miR-100通过靶基因ZBTB7A在胃癌中的表达及其意义

目的：探究胃癌中miR-100的表达及其对ZBTB7A基因的作用。 方法：对实验细胞分组：SGC-7901miR-100组；SGC-7901miR-100抑制剂组；SGC-7901Si-阴性对照组；SGC-7901Si-ZBTB7A组;BGC-823 miR-100组；BGC-823 miR-100抑制剂组；BGC-823 Si-阴性对照组；BGC-823 Si-ZBTB7A组等8组，定量PCR法对miR-100及ZBTB7A mRNA的表达检测，免疫印迹法检测ZBTB7A蛋白表达水平，细胞迁移与体外侵袭实验对体外细胞迁移和侵袭能力的测定，最后通过质粒构建及双荧光素酶报告基因检测ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性情况。结果：荧光素酶报告基因检测显示在miR-100过度表达的SGC7901和BGC823细胞中，与荧光素酶活性相关的ZBTB7A 3′UTR载体显著减少(分别为46.4±1.9%和55.7±2.3%）；miR-100被敲除时，ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性上调（分别为32.7±1.9%和25.4±3.3%）；蛋白免疫印迹法显示过表达的miR-100，导致了 SGC7901和BGC823细胞中的ZBTB7A表达的蛋白水平降低（分别是81.8±3.8%和62.9±1.3%），当miR-100被敲除时，ZBTB7A的蛋白水平出现上调（分别是38.1±2.7%和46.5±3.4%）。 结论：胃癌中ZBTB7A是miR-100的靶基因，miR-100表达可以下调ZBTB7A的表达，从而抑制胃癌的转移和生长。     

胃癌细胞miR-100表达及对靶基因ZBTB7A的调控作用

目的探讨胃癌细胞miR-100表达及其对ZBTB7A基因的调控作用。方法使用人胃癌细胞株SGC-7901(低分化、转移)和BGC-823(低分化),将实验细胞分为SGC-7901miR-100组、SGC-7901miR-100抑制剂组、SGC-7901Si-阴性对照组、SGC-7901Si-ZBTB7A组、BGC-823miR-100组、BGC-823 miR-100抑制剂组、BGC-823 Si-阴性对照组及BGC-823 Si-ZBTB7A组。定量PCR法检测各组miR-100及ZBTB7A m RNA的表达,免疫印迹法检测ZBTB7A蛋白表达水平,细胞迁移与体外侵袭实验测定体外细胞迁移和侵袭能力,通过质粒构建及双荧光素酶报告基因检测ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性情况。结果荧光素酶报告基因检测显示,在miR-100过度表达的SGC7901和BGC823细胞中,与荧光素酶活性相关的ZBTB7A 3′UTR载体显著减少,分别为(46.4±1.9)%和(55.7±2.3)%;miR-100被敲除时,ZBTB7A 3′UTR载体相关的荧光素酶的活性上调,分别为(32.7±1.9)%和(25.4±3.3)%。蛋白免疫印迹法显示,过表达的miR-100导致SGC7901和BGC823细胞中ZBTB7A表达的蛋白水平分别降低(81.8±3.8)%和(62.9±1.3)%;当miR-100被敲除时,ZBTB7A的蛋白水平分别上调(38.1±2.7)%和(46.5±3.4)%。结论ZBTB7A是miR-100的靶基因,miR-100表达可以下调ZBTB7A的表达,从而抑制胃癌细胞的转移和生长。     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的 探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。 方法 取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、MKN-45、SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1（CTDP1）mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C（Cyt C）、B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Vector）组、CTDP1过表达慢病毒（CTDP1过表达）组和miR-431-3p mimic+CTDP1过表达（共转染）组。MTT法检测各组SGC-7901细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组SGC-7901细胞单克隆形成数,流式细胞术检测各组SGC-7901细胞凋亡率。 结果 与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-431-3p表达水平降低（P<0.01）,CTDP1 mRNA表达水平升高（P<0.01）,并且二者表达水平呈负相关关系（r=－0.316,P=0.009）。与GES-1细胞比较,其他5种胃癌细胞中miR-431-3p表达水平均降低（P<0.01）,CTDP1 mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）。双荧光素酶报告系统,miR-431-3p靶向调控CTDP1表达。与空白组和mimic NC组比较,miR-431-3p组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性和克隆形成数降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）。与空白组和Vector组比较,CTDP1过表达组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数升高（P<0.05）;细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。与空白组和miR-431-3p组比较,共转染组SGC-7901细胞中CTDP1和Bcl-2蛋白表达水平、细胞增殖活性及克隆形成数水平升高（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞中Cyt C及Bax蛋白表达水平降低（P<0.05）。 结论 miR-431-3p过表达能抑制人胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,可能是与靶向下调CTDP1基因表达有关。     

微RNA-139-5p对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微RNA(miR)-139-5p对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及可能的作用机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测永生化胃黏膜上皮细胞GES1和胃癌细胞SGC-7901、AGS和BGC-823中miR-139-5 p的表达,Western blot法检测GES1、SGC-7901、AGS和BGC-8...     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

