HSF4b基因敲除下调αB-晶状体蛋白表达介导白内障发生

目的阐明热休克转录因子4b（HSF4b）对αB-晶状体蛋白（αB-crystallin, CRYAB）的调控在白内障发病过程中的作用及其机制。方法采用qPCR、Western印迹法和免疫荧光检测Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB和HSF4的表达情况;通过凝胶迁移实验、染色质免疫共沉淀、双报告基因检测等方法研究HSF4b对CRYAB的调控作用;通过免疫荧光分析和免疫共沉淀研究CRYAB与波形蛋白（vimentin, VIM）的相互作用。结果Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠晶状体中CRYAB表达下调;体外试验证实HSF4b和CRYAB的表达呈现正相关性;HSF4b直接与CRYAB启动子结合,激活CRYAB表达的转录过程;CRYAB与VIM存在相互作用。结论阐明了Hsf4tm1Xyk基因敲除小鼠中晶状体发育异常和白内障形成的分子机制。鉴定出CRYAB是HSF4b的下游调控分子。CRYAB对VIM具有稳定作用,有可能是抗白内障药物的作用靶点。     

人晶状体上皮细胞体外培养

目的 建立一种简单有效的人晶状体上皮细胞体外培养的方法. 方法 用组织块培养法,对不同年龄组(儿童组16例,中青年组18例,老年组14例)的人晶状体前囊膜进行培养.对培养的细胞进行形态学和增殖活动观察. 结果 组织块培养法较易在体外培养人类晶状体上皮细胞并传代,其增殖能力与供体年龄有关,但是老年人晶状体上皮细胞无法传代. 结论 成功地建立起人晶状体上皮细胞体外培养模型,可用于白内障及后发性白内障时后囊膜混浊发病机制和药物试验研究.     

不同浓度EGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 探索表皮生长因子(EGF)培养体外人视网膜色素上皮细胞(hRPE)的最佳浓度和最佳作用时间.方法 用CCK-8法观察EGF对体外hRPE增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系.结果 在相同浓度EGF作用下,hRPE吸光度值(A值)随作用时间延长而增加;在相同培养时间条件下,hRPE A值随EGF浓度增加而增加,...     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

人晶状体上皮细胞体外培养

白内障囊外摘除术后的远期并发症主要是后囊混浊 ,是导致视力下降的主要原因 ,其发生率可达50 %。现已明确后囊混浊发生的主要原因是由于残留的晶状体上皮细胞增生 ,并向后迁移所致。因此 ,抑制晶状体上皮细胞的增生 ,对于减少后囊混浊的发生十分重要。筛选有效的适合于临床应用的药物 ,需要在体外培养晶状体上皮细胞进行。由于晶状体材料组织块小 ,且无色透明 ,上皮细胞的体外培养具有一定的难度。为此 ,作者进行人晶状体上皮细胞体外培养实验 ,并对材料的处理和细胞培养条件进行了探讨。1　材料和方法1.1　材料 :人晶状体上皮细胞取材于年…     

αB-晶状体蛋白、半乳糖凝集素-9与胰腺癌临床分期及预后的关系

目的:探究αB-晶状体蛋白(CRYAB)、半乳糖凝集素-9(Gal-9)与胰腺癌临床分期及预后关系.方法:选取胰腺癌患者56例为研究对象,均接受手术治疗.对术后病理组织进行免疫组化染色和蛋白免疫印迹法(Western blot)实验,比较胰腺癌组织和癌旁组织中CRYAB、Gal-9蛋白表达水平,分析CRYAB、Gal-...     

碱性成纤维细胞生长因子促体外培养人晶状体上皮细胞株增殖及细胞周期的研究

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor, bFGF）与体外培养的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）株增殖之间的关系及其对细胞周期的影响.方法 对人晶状体上皮细胞株（SRA01/04）进行无血清培养液培养,取对数生长期细胞进行实验,分别加入不同终浓度的bFGF （0.01、0.10、1.00、10.00及100.00μg/ L） ）共同培养24、48、72 h后MTT法测定细胞增殖情况,以流式细胞仪分析bFGF对细胞增殖周期的影响.结果 bFGF浓度为0.1μg/L、1.00μg/ L、10.0μg/ L、100.00μg/ L时,对HLEC细胞有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义（P＜0.01）;100.00μg/ L作用24h増殖率最大112.78%,作用强度呈浓度时间依赖性; bFGF促进HLEC细胞周期发生变化,S期和G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞减少,说明bFGF通过促进HLEC细胞越过G1期限止点进入增殖状态.结论 bFGF可促进HLEC的增殖,改变细胞周期,是HLECs强有力的促增殖因子.     

