苦参碱对心肌成纤维细胞增殖、胶原代谢及转化生长因子-β1蛋白表达的影响

目的探讨苦参碱对醛固酮诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原代谢的影响,并探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）信号转导通路在苦参碱抗心肌纤维化中的作用机制。方法体外差速贴壁法分离纯化培养心肌成纤维细胞,试验分为对照组、醛固酮（1.0×10-7mol/L）组和醛固酮＋不同浓度（0.125,0.25,0.5mmol/L）苦参碱组5组。作用24h后,倒置显微镜观察细胞生长状态;四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测心肌成纤维细胞增殖;流式细胞分析仪分析细胞周期;分光光度法检测细胞上清羟脯氨酸含量;细胞免疫荧光染色及流式细胞仪检测TGF-β1蛋白表达。结果与对照组比较,醛固酮可显著提高心肌成纤维细胞MTT-OD值,使S期细胞比率增加,G0/G1期细胞比率下降;羟脯氨酸含量、TGF-β1的蛋白表达均显著高于对照组（P〈0.01）。苦参碱干预24h后,MTT-OD值、S期的细胞百分比、羟脯氨酸含量、TGF-β1的蛋白表达均显著低于醛固酮组（P〈0.01）,且苦参碱的效应呈浓度依赖性。结论苦参碱可抑制醛固酮诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成,其抗纤维化作用可能与直接下调TGF-β1蛋白表达有关。     

洛伐他汀对醛固酮诱导大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨洛伐他汀对醛固酮诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其作用机制。方法:采用胰酶消化法分离培养SpragueDawley大鼠心肌成纤维细胞,以3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)掺入法、四氮唑蓝比色法和流式细胞仪观察洛伐他汀对醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖的DNA合成、细胞数目和细胞周期的影响。结果:(1)0.1,1,10μmol·L-1浓度的洛伐他汀抑制醛固酮诱导的心肌成纤维细胞3HTdR掺入率和A490值,其中1,10μmol·L-1组的3HTdR掺入率[(1292±s152),(1030±163)counts·min-1]和A490值[(0.287±0.008),(0.231±0.007)]显著低于对照组、0.1和0.01μmol·L-1组(P<0.01);(2)洛伐他汀可增加G0/G1期细胞百分率,降低S期细胞百分率、增殖指数和DNA含量;(3)甲羟戊酸可逆转洛伐他汀的上述作用。结论:洛伐他汀可抑制醛固酮诱导的心肌成纤维细胞增殖及DNA合成,阻止其由G1期进入S期,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法:体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1(P27)蛋白的表达。结果:(1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFBG0/G1期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β1的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论:Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

去泛素化酶USP14对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 研究抑制去泛素化酶USP14的活性对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖的影响.方法 用胰酶消化法和差速离心法分离培养新生SD大鼠CFs,加入不同浓度去泛素化酶USP14的抑制剂IU1作用48小时后,采用MTS、细胞计数法和结晶紫染色法检测CFs的增殖,采用LDH释放检测测定IU1对CFs的细胞毒性作用.结果 IU1可以浓度依赖的抑制CFs的增殖,并且没有明显的细胞毒性作用.结论 抑制去泛素化酶USP14活性可以抑制CFs的增殖,去泛素化酶USP14可能是一个抗心肌纤维化的重要靶点.     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响,从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸,用羟脯氨酸法测定胶原量,MTT比色法检测细胞增殖情况,SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成,I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成,降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

牛磺酸对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

观察牛磺酸(taurine，Tau)在血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast，CFb)增殖过程中对一氧化氮(nitric oxide，NO)及蛋白激酶C alpha(p-PKCα)的影响，以探讨牛磺酸抑制CFb增殖的信号转导途径。胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb，用Ang II诱导促进其增殖，采用MTT法检测细胞增殖；ELISA法测定I型胶原、 III型胶原的含量；流式细胞仪检测细胞周期；硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量；Western blotting法检测p-PKCα含量。牛磺酸(40、 80和160 mmol·L^-1)可抑制Ang II诱导的CFb增殖及I型胶原、III型胶原合成增加(P<0.05，P<0.01)，并使细胞G₀/G₁期百分率增加，S期细胞百分率降低(P<0.05，P<0.01)。牛磺酸明显抑制p-PKCα的蛋白表达， 提高CFb NO含量， 与Ang II组比较差别具有明显统计学意义(P<0.05， P<0.01)。牛磺酸通过降低p-PKCα的表达而提高CFb NO的含量，使CFb的增殖和胶原合成受到抑制。     

