低表达DJ-1调控PI3K/AKT通路对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨低表达DJ-1对肺癌细胞增殖凋亡及PI3K/AKT通路的影响。方法:采用Western blot检测肺癌细胞系中DJ-1蛋白的表达;以脂质体法转染干扰SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达后,MTT法检测细胞的增殖变化,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达水平;将PI3K/AKT通路抑制剂LY294002处理SK-MES-1细胞48 h后,MTT法和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测细胞中p-AKT和AKT蛋白的表达。结果:与正常肺上皮BEAS-2B细胞相比,肺腺癌A549细胞和肺鳞癌SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的相对表达量均显著升高,且SK-MES-1细胞中DJ-1蛋白的表达量高于A549细胞,差异均有统计学意义（P＜0.05）。转染后siRNA DJ-1组细胞中DJ-1蛋白的表达量明显低于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,转染24 h后siRNA DJ-1组细胞的吸光值（OD值）变化不显著（P＞0.05）,而转染48 h和72 h后细胞的OD值明显降低（P＜0.05）;转染48 h后,与对照组相比,siRNA DJ-1组细胞的凋亡率显著升高（P＜0.05）,p-AKT/AKT值显著降低（P＜0.05）。SK-MES-1细胞经抑制剂LY294002处理48 h后,细胞的增殖凋亡趋势与下调DJ-1表达的结果相一致。结论:DJ-1在肺癌细胞中高表达,下调其表达能够抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

L-精氨酸抑制人肺腺癌A549细胞增殖及对PI3K/Akt信号通路的影响北大核心CSCD

目的探讨L-精氨酸(L-Arginine,L-Arg)对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法不同浓度L-Arg(16、32、64、96、128 mmol/L)、不同时间(24、36、48 h)条件下处理A549细胞,MTT检测细胞增殖,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期进程,Western blot检测PI3K/Akt(phosphatidylinositol-3-kinases/Akt)信号通路活化状态。结果(1)L-Arg能显著抑制A549细胞增殖,其效果与浓度及时间有关(P<0.05);(2)显微镜结果显示,与对照组比较,随着L-Arg浓度的增高,细胞数目降低,细胞形态变得不规则;(3)高浓度L-Arg在48 h促进细胞凋亡作用最强,阻滞细胞周期在G_0/G_1期最明显(P<0.05);(4)L-Arg浓度越高,p-Akt S473磷酸化越低(P<0.05),凋亡蛋白Cleaved Caspase-3和Bad表达越强(P<0.05)。结论 L-Arg可抑制A549细胞增殖,诱导凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路激活受限、上调Cleaved Caspase-3、Bad蛋白表达有关。     

ABL2在肺癌中的作用及机制研究

目的 探究ABL2在肺癌中的作用及其机制。方法 采用Realtime PCR方法检测ABL2在肺癌组织和癌旁组织中的表达情况。然后建立稳定低表达ABL2的肺腺癌A549细胞株;通过MTT、细胞迁移和克隆形成实验检测细胞增殖和迁移能力的变化情况;Western blot检测EMT、凋亡和PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果 肺癌组织中ABL2的表达水平明显高于癌旁组织(P＜0.001)。在A549细胞系中沉默ABL2后,与对照组相比,48 h后细胞的迁移能力减弱(P＜0.001),从第3天开始细胞的生长速度开始明显减缓(P＜0.05),15天后形成的平均克隆数也减少(P＜0.01)。Western blot结果显示,沉默ABL2后上皮细胞标志物E-cadherin表达升高(P＜0.001),间质细胞标志物N-cadherin(P＜0.001)、Vimentin(P＜0.01)及Snail(P＜0.001)表达降低。凋亡相关蛋白Bcl-XL表达下降(P＜0.01),BAX表达上调(P＜0.001)。PI3K/AKT信号通路相关蛋白PI3K P110(P＜0.05)、AKT(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)蛋白的表达都明显降低。结论 沉默ABL2基因能够通过PI3K/AKT信号通路促进细胞凋亡,抑制肺癌细胞的增殖和迁移。     

人肺腺癌耐顺铂细胞A549/CDDP获得侵袭转移能力的分子机制

目的:研究人肺腺癌耐顺铂细胞A549/CDDP获得侵袭转移能力的分子机制。方法:细胞划痕实验和Transwell侵袭实验比较A549和A549/CDDP的转移侵袭能力的差别,以及LY294002对A549/CDDP侵袭转移能力的影响。蛋白质免疫印迹技术检测AKT,NF-κB,STAT3信号通路的激活情况,MTT法检测A549和A549/CDDP对顺铂的敏感性,以及PI3K/AKT通路抑制剂LY294002对A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性的影响。结果:A549/CDDP对顺铂的耐药性以及侵袭转移能力相对于A549有明显增强。Western blot结果表明:A549/CDDP细胞AKT通路被激活,NF-κB,STAT3通路没有明显变化。LY294002能够明显抑制A549/CDDP的侵袭转移能力并且能够提高A549/CDDP对于顺铂的敏感性。结论:A549/CDDP细胞相对于A549细胞的侵袭转移能力明显增强,其机制与PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

