Wistar大鼠腹腔巨噬细胞,共收集脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)处理0、1、2、4、8 h组细胞,每组含8份分别来自不同大鼠的细胞样本.收集细胞总mRNA(n=8)及总蛋白(n=6),利用RT-PCR及ELISA技术分别检测各组细胞CRH及Ucn mRNA转录水平及胞溶多肽含量.结果 RT-PCR结果显示,正常大鼠腹腔巨噬细胞中即有一定水平的CRH及Ucn mRNA,LPS刺激后二者水平均显著增高,刺激4 h二者均达峰值,约为对照组的2倍.ELISA结果显示,正常大鼠腹腔巨噬细胞即可表达CRH[(0.07±0.01)ng/107细胞]及Ucn[(1.00±0.48)ng/107细胞];LPS刺激促进了二者的表达,CRH水平在2 h达高峰[(0.30±0.07)ng/107细胞],Ucn水平在8 h达高峰[(8.68±1.25)ng/107细胞].结论 大鼠腹腔巨噬细胞同时表达CRH及Ucn,注适量LPS刺激后,两者表达水平均会显著上调,但Ucn多肽水平显著高于CRH.因此,炎症条件下的巨噬细胞可能是局部CRH家族特别是Ucn的潜在来源细胞.     

CRH对培养下丘脑神经元胞浆内cAMP和Ca2+变化的影响

目的 研究促肾上腺皮质激素释放激素(Corticotropin-releasing hormone，CRH)对下丘脑神经元胞浆内cAMP浓度和Ca^2 的调节作用。方法 取孕17d胎鼠下丘脑分散培养下丘脑神经元，采用PTI(Photon technology international，PTI)测量和分析外源性CRH对培养下丘脑神经元胞浆内游离钙浓度([Ca^2 ]i)变化的影响，放射免疫方法测定神经元内cAMP含量。结果 正常对照组的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量较低，外源性CRH刺激后，[Ca^2 ]i立即升高，神经元胞浆内cAMP生成明显增加；CP-154526可明显抑制CRH(10^-6～mol／L)刺激的下丘脑神经元[Ca^2 ]i和cAMP的生成增加。结论 cRH可通过与其1受体结合直接作用于下丘脑神经元，使神经元[Ca^2 ]i和cAMP含量明显增加，在调节下丘脑神经元激活过程中下丘脑合成和分泌的CRH可能起了重要作用。     

肾上腺素对促肾上腺皮质激素分泌的影响及其作用机制的初步探讨

对颈外静脉预先置入硅橡胶导管的大鼠注射肾上腺素,应用放射免疫测定法,直接测定血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)浓度的改变,以了解肾上腺素影响肾上腺皮质活动的机理。实验在脑内正中隆起损伤和假损伤两组动物中进行,结果外周给肾上腺素兴奋垂体前叶释放ACTH,从而兴奋肾上腺皮质的活动;作用点在下丘脑,兴奋促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)的分泌,而非直接作用于腺垂体.     

PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRH mRNA表达的研究

目的探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH) mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Western blot及逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRH mRNA表达的关系.结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRH mRNA含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH mRNA含量的增加.结论在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH mRNA的表达的超短正反馈调节.     

肺癌患者肺泡巨噬细胞和外周血单个核细胞IL-10、IL-12测定的临床意义

目的:测定肺癌患者肺泡巨噬细胞(Alveolar marcrophage,AM)和外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)分泌IL-10、IL-12的水平,了解其细胞免疫功能状态;为IL-12应用于肺癌的治疗提供理论依据.方法:从57名肺癌(Lung cancer,LC)患者、33名良性肺病(Benign pulmonary disease,BPD)患者、12名健康者(Normal control,NC)的支气管肺泡灌洗液(Brochoalveolar larage,BALF)及外周血中分别获取AM和PBMC,用ELISA法测定培养上清液中IL-10、IL-12的水平.结果:(1) LC组IL-10的水平显著高于NC、BPD组,IL-12则比NC、BPD组显著降低.(2) LC组IL-10与IL-12的水平呈负相关.(3) Ⅲ、Ⅳ期患者IL-10水平比Ⅰ～Ⅱ期显著升高,Ⅳ期患者IL-12水平比Ⅰ～Ⅱ期显著降低.(4) 小细胞肺癌(Small cell lung cancer,SCLC)组IL-10水平显著高于腺癌组及鳞癌组,而PBMC分泌的IL-12水平低于腺癌组,AM分泌的IL-12水平低于腺癌组及鳞癌组.结论:(1) LC患者全身及局部的细胞免疫功能严重缺陷.(2) IL-10、IL-12基础水平与LC的分期、恶性程度有关.     

