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1.
罗汉果苷ⅢE的酶法合成 总被引:1,自引:1,他引:0
为开发罗汉果苷ⅢE的简易制备方法,为开发罗汉果苷类甜味剂提供参考依据。本研究以罗汉果苷Ⅴ为探针筛选糖苷水解酶库,获得了能够区域选择性合成罗汉果苷ⅢE的CPU-GH17,通过考察异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导温度和时间等参数建立了CPU-GH17的高效可溶性表达条件:0.4 mmol/L IPTG、15 ℃和12 h。在此基础上,针对反应pH、温度、酶量、底物浓度以及反应时间等参数进行系统优化,最终确定pH 6.0、45 ℃、3 U/mL酶、5 mg/mL底物和20 h时,罗汉果苷Ⅴ可以完全转化成罗汉果苷ⅢE。本研究成功地开发了基于CPU-GH17的罗汉果苷ⅢE的酶法合成新工艺,并验证了其规模化生产的可行性。 相似文献
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[目的]建立HPLC法测定罗汉果药材中罗汉果甜苷V的含量。[方法]用Nucleosil 100-5 NH2(5μm,4.6mm×250mm)色谱柱,以乙腈-水-2.5%四氢呋喃(77∶22∶1)为流动相,流速为1ml/min,检测波长为203nm,柱温30℃。[结果]罗汉果甜苷V进样量在0.2136~21.3600μg线性关系良好(r=0.99993),平均回收率为96.96%,RSD为0.72%(n=5)。[结论]本方法简便、快速、准确,可作为罗汉果药材的质量控制方法。 相似文献
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黄酮苷类化合物具有很高的药用价值,对于其分离方法 以及构效关系的研究不仅可以帮助人们更好地了解黄酮苷类化合物,还可以帮助人们更加充分有效地利用它.本文介绍了柱层析法、离心薄层层析法、纸层析法、超临界流体色谱分离4种分离提纯方法,进而分析了黄酮苷类化合物在抗氧化、抗癌以及抗炎作用的构效关系. 相似文献
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目的建立SAD动物模型,研究名方洗心汤对SAD模型大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰中蛋白质O位N-乙酰葡萄糖胺糖基转移酶(OGT)、和糖苷酶(O-GlcNAcase)的影响,探讨名方洗心汤防治SAD的可能作用机制。方法将SPF级健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐对照组、名方洗心汤小、中、大剂量组。治疗结束及行为学测试之后,以免疫组化及蛋白印迹方法检测大鼠脑组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰过程中OGT、O-GlcNAcase酶表达的变化。结果名方洗心汤能显著提高SAD大鼠海马OGT的表达,降低O-GlcNAcase的表达,组间差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。多奈哌齐对照组与SAD模型组相比无显著性差异(P>0.05)。结论名方洗心汤能够调节O-GlcNAc糖基转移酶和糖苷酶的表达,从而提高SAD大鼠海马组织tau蛋白O-GlcNAc糖基化修饰水平。 相似文献
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《第三军医大学学报》2009,31(21)
目的 对膳食中常见的21种花色苷抑制血管内皮细胞氧化应激损伤作用进行结构-效应关系研究,探索与花色苷内皮保护作用密切相关的结构特征,筛选出作用较显著的化合物单体.方法 不同浓度氧化低密度脂蛋白(ox-LDL,50、100、150、200μg/ml)处理内皮细胞24 h,MTT法检测细胞活力,确定IC_(50);以不同浓度(50、100、200μmol/L)的花色苷预处理内皮细胞2 h后,100μg/ml的ox-LDL继续处理细胞24 h,MTT法检测各组细胞活力;100 μmoL/L花色苷预处理内皮细胞2 h后,100μg/ml ox-LDL继续处理细胞24 h,按试剂盒说明书测定细胞培养上清液MDA和NO水平;根据各组细胞活力、MDA和NO值,结合不同花色苷的结构特征进行结构.效应关系分析.结果 ox-LDL能明显抑制内皮细胞活力,并呈浓度依赖关系,IC_(50)为100μg/ml.不同花色苷对内皮细胞活力、MDA生成和NO释放的影响存在显著相关性.花色苷对内皮细胞氧化应激损伤的抑制作用与其总-OH数量及B环-OH数量呈明显正相关;B环3',4'-邻苯二羟基和C环3-OH能增强花色苷的抑制作用,而甲基化和糖苷化能明显削弱其作用;A环6-OH可能削弱其抑制作用,B环5'和A环5位-OH对其作用无显著影响;葡萄糖取代与半乳糖取代对花色苷抑制作用的影响无显著差异,而单糖取代较之双糖取代能明显增强其抑制作用.Delphinidin和Delphinidin-3-glucoside分别是2种作用最显著的花色苷元和花色苷.结论 B环3',4'-邻苯二羟基和C环3-OH是花色苷抑制内皮细胞氧化损伤的重要结构特征. 相似文献
