重组人胰岛素中的脱酰胺胰岛素的检验

20世纪80年代前药用胰岛素多用猪、牛、羊胰腺提取、纯化制得.随着科学的进步,目前已成功地用DNA重组技术进行大规模生产[1,2].     

猪胰岛素与重组人胰岛素的高效液相色谱分析

目的鉴别猪胰岛素与重组人胰岛素。方法采用C8、C1 8及常规孔径 (6～ 1 0nm)与大孔径 (30nm)色谱柱用梯度洗脱和等度洗脱对猪胰岛素与重组人胰岛素的分离方法进行研究。结果用梯度洗脱代替英国药典中的洗脱体系能达到相同的分离效果。结论用常规C1 8柱通过梯度洗脱可分离猪胰岛素与重组人胰岛素     

重组人胰岛素生产工艺监控方法研究进展

重组人胰岛素生产工艺复杂，对生产各阶段的准确监控是提高产品收率保证产品质量的前提。文章介绍了PAGE、HPLC、HPCE及MS在生产各阶段监控中的应用。     

首批DNA重组人胰岛素国家标准品的建立

我国现行的第8次胰岛素国家标准品是猪胰岛素，而国内DNA重组人胰岛素（rh－Insulin）已获新药证书，其质量标准已被我国部颁标准收载，拟上2000版中国药典。因此迫切需要建立与临床供试品同质的国家标准品，为此制备、标定了第一次rh-Insulin国家标准品。经生物测定和HPLC测定，活性效价定为26IU／mg。     

重组人胰岛素类似物的HPLC分析

目的：探讨ＨＰＬＣ分析在重组人胰岛素类似物临别和杂质检测中的适用性。方法：采用反相然谱柱（Ｃ１８）,以硫酸钠－磷酸缓冲液（０．２ｍｏｌ．Ｌ＾－１,ｐＨ２．３）和乙腈为流动相,流速０．８或１．０ｍＬ．ｍｉｎ＾－１,柱温４０℃,检测波长２１４ｎｍ;用分子筛柱（Ｚｏｒｂａｘ ＧＦ２５０）以磷酸铵缓冲液（０．１ｍｏｌ．Ｌ＾－１,ｐＨ７．５）和乙腈为流动相,流速０．５ｍＬ．ｍｉｎ＾－１,检测波长２１４ｎｍ;     

重组人胰岛素pET28a-IHI下游工艺研究

目的对含有重组人胰岛素原基因的大肠杆菌工程菌pET28a-I HI摇瓶发酵,并探讨采用磺酸化方法对包涵体蛋白纯化复性的工艺。方法工程菌pET28a-I HI经摇瓶发酵、机械破碎得到包涵体,包涵体经过磺酸化、等电点沉淀、DEAE-52柱层析三步纯化后采用15%SDS-PAGE电泳检测,经过复性,酶切,DEAE-52纯化后,冷冻干燥,样品进行HPLC检测以及整体生物学活性实验。结果工程菌表达量约在30%左右,经过三步纯化,包涵体纯度可达98%以上,酶切之后经质谱检测,与人胰岛素标准品相对分子质量一致,而且动物实验降血糖效果明显,1 L发酵液最终可得到人胰岛素140mg。结论该工艺耗时短,效果好,成本较低。     

重组人胰岛素及其相关物质的毛细管区带电泳分析法

目的：建立重组人胰岛素及其相关物质的毛细管区带电泳检测方法。方法：在Ｂｅｃｋｍａｎ ５０００型毛细管电泳仪上,采用熔凝石英毛细管柱,以０．０５ｍｏｌ．Ｌ＾－１醋酸钠－０．８５ｍｏｌ．Ｌ＾－１２－环已胺基乙磺酸－１０％乙腈为电极缓冲液,２１４ｎｍ的检测波长,进行定量分析。结果：线性范围为０．５～５０Ｕ．ｍＬ＾－１（ｒ＝０．９９９５）,回收率（ｎ＝３）大于９７．０％,ＲＳＤ小于１．１％,主峰的迁移时间     

重组酶在胰岛素生产中的应用

本文分别测定了重组的与天然的牛胰蛋白酶和羧肽酶B对前胰岛素融合蛋白的裂解活性。水解产物采用HPLC进行分析,发现重组酶具有更强的活性并且副产物少,因此重组酶在胰岛素生产中比天然的牛胰蛋白酶和羧肽酶B具有更好的前景。     

