布地奈德、卡介苗干预对支气管哮喘小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤的影响

目的 观察布地奈德(BUD)、卡介苗(BCG)干预对支气管哮喘小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(ATⅡ)损伤的影响.方法 昆明小鼠40只随机分为哮喘模型组、BUD干预组、BCG干预组和正常对照组.以卵白蛋白致敏和激发复制小鼠哮喘模型,并行BUD、BCG干预.HE染色观察其呼吸道周围嗜酸性粒细胞(EOS)浸润.ELISA法检测其血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中Krebs von den lungen-6(KL-6)表达及BALF中IL-4、IFN-γ表达.免疫组织化学染色(SABC法)观察其肺表面活性蛋白(SP-A、SP-B)的表达.透射电镜观察其ATⅡ形态.结果 哮喘模型组、BUD干预组、BCG干预组、正常对照组EOS分别为(806±91)个·mm-2、(173±25)个·mm-2、(189±19)个·mm-2及(3±1)个·mm-2;血清KL-6水平分别为(1.514±0.027) ng·L-1、(1.101±0.020) ng·L-1、(1.008±0.019) ng·L-1及(0.753±0.033) ng·L-1;BALF中KL-6水平分别为(0.842±0.020) ng·L-1、(0.268±0.024) ng·L-1、(0.243±0.026) ng·L-1及(0.090±0.015) ng·L-1;BALF IL-4水平分别为(22.61±2.35) ng·L-1、(13.34±2.41) ng·L-1、(15.56±3.08) ng·L-1及(0.62±0.15) ng·L-1;BALF IFN-γ水平分别为(40.56±3.58) ng·L-1、(60.37±6.41) ng·L-1、(57.87±6.28) ng·L-1及(75.64±6.09) ng·L-1;SP-A IOD值分别为45.89±10.08、181.34±29.41、200.12±32.08及389.62±45.05;SP-B IOD值分别为10.34±2.42、88.76±12.66、87.13±14.58及187.89±27.15.上述指标除BUD干预组与BCG干预组之间差异无统计学意义外,余各组间差异均有统计学意义(Pa<0.01).电镜下可见哮喘模型组小鼠ATⅡ板层小体和线粒体减少,有明显排空和空泡化改变,部分细胞变性、坏死.干预后上述改变均有明显改善.哮喘模型组、BUD干预组及BCG干预组BALF中KL-6水平与EOS呈明显正相关,与BALF中IL-4/IFN-γ亦呈明显正相关.SP-A与BALF IL-4/IFN-γ呈明显负相关.结论 支气管哮喘使小鼠ATⅡ明显受损,KL-6表达增加,SP-A、SP-B表达下降.BUD、BCG干预可减轻哮喘ATⅡ的损伤.     

卡介苗干预对哮喘小鼠干细胞因子表达的影响

目的研究卡介苗(BCG)对哮喘小鼠干细胞因子(SCF)表达的影响。方法昆明小鼠随机分为哮喘组、BCG组和对照组,每组10只,以卵清蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型。末次激发24 h后取肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF),计数嗜酸性粒细胞(EOS);酶联免疫吸附法检测BALF中SCF水平;免疫组织化学图像分析技术测定肺组织中SCF蛋白表达。结果哮喘组、BCG组和对照组肺组织的EOS计数分别为(10.67±1.94)个/HP、(6.40±1.55)个/HP和(0.37±0.33)个/HP,BALF中EOS计数分别为(7.58±1.30)×107/L、(3.78±1.15)×107/L和0,三组间差异有统计学意义(P均0.01)。哮喘组、BCG组和对照组的肺组织SCF蛋白免疫组化指数分别为(24 787.97±7 214.12)、(20 509.50±4 775.27)和(12 261.66±3 277.65),BALF中SCF水平分别为(280.25±14.20)pg/ml、(266.77±31.15)pg/ml和(223.59±15.61)pg/ml,其中哮喘组和BCG组均高于对照组,差异有统计学意义(P均0.05),BCG组与哮喘组差异无统计学意义(P0.05)。哮喘组肺部SCF表达与EOS计数呈正相关(P0.05)。结论 BCG干预能显著减轻哮喘小鼠的气道炎症,但不能抑制SCF的表达。     