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目的 研究罗汉果甜苷对复合因素所致大鼠肝纤维化的影响.方法 通过给予大鼠高脂、乙醇和四氯化碳三种因素建立复合因素诱导肝纤维化模型,观察罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠的肝功能指标、脂质过氧化产物和胶原蛋白的影响.结果 与正常对照组相比,复合因素所致肝纤维化模型组血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量明显增加(P<0.01),肝组织脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和胶原标志物羟脯氨酸(Hyp)含量也显著增加(P<0.01).与模型对照组相比,不同剂量罗汉果甜苷可剂量依赖性地降低大鼠血清中ALT活性及TC和TG含量(P<0.05或<0.01);并可降低肝组织中MDA和Hyp的含量(P<0.05或<0.01).结论 罗汉果甜苷对复合因素所致肝纤维化大鼠有一定的保护作用. 相似文献
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摘要:目的研究罗汉果甜苷对复合因素所致肝纤维化病理组织改变及肝脏主要细胞肝细胞和肝星状细胞的影响。方法通过给予大鼠高脂、乙醇和四氯化碳三种因素建立复合因素所致肝纤维化模型,观察罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠肝脏病理组织学、肝星状细胞活化标志a~平滑肌肌动蛋白(a—smoothmuscleactin,a—SMA)表达和肝细胞凋亡的影响。结果不同剂量罗汉果甜苷对肝组织纤维化病变有一定程度的改善作用,可抑制肝脏a—SMA表达,减少肝细胞凋亡的作用。结论罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠肝星状细胞活化和肝细胞凋亡有一定的抑制作用,可能为其抗纤维化的机制之一。 相似文献
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目的 对罗汉果甜苷V生物合成途径的关键酶法呢基焦磷酸合成酶(Farnesyl pyrophosphate synthase,FPPS)基因的全长cDNA序列进行克隆,为研究罗汉果甜苷V生物合成与基因调控奠定基础。方法 根据植物FPPS基因保守功能域设计简并引物,通过PCR和RACE方法克隆罗汉果FPPS基因的全长cDNA。结果 获得罗汉果FPPS(SgFPPS)基因的全长cDNA序列共1 354个核苷酸,包含一个1 026核苷酸的开放阅读框架(open reading frame, ORF),cDNA编码的蛋白包含342个氨基酸,推断蛋白质相对分子质量为3.92×104。NCBI Blastx结果显示,SgFPPS基因编码的蛋白与苹果树来源FPPS具有最高同源性,氨基酸一致度达85.1%。SgFPPS具有异戊烯基转移酶的5个典型保守功能域。进化树分析结果显示,SgFPPS基因与苹果树的FPPS具有较近的亲缘关系。结论 首次克隆SgFPPS基因的全长cDNA序列,为分析SgFPPS基因表达特性及其在罗汉果甜苷V生物合成中的功能奠定基础。 相似文献
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目的 研究罗汉果的化学成分.方法 采用多种色谱技术进行分离纯化,应用核磁共振波谱法和质谱法等技术确定化合物的结构.结果 从罗汉果中分离和鉴定了10个化合物,分别为山柰酚(Ⅰ)、山柰酚7-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅱ)、山柰苷(Ⅲ)、罗汉果皂苷ⅡE(Ⅳ)、罗汉果皂苷Ⅲ(Ⅴ)、山柰酚3-O-α-L-鼠李糖苷-7-O-[β-D-葡萄糖基(1-2)-α-L-鼠李糖苷](Ⅵ)、罗汉果皂苷ⅣA(Ⅶ)、光果木鳖皂苷Ⅰ(Ⅷ)、罗汉果皂苷Ⅴ(Ⅸ)和罗汉果皂苷ⅡA1(Ⅹ).结论 化合物Ⅶ和Ⅹ为新的天然产物,Ⅰ为首次从罗汉果中分离得到. 相似文献
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为了得到具有糖基转移酶活性的重组蛋白,从万古霉素产生菌总DNA中克隆万古霉素糖基转移酶基因gtfE,连入pET-37b构建表达质粒并转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,体外测定纯化后的重组蛋白糖基转移酶活性,用HPLC和ESI-MS检测反应产物。结果表明,重组蛋白具有预期活性,可以催化尿苷二磷酸葡萄糖与万古霉素苷元的糖基化反应。本研究为获得糖基多样性的万古霉素奠定理论基础。 相似文献
