食管腺癌与鳞癌中H-ras12位点突变与P53 Exon 4杂合缺失探讨

应用ＰＣＲ／ＲＦＬＰ、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ方法对２２例食管癌及癌旁组织（８例腺癌、１４例鳞癌）Ｈ－ｒａｓ１２位点突变、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失规律进行了探讨。结果发现，２２例食管癌组织中发生Ｈ－ｒａｓ１２位点突变６例（６／２２、２７．２％）、Ｐ５３Ｅｘｏｎ４杂合缺失５例（５／２２、２２．７％），与癌旁组织比有显著差异（Ｐ＜０．０１）。８例腺癌与１４例鳞癌中两种基因变化无差异。两种基因改变在食管癌标本中散在分布，无标本同时具有两种基因变化。Ｈ－ｒａｓ改变与Ｐ５３缺失相比无明显优势表现，反之亦然。研究表明，二种基因的改变可能在食管癌的的致病过程中起协同作用，也可能受不同致病因子影响而有不同表现。Ｈ－ｒａｓ基因突变、Ｐ５３基因杂合缺失可能是食管癌癌变机理之一。     

p53基因突变及p53、APC基因缺失与胃癌关系的研究

为明确ｐ５３基因突变、缺失，ＡＰＣ基因缺失在胃癌发病机制中的作用，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对抑癌基因ｐ５３第４、５、６、７、８外显子、第６内含子在８７例胃癌及癌前病变中的突变规律以及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对ｐ５３基因第４外显子、第６内含子、ＡＰＣ基因在２５对胃癌及癌旁组织中的杂合缺失规律进行了探讨。结果发现，ｐ５３突变率在肠化、不典型增生、胃癌分别为３７．５％ （３／８），４２．１％（８／１９），５３．３％（１６／３０）。正常组织、浅表胃炎未发现ｐ５３突变。肠化、不典型增生、胃癌与正常对照组、浅表胃炎组相比均存在显著差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０１）。在肠化、不典型增生病变中未发现Ｅｘｏｎ８的突变，而在胃癌组Ｅｘｏｎ８的突变为４例（４／３０），提示Ｅｘｏｎ８的突变主要发生在晚期。在各病变组未发现Ｅｘｏｎ４、Ｉｎｔｒｏｎ６的突变。对Ｅｘｏｎ４、Ｉｎｔｒｏｎ６、ＡＰＣ基因的杂合缺失研究表明，２５对胃癌标本中有１９对Ｅｘｏｎ４杂合子，杂合率为７６．０％，９对有杂合缺失，ＬＯＨ为４７．４％，２３对Ｉｎｔｒｏｎ６杂合子，杂合率为９２．０％，其中２对为杂合缺失，ＬＯＨ为８．７％，１８对ＡＰＣ杂合子（１８／２５     

p53基因突变及p53,APC基因缺失与胃癌关系的研究

为明确ｐ５３基因突变，缺失，ＡＰＣ基因缺失在胃癌发病机制中的作用，应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对抑癌基因ｐ５３第４，５，６，７，８外显子，第６内含子在８７例胃癌及癌前病变中的突变规律以及ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法对ｐ５３基因第４外显子，第６内含子，ＡＰＣ基因在２５对胃癌及癌旁组织的杂合缺失规律进行了探讨，结果发同，ｐ５３突变率在肠化，不典型增生，胃癌分别为３７．５％（３／８），４２．１％（８／１９），５３．     

