穿龙薯蓣皂苷元对小鼠T淋巴细胞影响的体外研究

目的 研究穿龙薯蓣皂苷元(Dio)对小鼠脾脏T淋巴细胞增殖及白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-7(IFN-γ) mRNA表达的影响,探讨Dio的免疫调节机制.方法 以不同浓度Dio与刀豆蛋白A(ConA)刺激的T淋巴细胞共同培养,用CCK-8检测Dio对T淋巴细胞增殖的影响,反转录PCR法检测Dio对IL-2、IFN-γ mRNA表达的影响.结果 Dio浓度在0.937 5～15.000 0μg/mL范围,对T淋巴细胞增殖有抑制作用,在3.750 0～15.000 0 μg/mL范围,对T淋巴细胞IL-2、IFN-γ mRNA的表达有抑制作用,随Dio浓度增加抑制作用均增强(P＜0.05),7.500 0 μg/mL为最佳抑制浓度,超过此浓度抑制作用减弱.结论 Dio对T淋巴细胞的增殖及IL2、IFN-γ mRNA的表达均有抑制作用.     

大鼠T细胞源性exosome提取方法比较

目的采用3种方法从大鼠T细胞培养上清中提取纯化exosome,以获取高质量的exosome。方法分别采用ExoQuick Precipitation提取法、超滤密度梯度离心法、差速离心法提取T细胞培养上清中的exosome。利用透射电镜进行形态学观察,2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠(BCA)法进行蛋白定量,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析蛋白表达的差异,Western blotting检测白细胞介素2(IL-2)的表达。结果 3种方法均可提取出exosome;ExoQuick Precipitation提取法、超滤密度梯度离心法所得样本浓度显著高于差速离心法所得样本浓度(P<0.05);SDS-PAGE结果显示3种方法所得样本具有蛋白表达强度的差异;Western blotting显示3种方法所得样本均表达IL-2。结论 ExoQuick Precipitation提取法、超滤密度梯度离心法可获得高纯度、无蛋白丢失的exosome样本。     

小鼠肠系膜淋巴结与外周淋巴结淋巴母细胞在体内归巢的比较

本实验采用~3H-TdR标记来自供体ICR小鼠肠系膜淋巴结(MLN)及外周淋巴结(PLN)的淋巴母细胞,并结合液体闪烁计数及放射自显影技术,研究了两种不同来源的淋巴细胞在同系受体动物体内的迁移与归巢。实验结果表明:与PLN淋巴母细胞相比,MLN淋巴母细胞具有选择性地归巢到小肠粘膜及肠道相关淋巴组织的能力。     

氧化苦参碱对小鼠淋巴结T细胞增殖的双向作用

目的检测氧化苦参碱(Oxymatrine,OMT)对刀豆蛋白A(Con A)刺激的小鼠淋巴结T细胞增殖的影响,探讨OMT对免疫系统的作用机制,为临床用OMT治疗免疫相关性疾病提供理论和实验依据.方法利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测淋巴细胞在多克隆刺激剂Con A和OMT的共同作同下荧光强度的变化,并应用CELLQuest软件分析OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖的影响程度.结果 500、125和31μg/mLOMT对小鼠淋巴结T细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而16、8、4、2μg/mL OMT对小鼠淋巴结T细胞增殖起促进作用,但其剂量依赖关系不明显.结论 CFDA-SE染色和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具:OMT对小鼠淋巴结T细胞的增殖呈双向作用.     

BDEO对小鼠淋巴细胞增殖和活化的影响

目的 观察苄基苯基酮衍生物溴苯基二羟基苯基乙酮肟（BDEO）对体外丝裂原刀豆蛋白A （Con A）刺激的小鼠脾脏淋巴细胞以及外周血液淋巴细胞增殖和活化的影响及分子机制。 方法 Con A诱导体外淋巴细胞增殖和活化,分别用细胞计数法和MTT法检测BDEO对体外淋巴细胞的转化率和增殖的影响,ELISA法测定caspase-9活性,Western blot检测Bax、Bak、Bcl-2和Cyt C（线粒体内及胞质中）以及cleaved caspase-9和cleaved caspase-3水平;进一步在整体动物水平观察腹腔注射Con A〔15 mg/（kg·d）〕和BDEO〔3、6 mg/（kg·d）〕,小鼠脾脏细胞、外周血液淋巴细胞转化率以及腹腔巨噬细胞的吞噬率。 结果 BDEO在0.3~1 μmol/L下抑制体外淋巴细胞的增殖和转化率（P<0.05）,3~30 μmol/L时抑制作用逐步减弱。Caspase-9活性随BDEO浓度升高先升高后下降,而线粒体上的促凋亡蛋白Bax、Bak水平先上升后降低,而抑凋亡蛋白Bcl-2以及线粒体中Cyt C水平先降低后升高,胞质中的Cyt C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3水平先升高后降低。另外腹腔注射BDEO对小鼠体内的脾脏淋巴细胞和外周血液淋巴细胞的转化率以及腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有显著抑制作用。结论 BDEO可能主要通过线粒体内源性途径,激活caspase-3通路调节淋巴细胞的增殖和活化,较低浓度时抑制淋巴细胞的增殖和活化,高浓度下抑制作用减弱。这揭示BDEO具有免疫抑制活性。     

