用RNAi沉默survivin基因表达对前列腺癌细胞系PC3的影响

目的：运用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术阻断前列腺癌细胞系PC3中survivin基因的表达，并研究survivin基因沉默后对PC3细胞产生的影响。方法：用真核转录载体pSilencer^TM3．1-H1 neo构建针对survivin基因的重组真核转录载体pSilencer3．1-SVVl、pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3，并用脂质体法转染前列腺癌细胞系PC3，通过RT—PCR、蛋白印迹实验检测survivin的表达变化，并用流式细胞术、MTT法检测转染后PC3细胞的凋亡、细胞周期、细胞生长速度、对顺铂的敏感性等方面的变化。结果：重组载体pSilencer3．1-SVV2和pSilencer3．1-SVV3有效地阻断了PC3细胞中survivin基因在mRNA和蛋白水平上的表达（P〈0．01）。重组载体转染PC3细胞后，与对照组相比，细胞的凋亡增加了10％～15％；细胞生长速度明显变慢，其细胞数在84h时与对照组相比减少约30％；G1期细胞增加了10％。G2期和S期细胞减少了5％以上。加入顺铂后，pSilencer3．1-SVV2、pSilencer3．1-SVV3重组质粒转染的PC3细胞的存活数下降了35％～45％，细胞凋亡则增加了10％-14％。结论：初步证明了survivin基因在前列腺癌细胞分化增殖、抗凋亡等方面所扮演的重要角色，为进一步阐明survivin基因与前列腺癌的关系以及以survivin基因为靶点的前列腺癌基因治疗研究奠定了基础。     

Survivin基因RNAi对子宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响

目的：观察survivin基因RNAi对宫颈癌裸鼠移植瘤生长与凋亡的影响。方法：随机将BALB/c裸鼠分4组,分别注射转染携survivin RNAi重组质粒的HeLas2细胞、转染阴性对照质粒细胞HeLaNC、转染空质粒细胞HeLaU6 neo及宫颈癌HeLa细胞,建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型。观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响;免疫组化法检测移植瘤组织中survivin蛋白的表达和微血管密度（MVD）,HE染色及TUNEL染色观察survivin RNAi对人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤凋亡的影响。结果：成功建立人宫颈癌裸鼠皮下移植瘤模型, HeLas2组裸鼠瘤重明显小于其他3组（P<0.05）;肿瘤生长抑制率为67.9%。免疫组化结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织中survivin蛋白表达显著下降; MVD值也显著降低（P<0.05）;HE染色、TUNEL染色结果显示,HeLas2组裸鼠移植瘤组织细胞凋亡明显增多（P<0.05）,AI值达(22.73±137)%。结论：Survivin基因RNAi可通过下调移植瘤组织survivin蛋白表达和降低其MVD抑制移植瘤生长并促进其凋亡。     

沉默Id1基因表达对卵巢癌细胞生长影响的实验研究

目的:通过构建人卵巢癌SKOV3 Id1特异性siRNA慢病毒载体及其裸鼠移植瘤模型,观察沉默分化抑制因子（inhibitor of differentiation-1,Id1）表达对卵巢癌SKOV3生长的影响。方法:根据Id1基因序列设计并合成的siRNA片段转染SKOV3细胞,将转染细胞分为四组:cell+lv-shRNA-Id1（实验组）、cell+lv-shRNA-NC(质粒对照组)、cell+lv-control(空病毒对照组)、cell(空白对照组),筛选出稳定转染的SKOV3细胞克隆,48小时后检测细胞生长活性。将40只裸鼠随机分为四组,分别接种上述转染成功的细胞,30天后称取瘤体重量,计算抑瘤率;然后通过 Western blotting 法检测移植瘤中Id1蛋白的表达。结果:在体外试验中,实验组的细胞生长活性显著低于空白对照组,具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间无明显差异（P＞0.05）;体内实验显示,实验组平均瘤重均低于其他三对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,三对照组间瘤重差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组、质粒对照组、空病毒组抑瘤率分别为45.98%、4.84%、4.50%;Western blotting 结果显示,实验组中Id1表达较对照组明显下调（P＜0.05）。结论:沉默Id1基因能抑制卵巢癌细胞的生长,有望成为卵巢癌治疗新靶点。     