胃Hp感染与癌前病变癌基因和抑癌基因表达的关系

目的研究Ｈｐ感染与胃癌及癌前病变中ｃｍｙｃ，ｐ２１，ｐ５３增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的相互关系，以探讨Ｈｐ可能的致癌机制．方法经内镜和病理诊断明确的病变者共１２０例，包括慢性浅表性胃炎（ＣＳＧ）、肠上皮化生、不典型增生、胃癌各３０例．以ＡＢＣ免疫组化法检测上述标本中ｃｍｙｃ，ｐ２１，ｐ５３，ＰＣＮＡ的表达，以改良Ｇｉｅｍｓａ法检测Ｈｐ．各组比较用χ２检验．结果肠型胃癌Ｈｐ阳性率为８３３％（２０／２４），弥漫型６例中Ｈｐ阳性１例．非贲门部胃癌阳性率为７３９％（１７／２３），贲门癌７例中阳性３例．胃癌Ｈｐ阳性率（６６７％）与ＣＳＧ（３３３％）比较差异非常显著（Ｐ＜００１）．各组Ｈｐ阳性的ｃｍｙｃ，ｐ２１，ｐ５３，ＰＣＮＡ与其Ｈｐ阴性者作相应比较均有显著或非常显著性差异（Ｐ＜００５～００１）．结论Ｈｐ感染与肠型胃癌的关系更密切，更容易发生于非贲门部．Ｈｐ感染可增加细胞的增殖活性，并通过使抑癌基因失活及癌基因激活而引起胃癌     

幽门螺杆菌cagA基因株与胃癌p53,bcl—2表达的研究

目的　通过研究幽门螺杆菌（Ｈｐ）及细胞毒蛋白相关基因Ａ 株〔ｃａｇＡ（＋ ）株〕感染与胃癌组织ｐ５３、ｂｃｌ２ 表达的相互关系，以探讨Ｈｐ 的可能致癌机制。　方法　聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测９２ 例胃癌和２４ 例浅表胃炎组织石蜡标本Ｈｐ 和ｃａｇＡ（＋ ）株感染。用免疫组化方法检测全部标本的ｐ５３、ｂｃｌ２ 表达。　结果　（１）Ｈｐ 感染在胃癌和浅表胃炎病例间差异无显著性（７９４％ 及６６７％ ，Ｐ＞ ００５），而ｃａｇＡ（＋ ）株感染前者高于后者（９３２％ 及５００％ ，Ｐ＜ ００１）；（２）ｐ５３、ｂｃｌ２ 的表达在Ｈｐ（＋ ）与Ｈｐ（－ ）组之间差异无显著性，而ｃａｇＡ（＋ ）株感染组均显著高于ｃａｇＡ（－ ）株组（Ｐ＜００１）。　结论　胃癌的发生可能与不同Ｈｐ 菌株感染有关。产生细胞毒素的Ｈｐ 菌株〔ｃａｇＡ（＋ ）株〕与胃癌关系更密切，它可能是导致ｐ５３ 基因突变和ｂｃｌ２基因过度表达的原因之一。     

胃癌P53基因突变的检测及其意义

胃癌ｐ５３基因突变的检测及其意义何向民赵莹刘春荣张学孙开来应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析法对３０例胃癌组织及癌旁正常组织进行ｐ５３基因第５－６、第７外显子突变的检测，旨在探索ｐ５３基因突变与胃癌的相互关系。一、材料和方法１．...     

胃粘膜癌变过程中幽门螺杆菌感染与p53,c-erbB-2基因表达的研究

目的探讨胃粘膜癌变过程中幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ）感染与ｐ５３,ｃｅｒｂＢ２基因表达的关系．方法浅表性胃炎１６例,肠上皮化生２２例,异型增生１４例,早期胃癌１８例及进展期胃癌４０例作为研究对象．用ＷａｒｔｈｉｎＳｔａｒｙ银染色法检测Ｈｐ,用免疫组化Ｓｐ法检测ｐ５３和ｃｅｒｂＢ２的基因表达产物．结果Ｈｐ,ｐ５３,ｃｅｒｂＢ２在浅表性胃炎的检出率各为５００％,００％,００％;在肠上皮化生的检出率各为５９１％,２２７％,１３６％;在异型增生的检出率各为８５７％,６４３％,２８６％;在早期胃癌的检出率各为１６７％,３３３％,１１１％;在进展期胃癌的检出率各为５０％,５２５％,５５０％;在癌旁粘膜的Ｈｐ检出率为８６７％;在癌前病变中,Ｈｐ阳性组的ｐ５３,ｃｅｒｂＢ２表达率均高于Ｈｐ阴性组．结论Ｈｐ感染参与了胃癌前病变的发生与发展;Ｈｐ感染可引起野生型ｐ５３基因失活和ｃｅｒｂＢ２基因激活,从而导致胃粘膜的癌变．     