小C肽人胰岛素原类似物(B-Arg-Arg-A)和人胰岛素原(B-C-A)A、B链重组条件的研究

目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件下B Arg Arg A蛋白质的重组率 (94% )较B C A蛋白质 (82 % )的高。结论 :进一步验证了“胰岛素的A、B链含有足够使二硫键正确配对的结构信息”的论点。     

格列美脲与精蛋白锌重组人胰岛素联合治疗2型糖尿病疗效分析

目的：探讨格列美脲和精蛋白锌重组人胰岛素共同治疗2型糖尿病患者的疗效。方法按照完全随机原则选择本院的66例2型糖尿病患者,并随机分为两组,一组为试验组,另一组为对照组,每组成员为33例。试验组早餐前口服格列美脲,睡前皮下注射精蛋白锌重组胰岛素;对照组早晚餐前口服格列美脲,总共观察16周,然后分析这两组的疗效和不良的反应情况。结果两组空腹血糖值（FPG）、餐后2 h血糖值（2hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）均有明显的下降,但试验组使血糖的浓度下降幅度更明显。两组治疗后的血糖达标时间分别为（3.3±0.1） d和（6.3±0.3） d;试验组和对照组出现低血糖的患者分别为1例和4例。结论精蛋白锌重组人胰岛素联合格列美脲对治疗2型糖尿病的效果更好,能有效降低血糖水平及糖化血红蛋白的指标,具有疗效时间长、稳定性好、不良反应小等优点,并有可能改善细胞的功能。所以值得在临床推广和应用。     

重组人胰岛素药物利用评价标准的建立

目的 :建立重组人胰岛素药物利用评价(DUE)标准,为临床合理用药提供参考。方法:基于中华医学会糖尿病学分会(CDS)制定的相关指南拟定重组人胰岛素DUE标准草案,形成专家咨询表,进行两轮专家咨询调查,通过相应的统计学分析对标准进行修订完善。结果:重组人胰岛素DUE标准分为用药指征、用药过程、用药结果三个部分。用药指征包括临床诊断标准、疾病诊断、禁忌证;用药过程包括给药途径、注射部位、血糖监测、给药剂量间隔与调整、联用其他降糖药情况、合用非降糖药情况、糖尿病教育;用药结果包括体征症状、控制目标、药品不良反应监测与处置。咨询专家的权威程度系数(Cr)>0.7,克朗巴赫系数(α)>0.6,说明专家权威性和指标体系内部一致性良好。结论:建立的重组人胰岛素DUE标准适用于医疗卫生机构开展DUE研究,同时也可为临床药师开展工作提供参考。     

重组人胰岛素效价测定中生物测定与理化测定的相关性验证

在胰岛素效价测定方法中，以前一直用生物测定法。本文用ＨＰＬＣ法和小鼠血糖生物测定法进行了多批ＤＮＡ重组人胰岛纱效价测定，结果表明两法间有良好的相关性，对高纯组分ｒｈ－Ｉｎｓｊｌｉｎ的效价测定，ＨＰＬＣ法可代替生物测定法。     

诺和笔3及基因重组人胰岛素的应用

笔者于2003年起应用诺和笔3(胰岛素注射笔)及基因重组人胰岛素(诺和灵笔芯)，共治疗80名糖尿病患者，现将应用中的一些体会报道如下：     

重组人胰岛素V8酶肽图谱的毛细管区带电泳分析

目的：建立重组人胰岛素Ｖ８酶肽图谱的毛细管电泳分析方法。方法：利用毛细管区带电泳分离模式,采用熔凝石英毛细管柱,检测了重组人胰岛素经Ｖ８蛋白酶解所产生的５个肽片段;比较了重组与天然人胰岛素的Ｖ８蛋白酶肽图谱;鉴定了毛细管区带电泳和反相高效液相色谱的肽图谱中各峰的对应关系。结果：重组人胰岛素与天然人胰岛素的分子结构具有同一性;毛细管区带电泳和反相高效液叮色谱２种方法具有不同的分离机理。结论：毛细管区     