双苯氟嗪对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制研究

目的研究双苯氟嗪(d ipfluzine,D ip)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(card iac fibrob lasts,CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用MTT法检测D ip对CFB增殖的影响;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪技术检测细胞周期及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)的基因表达;免疫组织化学染色方法,观察心肌成纤维细胞经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1)蛋白的表达。结果①在一定浓度范围内,D ip能明显抑制AngⅡ诱导CFB的增殖和胶原合成(P<0.05或P<0.01)。②CFB细胞G0/G1期百分率随D ip浓度增加而增加,S期、G2/M期百分率和增殖指数随D ip浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。③D ip能降低PCNA蛋白表达,与AngⅡ组相比差异有显著性(P<0.01)。④D ip能够明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原和TGF-β1mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。⑤免疫组化结果显示D ip(10、100μmol.L-1)组ERK1和cPKCα阳性表达低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01)。结论D ip通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原的增加而起到了抗心肌纤维化的作用,其抗纤维化作用与其降低TGF-β1基因表达以及抑制cPKCα、ERK1通路有关。     

熊果酸对血管紧张肽Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

［摘要］目的观察熊果酸对血管紧张肽II（ Ang Ⅱ）诱导心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法培养新生大鼠心肌成纤维细胞,噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖,羟脯氨酸法检测胶原含量,［3H］ 脯氨酸掺入法测定胶原合成速率,免疫荧光法观察成纤维细胞形态学改变。Western blot测定还原型辅酶II（NADPH）亚单位p47 phox蛋白表达。结果Ang Ⅱ能够明显上调心肌成纤维细胞增殖、胶原含量、胶原合成速率及p47 phox表达。经熊果酸处理后,以上指标均明显下调。结论熊果酸能减轻Ang Ⅱ诱导心肌成纤维细胞增殖、胶原分泌及合成速率,机制与抑制p47 phox通路有关。     

苦参碱对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

本文研究了苦参碱（Ｍａｔ）对大鼠皮肤成纤维细胞增殖及胶原蛋白合成的影响。采用［＾３Ｈ］－胸腺嘧啶核苷和［＾３Ｈ］－脯氨酸掺入法分别测定成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成。实验结果表明，Ｍａｔ能剂量依赖性地抑制成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成。     

一氧化氮对成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

在参与肝纤维化形成的细胞中，成纤维细胞能大量合成和分泌胶原蛋白。其质和量决定了组织器官的纤维化过程。我们研究发现，一氧化氮(nitric oxide，NO)具有抗肝纤维化作用。本文在此基础上，观察NO对体外培养的成纤维细胞增殖及胶原合成的影响，进一步阐明NO的抗肝纤维化作用。     

参麦开肺散对NIH/3 T3成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨参麦开肺散对NIH/3T3成纤维细胞(FB)增殖及体外纤维化细胞模型胶原合成的影响。方法 NIH/3T3 FB常规培养后分为正常对照组、模型组和处理组,正常对照组加入含1%胎牛血清(FBS)的细胞培养液500μl,模型组加入使用含1% FBS细胞培养液配制的5 ng/mlβ型转化生长因子( TGF-β)溶液500μl,处理组加入含5 ng/ml的TGF-β+1 mg/ml的参麦开肺散混合溶液500μl,培养24 h。分别采用实时定量聚合酶链反应( PCR)、蛋白免疫印迹( Western blot)和Sircol assay检测细胞内胶原及细胞外基质( ECM)相关基因表达水平、Ⅰ型胶原表达情况以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量。结果参麦开肺散显著降低胶原及其相关基因、Ⅰ型胶原蛋白的表达以及分泌到细胞上清中胶原蛋白的含量(P<0．05,P<0．01)。结论参麦开肺散可明显抑制TGF-β诱导的NIH/3T3 FB胶原的合成,其发挥抗纤维化作用可能与其抑制FB增殖及胶原合成相关。     

胶原代谢在肝纤维化中的作用及中药调控胶原代谢研究进展

摘 要肝纤维化以细胞外基质在肝脏中的异常蓄积为主要特征,而胶原则是细胞外基质的最主要成分。胶原在肝纤维化的发生发展过程中发挥着重要的调控作用。因此,寻找具有显著调控胶原代谢的中药,成为肝纤维化治疗的重要途径。本研究综述了胶原代谢在肝纤维化中的作用,以及中药调控胶原代谢发挥抗肝纤维化作用的研究进展。     

Cyclophosphamide Effect on Collagen Metabolism in Granulation Tissue,Skin, and Aorta of Rats

Abstract Granulation tissue was produced in rats by subcutaneous implantation of viscose cellulose sponges. Cyclophosphamide 10 mg/kg was given daily intraperitoneally to 15 rats from the day of sponge implantation. Fifteen rats served as pair-fed controls, and 15 rats served as non-starved controls. After 14 days of treatment the animals were decapitated. Groups of 3 rats were given 50 μci ¹⁴C-proline intraperitoneally 1, 3, 6, 12, or 24 hours before death. The aorta, skin, and granulation tissue were examined. Cyclophosphamide caused no effect on collagen of the aorta, while in skin, the only detectable effect was a decrease in ¹⁴C-OH-proline biosynthesis. In granulation tissue, cyclophosphamide caused a fall in the dry weight, a decrease in ¹⁴C-proline uptake and ¹⁴C-OH-proline synthesis, as well as an increase in the alpha-amino nitrogen to OH-proline ratio in purified collagen. These results indicate that cyclophosphamide inhibits the synthesis of proteins, including collagen, and inhibits the hydroxylation of proline in collagen. No effect of cyclophosphamide could be detected on the amount of salt soluble OH-proline or on collagen cross-linking. The registered effects of cyclophosphamide on granulation tissue is probably of importance with regard to the anti-inflammatory action of cyclophosphamide. This action as well as the tissue differences in the sensitivity of cyclophosphamide may be of relevance to the clinical application of cytostatics in rheumatological diseases.     

