转录因子KLF5在恶性肿瘤发生中作用的研究进展

Krüppel样因子5(KLF5)是一种能与DNA结合的锌指转录调节因子,其在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中的作用具有环境依赖性。微RNA和长链非编码RNA可以调控KLF5的表达。同时KLF5也可以调控众多的下游靶基因的表达。本文主要介绍了KLF5在恶性肿瘤中的作用,也分析了在不同的细胞状态下通过调节KLF5蛋白的水平而影响下游基因表达的机制差异。深入研究这些差异性或能进一步揭示KLF5在肿瘤发生发展中的作用规律。     

干扰 Krüppel 样因子 8表达对肝癌 SMMC7721细胞中血管生成相关因子的调控作用

目的：构建Krüppel样因子8（Krüppel-like factor 8,KLF8）的真核表达质粒及干扰质粒,考查KLF8对人肝癌SMMC7721 细胞中血管生成相关因子的调控作用。方法：构建KLF8的真核表达质粒pcDNA3.1-KLF8,测序确认。构建靶向不同KLF8干扰位点的干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-KLF8,筛选出干扰效率最高的pGPU6/GFP/Neo-KLF8。将pcDNA3.1-KLF8、相应的对照质粒 pcDNA3.1,pGPU6/GFP/Neo-KLF8、相应的对照质粒pGPU6/GFP/Neo-ShNC 分别转染人肝癌SMMC7721细胞,共４组。实时荧光定量PCR及Western blot检测KLF8的表达,qPCR检测各组细胞中低氧诱导因子（hypoxia-inducible factor,HIF）1-α、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、血管生成素（angiopoietin,Ang）1、Ang2、血管生成素受体Tie2及基质金属蛋白酶（matrix metallo-proteinase,MMP）2的mRNA表达。结果：pcDNA3.1-KLF8显著上调KLF8表达（相对表达量为68.8±6.5）,pGPU6/GFP/Neo-KLF8下调KLF8的表达（相对表达量 0.31±0.01）。转染pcDNA3.1-KLF8组与其对照组相比,VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2 mRNA表达增加（P<0.05）,血管生成素受体Tie2、Ang1的mRNA表达无差异（P ＞0.05）;转染pGPU6/GFP/Neo-KLF8组与其对照组相比,Ang2和HIF1-α表达降低（P<0.05）,VEGF、血管生成素受体Tie2、Ang1及MMP2的表达无差异（P ＞0.05）。结论：在肝癌中,KLF8可能通过调控VEGF、Ang2、HIF1-α及MMP2来调控血管生成。     

Krüppel样因子相关microRNAs在肺癌中调控作用的研究进展

肺癌作为全球死亡率最高的恶性肿瘤,发病率居高不下,严重威胁人类健康和社会发展。尽管近年来肺癌在多学科精准医疗诊治方面得到长足发展,但关于其转移和治疗耐药等方面仍未完全阐明,因此,寻找新的药物靶点至关重要。Krüppel样因子(KLFs)家族成员与肿瘤细胞增殖、迁移、凋亡、肿瘤干细胞调节等密切相关。MicroRNAs(miRNAs)在Krüppel样因子调控中起着关键作用,其失控可能与多种肿瘤的发生、发展相关,miRNAs的上调或下调可以激活或抑制不同KLFs,发挥不同生物学作用。本研究对近年来KLFs相关miRNAs在肺癌中的调控作用研究进展作一综述,旨在为进一步寻找治疗靶点提供参考。     

HEK293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定

目的：研究人胚肾 293T(HEK 293T,简称 293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法：将构建的Flag-TRAF6、HA-KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与 KLF5 的结合以及 KLF5 K63 或 K48 多聚泛素化水平。此外,构建 KLF5 全部赖氨酸突变的质粒,分别与 TRAF6 质粒共转染 293T 细胞。用前述 IP/IB 检测 KLF5 K63 连接的多聚泛素化修饰,并确定 KLF5 K63 泛素化修饰的位点。结果：293T 细胞中 TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5 被 TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论：TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5-K99和 K100进行K63多聚泛素化修饰。     