BCG干预对哮喘小鼠调节性T细胞生成的影响

目的：研究表明减毒活菌卡介疫苗(BCG)能上调机体的TH1反应,从而对以TH2反应为主的哮喘等过敏性疾病起抑制作用。该文观察BCG干预后哮喘小鼠调节性T细胞生成的变化,以探讨其可能的作用机制。方法：昆明小鼠以卵白蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘模型。于OVA致敏前及后5d分别以BCG皮内注射干预,在最后一次抗原激发后24h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血。计数BALF中的细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)的个数。并采用流式细胞仪分析外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的百分比。开腹取脾,制备脾单细胞悬液并培养48h,收集上清液。ELISA法测定上清液中的IL-10的含量。结果：OVA致敏激发组小鼠BALF中的细胞总数为(27.27±5.36)×107/L;EOS为(6.59±1.32)×107/L较正常对照组(1.52±0.36)×107/L和0明显增高(P<0.01),而BCG干预组其BALF中的细胞总数为(13.71±3.17)×107/L及EOS的计数为(1.43±0.37)×107/L较OVA致敏激发组降低(P<0.01);哮喘组外周血CD4+CD25+Treg的百分比为(11.59±1.33)%与正常对照组(13.66±1.68)%比较明显下降(P<0.01)。而BCG干预组CD4+CD25+Treg的百分比为(14.40±2.70)%较哮喘组上升(P<0.05),同时,BCG干预组脾细胞培养上清液中IL-10的水平为7.79±1.34pg/mL,较哮喘组5.54±0.66pg/mL升高(P<0.01)。结论：BCG能明显抑制哮喘小鼠气道的炎症反应,其干预机制可能与促进调节性T细胞生成有关。     

减毒卡介活菌疫苗干预对哮喘小鼠肺GATA-3表达的影响

目的研究减毒卡介活菌疫苗（BCG）干预对哮喘小鼠呼吸道炎症及肺组织GATA-3表达的影响。方法昆明小鼠24只随机分为哮喘组、BCG治疗组、正常对照组。以卵清蛋白（OVA）致敏激发建立哮喘模型,于OVA致敏前及后5 d分别以BCG皮内注射干预。计数肺泡灌洗液（BALF）中的细胞总数及嗜酸性粒细胞（EOS）个数。酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定BALF中IL-4水平。免疫组织化学法观察BCG对哮喘小鼠肺组织GATA-3表达的影响。结果1.哮喘组小鼠BALF中的细胞总数及EOS计数较正常对照组明显增高（Pa〈0.001）,而BCG治疗组BALF中的细胞总数及EOS的计数较哮喘组显著降低（Pa〈0.001）。2.哮喘组小鼠BALF中IL-4的水平较正常对照组明显上升,二组比较差异有显著性（P〈0.01）;而BCG治疗组小鼠BALF中IL-4的水平较哮喘组明显下降,差异有显著性（P〈0.01）。3.BCG治疗的哮喘小鼠其肺部组织GATA-3的表达较哮喘小鼠明显减弱。结论BCG能抑制哮喘小鼠肺组织GATA-3的表达,导致IL-4等TH2型细胞因子的减少,从而减轻呼吸道的炎症反应。     