依普利酮对醛固酮灌注大鼠足细胞损伤的影响

目的：探讨醛固酮（Aid）灌注对大鼠足细胞损伤的影响及醛固酮特异性拮抗药依普利酮的干预作用。方法：SD大鼠随机分为3组：对照组（A）、醛固酮灌注组（B）、依普利酮治疗组（C），分别皮下埋置渗透性微泵。B、C组均以1．5μg&#183;h^-1持续灌注Aid，A组以DMSO代替Aid。C组以依普利酮（100mg&#183;kg^-1&#183;d^-1）灌胃，A、B组以0．9％氯化钠溶液灌胃。每两周测量尾动脉压，收集24h尿液检测尿白蛋白排泄率（UAER）。于第28d处死，PAS染色观察肾小球病理改变，免疫组化染色观察nephrin表达改变。结果：与A组相比，B组平均收缩压和UAER显著上升（P〈0．05），nephrin表达增加；C组平均收缩压和UAER较同期B组显著降低（P〈0．05），nephrin表达减少。结论：依普利酮可通过改变肾小球足细胞nephrin表达水平，减轻醛固酮诱导的足细胞损伤。     

丹皮酚体外抑制TGF-β诱导的成纤维细胞增殖的研究

目的:观察丹皮酚影响下离体成纤维细胞的增殖情况,为预防因成纤维细胞增殖引起的一系列病理过程提供理论依据。方法:取10只健康Wistar大鼠用于培养成纤维细胞,将离体大鼠腹膜成纤维细胞平均分为4组,分别加入细胞培养液RPMI-1640,RPMI-1640 TGF-β,RPMI-1640 丹皮酚,RPMI-1640 TGF-β 丹皮酚。测定各培养液中成纤维细胞增殖情况,并进行比较。结果:单独使用丹皮酚不影响成纤维细胞的增殖(P>0.05),单独使用TGF-β可以刺激成纤维细胞活化进入增殖状态(P<0.01),加入丹皮酚的干预后成纤维细胞的增殖率明显下降(P<0.01)。结论:TGF-β可以促进成纤维细胞活化,丹皮酚有抑制活化的成纤维细胞增殖的作用,应用丹皮酚可能在一定程度上减轻病理状态下成纤维细胞对人体的损害。     

丹参抑制人粘连成纤维细胞增殖的作用研究

目的:研究丹参对人粘连成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:从人体腹膜粘连组织中原代培养出成纤维细胞(AFB),以地塞米松为阳性对照,考察丹参及其主要成分丹参素、丹参酮ⅡA对AFB增殖活性与生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。结果:丹参冻干粉、丹参素作用下AFB活性下降幅度大,而且半数抑制浓度(IC50)显著低于丹参酮ⅡA,TGF-β1mRNA表达水平亦显著降低(P<0.01或P<0.05),丹参酮ⅡA对TGF-β1表达无显著影响。结论:丹参通过下调AFBTGF-β1mRNA表达抑制其增殖,主要起效成分为丹参素。     

阿司匹林抑制醛固酮诱导心肌成纤维细胞增殖的实验研究

目的 研究阿司匹林对醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用.方法 将培养3～5代SD新生大鼠的CFs分为空白组、模型组、阿司匹林组(1.11μmol·L-1)和阳性组(螺内酯1 μ.mol· L-1);用Giemsa染色法观察各组CFs的形态学变化,用ELISA法分别检测Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维,采用比色法分析上清液中羟脯氨酸的含量.结果 阿司匹林可有效抑制醛固酮诱导的CFs增殖;还可显著抑制醛固酮诱导的CFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原纤维的分泌.结论 阿司匹林对CFs的增殖及胶原分泌有一定的抑制作用,具潜在的抗心肌纤维化作用.     

PDTC抑制TGF-β1对肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞的诱导作用

目的:通过核因子-κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),观察NF-κB在转化生长因子(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)及向肌成纤维细胞(MF)分化中的作用。方法:一次性气管内滴注博莱霉素-A5复制肺纤维化模型,取肺组织培养肺成纤维细胞,细胞分为Sham组、TGF-β1组、PDTC TGF-β1组和PDTC组。采用免疫细胞化学技术、流式细胞术检测PDTC对TGF-β1诱导的成纤维细胞表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和CTGF的影响。结果:TGF-β1组和Sham组比较,肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA明显增加,PDTC TGF-β1组肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA低于TGF-β1组,单独PDTC对肺成纤维细胞无影响。结论:NF-κB促进TGF-β1诱导肺纤维化模型大鼠肺成纤维细胞表达CTGF及肺成纤维细胞向MF分化。