黄芩苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨黄芩苷对小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响.方法 用尼龙棉柱分离T、B淋巴细胞,MTT比色法检测不同浓度黄芩苷单独作用及其与丝裂原(ConA,LPS)共同作用对小鼠T、B淋巴细胞增殖作用的影响.结果 0.25～2 mg/mL的黄芩苷显著促进T淋巴细胞增殖(P＜0.01),0.125～2 mg/mL的黄芩苷显著增强ConA诱导的T淋巴细胞增殖作用(P＜0.01).0.25～2 mg/mL的黄芩苷显著促进B淋巴细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01),且显著增强LPS诱导的B淋巴细胞增殖作用(P＜0.05或P＜0.01).结论 黄芩苷显著促进小鼠T、B淋巴细胞增殖,并与ConA、LPS对T、B淋巴细胞有协同刺激作用.     

膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞表型及免疫功能变化

目的 探讨膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞(dendritic cells,DCs)的表型及免疫功能变化.方法 通过密度梯度离心法从膀胱肿瘤患者和正常人外周血分离单个核细胞,加rhGM-CSF和rhlL-4诱导培养树突状细胞,采用流式细胞仪检测2组DCs表达程序性死亡配体-1(PD-L1)、CDla、HLA和CD83的变化,混合淋巴细胞反应检测其刺激T淋巴细胞增殖能力和ELISA法检测分泌IL-10和IL-12的变化.结果 膀胱肿瘤患者外周血DCs表达PD-L1[(95.06±4.06)％ vs (76.63±6.90)％]和分泌IL-10[(214.00±13.75) pg/mL vs(83.78±7.95) pg/mL]的水平显著高于正常组(P＜0.05),DCs表达CD83[(16.20±1.91)％ vs (35.53±1.58)％]及刺激淋巴细胞增殖的能力均低于正常组水平(P＜0.05).结论 膀胱肿瘤患者外周血源性树突状细胞高表达PD-L1、低表达CD83及过多分泌IL-10可能是膀胱肿瘤发生免疫逃逸的原因之一.     

血管免疫母细胞性淋巴结病临床表现特点探讨

7例经淋巴结病理和免疫组化证实的血管免疫母细胞性淋巴病,临床表现为发热、全身、局部淋巴结肿大、肝脾肿大、多发性浆膜腔积液、自身免疫抗体形成。7例淋巴结活检均有三联征,免疫组化淋巴结活检例均有T淋巴细胞浸润,5例有B淋巴细胞浸润。认为血管免疫母细胞性淋巴细胞可能来源T细胞,由于T细胞克隆增殖可刺激B细胞过度产生抗体致免疫功能紊乱。此病是淋巴瘤瘤前状态。该病确诊有赖于淋巴结活检及免疫组化进一步分型。     

自身免疫调节因子缺失对小鼠脾脏T/B淋巴细胞功能的影响

目的：探讨自身免疫调节因子（Aire）基因的缺失对小鼠脾脏T／B淋巴细胞功能的影响。方法：利用淋巴细胞转化实验和酶联免疫吸附实验分别检测T／B淋巴细胞在受到特异性及非特异性刺激后的增殖情况以及细胞因子和免疫球蛋白分泌状况。结果：与对照鼠相比，Aire^≠鼠的脾脏T／B淋巴细胞增殖功能并未受到显著影响；T／B淋巴细胞分泌IL-2和Ig的能力无统计学意义。结论：Aire基因不影响外周免疫器官T／B淋巴细胞的基本功能。     