肝细胞癌抑癌基因p53异常的研究

目的：分析我国重庆地区肝细胞癌ｐ５３基因失活机制及突变谱，方法：采用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ直接测序技术对来自我国重庆地区２８例肝细胞ｐ５３抑癌基因结构异常进行了分析。结果，６１．５％的肝癌存在的ｐ５３基因的杂合缺失；５０％肝癌伴有ｐ５３基因突变，其突变模式为突变散在于５，６，７和８外显子，其中第７外显子２４９位密码子突变率最高（２１％）；具有突变的肝癌多同时伴有缺失，伴有ｐ５３     

大肠肿瘤癌旁淋巴结p53基因检测的临床意义

目的：探讨癌旁淋巴结ｐ５３基因检测与Ｄｕｋｅｓ Ｂ期大肠肿瘤患者临床预后的关系。材料与方法：３０例Ｄｕｋｅｓ Ｂ期大肠肿瘤患者，取癌灶组织、癌旁淋巴结组织及远切端正常大肠粘膜组织，选用ＰＣＲＳＳＣＰ（聚合酶链反应－单链构像多态性）法行ｐ５３基因第５～８外显子检测，同时进行临床随访。结果：３０例患者中，ｐ５３基因突变率为４３．３％（１３／３０），有癌旁淋巴结ｐ５３基因突变的大肠肿瘤患者局部复发率明显高于未突变者（８０％比１２％，Ｐ＜０．０５）。结论：癌旁淋巴结ｐ５３基因检测将有助于发现病理检查中所不能发现的微转移灶和准确判断预后。     

原发肝细胞癌N—ras基因突变,APC和DCC基因杂合缺失研究

目的 了解Ｎ－ｒａｓ基因突变。ＡＰＣ和ＤＣＣ基因杂合性缺失在原发性肝癌发生发展中的作用，方法 采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态观察（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分析技术，对３０例外科手术切除原发肝细胞癌组织中癌基因Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子突变，抑癌基因ＡＰＣ和ＤＣＣ杂合缺失（ＬＯＨ）进行研究。结果 原发肝癌中Ｎ－ｒａｓ第１２位密码子的突变率为１６．７％（５／３０），ＡＰＣ和ＤＣＣ基因ＬＯＨ率分别为３６．     

Hp感染与胃癌和癌前病变中p53、ras、c-myc基因表达的关系

目的研究幽门螺杆菌（Hp）感染与胃癌（GC）和癌前病变中p53、ras、c-myc基因表达的关系,以探讨其致病机制。方法用美兰和W-S特殊染色方法确定Hp感染,免疫组化SP法检测p53、ras、c-myc基因的表达。结果慢性萎缩性胃炎（CAG）、肠化生（IM）、异型增生（DYS）、GC的Hp感染率均高于慢性浅表性胃炎（CSG）（P均〈0.05）;p53、ras、c-myc基因在GC、DYS中的表达均高于CAG（P均〈0.05）,p53、ras基因在IM中的表达均高于CAG（P〈0.05）;IM中Hp阳性者的p53阳性表达率高于Hp阴性者（P〈0.05）,DYS、GC中Hp阳性者p53、ras、c-myc的表达率高于Hp阴性者（P均〈0.05）。结论Hp感染可能通过调节p53、ras、c-myc基因的表达而促进GC的发生。     

幽门螺杆菌flaA基因的变异

目的鞭毛是幽门螺杆菌（Ｈｐ）的重要侵袭因子,本研究拟检测Ｈｐ鞭毛素Ａ基因的变异性,进而研究其与Ｈｐ致病性的关系．方法我们对５２例胃粘膜活检标本和１８株Ｈｐ临床分离株进行Ｈｐ特异的１６ＳｒＲＮＡ基因和鞭毛素Ａ基因ＰＣＲ扩增和ＰＣＲＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰＳＳＣＰ分析．结果对４３例Ｈｐ（＋）的ｆｌａＡ基因ＰＣＲＲＦＬＰ（ＨｉｎｄⅢ）大约可分７个型（变异检出率为１６３％）,而ＰＣＲＲＦＬＰＳＳＣＰ可分３７个型（变异检出率为８６０％）,两者有非常显著性差异．结论ｆｌａＡ基因变异性极大,ＰＣＲＲＦＬＰＳＳＣＰ优于ＰＣＲＲＦＬＰ,是检测其变异的有效方法．     