白松片对慢性应激抑郁大鼠模型血浆CRH和ACTH浓度的影响

目的探讨中药白松片对慢性应激大鼠行为学及血浆促肾上腺皮质激素释放激素 (CRH)和促肾上腺皮质激素 (ACTH)浓度的影响。方法采用不同应激因子交替持续应激 2 1d复制大鼠慢性应激抑郁模型 ,观察大鼠行为学变化 ,于上午 8点将所有大鼠断头取血并离心收集血浆 ,用放射免疫方法测定大鼠血浆CRH和ACTH的水平。结果慢性应激模型组血浆CRH、ACTH较空白对照组显著升高 ,差异有非常显著性(P <0 .0 1 ) ;白松试验组血浆CRH、ACTH浓度比模型组低 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1 )。结论白松片可抑制慢性应激引起的HPA轴功能亢进 ,具有抗抑郁作用。     

CRH通过PKA途径调节大鼠下丘脑CRH表达的研究

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)刺激下丘脑神经元表达CRH的信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用免疫组织化学、Western blot技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(corticotropin-releasing hormonetype 1 receptor,CRH1R)后蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的活性变化,及其与CRH表达的关系.结果CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH含量的增加.结论在严重创伤应激反应中,CRH通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节.     

甘氨酸对大鼠腹腔巨噬细胞TNFα和IL-10表达的影响

目的 :观察甘氨酸对大鼠腹腔巨噬细胞产生TNFα和IL 10的影响。方法 :分离Wistar大鼠腹腔巨噬细胞后分别用RPMI 16 4 0或含 2mmol/L甘氨酸的RPMI 16 4 0培养液培养 ,测定脂多糖 (LPS) (5mg/L)刺激后 0h、3h、6h、12h、2 4h培养上清液中TNFα、IL 10水平及 12h 2者mRNA表达情况。结果 :①甘氨酸可明显降低LPS刺激后 3h、6h和 12hTNFα水平 (P分别 <0 .0 5 ,0 .0 5和 0 .0 1) ,并显著降低 12hTNFαmRNA表达量 (P <0 .0 1)。②甘氨酸明显增加 6h和 12hIL 10水平 (P分别 <0 .0 5和 0 .0 0 1)以及 12hIL 10mRNA表达量 (P <0 .0 5 )。结论 :甘氨酸可时间依赖性地在转录和翻译两个水平抑制LPS诱导的TNFα产生而增加IL 10表达     

辛伐他汀对冠心病患者血清IL-6和IL-10的影响

目的分析冠心病患者(CHD)外周血中白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的含量变化及辛伐他汀对其的影响。方法冠心病患者分为常规治疗(R)组和常规加辛伐他汀治疗(R+S)组,分别于治疗前及治疗后2周取外周血,健康对照(C)组仅采血1次。ELISA试剂盒测定IL-6和IL-10的含量,直接法测定低密度脂蛋白胆固醇,比浊法测高敏C-反应蛋白(CRP)。结果辛伐他汀治疗前,R组和R+S组患者血浆中IL-6I、L-10和CRP水平均高于C组。治疗后,R+S组患者血浆中IL-6和CRP含量降低,IL-10含量增加;R组治疗前后IL-6、IL-10和CRP水平均无明显差异。各组治疗前后低密度脂蛋白水平均无明显差异。结论CHD患者处于免疫活化状态;他汀能够抑制炎症反应,该作用独立于其降脂作用之外,是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