AT1-R对非雌激素依赖型子宫内膜癌Hec-1A细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过建立裸鼠子宫内膜癌模型,探讨敲除AT1-R基因对非雌激素依赖型子宫内膜癌细胞Hec-1A体内生长的影响以及对ERK1/2信号通路的调控.方法 将Hec-1A细胞、敲除AT1-R基因的Hec-1A细胞分别接种至裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间和成瘤率,测量肿瘤体积、瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;Western blot法检测瘤组织内ERK的蛋白表达;免疫组化方法检测瘤组织内Caspase-3表达.结果 与未转染组相比,敲除AT1-R基因组裸鼠移植瘤生长较慢,平均成瘤时间明显延长,成瘤率、瘤体体积和瘤质量显著减少(P<0.05);与未转染组相比,敲除AT1-R基因组的Hec-1A-si细胞ERK蛋白表达水平显著减少(P<0.05);与未转染组相比,敲除AT1-R基因组Hec-1A-si细胞Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论 敲除AT1-R基因在裸鼠体内可抑制HEC-1A细胞增殖、促进HEC-1A细胞凋亡.     

AT1-R对非雌激素依赖型子宫内膜癌Hec-1A细胞增殖及凋亡的影响

目的：通过建立裸鼠子宫内膜癌模型,探讨敲除AT1-R基因对非雌激素依赖型子宫内膜癌细胞Hec-1A体内生长的影响以及对ERK1/2信号通路的调控。方法：将Hec-1A细胞、敲除AT1-R基因的Hec-1A细胞分别接种至裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间和成瘤率,测量肿瘤体积、瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;Western blot法检测瘤组织内ERK的蛋白表达;免疫组化方法检测瘤组织内Caspase-3表达。结果：与未转染组相比,敲除AT1-R基因组裸鼠移植瘤生长较慢,平均成瘤时间明显延长,成瘤率、瘤体体积和瘤质量显著减少（P〈0.05）;与未转染组相比,敲除AT1-R基因组的Hec-1A-si细胞ERK蛋白表达水平显著减少（P〈0.05）;与未转染组相比,敲除AT1-R基因组Hec-1A-si细胞Caspase-3蛋白表达水平显著升高（P〈0.05）。结论：敲除AT1-R基因在裸鼠体内可抑制HEC-1A细胞增殖、促进HEC-1A细胞凋亡。     

转染KISS-1对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的 影响

 目的 探讨KISS-1基因对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长的影响。 方法 通过脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1转染人食管鳞癌细胞EC-1,用Western blot法检测转染前、后KISS-1蛋白的表达。将单纯EC-1细胞、稳定转染空质粒的EC-1细胞、稳定转染pcDNA3.1-KISS-1的EC-1分别接种于BALB/c-nude裸鼠,构建裸鼠食管鳞癌移植瘤模型,观察肿瘤生长情 况,测量肿瘤体积和瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;免疫组织化学和半定量RT-PCR技术检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。 结果 KISS-1基因转入食管鳞癌EC-1细胞,KISS-1蛋白的表达（1.143±0.218）较空质粒转染组（0.745±0.130）和对照组（0.855±0.184）明显增加（P<0.05）,转染KISS-1基因组裸鼠较空质粒转染组和对照组肿瘤生长速度慢,体积（949.42±102.26）mm3与空质粒转染组（1339.82±72.23）mm3和对照组（1384.04±97.07）mm3相比明显减小（P<0.05）,瘤体重量（0.498±0.654）g与空质粒转染组（0.638±0.066）g和对照组（0.676±0.108）g相比明显减轻（P<0.05）。 结论 通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长。     