Rac1蛋白在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3增殖及迁移的作用

目的 研究Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞株SKOV3恶性增殖和迁移的影响.方法 Western blot检测人卵巢浆液性腺癌组织、卵巢良性浆液性囊腺瘤组织及卵巢正常组织中Rac1蛋白的表达水平;构建Rac1表达缺失的细胞株SKOV3-Rac1i;分别用细胞划痕实验、MTT及平板克隆实验检测SKOV3-Rac1i细胞迁移能力、细胞增殖及克隆形成能力.结果 卵巢浆液性腺癌组织中Rac1蛋白表达水平显著高于卵巢良性浆液性囊腺瘤组织[(0.89 ±0.17)vs(0.69 ±0.24),P＜0.05]和卵巢正常组织[(0.89±0.17) vs (0.72±0.12),P＜0.05];与亲代细胞相比,SKOV3-Rac1i细胞表现出迁移能力减弱(P＜0.05)和增殖能力明显受限(P＜0.05).结论 Rac1在人卵巢浆液性腺癌组织中呈高表达,其可能是通过影响细胞迁移能力及细胞的增殖而促进卵巢癌细胞的恶性生物行为.     

抗精子抗体和抗子宫内膜抗体与不孕及流产的关系

目的　探讨抗精子抗体（ＡｓＡｂ）与抗子宫内膜抗体（ＥＭＡｂ）在不孕、流产中的作用及二者关系,进一步 揭示不孕、流产的病因。方法　采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）同时检测３４５例不孕、流产妇女血清中的ＡｓＡｂ与 ＥＭＡｂ,按ＡｓＡｂ检测结果分阳性组和阴性组,比较两组ＥＭＡｂ阳性率的差异。结果　原发不孕及自然流产妇女中, ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率高达１６．６７％和１９．５１％,而ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率高达４３．６４％和４２．８６％,显著高于 ＡｓＡｂ（－）组（Ｐ＜０．０１,Ｐ＜０．０５）。继发不孕妇女中ＡｓＡｂ（－）组ＥＭＡｂ阳性率为１８．１８％,ＡｓＡｂ（＋）组ＥＭＡｂ阳性率 为３２．２％,二者无显著性差异（０．０１＞Ｐ＞０．０５）。结论原发不孕及自然流产妇女中因个体免疫反应差异使某些 人易对体内、外物质发生免疫反应而产生抗体,从而导致不孕或流产。     

亚硝基脲类和亚硝基硫脲类的理化性质及致突变能力

本题选择N,N′-二甲基亚硝基脲(DMNU),N,N′-二乙基亚硝基脲(DENU),及其类似物N,N′-二甲基亚硝基硫脲(DMNTU)、N,N′-二乙基亚硝基硫脲(DENTU)为代表,测定了这些化合物的水解反应速度、脂溶性(HPLC的logk′值)、水解产物和致突变能力。证明了硫脲的脂溶性大于脲的脂溶性。DMNTU对TA100菌株的致突变能力最强,其它较弱。     

气血与足月妊娠分娩关系的探讨

论述足月妊娠分娩的发动和维持依靠气的推动、温煦、气化、固摄功能和血的营养、濡润功能。顺利分娩既要气血充足，还要气顺血和。临床研究结果表明调补气血，是促进产程，预防难产的重要手段。实验研究结果阐明调补气血中药加强产力、促进产程主要是从改善产妇全身情况，提高机体抗应激、抗疲劳、耐缺氧能力，即所谓使产妇气血充足调和，充分发挥气血在分娩过程中的生理作用。     

水疗联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响

目的探讨新生儿游泳联合抚触对新生儿的生长发育、黄疸及睡眠的影响。方法将经阴道顺产分娩的正常新生儿100例随机分为两组，观察组（水疗联合抚触组）50例，对照组（单纯沫浴组）50例。①测定两组10日、28日的体重、身长、上臂围；②观察记录胎便转黄时间，测定皿清胆红素；③记录24h睡眠时间。结果两组新生儿10日、28日体重、身长、上臂同增长有显著差异（P〈0．05），两组新生儿5日时，胎便转黄时间及黄疸指数比较均有显著性差异（P〈0．01），两组睡眠时间比较有统计学意义（P〈0．05），两组并发症比较无统计学意义（P〉0．05）。结论新生儿水疗联合抚触可促进新生儿的生长发育，能加速胎粪的早排出，减轻生理性黄疸程度，有效地降低新生儿高胆红素血症的发病率，提高睡眠质量。