微小RNA-7-5p调控三叶因子3对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响

目的 研究三叶因子3（TFF3）基因在宫颈癌组织和正常组织中的表达情况,同时探讨微小RNA-7-5p（miR-7-5p）调控TFF3对人宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法 实时聚合酶链反应检测TFF3在30例宫颈癌及其邻近正常组织中的表达;采用脂质体转染法将TFF3-siRNA、miR-7-5p转染入宫颈癌HeLa及SiHa细胞中。采用CCK-8、Transwell实验和平板克隆实验检测瞬时转染TFF3-siRNA及miR-7-5p mimics对宫颈癌细胞增殖、迁移及克隆形成能力的影响;并利用双荧光素酶报告实验检测miR-7-5p与TFF3的相互关系。结果 TFF3在73.33%（22/30）宫颈癌组织中表达量明显高于其邻近正常组织（P＜0.001）。与阴性对照组比较,TFF3 siRNA转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 3～5d后,细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞分别为（170±15）个/高倍镜视野和（155±10）个/高倍镜视野,TFF3干扰组迁移细胞分别为（70±20）个/高倍镜视野和（54±8）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数分别为（160±34）个和（183±17）个,TFF3干扰组细胞克隆数分别为（45±15）个和（33±12）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。荧光素报告系统表明miR-7-5p可抑制含野生型TFF3 3′UTR序列的荧光素酶活性（P＜0.01）,但对含突变型TFF3 3′UTR的荧光素酶活性影响不显著（P＞0.05）。与阴性对照组比较,miR-7-5p mimics转染宫颈癌细胞株HeLa和SiHa 4～5d后,增殖明显受到抑制（P＜0.05）。Transwell细胞迁移实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组迁移细胞为（364±48）个/高倍镜视野和（411±27）个/高倍镜视野,miR-7-5p mimics转染组迁移细胞为（165±15）个/高倍镜视野和（100±208）个/高倍镜视野,迁移能力被显著抑制（P＜0.05）。克隆形成实验表明： HeLa和SiHa阴性对照组克隆形成数为（83±11）个和（129±21）个,miR-7-5p mimics转染组细胞克隆数为（25±7）个和（14±8）个,形成能力明显减弱（P＜0.05）。结论 TFF3基因的异常高表达可能会对宫颈癌的发生发展起促进作用,miR-7-5p抑制宫颈癌细胞TFF3的表达或可为将来宫颈癌的靶向治疗提供一定的实验基础。     

微RNA-335对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的 探讨微RNA(miR)-335对胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法 选择2020年1月至2021年7月新乡医学院第三附属医院收治的61例胃癌患者为研究对象,收集患者手术切除的胃癌组织、癌旁组织(距癌灶1～2 cm)及切缘正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测人胃癌组织、癌旁组织和正常组织中miR-335的表达。另外,将对数生长期的胃癌细胞系SGC-7901细胞分为miR-335转染组、空白载体组和对照组,miR-335转染组SGC-7901细胞转染miR-335 precursor,空白载体组SGC-7901细胞转染miR-335-NC,对照组细胞不做任何传染。采用四甲基偶氮唑盐法检测3组SGC-7901细胞增殖能力,划痕实验检测3组SGC-7901细胞迁移能力,Transwell小室法检测3组SGC-7901细胞侵袭能力。采用荧光素酶报告基因技术检测miR-335的作用靶点,Western blot法检测3组SCG-7901细胞中p53蛋白的表达。结果 miR-335转染组、空白载体组和对照组胃癌组织中miR-335相对表达量显著低于正常组...     

BNIP3表达载体转染对胃癌细胞株SGC-7901生物学行为的影响

目的观察Bc L-2与腺病毒E1B 19KDa相互作用蛋白3(BNIP3)高表达对胃癌细胞SGC-7901的增殖以及对化疗药物敏感性的影响。方法免疫细胞化学法筛选BNIP3表达阴性或表达相对较低的胃癌细胞株;BNIP3真核表达载体pc DNA3.1-BNIP3-FLAG通过脂质体转染胃癌细胞;Western blot进行鉴定;MTT法和克隆形成实验检测转染细胞的增殖情况;MTT法检测转染细胞对常规化疗药5-氟尿嘧啶(5-Fu)的敏感性。结果 SGC-7901和BGC-823细胞均有BNIP3表达,表达水平SGC-7901低于BGC-823(P<0.05);与未转染组和转染空载体pc DNA3.1组比较,转染pc DNA3.1-BNIP3-FLAG组BNIP3相对表达量显著增高(P<0.05),转染pc DNA3.1-BNIP3-FLAG组5-Fu的IC50值显著降低(P<0.05),细胞克隆形成率显著降低(P<0.05),细胞增殖速度减慢。结论 BNIP3在胃癌细胞中高表达可抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,增强细胞对化疗药物5-Fu的敏感性。     

microRNA-137对人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭的影响

目的 研究miR-137 过表达对人胃癌MKN-45 细胞迁移侵袭的影响. 方法 采用RT-PCR法检测5 株胃癌细胞和人胃黏膜上皮细胞( GES )中 miR-137 的表达. 构建miR-137慢病毒,并转染MKN-45细胞. 通过划痕实验、细胞侵袭小室检测和Transwell侵袭实验以分析过表达miR-137对MKN-45细胞迁移侵袭的影响. 结果 MKN-45 细胞中miR-137的表达丰度明显低于在 GES、MKN-74、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞,差异有统计学意义(P<0. 05). 同时成功构建micro up病毒感染的细胞组. 划痕实验结果显示,与空白对照组( CON组)和阴性对照组( NC组)比较, micro up组24、48 h后平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 05 );细胞侵袭小室检测结果显示,与 CON组、NC组比较, micro up组的平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 );Transwell侵袭实验结果显示,与CON组、NC组比较,micro up组平均迁移率差异有统计学意义( P<0. 01 ). 结论 miR-137过表达能明显抑制人胃癌MKN-45细胞迁移侵袭能力,有可能成为胃癌治疗的新靶点.