促红细胞生成素对心脏成纤维细胞表型转化的影响及其信号机制

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导培养的乳鼠心脏成纤维细胞(CF)表型转化的影响,以及其可能的信号通路(TGF-β1-TAK1-p38MAPK)在其中的作用.方法 体外分离培养乳鼠心脏成纤维细胞,用10-6 mol/L的AngⅡ诱导培养心脏成纤维细胞表型转化,加入20 kU/L的EPO进行预干预,同时加或不加15 μmol/L的SB203580进行处理,以平滑肌肌动蛋白(SMA)表达作为心脏成纤维细胞表型转化的观察指标,应用免疫组织化学观察心脏成纤维细胞内SMA表达情况;采用实时荧光定量PCR方法检测细胞内信号分子转化生长因子β1(TGF-β1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、转化生长因子激活性激酶1(TAK1)、p38MAPK以及磷酸化的TAK1(p-TAK1)和p-p38MAPK的表达情况.结果 20 kU/L的EPO能有效抑制AngⅡ诱导的CF细胞表型转化,减少CF细胞内α-SMA蛋白的沉积,降低CF表型转化相关信号分子TGF-β1、p-TAK1、TAK1、p-p38MAPK和p38MAPK的活化或表达,且加入SB203580后该作用增强.结论 EPO可抑制AngⅡ诱导的乳鼠心脏成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞,减轻心肌纤维化,并可降低相关信号分子mRNA及蛋白的表达,初步考虑EPO抑制心肌纤维化,减轻心室重构的作用是通过TGF-β1-TAK1-p38MAPK进行的.     

吡格列酮对L6肌细胞脂联素和葡萄糖转运蛋白4表达的影响及其机制研究

建立棕榈酸诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型后,以吡格列酮、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580进行干预.应用Western 印迹法检测脂联素、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达和JNK、p38MAPK磷酸化水平.结果显示,吡格列酮可显著增加胰岛素抵抗状态下L6细胞p38MAPK磷酸化、脂联素和GLUT4蛋白表达(P＜0.05或P＜0.01),降低JNK磷酸化水平(P＜0.01).阻断p38MAPK信号通路后,吡格列酮上调L6细胞GULT4蛋白表达的效应显著降低(P＜0.01),而阻断JNK信号通路却无显著影响(P＞0.05).     

MAPK信号通路在转化生长因子β1诱导心肌成纤维细胞趋化运动中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导心肌成纤维细胞趋化运动中可能的作用机制。方法 培养新生SD大鼠的心肌成纤维细胞,将细胞随机分为空白对照组、TGF-β1组、c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制因子(SP600125,10 μmol/L)组、P38MAPK抑制因子(SB203580,10 μmol/L)组、细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)抑制因子(U0126,10 μmol/L)组,除空白对照组外,其余组均给与10 μg/L TGF-β1及对应抑制因子处理。MTT比色法测定心肌成纤维细胞增殖活性,Transwell小室检测心肌成纤维细胞运动能力,羟脯氨酸试剂盒检测胶原含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌成纤维细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)水平,Western blot检测成纤维细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Col-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平。结果 TGF-β1可明显促进心肌成纤维细胞增殖活性、趋化运动能力及胶原含量,MAPK信号途径抑制因子干预后能够抑制这种增殖及趋化运动,并降低胶原含量(P＜0.05);ELISA结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的MCP-1、PAI-1水平升高(P＜0.05);Western blot结果显示,MAPK信号途径抑制因子能够显著降低TGF-β1处理后导致的α-SMA、Col-1、MMP-9蛋白表达升高(P＜0.05)。结论 TGF-β可能通过激活MAPK信号通路促进心肌成纤维细胞的趋化运动,通过使用MAPK抑制剂能够一定程度的抑制心肌纤维化。     

瑞舒伐他汀对TGF-β1诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及其胶原合成与分泌的作用和机制

目的 探讨瑞舒伐他汀对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及其胶原合成与分泌的作用和可能机制.方法 分离、培养新生SD大鼠的心脏成纤维细胞,采用CCK-8比色法测定细胞数目.用RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达,用ELISA测定Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白含量,用Western blot检测心脏成纤维细胞Akt的蛋白表达.结果 CCK-8比色法显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞增殖;RT-PCR结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达;ELISA结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白分泌;Westernblot结果显示,瑞舒伐他汀能抑制TGF-β1诱导的Akt蛋白表达.结论 瑞舒伐他汀可能通过抑制TGF-β1诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的合成与分泌来抑制TGF-β1诱导的心脏纤维化,其分子机制可能与抑制Akt信号通路有关.     