转录因子KLF5介导乳腺癌细胞获得性耐药的作用机制

目的:探讨Kruppel样因子5(KLF5)介导乳腺癌获得性耐药的作用机制。方法:间歇刺激法构建对紫杉醇(PTX)耐受的乳腺癌耐药细胞株MDA-MB-231/PTX(MM-231/PTX),并采用细胞计数法(CCK8)检测亲本及耐药细胞的半数抑制浓度值(IC50)及耐药指数(RI),采用流式细胞术分析细胞周期,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测乳腺癌亲本细胞及耐药细胞株中KLF5及抗凋亡蛋白Survivin的表达水平,采用染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测KLF5与Survivin基因启动子之间的相互作用。构建KLF5蛋白表达载体质粒pcDNA3. 0-KLF5,含Survivin基因启动子的报告基因质粒pGL3-Basic-Survivin-promoter,采用荧光素酶报告基因法检测KLF5对Survivin基因启动子活性的影响。结果:成功构建对PTX耐受的乳腺癌耐药细胞株MM-231/PTX,细胞的RI为18. 04,并且耐药细胞株对PTX的细胞周期阻滞作用并不敏感;耐药细胞株中KLF5和Survivin蛋白的表达水平均比亲本细胞中明显升高(P<0. 05);ChIP结果显示,KLF5能够结合到Survivin基因的启动子上;荧光素酶报告基因实验结果表明,KLF5能够增强Survivin基因启动子的活性。结论:KLF5能够增强Survivin基因的启动子活性,增加Survivin的转录表达,这可能是乳腺癌获得性耐药的主要原因。     

前列腺癌组织中KLF5的表达及敲低KLF5对前列腺癌细胞生长的影响

目的:研究前列腺癌组织中KLF5的表达及敲低KLF5对前列腺癌细胞生长的影响。方法:收集前列腺癌和良性前列腺增生组织,抽提RNA并测定KLF5、增殖和上皮间质转化相关基因的mRNA含量;培养DU145细胞,转染KLF5的siRNA以及阴性对照的siRNA后抽提RNA,测定增殖和上皮间质转化相关基因的mRNA含量。结果:前列腺癌组织中KLF5、SRSF1、Survivin、MACC1、c-Met、Ncadherin、Vimentin的mRNA含量显著高于良性前列腺增生组织,TGF-β、E-cadherin、β-catenin的mRNA含量显著低于良性前列腺增生组织;si-KLF5组中SRSF1、Survivin、MACC1、c-Met、TGF-β、N-cadherin、Vimentin的mRNA含量显著低于si-NC组,E-cadherin、β-catenin的mRNA含量显著高于siNC组。结论:前列腺癌组织中KLF5的表达量异常升高,靶向敲低KLF5的表达能够抑制前列腺癌细胞的增殖及上皮间质转化。     

KLF5 在脱氧胆酸诱导胃黏膜 肠上皮化生中的作用

目的 探究Krüppel 样因子5（KLF5）是否参与脱氧胆酸（DCA）诱导的胃黏膜肠上皮化生及 其可能的作用机制。方法 收集正常胃黏膜和肠上皮化生组织,用不同浓度DCA（100、200 和500μmol/L） 处理胃黏膜上皮GES-1 细胞,Western blot 和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测KLF5 和Wnt3a 的表达。将GES-1 细胞分为空白对照组、DCA 组、阴性对照组及KLF5 沉默组,分别用MTT 法检测细胞增 殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot 和qRT-PCR 检测TFF2、VIL1 和CDX2 的表达。用氯 化锂LiCl（Wnt 通路激活剂）处理si-KLF5 转染的细胞,检测各组细胞中Wnt3a、β-catenin 和CDX2 的表达。 结果 与正常胃黏膜相比,肠上皮化生组织中KLF5 和Wnt3a 的表达上升。随着DCA 浓度增加,GES-1 细 胞中KLF5 和Wnt3a 的表达逐渐升高。500μmol/L DCA 处理GES-1 细胞后,细胞的增殖能力提高,凋亡率 降低,TFF2、VIL1 和CDX2 的表达升高,而si-KLF5 转染使细胞增殖能力降低,凋亡率升高,TFF2、VIL1 和 CDX2 的表达降低,抑制DCA 对GES-1 细胞的作用。另外,LiCl 能减弱DCA 处理后si-KLF5 转染对细胞中 Wnt3a、β-catenin 和CDX2 表达的影响。结论 KLF5 可能通过激活Wnt 通路,促进DCA 诱导的胃黏膜肠 上皮化生。     

