逆转录病毒介导单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨应用逆转录病毒载体介导单纯疮疹病毒－胸苷激酶（herpes simplex virus type Ⅰthymidine kinase gene,ＨＳＶ－ＴＫ）基因治疗实验性人胰腺癌细胞系８９８８的价值。方法 ＨＳＶ－ＴＫ被定向克隆入逆转录病毒载体pＭＮＤＭ的ＤＶ４０下游。重组逆转录病毒包装细胞ＰＡ３１７细胞,产生的重组病毒将ＨＳＶ－ＴＫ转入人胰腺癌细胞系８９８８细胞内。结果 Ｓorthern blot试验及药敏试验均证实ＨＳＶ－ＴＫ基因已整合至细     

TK基因联合mIL-2基因治疗胃癌的实验研究

目的通过转基因方法观察自杀基因TK对小鼠胃癌的杀伤作用,并联合mIL-2基因,观察免疫反应在增强TK杀伤性中的作用.方法应用逆转录病毒方法转导自杀基因TK,应用脂质体方法转导细胞因子基因mIL-2.通过体外实验观察TK基因对小鼠胃癌MFC细胞的杀伤性和旁观者效应;体内实验中首先在615小鼠建立胃癌模型,然后分组将病毒上清注入瘤体内,并结合应用前药和mIL-2基因,分别观察它们对肿瘤的杀伤作用.通过病理切片观察组织病理变化;应用免疫组化方法观察T淋巴细胞亚群在局部的聚集情况.结果 TK基因在体外即显出明显的杀伤作用,20%的转基因细胞可以杀伤70%～80%以上的肿瘤细胞.体内实验表明TK基因结合前药GCV可显著杀伤肿瘤,而TK基因本身并无杀伤作用(P=0.046).联合mIL-2后抗肿瘤作用进一步加强,部分肿瘤完全消退(P=0.005).免疫组化显示CD ,CD 细胞在局部聚集.结论自杀基因TK联合前药GCV对小鼠胃癌产生显著杀伤作用,不仅转基因细胞被杀死,而且通过旁观者效应杀伤大量周围细胞.细胞因子基因mIL-2可增强TK的抗肿瘤作用.     

TK基因联合白介素-2/粒、巨噬细胞集落刺激因子基因治疗胃癌的实验研究

目的：用逆转录病毒载体pLxSN转导TK基因,用真核表达载体pIRES转导细胞因子基因,观察TK基因联合白介素－2（mouseII-2)/粒,巨噬细胞集落刺激因子（mouse)GM-CSF)两种细胞因子基因对小鼠胃癌的治疗作用,方法：先用TK基因治疗胃癌细胞株,然后联合mIL-2/mGM-CSF基因治疗小鼠模型胃癌,其“自然基因”与细胞因子基因相互协同,产生显著的抗肿瘤作用,PT－PCR检测基因表达,结果：20％的转基因细胞发了可杀灭70％－80％以上的肿瘤细胞,表现出很强的旁观者效应,实验表明,应用TK／9－丙氧鸟苷（GCV）,即可产生很强的抗肿瘤作用（P＜0．01）,结合mIL-2/mGM-CSF两种细胞因子基因,抗肿瘤作用会得到进一步强化,肿瘤消退速度明显加快,大部分肿瘤完全消退,具有显著抗肿瘤作用,联合IL－2／GM－CSF后,抗肿瘤作用会得进一步强,生明显的抗肿效应。     

基因治疗技术及其应用

随着分子生物学和生物技术的发展，基因治疗（genetherapy）已由理想逐步变为现实。基因治疗的原理是将一种专门的目的基因转移到某种靶细胞上。在遗传性疾病中，将患者所缺乏的某种基因转移给患者；在获得性疾病中，将某种目的基因导人肿瘤细胞，使其对放疗或化疗更敏感，或给冠脉疾病患者转移一种可编码具有抗凝作用的蛋白基因等等。无论是遗传性疾病还是获得性疾病。基因治疗技术的关键是选择靶细胞和递送基因的载体。有些疾病，对靶细胞的特异性要求高，如纤维囊泡症及镰形细胞病的靶细胞分别是呼吸道上皮细胞和幼红细胞。而许多基因缺…     

基于间充质干细胞的胃癌基因治疗研究

胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一,进展期胃癌预后差,生存率低,近年来基因治疗逐渐兴起,有望成为肿瘤治疗新手段。有研究提示适于作为基因治疗的载体。本文将就其在胃癌治疗方面研究进展及相关机制进行综述,并提出有关此方面研究现有的挑战及思考。     