p38MAPK信号转导通路在EGF诱导食管腺癌SEG-1细胞表达u-PA中的作用

目的:探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对人食管腺癌SEG-1细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,u-PA)mRNA和蛋白表达的影响及p38MAPK信号转导通路在其中的作用.方法:以相同浓度的EGF(100g/L)按时间梯度刺激SEG-1细胞,应用Western blot法测定各时间点总p38MAPK蛋白、磷酸化p38MAPK蛋白、u-PA蛋白表达,并应用RT-PCR方法检测各时间点u-PAmRNA表达.用p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞后,观察上述指标变化.结果:EGF可明显增强SEG-1细胞(u-PA)mRNA和蛋白的表达,并可激活p38MAPK蛋白的磷酸化,具有时间依赖性.SB203580能明显抑制EGF诱导的p38MAPK蛋白的磷酸化,用其阻断p38MAPK信号转导通路后,EGF对u-PAmRNA和蛋白表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性.结论:EGF可通过p38MAPK信号转导通路诱导SEG-1细胞表达u-PA.     

p38 MAPK信号转导通路参与NO诱导兔关节软骨细胞凋亡

目的探讨p38 MAPK信号转导通路在软骨细胞凋亡中的作用。方法体外培养兔关节软骨细胞,一氧化氮(NO)供体NOC-18和p38 MAPK抑制剂SB203580作用于细胞24 h,用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测软骨细胞凋亡率,W estern b lot测定p38、磷酸化p38蛋白的表达水平。结果与对照组比较,SB203580显著降低了NOC-18诱导的软骨细胞凋亡率(P<0.05);NOC-18以浓度依赖的方式促进p38 MAPK的磷酸化,而SB203580能抑制其磷酸化(P<0.05)。结论p38 MAPK通路参与了NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的信号转导。     

p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞上皮-间质转化中的意义

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和c-Jun氨基端激酶（JNK）信号通道在转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人肺泡上皮细胞上皮-间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）中的意义,从而进一步揭示肺纤维化的发病机制.方法 使用TGF-β1诱导A549细胞EMT,分别在蛋白水平（使用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125）和RNA水平（RNA干扰）抑制p38 MAPK和JNK信号通道,检测抑制后A549细胞的p38 MAPK和JNK的蛋白和mRNA,以及间质细胞表型蛋白包括结蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和上皮细胞表型蛋白包括E-钙黏素、紧密连接蛋白-1、水通道蛋白-5的表达.结果 TGF-β1可以诱导A549细胞EMT,表现为间质细胞表型蛋白表达的增加和上皮细胞表型蛋白表达的减少,这一过程p38 MAPK和JNK通道表达也增加,无论蛋白水平抑制或基因沉默p38 MAPK和JNK均可减轻A549细胞的EMT.结论 p38 MAPK和JNK信号通道在TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程中起重要作用.     

复方接骨中药介导MAPK信号通路促进骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化

目的探讨复方接骨中药介导MAPK信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的促进作用。方法取健康雄性SD大鼠60只,随机平均分为实验组和对照组,实验组灌喂复方接骨中药煎剂,对照组灌喂等体积自来水,处理10 d后提取各组大鼠血清。分离BMSCs,利用体积分数为0.1的含药血清及非含药血清单独处理BMSCs 24、48、72 h及联合10μmol/L p38MAPK抑制剂SB203580处理BMSCs 72 h后,MTT检测细胞增殖;RT-PCR及Western印迹检测两组血清单独处理及联合SB203580处理BMSCs 72 h后成骨细胞分化标记基因ALP、BGP、BMP-2的表达;Western印迹检测两组血清处理BMSCs 72 h p38蛋白表达及磷酸化。结果含药血清处理24、48 h,细胞OD值与非含药血清组及对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),第72小时含药血清组细胞OD值显著高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组细胞OD值与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。两组血清处理72 h后,含药血清处理组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化明显高于对照组及非含药血清组(P<0.01),非含药血清组ALP、BGP、BMP-2表达及p38磷酸化与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),p38总蛋白表达三组差异无统计学意义(P>0.05)。SB203580联合两组血清处理72 h后,非含药血清+SB203580组与SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达差异无统计学意义(P>0.05),明显低于对照组(P<0.01),含药血清+SB203580组细胞增殖及ALP、BGP、BMP-2表达显著高于SB203580组(P<0.01),与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方接骨中药可能通过促进MAPK信号通路促进BMSCs的增殖及成骨分化。     