穿心莲内酯磺化物对支气管哮喘小鼠肺泡灌洗液炎性细胞、白细胞介素-12及白细胞介素-13表达的影响

目的探讨穿心莲内酯磺化物对哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF)内炎性细胞、IL-12及IL-13表达的影响。方法 BALB/c小鼠随机分为哮喘组、穿心莲内酯磺化物干预组和对照组。以卵清蛋白(OVA)致敏激发建立哮喘小鼠模型。计数BALF炎性细胞总数及分类,双抗体夹心ELISA法测定BALF中IL-12、IL-13水平,实时荧光定量PCR检测肺组织中IL-12 mRNA、IL-13 mRNA相对表达量。结果哮喘组、穿心莲内酯磺化物干预组、对照组BALF中白细胞总数分别为(203.09±43.60)×104L-1、(123.90±35.10)×104 L-1、(20.69±3.68)×104 L-1;嗜酸性粒细胞(EOS)数分别为(160.78±31.62)×104 L-1、(67.44±20.00)×104 L-1、(1.72±0.68)×104 L-1;巨噬细胞数分别为(33.85±2.29)×104 L-1、(14.12±2.10)×104 L-1、(17.24±1.97)×104 L-1;BALF中IL-12水平分别为(60.45±7.91)ng.L-1、(92.27±18.67)ng.L-1、(278.48±36.78)ng.L-1;BALF中IL-13水平分别为(570.20±62.98)ng.L-1、(299.71±31.64)ng.L-1、(230.22±27.83)ng.L-1;肺组织IL-12 p40 mRNA相对表达量分别为0.43±0.24、0.93±0.28、1.04±0.28;IL-13 mRNA相对表达量分别为44.80±9.51、11.27±5.47、1.07±0.47。上述指标,三组间比较差异均有统计学意义(Pa<0.01)。结论穿心莲内酯磺化物可抑制哮喘小鼠炎性细胞浸润和IL-13表达,促进IL-12表达拮抗哮喘呼吸道炎症。     

哮喘小鼠树突状细胞表达及减毒卡介苗干预的影响

目的探讨哮喘小鼠树突状细胞(DC)表达及减毒卡介苗(BCG)干预的影响。方法以卵蛋白腹腔注射、雾化吸入和BCG皮下注射复制哮喘和BCG干预小鼠模型。流式细胞仪检测小鼠脾单个核细胞DC和共刺激分子CD80、CD86表达;免疫组化法检测小鼠肺DC表达;ELISA法检测小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6、IL-12的含量。结果哮喘、BCG干预、对照组小鼠的脾单个核细胞DC表达分别为(16.18±9.49)%、(8.62±3.53)%、(1.84±0.69)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.01);哮喘、BCG干预、对照组小鼠的肺DC表达分别为(1 581±177)个/mm、(668±101)个/mm、(268±29)个/mm,各组间差异均有统计学意义(P<0.01)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD80表达分别为(6.4±3.3)%、(10.8±3.1)%、(7.1±4.0%),BCG干预组与哮喘和对照组间的差异有统计学意义(P<0.05),哮喘组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。哮喘、BCG干预、对照组小鼠的CD86表达分别为(9.6±2.9)%、(7.3±4.5)%、(4.9±4.4)%,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-6含量分别为(28.65±2.39)pg/ml、(18.63±1.88)pg/ml、(12.80±2.98)pg/ml,各组间差异均有统计学意义(P<0.05);哮喘、BCG干预、对照组小鼠BALF中的IL-12含量分别为(4.78±0.22)pg/ml、(6.33±0.31)pg/ml、(7.38±0.28)pg/mlG,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论哮喘小鼠外周循环与呼吸道局部DC表达均增加,在哮喘的发生、发展过程中起着重要作用。BCG可通过调节DC,CD80、CD86、IL-6、IL-12等表达,以拮抗哮喘气道炎症反应。     