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目的建立HPLC法测定不同产地、不同栽培品系的罗汉果药材中罗汉果苷V和11-氧化罗汉果苷V。方法采用ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.75mL/min,检测波长210nm,柱温40℃。结果罗汉果苷V在0.8046~20.1150μg线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为104.6%,RSD为3.28%(n=6)。11-氧化罗汉果苷V在0.5985~14.9625μg线性关系良好(r=0.9984)。结论本方法简便、快速、准确,可作为罗汉果药材的质量控制方法。 相似文献
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为了考察基因snogE中断对诺加霉素生物合成的影响,比对多种糖基转移酶的氨基酸序列,并克隆与已知蒽环类抗生素糖基转移酶序列同源性最高的snogE编码基因片段,构建基因中断质粒pSXW-2-62。利用接合转移的方法将其转入产诺加霉素的胡桃链霉菌中并发生同源重组,得到重组菌株mSXW-2-71,验证突变株基因型与发酵产物。结果表明,基因中断质粒以正确方式整合入基因组,中断了snogE基因;在突变株发酵产物中无法检测到诺加霉素产生。snogE基因编码的糖基转移酶在诺加霉素的生物合成途径中是必需的。 相似文献
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目的:观察中药壳聚糖对肝癌和肺癌细胞株糖基转移酶表达的影响,探讨中药多糖在肿瘤预防和治疗的应用。方法:以浓度为50,100和200 mg/L的壳聚糖分别作用于肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAcT2)和β3GalT7的表达水平。结果:肝癌细胞株中pp-GalNAcT2和β3GalT7仅微弱表达,加药后作用不明显;肺癌细胞株中ppGalNAcT2和β3GalT7均有所表达,加入不同浓度的壳聚糖之后,ppGalNAcT2和β3GalT7的表达均受到抑制,且随着壳聚糖浓度的增加,抑制作用越明显。结论:肝癌细胞株SMMC-7721和肺癌细胞株A549 ppGalNAcT2和β3GalT7的表达不同,壳聚糖能够抑制肺癌细胞株A549中的糖基转移酶ppGalNAcT2和β3GalT7的表达,从而抑制了糖基化作用,对肺癌的预防和治疗具有一定的价值。 相似文献
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目的 研究罗汉果甜苷含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6的毒性以及对细胞增殖与相关基因表达的影响,初步探讨其抗肝纤维化作用机制。方法 以罗汉果甜苷含药血清干预HSC-T6,乳酸脱氢酶(LDH)法检测罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6的细胞毒性;MTT法检测其对HSC-T6生长的抑制作用;RT-PCR法检测HSC-T6中I型胶原(Col-I)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达。结果 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6无特异毒性,罗汉果甜苷含药血清体积分数为20%、10%时可显著抑制HSC-T6的增殖(P<0.05、0.01),并对Col-I、TGF-β1及TIMP-1 mRNA表达均表现显著抑制作用(P<0.05、0.01)。结论 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6细胞无特异毒性,对HSC-T6细胞增殖、Col-I有抑制作用,促进细胞外基质(ECM)降解,这可能是其抗肝纤维化的部分作用机制。 相似文献
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天然产物结构新颖、生物活性多样,是药物或药物先导化合物的重要来源之一。但是,目前仅有极少数的天然产物被开发成药,生物活性不佳、溶解度低或稳定性差等是造成其成药性不佳的主要原因。鉴于天然产物结构的复杂性,通过化学结构修饰提高成药性受到了极大的挑战和限制,因此,更加多元化的酶法结构改造逐渐成为天然产物结构修饰的重要手段之一。由于选择性强、效率高、反应温和等优势,基于糖基转移酶的酶法糖基化修饰在改善天然产物成药性方面展现出了良好的应用前景。本文概述了糖基转移酶及其在天然产物结构修饰中的应用和挑战,可为天然产物的新药开发提供一定的参考和借鉴。 相似文献