αB-晶状体蛋白基因rs14133G/C和rs2070894G/A多态性在广西西部人群中的分布

目的检测中国广西西部人群αB-晶状体蛋白(CRYAB)基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点多态性,并探讨中国广西西部人群αB-晶状体蛋白基因多态性与其他4个种族人群的差异。方法通过聚合酶链式反应结合单碱基延伸技术和DNA测序方法检测199名广西西部健康人CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型,并与国际人类基因组单倍型图谱计划公布的欧洲人、非洲人、日本人、中国北京人的CRYAB基因多态性进行对比。结果在199名广西西部健康人中,男女性组间CRYAB基因rs14133 G/C位点、rs2070894 G/A位点的基因型和等位基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中国广西西部人群和欧洲人相比,CRYAB基因rs14133 G/C和rs2070894 G/A位点基因型和等位基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05);与非洲人、日本人、中国北京人相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CRYAB基因多态性分布具有种群和地域差异,这种差异可能是相同疾病在不同人群中临床表现不同的原因之一。     

人视网膜色素上皮(RPE)细胞的体外纯化培养

视网膜色素上皮(RPE)和脉络膜毛细血管位于Bmshs膜两侧，RPE细胞的紧密连接构成血—视网膜外屏障，且对排除废物和供给视网膜营养是必要的。RPE细胞的任何必要生理紊乱都对视网膜不利。RPE的功能之一就是通过产生神经营养的GF而营养支持视网膜，这些GF有神经生长因子(NGF)、脑源性生长因子(BDNF)和色素上皮源性生长因子(PEDF)等。     

腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人RPE细胞对人脉络膜微血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial cells,RPE）细胞对人脉络膜微血管内皮细胞（human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC）增殖的影响,探讨Slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）提供新的治疗思路。方法：体外培养并鉴定人RPE细胞、HCMEC;200 ?滋mol/L 氯化钴建立化学缺氧模型,Transwell小室建立细胞共培养模型;将缺氧的RPE细胞随机分为Slit2组（加入Slit2）、Slit2 ShRNA组（加入Slit2 ShRNA）、空腺病毒组（加入空腺病毒）、缺氧组,12、24、48 h后采用CCK 8（Cell Counting Kit-8,CCK 8）法检测HCMEC的增殖。结果：不同组别存在组间差别,差异均有统计学意义（F=98.122,P=0.000）,不同时间点存在差别（F=3388.913,P=0.000）,组别与时间点的交互作用（F=82.863,P=0.000）。Slit2组吸光度（absorbance,A）值在24 h、48 h均高于其他组（与缺氧组P=0.001,其余P=0.000）,Slit2 ShRNA组A值在24 h、48 h均低于其他组（48 h与缺氧组P=0.003,与空腺病毒组P=0.008,其余P=0.000）。结论：Slit2的高表达可明显促进HCMEC的增殖,沉默RPE细胞中的Slit2的表达后,会明显抑制HCMEC的增殖。     

辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤的保护作用及机制研究

目的:分析辅酶Q100对人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell,RPE)细胞氧化应激损伤的作用效果与机制。方法:实验分为4组:氧化应激模型组,用H_2O_2进行处理;实验高、低剂量组,采用不同剂量辅酶Q10预处理细胞,然后再经H_2O_2诱导;正常细胞对照组,不用辅酶Q10和H_2O_2处理。采用CCK-8法检测细胞活性;应用DCFH-DA荧光探针检测法检测细胞内活性氧含量;Western blot法检测细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax、磷酸化-Akt、Akt的表达量。结果:辅酶Q10能够增强H_2O_2处理后的人视网膜色素上皮细胞的活性;降低由于H_2O_2引起的细胞内活性氧的水平,抑制人视网膜色素上皮细胞中Caspase-3、Bax的表达,促进细胞中Bcl-2的表达水平;抑制人视网膜色素上皮细胞中Akt的磷酸化水平。结论:辅酶Q10对人RPE细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制细胞氧化损伤与凋亡发生相关因子的表达,促进凋亡抑制因子Bcl-2表达,抑制Akt发生磷酸化等多个方面起作用。     

αB晶状体蛋白在晶状体外的研究概况

αB晶状体蛋白是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,在机体各种组织中都有广泛表达,它是小分子热休克蛋白家族成员之一,具有分子伴侣活性,能抑制多种环境变化下的细胞凋亡,同时与某些肿瘤的发生发展及肿瘤治疗中的抗药性都有密切关系,作者就此对近年来的相关研究作一概述.     

人胚胎视网膜色素上皮细胞的体外培养和吞噬作用

目的探讨人胚胎视网膜色素上皮（RPE）细胞分离培养的特性及其吞噬作用。方法取发育至13-15周的新鲜人胚胎眼球,显微解剖后采用机械胰酶消化法分离培养RPE细胞,应用免疫荧光法观察人胚胎RPE细胞吞噬视网膜光感受细胞外节膜盘。结果人胚胎发育至13-15周后,RPE细胞可应用标准的培养方法进行体外培养和传代。根据测定的人胚胎RPE细胞生长曲线,取2—6代细胞用于实验培养的人胚胎RPE细胞具备吞噬功能。结论改进了人胚胎RPE细胞的培养方法,证明人胚胎RPE细胞在体外具有吞噬能力。     