ROCK2和KLF6在急性缺血性脑卒中的表达变化及其与病情程度和预后的相关性

目的 探究Rho相关蛋白激酶2(ROCK2)和Krüppel样因子6(KLF6)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清表达变化及其与病情程度和预后的相关性。方法 选取2021年1月至2023年3月在我院确诊的117例AIS患者作为研究组,另选120例在我院同期体检健康者作为对照组。根据美国国立卫生院神经功能缺损(NIHSS)评分,将患者分为轻度(46例)、中度(40例)、重度(31例)组。根据改良Rankin量表将患者分为预后良好(74例)和预后不良(43例)组。酶联免疫吸附试验测定血清ROCK2和KLF6水平。Spearman分析ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分的关系;多因素Logistic回归分析AIS患者预后不良的危险因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ROCK2和KLF6水平对AIS患者预后不良的预测价值。结果 与对照组相比,研究组ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。与轻度组相比,中度组和重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05),与中度组相比,重度组ROCK2和KLF6水平及NIHSS评分显著增加(P<0.05)。相关性分析结果显示,ROCK2和KLF6水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.605,0.632,P<0.001)。与预后良好组相比,预后不良组患者ROCK2和KLF6水平显著增加(P<0.05)。ROCK2、KLF6单独及联合预测AIS患者预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.886(95%CI 0.822～0.949)、0.850(95%CI 0.770～0.930)、0.954(95%CI 0.919～0.988)。预后良好组与预后不良组患者总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平及NIHSS评分比较差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示TG水平、NIHSS评分、ROCK2和KLF6是AIS患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论 AIS患者ROCK2和KLF6表达上调,其水平与病情程度及预后不良密切相关。     

叉头样转录因子3在肺恶性肿瘤中的作用

叉头样转录因子（Foxp3）是一个具有多种功能的转录因子,通常调控细胞生长发育,不但在肿瘤发生、发展中发挥作用,而且在肿瘤的治疗、预后评估中均起着相当重要的作用.Foxp3是通过调控调节性T细胞（Treg细胞）水平,抑制肿瘤微环境免疫功能,使肿瘤细胞逃避免疫监视,导致肿瘤的发生.抑制Foxp3表达,使机体发挥正常免疫功能,可达到抗肿瘤目的.本文就Foxp3在肺恶性肿瘤中的表达和肿瘤免疫中的作用机制以及免疫治疗中的作用作一综述.     

抑癌基因KLF6在肿瘤中作用机制的研究进展

Kruppel样因子6（Kruppellike factor6,KLF6）,是一种在哺乳动物组织中普遍表达的核转录调控因子,参与生长发育、细胞分化、生长信号的转导、细胞增殖、凋亡和血管形成等过程。研究表明,KLF6作为肿瘤抑制基因,在前列腺癌、肝癌、结直肠癌等多种肿瘤中失活、突变或表达下降,在肿瘤的发生发展中起重要作用。文章从KLF6的结构功能、在肿瘤发生发展中的作用以及肿瘤中的失活机制三方面进行综述。     