氯诺昔康用于食管癌术后镇痛对IL-2、IL-6、 IL-10的影响

目的 观察氯诺昔康用于食管癌术后镇痛对白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的影响.方法 根据术后静脉自控镇痛给药方式不同,将24例食管癌根治术患者随机分为两组,L组(氯诺昔康组,n=12):氯诺昔康40 mg 氟哌利多5 mg;M组(吗啡组,n=12):吗啡40 mg 氟哌利多5 mg.观察患者术后4、24、48 h镇痛评分(visual analogue scale,VAS)及测定外周静脉血IL-2、IL-6、IL-10及TNF-α在诱导前(T1)、术毕(T2)、术后24 h(T3)及术后48 h(T4)的表达水平.结果 两组患者术后各时间点VAS 评分、两组患者诱导前血浆中IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α之间比较及两组患者术后各时间点TNF-α与诱导前比较,无显著性差异(P＞0.05);M组IL-2在术后各时间点较术前有显著降低(P＜0.05);IL-6、IL-10在术后各时间点较术前则有显著升高(P＜0.05);L组IL-2在术后各时间点较术前有显著降低(P＜0.05);IL-6、IL-10在术后T2、T3时间点较术前有显著升高(P＜0.05);L组较M组IL-10在T4有显著降低(P＜0.05).结论 氯诺昔康用于食管癌术后镇痛疗效与吗啡相当,且对免疫功能的影响优于吗啡.     

三百胶囊对实验性肺结核病小鼠血清IL-2和IL-10影响的实验研究

目的 观察三百胶囊对肺结核病小鼠血清IL-2和IL-10的作用,为三百胶囊治疗肺结核提供实验依据.方法 实验动物用结核杆菌造模后随机分为模型组、抗痨药物组、三百胶囊小剂量组和三百胶囊大剂量组,另设空白对照组.除模型组外,分别给予对氨基水杨酸异烟肼片、三百胶囊以及生理盐水灌胃28 d,用ELISA法检测实验小鼠血清IL-2和IL-10的改变情况.结果 与空白对照组比较,模型组血清IL-2水平显著降低、IL-10显著升高,其差异具有统计学意义(P＜0.01);三百胶囊小剂量组、三百胶囊大剂量组与模型组比较,IL-2含量显著升高、IL-10显著降低,其差异具有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05).结论 三百胶囊有调节肺结核病小鼠血清IL-2和IL-10水平的作用.     

系统性红斑狼疮26例IL-10及IL-12的异常表达及其相互作用

目的:了解系统性红斑狼疮(SLE)患者白细胞介素(IL)-10、IL-12异常表达的相互关系,探讨IL-10对IL-12分泌的影响。方法:取26例SLE患者及正常对照18例志愿者的外周血(PBMCs),用ELISA法测定其血清、单个核细胞(PBMCs)培养上清、植物血凝素(PHA)刺激培养上清中IL-10、IL-12水平;在SLE患者及正常对照PBMCs中分别加入正常人血清、SLE血清、SLE血清 IL-10抗体,PHA刺激培养24h,用ELISA法测培养上清中IL-12的水平。结果:SLE患者血清、PBMCs培养上清中自发产生和PHA刺激诱生的IL-10及IL-12P40水平均异常增高。然而仅血清IL-10水平与SLEDAI呈正相关,但血清IL-12P40水平、PBMCs培养上清自发产生的及PHA刺激诱生的IL-12P40水平均与SLEDAI呈正相关。尽管SLE患者血清IL-10水平与IL-12P40血清及PBMCs培养上清水平呈正相关,但体外实验时,在PBMCs培养中,加入SLE血清,可显著抑制IL-12的产生,采用IL-10抗体中和掉SLE血清中的IL-10后,正常人或SLE患者的PBMCs培养上清中IL-12可明显增多。结论:SLE患者IL-10及IL-12表达水平异常增高,且血清水平与SLE活动性正相关;体外细胞培养实验中SLE血清中IL-10可明显抑制IL-12的分泌,但在细胞因子网络环境中两者之间相互作用更为复杂。     