痰液癌基因突变的检测在肺癌诊断中的应用

目的从分子生物学检测角度来寻求敏感的肺癌诊断新方法。方法应用多聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性长度片段多态性分析法（ＲＦＬＰ）及免疫组化技术（ＩＨＣ），检测６２例肺癌和３４例肺部良性疾病患者痰标本中ｋｒａｓ、ｐ５３基因的突变状况，检测结果与组织学、脱落细胞学诊断进行对比分析。结果肺癌痰标本的脱落细胞学敏感性为６１％、阴性预计值（ＮＰＶ）为５９％；ｐ５３阳性表达的敏感性为７７％、ＮＰＶ为６６％；ｋｒａｓ变异阳性的敏感性为３４％、ＮＰＶ为４２％；ｐ５３、ｋｒａｓ和痰脱落细胞学联合检测：敏感性提高至９２％（Ｐ＜０．０５）、ＮＰＶ为８４％（Ｐ＜０．０５）。２４例痰细胞学假阴性痰标本中ｐ５３或ｋｒａｓ变异阳性１７例（７１％）。结论痰标本ｐ５３、ｋｒａｓ的联合检测可增加痰检的敏感性，补充和提高脱落细胞学的诊断价值。     

幽门螺杆菌感染与胃癌组织p16基因变异的关系

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp)感染与胃癌组织p16基因变异的关系。方法43例胃癌患者的新鲜癌手术标本、相应的癌旁正常组织及血清标本为本组研究对象,分别采用PCR及银染PCR－SSC癌组织p16基因的纯合性缺失及突变情况;幽门螺杆菌感染状况通过PCR及血清学试验确定。结果（1）43例胃癌中,Hp阳性30例,阳性率为69．77％,其中CagA阳性24例,阳性率为80％。（2）30例Hp阳性胃癌中,有12例发生p16基因变异,发生率为40％;13例Hp阴性胃癌中,4例p16基因发生变异,发生率为30．77％,Hp阳性组与阴性组相比较p16基因变异率差异无显著性（P＞0．05）。（3）30例Hp阳性胃癌中,CagA阳性与阴性组p16基因变异率分别为41．67％（10．24）及33．33％（2／6）,两组变异率比较差异无显著（P＞0．05）。结论Hp及CagA阳性Hp感染与胃癌组织p16基因变异无显著相关性,Hp感染可能不是其改变或必须因素。     

幽门螺杆菌感染与胃癌及癌前病变中c-myc、p53、C-erbB-2及bcl-2蛋白表达关系的研究

目的 观察胃癌、癌前病变中幽门螺杆菌(Hp)感染情况及其与c-myc、p53、c-erbB-2、bcl-2在胃癌及癌前病变中的表达关系,探讨Hp在胃癌、癌前病变发生及发展中的作用以及探索从癌前病变到癌变过程中的基因变化规律.方法 放大内镜及超声内镜检查收集103例胃黏膜标本,用免疫组织化学染色方法检测Hp感染及不同组织间c-myc、p53、c-erbB-2、bcl-2的表达.结果 c-myc、p53、c-erbB-2和bcl-2阳性表达率在胃癌组及癌前病变组中呈过度表达,与正常对照组相比有显著性差异(P<0.05).此外,Hp感染组c-myc、p53、c-erbB-2及bcl-2同时表达者为5例(9.4%);与无Hp感染组相比有显著性差异(P<0.01).结论 胃癌及癌前病变中组织存在c-myc、p53、c-erbB-2、bel-2多个表达,与Hp感染密切相关.     