髓系KLF5基因缺失小鼠腹主动脉瘤形成的生物信息学分析

背景　腹主动脉瘤（AAA）是一种老年常见高死亡率的心血管系统疾病,发病机制不明确,临床上无有效治疗药物。本课题组前期研究发现,KLF5基因在人和小鼠AAA组织中表达升高,但是对于详细的KLF5基因调控炎症相关基因表达的网络分析未见报道。目的　利用基因芯片技术对髓系KLF5基因表达缺失（LyKLF5-/-）小鼠AAA的差异表达基因进行生物信息学分析,探讨KLF5基因在AAA中的调控机制。方法　研究时间为2015年1月-2019年4月。将SPF级KLF5-flox小鼠和SPF级LysM-cre小鼠杂交培育的雄性髓系遗传性LyKLF5-/-小鼠与同笼野生型（WT）C57BL/6小鼠各3只作为实验动物。通过CaPO4诱导小鼠AAA模型,并提取肾下腹主动脉组织总RNA行mRNA芯片筛查。对于筛选出的差异表达基因,利用在线数据库Metascape进行GO功能富集分析和KEGG富集分析,再利用STRING在线数据库进行蛋白互作网络分析。结果　mRNA芯片共筛选到上调表达基因646个,下调表达基因1 410个（|FC|≥2,P<0.05）。与WT小鼠比较,抑制炎症的基因在LyKLF5-/-小鼠表达增加,Bcas3、Hck基因表达分别上调3.96、3.14倍;促进炎症的基因在LyKLF5-/-小鼠表达降低,Retnla、Olig1、Tnfrsf11a分别下调7.68、5.07、3.66倍。GO功能富集分析显示上调差异基因主要参与多肽抗原合成和表达的调控、核苷二磷酸代谢过程、肌节组织的正向调节等过程;下调差异基因主要参与生长发育、细胞对葡萄糖刺激反应的胰岛素分泌调节、平滑肌细胞迁移的正调控等过程。KEGG富集分析显示上调差异基因主要影响破骨细胞分化、吞噬小体、氨基酸的生物合成等通路;下调差异基因主要影响血管平滑肌收缩、泛素介导的蛋白水解作用以及肌动蛋白细胞骨架的调控等通路。蛋白互作网络分析证实,小鼠髓系LyKLF5-/-导致参与血管炎症相关基因Bcas3、Hck表达上调和Retnla、Olig1、Tnfrsf11a表达下调。结论　Bcas3、Hck、Retnla、Olig1、Tnfrsf11a基因可能是参与血管炎症和AAA形成的重要候选基因。     

miR-375通过抑制KLF4促进前列腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-375在前列腺癌(PCa)细胞中的表达、作用及机制.方法 培养细胞,转染质粒,Transwell分析PCa细胞的迁移和侵袭;qPCR分析miR-375、KLF4 mRNA在PCa细胞中的表达;Western blot分析KLF4蛋白在PCa细胞中的表达;生物信息学分析miR-375的靶基因,双荧光素酶实验验证.结果 miR-375在PCa中高表达,抑制miR-375的表达显著抑制PCa细胞的迁移和侵袭;通过生物信息学分析miR-375的潜在靶基因含有KLF4,双荧光素酶实验验证KLF4为miR-375的靶基因;KLF4在PCa细胞中表达显著降低,抑制miR-375的表达能够显著促进KLF4蛋白的表达;进一步研究表明抑制KLF4表达可逆转miR-375抑制物对PCa细胞的迁移侵袭的抑制作用.结论 miR-375抑制KLF4的表达促进PCa的迁移和侵袭,发挥癌基因的作用;其可以作为PCa的治疗靶点,为PCa的治疗提供新的方向.     

血清KLF5含量与阳性淋巴结比例的相关性及其对膀胱癌患者根治术后预后的预测价值

目的：探究血清Kruppel样因子5(recombinant Kruppel factor 5,KLF5)含量与阳性淋巴结比例的相关性及其对膀胱癌患者根治术后预后的预测价值。方法：选取新乡市中心医院和郑州大学第一附属医院泌尿外科2019年6月至2022年9月进行根治性膀胱切除术治疗的92例膀胱癌患者作为研究对象,根据疗效分为有效组和无效组。酶联免疫吸附法检测血清KLF5的表达水平、分析血清KLF5含量与阳性淋巴结比例的相关性和预后的预测价值分析。结果：治疗有效组患者血清KLF5的表达水平显著低于无效组（P<0.05）;有效组患者阳性淋巴结比例与无效组相比,具有显著差异（P<0.05）;采用Pearson分析血清KLF5与阳性淋巴结比例间关系,发现血清KLF5与阳性淋巴结比例呈正相关（r=0.607）;logistic多因素回归分析显示,血清KLF5(OR=2.751,95%CI=1.777～4.260,P=0.000)与阳性淋巴结比例（OR=2.751,95%CI=1.389～7.342,P=0.006）是影响膀胱癌根治术患者病情预后的独立危险因素;ROC结果显示,血清KL...     