造血干细胞基因治疗的研究进展

由于造血干细胞具有高度自我更新能力 ,且能分化产生各系血细胞 ,将基因转导至造血干细胞 ,能使转导基因终生存在于血细胞内 ,故造血细胞成为基因治疗的理想靶细胞。逆转录病毒是目前造血细胞基因转导最主要的载体系统 ,它能有效地将外源基因整合到宿主基因组中 ,使外源基因稳定表达而不丢失〔1〕。在 2 0世纪 80年代早期 ,以小鼠白血病病毒(MLV)为基础的逆转录病毒载体引进不久 ,就成功地将基因转导至鼠造血干细胞中 ,并在子代细胞中有效稳定的表达。之后 ,人们设想人造血干细胞基因治疗将成为现实。造血干细胞基因治疗的主要目标是使转…     

肺癌的基因治疗

肺癌的发生是癌基因激活和抑癌基因失活的结果。肺癌基因治疗已进入临床试验阶段。本文简要介绍目前肺癌基因治疗中采用的主要几种方法，其中免疫法，抑癌基因疗法，药物敏感基因疗法，抗肿瘤血管疗法已初步显示对改善中，晚期肺癌患者的预后具有极大的潜力。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因治疗结肠癌的研究

目的：观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk),丙氧鸟苷(GCv)自杀基因治疗系统在体内外对结肠癌的杀伤效应。方法：构建携带HSV-tk基因的逆转录病毒载体,将该重组逆转录病毒感染结肠癌细胞株SW480,筛选稳定表达tk的细胞克隆SW480／tk,测定SW480／tk细胞在体外对GCV的敏感性;SW480／tk细胞在裸鼠皮下成瘤,用GCV治疗并观察疗效。结果：HSV-tk基因整合入SW480细胞并在SW480／tk细胞中稳定表达;GCV在体外对SW480／tk细胞有明显的杀伤作用,其作用呈现剂量和时间依赖性特点和旁杀伤效应,对未转染细胞则无明显毒性。裸鼠ex vivo实验得到相应结果,治疗组肿瘤受到明显抑制。结论 在in vitra和ex vivo水平,表达HSV-tk基因的肿瘤细胞均可被GCV有效杀伤,逆转录病毒介导HSV-tk/GCV自杀基因治疗系统有可能成为结肠癌的有效治疗方法。     

半随病毒载体介导帕金森病基因治疗的实验研究

一、材料和方法　　 1.腺伴随病毒 (ａｄｅｎｏ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ,ＡＡＶ)载体的制备 :酪氨酸羟化酶 (ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ,ＴＨ)质粒〔芳香族氨基酸脱羧酶 (ａｒｏｍａｔｉｃａｍｉｎｏ ａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｌａｓｅ ,ＡＡＤＣ)或三磷酸鸟苷环水解酶Ｉ(ＧＴＰｃｙｃｌｏｈｙｄｒｏｌａｓｅＩ,ＧＣＨ)质粒〕是ＡＡＶ基因组反向末端重复序列之间依次含巨细胞病毒早期响应启动因子、人类生长激素第 1内含子、人源性ＴＨ(ＡＡＤＣ或ＧＣＨ)基因、ＳＶ40多聚腺苷信号的载体质粒。以磷酸钙沉积法共转染载…     

肝移植与基因治疗

基因治疗在基础及临床研究方面都取得了很大进展,目前基因治疗应用于动物肝移植的实验研究已经具有可行性,正应用于研究移植物排异反应的机制,并有可能成为诱导免疫耐受的有效方法,对供肝或受才进行基因治疗有望在减少急慢性异反应、提高移植存活时间等方面取得突破。     

白细胞介素-2基因转导人胃癌细胞的实验研究

为研究白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因转导人胃癌细胞的可行性和有效性，用真核表达载体，将人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转导入人胃癌细胞株ＳＧＣ－７９０１细胞表达，并观察了基因转导和表达对胃癌细胞体外生长特性和ＬＡＫ细胞的肿瘤杀伤作用的影响，以及基因转导细胞的体内致瘤性。结果表明，人ＩＬ－２ｃＤＮＡ可以转导入人胃癌细胞，并表达有活性的ＩＬ－２，基因转导不改变胃癌细胞的体外生长特性，并能增强ＬＡＫ细胞的肿瘤杀伤作用，降低或消除胃癌细胞的体内致瘤性。本研究结果提示：ＩＬ－２基因转导胃癌细胞可能是防治胃癌的有效方法。     

顺铂鱼肝油酸钠配伍治疗胃癌的实验研究

用ＭＴＴ法观察顺铂（ＣＤＤＰ）与鱼肝油酸钠（ＳＭ）配伍对人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１的体外杀伤效果。人胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１被接种于裸鼠皮下以建立荷瘤裸鼠。ＣＤ－ＤＰ每次３ｍｇ·ｋｇ~（－１）·ｔｉｍｅ~（－１），ＳＭ：５０ｍｇ·ｋｇ~（－１）·ｔｉｍｅ~（－１），容量：５０μｌ，肿瘤组织中心注射。配伍组肿瘤ＳＭ和ＣＤＤＰ交叉给药，两药间隔３０分钟，每３天１次，共３次。ＳＭ在体外对胃癌细胞有很强的杀伤作用；局部注射后，配伍组的抗癌作用明显高干各单一药物组，肿瘤细胞全部坏死，周围有纤维组织包绕，血管内皮细胞坏死。ＳＭ与ＣＤＤＰ协同抗肿瘤作用明显。     