亚砷酸诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对MAPK/ERK信号通路的影响

目的探讨亚砷酸对肺腺癌A549细胞凋亡、MAPK/ERK信号通路的影响及其作用机制。方法体外培养肺腺癌A549细胞,实验组采用不同浓度(1、3、6μmol/L)亚砷酸处理,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体,Western blotting检测Bcl-2、Bax、p53、Caspase-3及MAPK/ERK信号通路相关蛋白表达水平,RT-PCR检测PCNA、CDK2、CyclinA1表达量。结果实验组肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡率、凋亡小体数量随着亚砷酸处理时间延长而降低,且存在剂量反应效应(P0.05);Western blotting结果显示,实验组肺腺癌A549细胞中Bax、p53、Caspase-3、p-JNK/JNK及p38蛋白水平高于对照组,而Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白含量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P0.05);RT-PCR结果显示实验组肺腺癌A549细胞PCNA、CDK2、CyclinA1表达量低于对照组,均呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸可以通过下调细胞周期基因水平、上调细胞凋亡相关因子含量、降低MAPK/ERK信号传导,来诱导肺腺癌A549细胞凋亡。     

LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响

目的：观察应用PI3K抑制剂2- （4-吗啉基） -8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮 （LY294002） 对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶 （PI3K） /丝氨酸苏氨酸激酶 （AKT） 信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、 侵袭及凋亡等方面的影响。方法： 应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901, 通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、 基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、 基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 细胞周期素 （CyclinD1） 的表达情况。噻唑蓝比色法 （MTT） 和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、 侵袭、 凋亡等变化。结果： 与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、 MMP-2、 MMP-9、 Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达。LY294002组自第2天起生存率明显下降 （P<0.05）。Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组 （81.0±2.65）、 DMSO组 （81.3±1.52）、 LY294002组 （44.6±2.52）, 3组相比较差异具有统计学意义 （F=255.1, P=0.000）。LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期, S期减（P<0.05）, 早期凋亡的细胞数明显增多（F=149.66, P=0.000）。结论： LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂, 靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达, 在体外显著抑制细胞的增殖、 侵袭, 并促进细胞的凋亡, 因此为临床肿瘤防治提供了新思路, 针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径。     

PI3K/AKT信号通路阻断药联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的 探讨采用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制药——LY294002抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路联合小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blot检测细胞中PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2、BAX蛋白表达情况.结果 随着小檗碱作用浓度的增加,DU145细胞的增殖率逐渐降低;不同浓度小檗碱与LY294002联合处理对DU145细胞增殖的抑制作用均较相同浓度小檗碱单独处理增强(P﹤0.05).与空白对照组相比,小檗碱组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).与小檗碱组和空白对照组相比,小檗碱+LY294002组DU145细胞的凋亡率增高(P﹤0.05),G0/G1期细胞所占比例增高(P﹤0.05),PI3K、p-AKT、cyclin D1、bcl-2蛋白表达水平均下调(P﹤0.05),BAX蛋白表达水平上调(P﹤0.05).结论 小檗碱能够抑制DU145细胞增殖,并促进细胞凋亡和细胞周期阻滞,采用LY294002阻断PI3K/AKT信号通路能够明显增强小檗碱对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用.     

苯丁酸钠对体外人肺腺癌细胞A549的影响

目的观察苯丁酸钠（PB）对体外人肺腺癌细胞A549的影响。方法采用MTT法观察不同浓度PB对人肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用,流式细胞术分析不同浓度PB对生长期人肺腺癌细胞A549的细胞周期及凋亡情况的影响。结果 PB作用后人肺腺癌细胞A549的生长缓慢,细胞阻滞于G0/G1期（P〈0.05）,凋亡增加（P〈0.05）,其抑制作用呈时间和浓度依赖性。结论 PB能抑制人肺腺癌细胞A549的生长,促进其凋亡。     

黏蛋白13在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞恶性生物学行为的影响与可能的机制

目的：探讨黏蛋白13(MUC13)在肺腺癌组织中的表达及其对A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及EMT的影响与可能的机制。方法：通过癌症基因组图谱（TCGA）和高通量基因表达（GEO）数据库分析MUC13在肺腺癌组织与正常肺组织、癌旁组织中的差异表达。qPCR法和WB法检测人肺腺癌细胞NCI-H1395、NCI-H1975、H1299、A549和人正常肺上皮细胞BEAS-2B中MUC13 mRNA和蛋白的表达水平。利用si RNA技术敲低A549细胞中MUC13表达,实验分为si-MUC13组、NC组和si-MUC13+IGF-1组。通过克隆形成实验、流式细胞术和Transwell实验分别检测敲低MUC13对A549细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭的影响,WB法检测敲低MUC13对A549细胞上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT等蛋白表达的影响。结果：MUC13 mRNA和蛋白在肺腺癌组织和细胞中均呈高表达（均P<0.01）,选取表达水平较高的A...     