氯雷他定对哮喘豚鼠肺泡灌洗液及血清白细胞介素-5和嗜酸性粒细胞计数的影响

目的 观察氯雷他定对支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清IL-5表达以及嗜酸性粒细胞(EOS)计数的影响,探讨氯雷他定对哮喘豚鼠模型呼吸道高反应性的作用.方法 将32只豚鼠随机分为正常对照组、哮喘组、氯雷他定低剂量组及氯雷他定高剂量组.经鸡卵白蛋白(OVA)致敏后,给予OVA雾化吸入,诱发哮喘发作制作哮喘模型,氯雷他定低剂量组和氯雷他定高剂量组分别给予氯雷他定2 mg·kg-1和10 mg·kg-1灌服.在末次雾化吸入OVA后,经动物呼吸机测定豚鼠呼吸道压力,用酶联免疫法检测其血清和BALF中IL-5水平,并计数外周血及BALF中EOS.结果 正常对照组、哮喘组、氯雷他定低剂量干预组及高剂量干预组血清IL-5水平分别为(0.27±0.04) ng·L-1、(0.41±0.03) ng·L-1、(0.38±0.02) ng·L-1及(0.31±0.03) ng·L-1,BALF中IL-5水平分别为(0.10±0.01) ng·L-1、(0.38±0.04) ng·L-1、(0.33±0.05) ng·L-1及(0.23±0.09) ng·L-1;外周血EOS计数分别为(4.0±0.6)×108L-1、(54.6±7.6)×108L-1、(44.5±3.9)×108L-1及(29.0±5.8)×108L-1;BALF中EOS计数分别为(3.0±0.5)×108L-1、(33.7±3.9)×108L-1、(27.1±3.2) ×108L-1及(18.6±3.3) ×108L-1.以上各指标任意2组比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05,0.01).当吸入组胺质量浓度为10 mg·L-1和20 mg·L-1时,哮喘组与氯雷他定低剂量组比较差异无统计学意义,其余任意2组比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 氯雷他定低、高剂量均能改善哮喘模型中豚鼠呼吸道高反应性,并对血清及BALF中IL-5的表达有抑制作用,同时使血清、BALF中EOS计数减少.     

防哮饮早期干预对哮喘小鼠血清白细胞介素-10水平影响的实验研究

目的观察中药防哮饮早期干预对哮喘小鼠血清白细胞介素10(IL-10)水平以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞百分比(EOS%)的影响。方法将60只健康昆明小鼠随机分为6组:正常对照组、哮喘模型组、防哮饮小剂量组、防哮饮中剂量组、防哮饮大剂量组、布地奈德组各10只,用卵蛋白致敏激发造模。中药防哮饮组从致敏第1天起,将中药防哮饮按小剂量(含生药0.5 g/mL)、中剂量(含生药1.5 g/mL)、大剂量(含生药2.5 g/mL)灌胃给药,每日1次,每次0.4 mL,共27 d。在最后1次激发后24 h(第28 d)处死小鼠,采用双抗夹心酶联免疫吸附试验检测小鼠血清IL-10的含量,并镜检BALF中EOS%。结果哮喘模型组小鼠BALF中EOS[(2.9±1.4)%]较对照组[(1.3±0.9)%]明显升高(P<0.01);血清IL-10的含量[(7.6±3.0)ng/mL]较对照组[(44.9±33.0)ng/mL]降低(P<0.05)。防哮饮小、中、大剂量组均能显著提高哮喘小鼠血清IL-10水平,与哮喘模型组比较差异有统计学意义(P<0.01),与布地奈德组比较差异无统计学意义(P>0.05)。防哮饮大...     

卡介苗干预对哮喘小鼠T淋巴细胞活化/凋亡状态的影响

目的 探讨卡介苗(BCG)干预对哮喘小鼠共刺激分子B7-CD28/CD152的表达及T淋巴细胞凋亡的影响.方法 昆明小鼠27只随机分为哮喘组、BCG干预组和对照组,每组9只.用卵清蛋白(OVA)、100g/L氢氧化铝腹腔注射致敏哮喘组小鼠,OVA雾化吸入激发,复制哮喘模型.干预组在致敏前5、3、1 d采用BCG皮内注射,0.025 mg/只,共干预3次,余同哮喘组.对照组以9g/L盐水代替OVA及氢氧化铝致敏和激发.流式细胞术检测各组小鼠脾淋巴细胞悬液CD28、CD152、CD80、CD86的表达;采用Ficoll法分离各组小鼠外周血单个核细胞并培养出T淋巴细胞,采用Comet法检测各组小鼠T淋巴细胞凋亡率.采用SPSS10.0软件进行统计学分析.结果 哮喘和对照组小鼠比较CD28表达明显上调(t=3.94 P<0.01),CD152表达无变化(t=0.38 P>0.05),CD80表达无变化(t=0.40 P>0.05),CD86>达上升(t=2.68 P<0.05);BCG干预和哮喘组比较,CD28表达显著下调(t=4.21 P<0.01),CD152表达显著上调(t=3.21 P<0.01),CD80表达明显上调(t=2.50 P<0.05),CD86二组表达无差异(t=0.45 P>0.05).T淋巴细胞凋亡率BCG干预组明显高于哮喘组(t=3.15 P<0.01).哮喘与对照组T淋巴细胞凋亡率比较显著减少(t=5.83 P<0.01).结论 BCG通过抑制小鼠T淋巴细胞活化,促进T淋巴细胞凋亡,上调TH1反应,发挥其防治哮喘作用.     