黄菊液雾浴治疗兔实验性单纯疱疹病毒角膜炎研究

目的　证实用黄菊液雾浴法治疗家兔实验性单纯疱疹病毒Ⅰ型 (HSV -Ⅰ )角膜炎的效果。方法　以HSV -Ⅰ感染家兔眼角膜 ,用黄菊液进行雾浴治疗 ,分别用裂隙灯检查和扫描电镜观察病变情况 ,并与对照组比较。结果与结论　治疗组与对照组差别明显 ,黄菊液雾浴治疗单纯疱疹病毒性角膜炎具有良好的效果。     

胃癌组织p170基因表达的研究

为研究糖蛋白ｐ１７０基因在胃癌中的表达，对８０例内镜活检及术后确诊的胃癌组织用抗生物素－过氧化酶复合物进行免疫组化染色研究。结果，胃癌组织中ｐ１７０基因表达均增强，其阳性率达６６％及７１％，并且阳性表达与胃癌组织学类型及分化程度有一定关系，管状腺癌中ｐ１７０阳性表达率高，高、中分化腺癌高于低分化、粘液腺癌、乳头状腺癌等。其分布形式基本相似，主要位于细胞浆内，其次在细胞膜内，细胞核内偶见，癌旁组织也有较强阳性表达。在转移淋巴结组中阳性表达显著高于非转移淋巴结组，提示ｐ１７０与胃癌转移密切相关。结果显示糖蛋白Ｐ１７０在胃癌组织中的表达有可能成为一种新的肿瘤标志物。     

胃癌组织p170基因表达的研究

为研究糖蛋白ｐ１７０基因在胃癌中的表达，对８０例内镜活检及术后确诊的胃癌组织用抗生物素—过氧化酶复合物进行免疫组化染色研究。结果，胃癌组织中ｐ１７０基因表达均增强，其阳性率达６６％及７１％，并且阳性表达与胃癌组织学类型及分化程度有一定关系，管状腺癌中ｐ１７０阳性表达率高，高、中分化腺癌高于低分化、粘液腺癌、乳头状腺癌等。其分布形式基本相似，主要位于细胞浆内，其次在细胞膜内，细胞核内偶见，癌旁组织也有较强阳性表达。在转移淋巴结组中阳性表达显著高于非转移淋巴结组，提示ｐ１７０与胃癌转移密切相关。结果显示糖蛋白ｐ１７０在胃癌组织中的表达有可能成为一种新的肿瘤标志物。     

局部注射化疗药治疗胃癌的动物实验研究

以人胃癌细胞ＳＧＣ─７９０１接种于裸鼠大腿皮下复制裸鼠人胃癌模型，采用１３９─３在肿瘤局部注射给药，观察对肿瘤生长的抑制作用，同时与油酸多相脂质体，５─Ｆｕ及生理盐水作对照，结果表明：１３９─３局注的抗肿瘤效果明显优于１３９─１和５─Ｆｕ单独使用。组织学检查发现１３９─３局注除引起肿瘤细胞变性坏死外，局部还有巨噬细胞浸润，表明１３９─３局注增强了局部抗肿瘤免疫功能。本文采用１３９─３局注治疗，未发现动物有饮食，精神状态及皮肤改变，组织学检查未发现对正常组织有损伤。     

老年病人胰腺癌围手术期的监护治疗

目的探讨老年胰腺癌病人的围手术期处理方法。方法回顾性分析我院普外科从2002年6月至2004年4月手术治疗的36例胰腺癌病例,按年龄将病人分成老年组和中年组,分别对比两组病人围手术期的生命体征变化,提出围手术期的治疗方案。结果老年组病人的生命体征在手术前后具有显著性差异,老年组病人手术后的心肺功能异常发生率为70.83%,相对中年组有显著性差异(P<0.01)。结论胰腺癌手术复杂,创伤大,对老年病人更容易产生心肺功能异常和并发症,需要在围手术期各个阶段认真对待。     

国产丙硫咪唑治疗实验性包虫病与17例肝包虫病的初步观察

对实验感染的泡球蚴病小鼠,以丙硫咪唑50mg/k/d给药30～70天。治后虫囊重量较对照组降低75.7～78.9％。实验感染的细粒棘球蚴病小鼠给予相同剂量40～50天,囊重降低48.8～55.4％。从组织学与超微结构观察到囊壁发生退化变性,但虫囊再移植后均生长良好。 13例肝CE与4例肝AE患者,给服丙硫咪唑18mg/k/d。连服30天一疗程,间隔15天后重复给药3～13(平均5.6)疗程。治后6～13个月复查。CE病人中2例治愈,9例获部分有效或改善,2例失败。AE病人中,2例部分有效,2例改善。本文证实该药治疗包虫病有一定效果。