吡格列酮对谷氨酸引起皮质神经元损伤的保护作用及其机制

目的观察吡格列酮对谷氨酸引起皮质神经元损伤的保护作用及机制。方法初生大鼠乳鼠的皮质神经元体外培养7 d后用于实验,建立谷氨酸损伤模型,用Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变,MTT法测定细胞活力,W estern印迹法检测磷酸化p38MAP激酶蛋白水平。结果谷氨酸组细胞存活率较对照组明显降低(P0.01),吡格列酮、SB203580和一氧化氮合酶抑制剂(SMT)提高细胞存活百分率(P0.01)。谷氨酸组细胞凋亡百分比较对照组增加(P0.01),吡格列酮SB203580和SMT均能降低细胞凋亡百分比(P0.01)。谷氨酸组磷酸化p38MAP激酶蛋白水平较对照组明显升高(P0.01),吡格列酮明显降低磷酸化p38MAP激酶蛋白水平(P0.01)。结论吡格列酮对谷氨酸引起体外培养皮质神经元损伤具有保护作用,此作用与降低磷酸化p38MAP激酶蛋白水平有关。     

肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂诱导成纤维样滑膜细胞合成基质金属蛋白酶-1机制的研究

目的 通过研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶(MMP)-1过程中的作用,探讨TWEAK参与RA发病的机制.方法 将重组TWEAK与FLS共培养,对经或未经SB203580预处理的FLS,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养液中MMP-1水平;应用Western-blot法检测FLS中p-p38MAPK和P65的表达.结果 100 ng/ml的TWEAK能够明显诱导RAFLS合成MMP-1;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-1;TWEAK作用于RAFLS,能够使D38MAPK磷酸化,并使细胞核内P65蛋白表达增加.结论 TWEAK诱导RA FLS合成MMP-1过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,并诱导核因子(NF)-κB的表达.     

氧化型低密度脂蛋白对胎盘生长因子及抑制剂的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对胎盘生长因子1(PLGF-1)作用人脐静脉内皮细胞(ECV-304)释放炎性因子和内皮细胞黏附分子的影响,及PLGF-1拮抗剂2’-氨基-3’-甲氧黄酮(PD98059)对其抑制程度。方法应用不同浓度的PLGF-1(20、40、80μg/L)孵育ECV-304,分为对照组和PLGF-1干预组(20、40、80 μg/L)。再应用PD98059(100μmol/L)和PLGF 1(80 μg/L)刺激ECV 304,分为空白对照组、ox-LDL组、PLGF-1+ox-LDL组和PLGF-1+ox-LDL+PD98059(拮抗组)。应用ELISA法检测炎性因子和内皮细胞黏附分子的表达。结果 (1)PLGF-1诱导炎性因子和内皮细胞黏附分子的表达呈时间依赖关系,6 h达最理想的分泌量。随着PLGF-1浓度的加大呈上升趋势。(2)与空白对照组比较,ox-LDL组、PLGF-1+ox-LDL组和拮抗组白细胞介素6、基质金属蛋白酶2、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性血管细胞黏附分子1的表达显著增加(P<0.01),拮抗组较PLGF-1+ox-LDL组的表达显著减少(P<0.01)。结论 PLGF-1可促使内皮细胞产生大量炎性因子,参与诱导内皮活化;抑制PLGF-1的生物活性可控制炎性的反应。     

[ ]右美托咪定用于心脏瓣膜置换术的临床疗效及对心肌与神经功能的保护作用

[摘要]目的：探讨右美托咪定用于心脏瓣膜置换术的临床疗效及对心肌与神经功能的保护作用。方法：选择2014年7月至2016年10月在我院接受心脏瓣膜置换术的62例患者作为研究对象，按挂号数字单双号均分为观察组和对照组。其中观察组注入右美托咪定，对照组注入等量的生理盐水，两组患者采用同样的诱导方式。结果：两组患者的围术期无明显差异（P>0.05）；观察组在T5、T6、T7和T8四个节点时，H-FABP和cTnⅠ指数明显低于对照组（P<0.05），观察组的CK-MB在T6、T7、T8三个节点时低于对照组（P<0.05）；观察组的NSE和S-100β两组指数均低于对照组患者（P<0.05）；在T3和T4时间点观察组的ERO2均低于对照组（P<0.05）；观察组的Ca-jvO2在T3和T4时间点时会明显低于对照组（P<0.05）。     

