PCR技术在B细胞淋巴瘤诊断中的应用

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从ＤＮＡ水平测定Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤的单克隆起源，以用于淋巴瘤的诊断。４０例标本检测的阳性结果为；Ｂ细胞淋巴瘤１３／１５例，Ｔ细胞淋巴瘤０／３例，霍奇金病０／３例，慢性淋巴结炎０／８例，非淋巴源性肿瘤０／１１。与组织学及免疫组化诊断符合率为８７％。本研究在把分子生物学的新方法用于Ｂ细胞淋巴瘤的临床诊断方面作出初步的探索。关键词     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

干燥综合征与恶性淋巴瘤

为了探索早期诊断干燥综合征患者合并恶性淋巴瘤，作者采用Ｂ细胞恶性淋巴瘤基因探针检测了４例干燥综合征患者的泪腺组织及患眼附属器Ｂ恶性淋巴瘤组织。结果４例干燥综合征患者泪腺组织阴性，而５例恶性淋巴瘤患者的瘤组织扩增阳性。结果表明，一般的原发或继发性干燥综合征患者泪腺中的淋巴细胞中无恶性Ｂ淋巴瘤基因。     

原位RT—PCR法检测柯萨奇B3病毒感染HeLa细胞中的？…

利用生物素标记的核苷酸直接掺入法，建立了检测柯萨奇Ｂ３病毒感染的原位逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，并对经柯萨奇Ｂ３病毒感染的ＨｅＬａ细胞和未感染的ＨｅＬａ细胞进行了检测。结果表明，病毒感染的ＨｅＬａ细胞可见阳性信号，细胞呈蓝紫色，而未感染的ＨｅＬａ细胞无阳性信号，细胞不着色。说明该技术可应用于柯萨奇Ｂ３病毒感染的细胞和组织中的病毒ＲＮＡ检测，特别是用天病毒感染组织（如心肌炎、心肌病心     

巢式PCR检测恶性淋巴瘤患儿骨髓人细小病毒B19DNA

目的：用巢式聚合酶链反应（PCR）技术检测恶性淋巴瘤患儿骨髓中人细小病毒B19感染状态。方法：收集住院期间29例患有恶性淋巴瘤的患儿骨髓标本，对照组为非血液系统疾病的患儿骨髓标本26例行病例对照研究，用巢式PCR检测B19－DNA。结果：29例恶性淋巴瘤患儿骨髓中B19－DNA阳性9例，阳性率为31．0％，与对照组比较差异非常显（P＜0．01）；结论：提示恶性淋巴瘤患儿是B19－DNA的易感群体。化疗及免疫功能低下的淋巴瘤患儿发生B19感染易引起持续感染慢性贫血。     

应用PC检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的；检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法；以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＴＲ．基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果；（１）３４份ＭＬ患垧骨髓标本ＩＢＭ出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ〈０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

用PCR方法检测B细胞淋巴瘤克隆性IgH基因重排

用ＰＣＲ方法检测克隆性ＩｇＨ基因重排正在成为Ｂ细胞淋巴瘤基因诊断的有效手段。与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析法相比，前者有明显的优点：快速简便，标本用量少并可用于石蜡切片，无放射性危害等。ＰＣＲ所用引物是辨认ＩｇＨ基因可变区（Ｖ）和连接区（Ｊ）中存在的相对保守...     

新型隐球菌聚合酶链反应的检测方法

目的：从基因角度为新型隐球菌性脑膜炎的快速诊断提供一种新方法．方法：应用聚合酶链反应技术检测和鉴定脑脊液中的新型隐球菌特异性基因．结果：对引物的特异性试验证明具有较高的特异；对引物的敏感性试验可扩增出１０个菌细胞；用墨汁复染、分离培养、ＰＣＲ技术，对１５例脑膜炎患者的脑脊液同时进行检测，结果分别为：６６．６％、８６．６％、９３．３％．结论：以新型隐球菌特异性基因片段进行体外扩增，对新型隐球菌性脑膜炎的早期诊断具有重要的临床意义．     

应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义

目的 观察猪内源性逆转录病毒（Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况。方法 针对PREV gag区的序列，选用特异性引物，采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列；以及RT－PCR方法检测血清中PERV－RNA序列。结果 该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列；此外，在猪血清标本亦检测出病毒序列，而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清（大鼠、兔）检测结果均为阴性，说明该方法特异性较高。结论 中国实验小型猪均携带该病毒，并可以释放到血清中；采用该法具有特异、简便的特点，为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础。     

伤寒杆菌聚合酶链反应检测方法

目的 探讨聚合酶链反应快速检出血培养物中的伤寒杆菌。用于伤寒杆菌菌血症的诊断．方法 根据伤寒杆菌鞭毛抗原基因ＤＮＡ核苷序列设计特异性革酸引物,应用聚合酶链反应技术快速检出血培养物中的伤寒杆菌。结果 对伤寒杆菌和７株非伤寒要直菌,同时进行ＰＣＲ增,结果只有伤寒杆菌出现４５８ｂｐ的牧场划性扩增区带,其他７株非伤寒 杆菌均未出现４５８ｂｐ的扩增菌悬液进行扩增,结果表明,在１００个菌细胞时即可扩增出明显的     