血管内皮细胞中RhoC的表达对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨RhoC在血管内皮细胞中表达对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、侵袭能力的影响及可能机制.方法 构建RhoC shRNA慢病毒载体转染骨髓瘤血管内皮细胞(MVECs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别采用CCK-8试剂盒、流式细胞仪、Transwell实验检测条件培养基对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、细...     

扶正抑瘤汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌增殖、凋亡及自噬

目的 探讨扶正抑瘤汤对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡、自噬以及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 采用不同浓度（12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL、100 mg/mL、200 mg/mL、400 mg/mL）扶正抑瘤汤体外培养非小细胞肺癌A549细胞, CCK-8法测定细胞增殖抑制率;Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平;透射电镜下观察自噬溶酶体形成情况。结果 200 mg/mL和400 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞增殖抑制率增加（均P<0.05）。200 mg/mL扶正抑瘤汤作用后A549细胞侵袭和迁移能力降低（均P<0.05）;细胞凋亡率增加（P<0.05）;Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达水平升高（均P<0.05）,P62蛋白的表达水平降低（P<0.05）;A549细胞自噬溶酶体数量增加;p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白的表达降低（均P<0.05）。结论 扶正抑瘤汤可以抑制A549细胞增殖,并促进细胞凋亡和自噬,可能与PI3K/Akt/mTOR信号通路失活有关,是治疗非小细胞肺癌的潜在药物。     

A549细胞条件培养液激活PI3K-Akt1信号通路促人脐静脉内皮细胞存活

目的:研究肺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium, CM)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)生存活性和凋亡的影响,以及PI3K-Akt信号通路在其中的作用.方法:用制备获得的人肺癌A549细胞CM 培养HUVECs;XTT 法检测HUVECs活性; Hoechst 33258染色,荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学改变;FCM法检测细胞的凋亡率; Western印迹法检测Akt总蛋白和磷酸化Akt蛋白表达.分别用特异性PI3K抑制剂 wortmannin(WT)和针对Akt1基因的siRNA (siAkt1)转染HUVECs, RT-PCR法检测Akt亚型mRNA的表达,并观察上述各指标的变化.结果:在CM刺激后24 h, HUVECs活性明显增强(P=0.037),凋亡率下降(P =0.001).CM呈时间依赖性激活HUVECs Akt磷酸化,CM处理后15 min即显示磷酸化Akt水平增高,30 min达高峰,此后呈下降趋势.WT或siAkt1转染均能阻断前述效应.结论:肺癌A549细胞CM经PI3K-Akt途径促进HUVECs存活并抑制其凋亡,其中Akt1起关键作用.     

Overexpression of FYN suppresses the epithelial-to-mesenchymal transition through down-regulating PI3K/AKT pathway in lung adenocarcinoma

BackgroundTyrosine-protein kinase Fyn (FYN) plays a crucial role in Src family, which participates in the signal transduction of brain nerves and the development and activation of T lymphocytes in physiological conditions. We probed into the roles and mechanisms of FYN in lung adenocarcinoma (LUAD).MethodsCell activity, apoptosis, invasion, and migration were detected by CCK-8, FCM, transwell, and wound-healing assays, respectively. The angiogenesis capacity was evaluated by in vitro angiogenesis test. Relative mRNA and protein expressions were determined by qRT-PCR, Western blot, and immunohistochemistry assays, respectively. Insulin-like growth factors-I (IGF-I) was used as an agonist of PI3K/AKT pathway.ResultsWe demonstrated that FYN expression correlated with LUAD prognosis and was down-regulated in LUAD tissues and LUAD cells. Overexpression of FYN suppressed the cell viability, together with invasion and migration abilities of A549 cells. FYN overexpression accelerated the cell apoptosis and reduced the angiogenesis capacity of A549 cells. Overexpression of FYN suppressed E-cadherin, Vimentin, Snail, and PI3K/AKT expressions in A549 cells. High expression level of FYN reduced the migration and invasion capacities of A549 cells via down-regulating the PI3K/AKT pathway.ConclusionCollectively, our findings reveal that overexpression of FYN inhibits the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) through down-regulating the PI3K/AKT pathway in A549 cells.     

GOLM1调控PI3K/AKT/mTOR信号转导通路促进肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

背景与目的：高尔基体膜蛋白1(Golgi membrane protein 1,GOLM1)在肺腺癌中发挥促癌作用,但对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制尚不明确。探究GOLM1对肺腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法：选取2019年4月—2021年4月在克拉玛依市中心医院行手术切除的肺腺癌患者的癌组织及相应癌旁组织标本各90例,采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织和癌旁组织中GOLM1的表达,并分析肺腺癌组织中GOLM1表达与临床病理学特征的关系。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人肺上皮细胞系BEAS-2B及人肺腺癌H460、A549、PG49、H1299细胞系中GOLM1的表达。取对数生长期的肺腺癌A549细胞,随机分为空白组（细胞未转染）、GOLM1小干扰RNA阴性对照（small interfering RNA negative control,si-NC）组（细胞转染si-NC）、GOLM1小干扰RNA(GOLM1 small interferingRNA,si-GOLM1)组（细胞转染si-GOLM1）、胰岛素样生长因子-1(insulin...