不同剂量右旋美托咪定的镇静效果及其对呼吸循环的影响

目的探讨不同剂量右旋美托咪定的镇静效果及其对机体呼吸循环系统的影响。方法选择30名支气管镜检查患者并随机分为3组,每组患者选择不同剂量Dex(0.5、1.0及1.5μg/kg)静脉注射,观察Dex的临床效应及这种效应是否为浓度依赖性。结果注射后即产生明显的镇静效应,表现为警觉/镇静评分明显降低(P0.05),并伴随心率下降(P0.05),15 min后受试者出现血氧饱和度降低(P0.05)。同时亦可降低三组受试者的血压(P0.05),但三组起效的起始时间不同。剂量因素、时间和剂量的交互因素差异无统计学意义(P0.05)。结论静脉注射0.5-1.5 ug/kg Dex,出现明显的镇静效应,且在15 min内完成检查最佳,同时Dex能有效降低受试者的血压、血氧饱和度及心率,这种效应非药物浓度依赖性,但随着药物量的增加,其恢复时间随之延长。     

孟鲁司特治疗IgA血管炎患儿的临床疗效及其对免疫功能的影响分析

目的 探讨孟鲁司特治疗Ig A血管炎患儿的临床疗效及其对免疫功能的影响。方法 选择2018-06～2019-06该院儿科收治的80例Ig A血管炎患儿为研究对象,按照随机数字表法将其分为观察组(n=40)和对照组(n=40)。对照组予以常规综合治疗,观察组在对照组治疗基础上加用孟鲁司特治疗;比较两组的临床疗效、临床症状消失时间及免疫功能指标。结果 (1)观察组总有效率为95. 00%,显著高于对照组的77. 50%(P 0. 05)。(2)观察组各临床症状消失时间均明显短于对照组(P 0. 05)。(3)治疗前,两组各免疫功能指标比较差异均无统计学意义(P 0. 05)。治疗后,两组CD4+、CD4+/CD8+水平均明显升高,CD8+水平明显下降,且观察组各免疫功能指标改善情况明显优于对照组(P 0. 05),而CD3+水平无明显改变(P0. 05)。结论 孟鲁司特治疗Ig A血管炎患儿疗效确切,可有效缓解临床症状,改善免疫功能,值得在临床上推广应用。     

The effect of pressure pulsations on the Fahraeus-Lindqvist effect

The effect of superposition of pressure pulses on the steady flow of blood through narrow tubes with diameters in the Fahraeus-Lindqvist range was studied experimentally to determine whether pulsations modify the diameter-dependent viscosity reduction of blood in these rigid tubes. Glass tubes 65 and 78 μm in internal diameter were perfused with steady pressures and sinusoidally oscillating pressures (50% amplitude at frequencies of 1 and 2 Hz) with the same mean values. It was observed that introduction of pulsations did not affect the mean flow rate of blood through the test segments.     

疗程与药物配伍对布氏菌病疗效的影响

目的筛选对本地区布氏菌病急性期最敏感的抗生素，为今后制定防治策略提供科学依据。方法采用不同药物配伍、不同疗程、分成6组（492例）进行治疗和对比研究。结果含强力霉素治疗组（85．66％）效果优于未含强力霉素组（58．97％），差异有显著性（P〈0．001）。如增加疗程，疗效增加不明显。结论治疗急性及慢性期急性发作布病患者，使用抗菌素应首选强力霉素配伍，3个疗程即可取得满意疗效。     

伊布利特对人体心房与心室的电生理作用及其频率依赖性研究

目的探讨伊布利特对人体心房、心室的电生理作用及其频率依赖性。方法25例射频消融术后患者于静脉推注伊布利特（0．0167mg／kg）前后测定两种起搏周长（PCL，400ms与600ms）时的右心房、左心房及右心室的有效不应期（RA-ERP、LA-ERP及RV-ERP），其中通过起搏冠状静脉窦远端问接起搏左心房。结果（1）明显延长RA-ERP（PCL=400ms时，由215．20ms延长至259．60ms，P〈0．001；PCL=600ms时，由231．20ms延长至281．20ms，P〈0．001）；（2）明显延长LA-ERP（PCL=400ms时，由216．60ms延长至247．60ms，P〈0．001；PCL=600ms时，由226.40ms延长至262．40ms，P〈0．001）；（3）明显延长RV-ERP（PCL=400ms时，由219．60ms延长至249．60ms，P〈0．001；PCL=600ms时，由233．20ms延长至268.20ms，P〈0．001）；（4）PCL=400ms与PCL=600ms比较，对RA-ERP、LA-ERP及RV-ERP延长程度均差异无统计学意义（P〉0．05）；（5）明显延长QT与QTc间期，其中QTc由384．36ms延长至450．66ms（P〈0．001），对窦性心率〈82次／min与≥82次／min患者的QT与QTc延长程度差异无统计学意义（P〉0．05）。结论伊布利特可明显延长RA-ERP、LA-ERP、RV-ERP及QT、QTc，而且这些电生理作用无频率依赖性。