IL-8、IL-10与阴虚证相关的实验研究

目的观察IL-8、IL-10与阴虚证的关系,验证阴虚证本质科学假说的正确性。方法 80例肺癌和肺结核端病人分为良性肿瘤对照组、无阴虚对照组和阴虚证实验组,用免疫组化方法测定IL-8、IL-10在肺组织巨噬细胞等细胞中表达的情况。结果巨噬细胞等细胞中IL-8的表达水平和IL-8/IL-10比值与阴虚证有关,阴虚证实验组病人肺组织中巨噬细胞等细胞中IL-8的表达水平和IL-8/IL-10比值高于良性肿瘤对照组和无阴虚对照组(P<0.05);巨噬细胞等细胞中IL-10的表达水平与阴虚证无关(P>0.05)。结论本文研究结果支持阴虚证的本质是由于细胞因子网络紊乱的结果的科学假说。     

黄芪对梗阻性黄疸幼鼠肝脏超微结构及IL-10 mRNA表达的影响

目的 建立幼鼠梗阻性黄疸模型,对模型鼠应用黄芪干预,观察胆道梗阻后肝脏超微结构和IL-10 mRNA表达的改变,探讨黄芪对上述指标的影响.方法 将40只Wistar幼鼠随机分为正常对照组、假手术组、梗阻性黄疸(OJ)组和OJ+黄芪(A)组,每组10只.OJ组鼠于近肝门处游离并结扎胆总管,假手术组仅做游离不结扎胆总管.OJ+A组术后1d开始腹腔注射黄芪注射液(250 mg/100 g体重)共7 d,其余组相同时间腹腔注射生理盐水0.5 ml.检测实验鼠肝脏超微结构改变;应用RT-PCR技术检测肝组织IL-10 mRNA表达,对所得数据进行统计学处理.结果 (1)电镜下正常对照和假手术组肝细胞结构完整,细胞器分布均,线粒体正常.Disse间隙内可见枯否细胞,OJ组肝细胞内线粒体明显肿胀、减少、外膜不清、嵴消失,粗面内质网数量减少,滑面内质网增多、核糖体脱颗粒.肝细胞内质网扩张,细胞核边聚,毛细胆管扩张.OJ+A组肝细胞的超微结构变化较轻.(2)IL-10 mRNA基因表达OJ组显著高于对照组及OJ+A组,均P＜0.05.结论 梗阻性黄疸幼鼠模型肝脏超微结构显著改变;幼鼠胆管结扎8 d,肝组织的IL-10 mRNA表达增强;应用黄芪的梗阻性黄疸幼鼠肝细胞超微结构改变较轻,减轻肝脏IL-10 mRNA的表达,从而对梗阻性黄疸诱发的肝脏损害有保护作用.以上结果证实黄芪可较好的改善梗阻性黄疸机体的营养状况,对受损的肝脏起保护作用.     

IL-18和IL-10在慢性丙型肝炎抗病毒疗效中的早期预测作用

目的 观察慢性丙型肝炎患者干扰素联合利巴韦林治疗过程中血清白细胞介素-18(IL-18)和白细胞介素-10(IL-10)水平的变化,探讨它们在慢性丙型肝炎抗病毒疗效中的早期预测作用.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)检测30例正常人,82例慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗前、治疗4周、治疗24周血清中IL-18和IL-10的水平,同时检测肝功能和HCV RNA(定量PCR法).结果 慢性丙型肝炎患者治疗前血清IL-18和IL-10的水平显著高于正常人(P<0.01),其值与谷丙转氨酶(ALT)活性呈显著正相关.抗病毒有效者,在不同时间点血清IL-18和IL-10的水平均较治疗前显著下降(P<0.05),其中,完全应答组细胞因子水平治疗前后改变更显著,而无效者改变不明显.结论 IL-18和IL-10在慢性丙型肝炎发病中起一定作用,早期检测IL-18和IL-10的水平对干扰素联合利巴韦林抗病毒的疗效预测有重要意义.