KLF4调控sublytic C5b-9诱导肾小球系膜细胞IL-23基因启动与表达的作用

目的： 研究转录因子KLF4调控sublytic C5b-9刺激肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell, GMC)诱导促炎因子IL-23生成的作用。 方法：构建KLF4的短发夹状小干扰RNA(shKLF4)及过表达(pIRES2-KLF4)质粒。将pIRES2-KLF4转染GMC或将shKLF4 转染GMC后再行sublytic C5b-9刺激,用qPCR、Western blot(WB)和ELISA法检查沉默或过表达KLF4基因后对GMC产生IL-23的影响。此外,构建IL-23基因近端启动子全长质粒,行荧光素酶报告基因实验测定沉默或过表达KLF4基因后对IL-23启动子活性的影响。结果：(1)Sublytic C5b-9刺激GMC后能明显提高IL-23的生成,而沉默KLF4基因后,由sublytic C5b-9诱导GMC产生的IL-23明显减少,但过表达KLF4后IL-23的水平则显著增加。(2)Sublytic C5b-9刺激GMC能显著上调IL-23的启动子活性,而沉默KLF4基因后由sublytic C5b-9诱导的IL-23启动子活性明显降低,但过表达KLF4后又能显著升高IL-23的启动子活性。结论：转录因子KLF4确能调控sublytic C5b-9刺激 GMC 诱导IL-23的基因启动与表达。     

氧化应激对C2C12肌原细胞中KLF4表达的影响

目的:观察心肌细胞氧化应激反应对KLF4表达的影响.方法:采用过氧化氢处理的小鼠C2C12肌原细胞模拟相应的氧化应激细胞模型;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测C2C12肌原细胞中KLF4 mRNA的表达情况;采用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测KLF4蛋白的表达情况.结果:不同浓度H2O2处理C2C12肌原细胞12 h后,KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均明显增多,呈剂量依赖性;1 mM H2O2处理肌原细胞不同时间后KLF4 mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,具有时间依赖性.结论:细胞氧化应激反应能显著诱导C2C12肌原细胞中KLF4的高表达.     

野生型KLF6对前列腺癌LNCaP细胞的作用

目的:探讨野生型抑癌基因KLF6对前列腺癌LNCaP细胞的生长增殖、细胞周期和侵袭转移能力的影响及其可能的作用机制.方法:利用RT-PCR法克隆目的基因KLF6,并将含KLF6的pEGFP-C1质粒转染入LNCaP细胞.分为转染组和对照组分别进行MTT法观察LNCaP细胞的生长抑制率,流式细胞仪观察细胞周期比例变化和凋亡率,细胞爬片划痕法观察LNCaP细胞的侵袭转移能力变化.结果:转染了野生型抑癌基因KLF6的前列腺癌LNCaP细胞生长抑制率为(31.9±4.7)%,对照组为0%,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞周期比例表现为G2/M期减少,G0/G1期比例增加为(75.0±8.8)%,对照组为(55.9±7.1)%,差异有统计学意义(P＜0.05),细胞凋亡峰为(29.3±3.7)% ,对照组为(8.6±0.9)%,差异有统计学意义(P＜0.01);每毫米划痕区内迁移入的细胞数为102.8±15.4,对照组为(192.7±25.2),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:野生型抑癌基因KLF6的转染可以明显抑制前列腺癌LNCaP细胞的生长增殖,并诱导其调亡,使其侵袭转移能力下降,其机制可能与野生型抑癌基因KLF6部分地逆转LNCaP细胞的恶性表型有关.     

过表达KLF4抑制非小细胞肺癌增殖及上皮间质转化的作用机制

目的探究KLF4 调控非小细胞肺癌（NSCLC）增殖及上皮间质转化（EMT）发生的作用机制,为NSCLC 的临床研究提供理论依据。方法收集临床病理资料进行统计学分析,免疫组织化学检测KLF4 在癌旁及癌组织中的表达,细胞水平检测KLF4 在癌细胞和正常细胞中的表达差异,过表达KLF4 检测对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT 相关标志物的影响。结果KLF4 在癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达,并且与患者的临床分期及远处转移密切相关,细胞水平检测也得到了相同的结果,上调KLF4 的表达抑制了细胞的增殖、侵袭及迁移,同时抑制EMT 相关的间充质标志物的表达,促进上皮标志物的表达。结论过表达KLF4能够抑制NSCLC 增殖及EMT 的发生。