T-bet在哮喘小鼠中的表达及卡介苗干预的实验研究

目的 研究T-bet在卵白蛋白(OVA)致敏小鼠、哮喘小鼠中的表达及卡介苗(BCG)干预对其表达的影响.方法 雄性昆明小鼠随机分成致敏组、哮喘组、卡介苗干预组和正常对照组.用OVA致敏、激发,建立哮喘模型.免疫印迹法检测肺组织中T-bet蛋白的表达水平,ELISA法测定肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4的水平.结果 致敏小鼠肺组织中T-bet蛋白表达0.463±0.369,较正常对照组小鼠明显下降,哮喘小鼠肺组织T-bet蛋白表达0.658±0.345,与致敏组比较,差异无统计学意义;BEG干预后,肺组织T-bet表达1.322±0.349,较哮喘组明显增加.致敏小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ水平为(15.50±2.25)pg/ml,较正常对照组小鼠明显减少,IL-4为(39.90±2.12)pg/ml,较正常对照组小鼠明显增多;哮喘小鼠肺泡灌洗液中IFN-γ为(12.64±2.92)pg/ml,与致敏小鼠比较,差异无统计学意义,IL-4为(48.34±3.83)pg/ml,较致敏小鼠明显增多;BCG干预后,IFN-γ明显增多,IL-4明显减少.结论 卡介苗能在转录因子水平促进T-bet表达,从而在转录因子水平纠正Th1/Th2比例失衡,对哮喘起保护作用.     

Thrombophilia in Infancy: Factor V Leiden and MTHFR or Factor II Double Heterozygocity as a Risk Factor

Thrombophilic risk factors are associated with thromboembolism in children but data in infants and neonates are not well established. The authors report a series of 9 infants with thrombotic events and the associated genetic risk factors. The clinical and laboratory records of newborns and infants with a history of thrombotic events were summarized, while patients with underlying diseases were excluded. The frequency of the genetic mutations was compared to a control group of 80 children from the same ethnic origin. In 6 patients a cerebrovascular accident was diagnosed and in 3 newborns, CT scan could diagnose antenatal brain infarct. In another 2 patients deep-vein thrombosis associated with femoral catheterization was diagnosed. Seven infants were factor V Leiden heterozygous and another one homozygous. Methylenetetrahydrofolate reductase genotype was found in 5 infants. Five cases were found to be double heterozygous for those two mutations, and another one double heterozygous for FVL and factor II. The results of this small series of patients indicate that cerebrovascular accident is the major thrombotic event in infants and the combination of more than one prothrombotic factors may be the cause of those events. The correct management, including anticoagulant therapy, is still under discussion and waiting for larger series and long-term follow-up results until accurate recommendations can be made.     

Insulin-Like Growth Factor II Effects Mediated through Insulin-Like Growth Factor II Receptors

ABSTRACT. Insulin-like growth factor II (IGF-II) resembles the homologous peptide insulin-like growth factor I (IGF-I) in that it stimulates cellular growth in vitro. This effect is generally believed to be mediated through IGF type 1 receptors; the role of the IGF type 2 receptor remains, as yet, unknown. IGF-II has been shown to stimulate clonal expansion in cells from the human erythroleukaemia cell line K562, which displays binding of IGF-II and insulin but not IGF-I. This IGF-II effect was dose-dependent and correlated to the amount of specific binding; IGF-I did not stimulate growth. A similar effect on clonal growth was observed in the human T-cell line Jurkat. Furthermore, IGF-II was found to stimulate the cytotoxic activity of natural killer cells (as does interleukin 2). This effect was not inhibited by addition of IGF binding protein 1. Thus, it can be concluded that IGF-II, besides demonstrating standard IGF properties, exhibits unique biological effects in certain cells.     