兔晶状体上皮细胞的体外培养

目的：建立兔晶状体上皮细胞（RLEC）体外培养的模型。方法：采用组织块培养法，对兔晶状体前囊膜进行培养，并利用形态学检查方法鉴定。流式细胞仪检测细胞周期。结果：组织块接种72小时后可见细胞生长。且保持上皮细胞形态，12-14天细胞融合，体外传代5代以后，细胞呈纤维化生长，细胞周期分析提示体外培养的RLEC保持正常的增殖能力。结论：组织块培养法能在体外成功培养兔晶状体上皮细胞，可用于白内障术后前囊膜及后囊膜混浊发生机制的研究。     

高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的探讨高糖及高糖联合低氧对体外培养的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelial，RPE）细胞低氧诱导因子1α（hypoxia—inducible factor-1α，HIF-1α）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达的影响。方法通过使用化学低氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞低氧环境，研究RPE细胞分别在5．56mmol／L葡萄糖（对照组）、5．56mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（低氧组）、25mmol／L葡萄糖（高糖组）以及25mmol／L葡萄糖＋150μmol／L CoCl2（联合组）的培养条件下，通过反转录PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达，Western blot分析检测HIF-1α及VEGF蛋白水平。结果与对照组比较，高糖组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，而高糖组可检测出微量的HIF-1α蛋白，对照组未能检测出HIF-1α蛋白；且高糖组VEGF mRNA表达和蛋白合成均增加（均P〈0．05）。与低氧组比较，联合组RPE细胞HIF-1α mRNA表达无显著性差异，但HIF-1α蛋白水平明显高于低氧组（P〈0．05）；同时VEGF mRNA表达和蛋白合成也均明显增加（均P〈0．05）。结论高糖对体外培养的人RPE细胞HIF-1α的影响是促进蛋白的合成，且对HIF-1α蛋白有一定的稳定作用，在联合低氧条件下高糖促进合成的HIF-1α蛋白更加稳定，同时也促进VEGF的表达增加。     

p21/WAF1基因对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 观察p21／WAF1基因对体外培养的人视网膜色素上皮(hRFE)细胞增殖的影响。方法hRFE细胞原代、传代体外培养，通过脂质体介导将p21／WAF1基因转人体外培养的hRPE细胞。免疫组织化学法检测p21蛋白表达水平，并用MTT法检测其对hRFE细胞增殖抑制的作用，同时利用流式细胞仪来分析p21／WAF1基因对细胞周期的影响。结果 MTT法显示p21／WAF1基因抑制hRPE细胞的增殖。流式细胞仪检测显示转染后Go／G1期比例明显增加，S期比例减少。结论 p21／WAF1基因可有效地抑制hRPE细胞的增殖活性。     

尼古丁对人RPE细胞及HUVEC的影响

目的探讨尼古丁对人视网膜色素上皮(RPE)细胞和血管内皮细胞(HUVECs)中血管内皮生长因子(VEGF)表达及形成新生血管能力的影响。方法 MTT法检测尼古丁对两种细胞增殖的影响;划痕及成管实验检测其对HUVECs迁移、成管的影响;RT-PCR和Western blotting法检测两种细胞经尼古丁处理后VEGF、PEDF mRNA及蛋白的表达。结果尼古丁促进HUVECs增殖、迁移、成管(P<0.05),但对ARPE-19细胞增殖无影响(P>0.05),且高浓度(100μmol/L)时抑制细胞增殖(P<0.01)。尼古丁以剂量和时间依赖方式促进两种细胞VEGF mRNA及蛋白的表达,抑制PEDF mRNA及蛋白的表达,上调VEGF/PEDF基因表达的比率(P<0.05)。结论尼古丁可上调ARPE-19细胞和HUVECs中VEGF/PEDF基因表达的比率,促进HUVECs增殖、迁移、成管。     

多西他赛对人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

目的 研究多西他赛（docetaxel, DTX）对体外培养的人视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelium, hRPE）细胞增殖的抑制和凋亡。方法 选择不同浓度（0、10、20、40、80μg/mL）的DTX作用于hRPE细胞一定时间,MTT法检测DTX对hRPE细胞的生长抑制,荧光染色显微镜观察凋亡细胞,流式细胞术检测DTX对hRPE细胞周期的影响。结果 DTX对人hRPE细胞有生长抑制作用,随着DTX浓度的增加,对hRPE细胞的增殖抑制作用明显增强（P<0.05）,当DTX浓度为80μg/mL作用于hRPE细胞48 h时,细胞增殖抑制达93%。20μg/mL DTX作用的hRPE细胞中细胞核或细胞质内出现致密浓染的颗粒状或条索状荧光的凋亡细胞,随着浓度的增加,凋亡细胞数亦增加。流式细胞仪检测显示,加入DTX的hRPE细胞各周期比例发生改变,G₀/G₁期、S期细胞比例逐渐减少,G₂/M期细胞增加,不同浓度组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）,80μg/mL...