精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液治疗2型糖尿病患者31例

目的研究精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液对2型糖尿病患者的疗效影响及并发症发生率。方法采用随机数字表法将62例患者随机分为观察组和对照组,各31例。对照组采用降糖药物治疗,观察组采用胰岛素联合降糖药物治疗,比较两组患者血糖控制效果、治疗依从性、药物不良反应发生率和糖尿病并发症发生率。结果观察组患者空腹血糖为（7．07±0．25）mmol／L,餐后2h血糖（8．43±0．37）mmol／L,糖化血红蛋白（6．92±0．44）％,对照组分别为（7．34±0．30）mmol／L,（9．12±0．48）mmol／L,（7．29±0．54）％,组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。观察组患者糖尿病急性并发症发生率为16．13％,慢性并发症发生率为9．68％;对照组患者分别为38．71％和29．03％,组间比较差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论精蛋白锌重组人胰岛素混合注射液有助于患者血糖控制,可有效降低药物不良反应和糖尿病并发症发生率。     

国内外精蛋白重组人胰岛素注射液的有关物质比较

目的 精蛋白重组人胰岛素适用于2型糖尿病患者的治疗,现行标准中仅对本品有关物质A₂₁脱氨人胰岛素进行控制,未进行B₃和B₃iso脱氨人胰岛素限度的控制。采用两种方法对精蛋白重组人胰岛素注射液中的有关物质进行测定并比较国内外共17批样品的质量。方法 采用高效液相色谱法梯度洗脱,色谱柱：Waters Xbridge C₁₈ 4.6 mm×250 mm(5μm),检测波长：214 nm,柱温：40℃,流速：1.0ml/min,进样体积：20μl;《中国药典》2020年版方法：流动相A为0.2 mol/L硫酸钠溶液(pH值2.3)-乙腈(82∶18),流动相B为乙腈-水(50∶50);某企业自拟方法：流动相A为0.2 mol/L硫酸钠溶液(pH值3.6)-乙腈(90∶10),流动相B为乙腈-水(50∶50)。结果 国内外样品的A₂₁脱氨人胰岛素含量差异不大、国内一家企业B₃和B₃iso脱氨人胰岛素含量低于其他企业,国内另一家企业有关物质总和高...     

甘精胰岛素联合重组人胰岛素强化治疗2型糖尿病的临床效果

目的 观察甘精胰岛素联合重组人胰岛素强化治疗2型糖尿病的临床效果。方法 选取2018年4月—2021年4月共青城市人民医院收治的2型糖尿病患者80例,采用随机数字表法分为观察组和对照组,各40例。观察组予甘精胰岛素联合重组人胰岛素强化治疗,对照组接受常规治疗,2组均连续治疗3个月。比较2组患者治疗效果,治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)、糖化血红蛋白(HbA_1c)、血脂指标[总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]与血清过氧化脂质(LPO)、丙二醛(MDA)水平及不良反应。结果 观察组患者治疗总有效率为95.00%,高于对照组的77.50%(χ²=5.165,P=0.023);治疗3个月后,2组FPG、2 hPG、HbA_1c、TC、TG、LDL-C及血清LPO、MDA水平均较治疗前降低,HDL-C水平较治疗前升高,且观察组降低/升高幅度大于对照组(P均<0.01);观察组不良反应总发生率为5.00%,低于对照组的20.00%(χ<...     

GB-03无针注射器对重组人胰岛素注射液生物活性的影响

目的 考察GB-03无针注射器对重组人胰岛素注射液生物活性的影响,比较无针注射与传统皮下注射重组人胰岛素注射液的生物等效性。 方法 采用小鼠双交叉实验生物检定法,用重组人胰岛素注射液(作为对照品)标定经无针注射器处理的重组人胰岛素注射液的生物效价;家兔常规皮下注射和无针注射器注射相同剂量的重组人胰岛素注射液,比较给药后6 h内血糖的变化。 结果 经无针注射器处理的重组人胰岛素效价为109.7%;在注射后6 h内观察,采用2种给药途径的家兔各时间点血糖值差异无统计学意义。 结论 GB-03无针注射器对重组人胰岛素注射液生物活性无明显影响,家兔无针注射器注射重组人胰岛素注射液与皮下注射具有生物等效性。     

快速液相色谱在重组人胰岛素肽图分析中的应用

目的:探讨快速 HPLC 分析方法在重组人胰岛素肽图测定中的应用。方法:采用 Shimadzu Pack XR—ODS(3.0 mm×75mm,2.2 μm)色谱柱;流动相 A 为0.2 mol·L~(-1)硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(90:10),流动相 B 为乙腈-水(50:50),进行梯度洗脱。检测波长为214 nm;柱温50℃;流速0.8 mL·min~(-1)。结果:人胰岛素酶解样品的各个片段能够很好地分离,分析时间显著缩短。结论:本法简便、快速,经济,灵敏度高。可应用于重组人胰岛素肽图的测定。