补体H因子研究进展

H因子是一种多结构域和多功能的蛋白质,作为一种补体调节物质,不论是在血管内或在细胞表面,控制C3转化酶的生成和稳定性。由于基因缺陷造成H因子减少或缺如,造成补体旁路途径持续激活,导致血管内皮损伤,且不能修复,临床上可引起溶血尿毒综合征和膜增殖性肾小球肾炎等疾病。某些肿瘤细胞可产生H因子,从而逃逸补体介导的细胞杀伤。该文就补体H因子的结构、功能及与上述疾病的关系作一综述。     

Neonatal Congenital Factor X Deficiency

Four neonates with congenital Factor X deficiency presented soon after birth with bleeding episodes. Two of the newborns had intracranial hemorrhages; one of them also had antenatal ventricular dilatation and postnatal hydrocephalus and died of massive intracerebral hemorrhage at four months. One patient was lost for follow up. The two surviving infants were followed up for four years and two years respectively, while on replacement therapy with three injections of 40 units/kg prothrombin complex a month. In spite of markedly elevated prothrombin time and partial thromboplastin time, these two infants remain free of major bleeding manifestations except for troublesome petechiae and ecchymoses. A schedule for substitution therapy with Factor X is proposed for infants and children to prevent bleeding in severe Factor X deficiency.     

肝细胞生长因子与哮喘

肝细胞生长因子(HGF)是一个多功能的细胞生长因子,具有保护气道上皮、抗细胞凋亡、抑制胶原组织沉积等作用,也是为数不多的抗组织纤维化的细胞因子之一。有实验证实HGF对哮喘大鼠的气道上皮有保护性作用,并可以改善气道组织重建、促进气道小血管的生成等。目前,哮喘的发生发展过程和机制仍不明确,治疗方法也在探索当中,HGF有可能成为一个新的研究哮喘机制和治疗哮喘的方法。     

神经生长因子减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的研究

目的：探讨神经生长因子(NGF)减轻新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的作用及其机制。方法：将NGF以0.1 μg/kg和0.3 μg/kg两个剂量组用于新生大鼠HIBD模型,采用干湿比重法、原子吸收光谱法和高效液相色谱电化学法检测缺氧缺血后脑组织含水量、脑组织钙含量和单胺类神经递质含量变化。结果：新生大鼠缺氧缺血组结扎侧脑组织平均含水量、组织钙含量及单胺类神经递质(除DOPAC外)含量较结扎对侧和/或正常对照组明显增高,含水量：(91.14±2.21)% vs (82.99±6.53)% (P<0.05),(91.44±2.21)% vs (87.22±1.13)%(P<0.05),钙含量：(255.24±122.6) μmol/g干重 vs (44.12±13.54) μmol/g干重(P<0.01),(255.24±122.6) μmol/g干重 vs (42.68±4.35) μmol/g干重(P<0.05),NGF干预后,结扎侧脑组织含水量、组织钙含量及单胺类神经递质(除DOPAC)外含量均明显下降,与HIBD组结扎侧相比有显著性差异,与正常对照组相比无显著性差异。0.1 μg NGF组,含水量：(86.86±0.86)% vs (91.14±2.21)% (P<0.05),钙含量：(44.34±3.10) μmol/g干重 vs (255.24±122.6) μmol/g干重(P<0.01)。0.3 μg NGF组,含水量：(87.45±0.37)% vs (91.14±2.21)% (P<0.05),钙含量：(42.03±14.99) μmol/g干重 vs (255.24±122.6) μmol/g干重(P<0.01)。结论：NGF可以降低钙超载,减轻脑水肿,减弱或抑制单胺类神经递质等从而有可能减轻HIBD。