多聚酶链反应检测艰难梭菌产毒株

以艰难梭菌A毒素基因非重复片段中的两个寡核苷酸链作引物,扩增306bp,用多聚酶链反应技术扩增31株细菌,结果19株艰难梭菌产毒株均扩增出单一特异的电泳带,而8株艰难梭菌无毒株、2株索氏梭菌和2株大肠杆菌均无特异带出现。将艰难梭菌产毒株的模板DNA从50ng稀释至0.5ng后再进行多聚酶链反应,结果仍可见特异扩增带。说明多聚酶链反应检测艰难梭菌产毒株较之细菌分离培养、细胞毒索测定方法具有快速、简便、特异、敏感的优点,可望用于临床标本的直接检测。     

乙肝病毒DNA与血清免疫标志物的对比研究

目的探讨HBVDNA与乙肝五项免疫标志物之间的关系以及各型乙肝病人HBVDNA检出率。方法血清HBVDNA采用PCR法，乙肝五项免疫标志物采用ELISA法。结果HBsAHg、HBsAHg、抗HBc阳性者HBVDNA阳性率80．3％；HBsAg、抗HBc、抗HBe阳性者HBVDNA阳性率31．6％；抗HBs、抗HBc、抗HBe阳性者HBVDNA阳性率20％。慢性乙肝HBVDNA检出率明显高于急性乙肝及乙肝病毒携带者。结论HBVDNA较乙肝五项免疫标志物更准确，更灵敏的反映血中HBV复制情况。肝脏病变越重，HBVDNA检出率越高。     

Detection of toxigenic Clostridium difficile by polymerase chain reaction

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｏｘｉｇｅｎｉｃＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＣｈｅｎＣｕｎｌｏｎｇ（陈村龙）；ＺｈｏｕＤｉａｎｙｕａｎ（周殿元）；ＰａｎＬｉｎｇｊｉａ（潘令嘉）；ＷａｎｇＪｉｄｅ（...     

Detection and Identification of Enteroviruses RNA by Using Polymerase Chain Reaction

Theenteroviruses(EV)areamongthemostcommonandimportantviralpathogensofhumansll'2].Atleast70serotypeswhichinfecthumanshavebeenidentified,includingthepolioviruses(PV),coxsackievirusesgroupAandB(CVAandCVB),andechoviruses(EchoV).Sinceitsinceptionmorethan40yearsago,EVisolationincellculturehasbeenthemainstayofenteroviraldiagnosis.ReportedmeanisolationtimeforEVfromcerebrospinalfluid(CSF)rangedfrom3.7to8.2days.However,asmanyas25%to35%oftheEVserotypes,particularlytheCVAgroup,donotgrowincellcu…     

聚合酶链反应技术快速诊断淋病

作者采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）诊断女性淋病５０例，并将ＰＣＲ与淋菌分离培养比较，结果５０例宫颈分泌物ＰＣＲ检测获得阳性３５例，其中２０例与常规分离培养法一致，另外１５例ＰＣＲ阳性而分离培养为阴性，此１５例临床诊断为淋病，在检测中未见培养阳性而ＰＣＲ检测阴性者，用ＰＣＲ全部实验过程可在５ｈ内完成，较目前分离培养法鉴定淋球菌在时间上明显缩短，所以作者认为ＰＣＲ检测淋菌优于淋菌分离培养，具有简便快速、     

巢式多聚酶链反应快速检测胎儿性别

为建立一种非侵入性的对Ｘ性连锁遗传性疾病胎儿的早期产前性别鉴定方法,我们采用了巢式ＰＣＲ方法来扩增孕妇外周血中男性胎儿的Ｙ染色体特异序列,并与新生儿出生性别相对照。４４例孕妇中２２例分娩男性婴儿．其中１９例扩增出Ｙ特异片段,阳性检出率为８６．４％（１９／２２）．其余２２例分娩女性婴儿,其中无一例出现Ｙ特异扩增带,结果提示用巢式ＰＣＲ方法可快速判断胎儿性别,使临床上无伤性产前检查Ｘ性连锁遗传性疾病的胎儿性别成为可能。     

PCR扩增法检测DMD患者的基因缺失

目的 探讨Ｄｕｃｈｅｎｎｅ型肌营养不良症（ＤＭＤ）患者基因缺失的突变特点并进行基因诊断。方法 用一对特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因ｅｘｏｎ４８附近的ＤＮＡ片段。结果 在２１例ＤＭＤ患者中，检出１６例患者的ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因在该处存在缺失突变。ｅｘｏｎ４８是ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ基因发生缺失突变“热点”区的观点。结论 该方法可用于ＤＭＤ的遗传咨询、基因诊断及产前基