幽门螺杆菌相关胃疾病组织中P53、iNOS的表达

目的通过检测慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃癌组织幽门螺杆菌（Hp）和P53、一氧化氮合成酶（iNOS），探讨Hp感染与P53、iNOS表达的关系，以及Hp感染导致胃癌的可能分子机制。方法应用快速尿素酶试验和组织切片革兰氏染色和血清HpCagA抗体检测Hp，用免疫组化SP法检测上述组织的P53、iNOS。结果慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃癌组织中Hp检出率分别为45．9％、68．4％、71．4％、75．O％、54．8％，病变各组中P53和iNOS表达阳性率与浅表性胃炎组比较均有显著性差异。除浅表性胃炎组、萎缩性胃炎Hp阳性组的P53表达阳性率外，各病变Hp阳性组的P53和iNOS表达阳性率与各组的Hp感染阳性率呈正相关，各病变组中Hp（＋）组的P53和iNOS表达阳性率显著高于Hp（-）组，均有显著性差异。结论Hp与P53和iNOS阳性表达有一定的相关性。     

Aberrant DNA methylation in non-neoplastic gastric mucosa of H. Pylori infected patients and effect of eradication

BACKGROUND: Gene promoter methylation is an epigenetic event leading to gene silencing. This mechanism is particularly relevant in cancer since it can interfere with the activity of specific "suppressor" genes. AIM: To evaluate promoter methylation of CDH1, p16, APC, MLH1, and COX2 in patients with H. pylori (Hp) infection before and after eradication. METHODS: Fifty-seven dyspeptic outpatients who had never performed previous endoscopy or Hp testing and treatment underwent clinical interview, endoscopy with three paired gastric biopsy specimens from the antrum, angulus, and corpus, and (13)C-urea breath test (UBT). Biopsies were scored for the presence of Hp and intestinal metaplasia (IM). DNA methylation of five tumor-related genes (CDH1, p16, MLH1, APC, and COX2) was evaluated by methylation-specific PCR in each biopsy. Infected patients were given a standard eradicating treatment and, after 1 yr, underwent endoscopy with biopsies and UBT. RESULTS: Hp infection was found in 45 patients. IM was detected in 17 out of 45 (38%) infected patients. Mean number of methylated genes was 0, 1.1 +/- 0.9, and 1.6 +/- 0.9 among the 12 Hp-/IM-, the 28 Hp+/IM-, and the 17 Hp+/IM+ patients, respectively (P < 0.0001). Specifically, promoter hypermethylation of CDH1, p16, APC, MLH1, and COX2 was found in 68%, 25%, 7%, 0%, and 14% of Hp+/IM- patients and in 71%, 29%, 35%, 12%, and 12% of Hp+/IM+ patients. No significant difference was found among the three groups of patients as far as age, smoking, alcohol, meat and vegetable consumption, and family history of gastric cancer were considered. Twenty-three out of 45 (51%) infected patients underwent the 1-yr follow-up endoscopy: 17 out of 23 (74%) were successfully eradicated. After Hp eradication, CDH1, p16, and APC methylation significantly decreased while COX2 methylation completely disappeared. Conversely, MLH1 methylation did not change significantly in patients with IM. CONCLUSION: Hp infection is associated with promoter methylation of genes which are relevant in the initiation and progression of gastric carcinogenesis. While CDH1 methylation seems to be an early event in Hp gastritis, MLH1 methylation occurs late along with IM. Hp eradication is able to significantly reduce gene methylation thus delaying or reversing Hp-induced gastric carcinogenesis.     

胃癌、癌旁组织中抑癌基因和凋亡调节基因表达及其内在关系

目的 研究胃癌、癌旁组织中抑癌基因ｐ５３、ｐ１６和关键性凋亡调节基因ｂｃｌ－２蛋白的表达及其内在的关系,进一步探讨胃癌发病可能的分子机制。方法 术中取３０例胃癌患者的癌组织,癌旁组织各２块,石蜡包埋,切片分别作ＨＥ染色病理检查及免疫组织化学检查ｐ５３、ｐ１６、ｂｃｌ－２基因蛋白表达。结果 ｐ５３、ｐ１６和ｂｃｌ－２表达与胃癌分期、分化程度及有无淋巴结转移均无显著关系（Ｐ〉０．０５）,但ｂｃｌ－２与