基因芯片分析RNA干涉MSP58后细胞周期相关基因表达的变化

目的:采用基因芯片技术,观察RNA干涉法抑制人脑胶质瘤U251细胞MSP58基因表达后细胞周期相关基因的变化,从而了解MSP58在细胞周期相关基因通路中的可能定位.方法:将特异性的MSP58干涉表达载体pSilencer3.1-MSP58转染人脑胶质瘤细胞系U251,同时构建相应的阴性对照载体pSilencer3.1-NC以及空载体pSilencer3.1-H1neo.运用半定量RT-PCR及蛋白质印迹法,检测稳定转染和未转染干涉载体的胶质瘤细胞MSP58的mRNA和蛋白表达水平.运用基因芯片技术分析pSilencer3.1-MSP58转染后细胞周期相关基因的变化.结果:成功建立了具有稳定下调MSP58基因表达的U251-S细胞、阴性对照U251-NC细胞以及含有空载体的U251-H1 neo细胞.干涉组细胞MSP58的表达无论在mRNA水平还是在蛋白质水平均较阴性对照组及空载体组细胞显著降低,P＜0.01.基因芯片技术共筛选细胞周期相关基因128个,其中上调及下调>2倍的共有33个基因.结论:干涉MSP58基因表达后,胶质瘤细胞增殖的抑制与细胞周期相关基因表达的变化有关.     

MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒对体内胃癌细胞的增殖抑制作用

目的 探讨MED19基因靶向RNA干扰重组慢病毒对体内胃癌细胞的治疗效果.方法 将SGC7901胃癌细胞株分为3组:空白对照(正常培养的SGC7901胃癌细胞,不用病毒颗粒转染)标记为BC组,阴性对照(感染阴性对照病毒颗粒)标记为NC组,病毒干扰(感染MED19-shRNA慢病毒颗粒)标记为VI组.36只实验用裸鼠随机分为3组,以BC、NC和VI标记,分别接种对应的3组不同的细胞,观察接种后3组裸鼠体内胃癌细胞的增殖情况.每7天测量1次肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线图.成瘤35 d后的裸鼠,统一以脱颈法处死,分离出完整瘤体,分析3组瘤体的平均质量差异及病理类型、形态学变化.结果 裸鼠皮下接种肿瘤细胞后,生长状态均良好,裸鼠的总成瘤率为94.4%.肿瘤生长曲线显示,VI组裸鼠体内肿瘤瘤体生长的速度明显低于BC组和NC组.3组瘤体经常规HE染色后光镜下观察,确认肿瘤的病理类型为低分化胃腺癌,VI组癌组织在光镜下显示细胞的形态学变化明显,细胞缩小、皱缩,呈片状坏死等征象.结论 沉默MED19表达,对肿瘤的生长、增殖有明显的抑制作用.     

Survivin基因沉默抑制结肠癌生长的动物实验研究

目的 探究survivin基因沉默对人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 构建靶向survivin的shRNA载体SUR和阴性对照质粒Neg,并将其转染人结肠癌Lovo细胞,分别种植到裸鼠皮下建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型.随后观察各组裸鼠移植瘤生长情况,免疫组化方法检测移植瘤survivin蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况.结果 移植转染细胞8周,与空白对照组比较,SUR组移植瘤的体积和质量均有显著缩小(P<0.05),体积和质量抑瘤率分别为48.9%和51.2%.与空白对照组比较,SUR组移植瘤survivin表达显著下调,表达指数为31.9%;SUR组肿瘤细胞凋亡显著增加,凋亡指数18.47%(P<0.05).阴性对照Neg组的上述指标与空白对照组比较,差异均无统计学意义.结论 Survivin基因沉默能够抑制人结肠癌Lovo细胞裸鼠移植瘤的生长.     

沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用

观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子（NS）基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达。结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块。第5周各组裸鼠成瘤率均为100%。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为（1 806.40±77.75） mm3、（1 702.20±88.60） mm3和（847.00±82.25） mm3,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达。沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略。      

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。