青钱柳总皂苷对游离脂肪酸诱导的H4-ⅡE细胞脂肪代谢的影响及作用机制

目的:研究青钱柳总皂苷(CPS)对游离脂肪酸(FFA)诱导的H4-ⅡE肝细胞脂肪代谢的影响和作用机制。方法:以FFA诱导的H4-ⅡE大鼠肝细胞为模型,培养72 h后,采用Neutral red法检测CPS(0,0.05,0.10,0.20,0.40 g·L~(-1))对细胞活性的影响;根据细胞活性检测结果选择CPS低剂量组(CPS-L,0.10 g·L~(-1))和高剂量组(CPS-H,0.20 g·L~(-1))干预,油红O(Oile red)染色并测定细胞内脂质含量;药物干预2 h后实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测肝细胞相应基因表达,药物干预30 min后,利用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞相应蛋白磷酸化水平。结果:与正常组比较,0.10,0.20 g·L~(-1)CPS干预后肝细胞活性明显升高(P0.05);干预72 h后,Oile red染色显示FFA(20μmol·L~(-1))诱导后呈现大片红染的脂滴,细胞脂质含量显著增加(P0.01),CPS干预后细胞中红染的脂滴减少,细胞脂质含量较FFA(20μmol·L~(-1))诱导组明显减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,CPS-L和CPS-H组腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK),乙酰Co A羧化酶(ACC)蛋白磷酸化水平明显升高(P0.05,P0.01);胆固醇应答元件结合蛋白1c(SREBP1c),脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达水平明显降低(P0.05,P0.01)。结论:CPS能够显著降低体外FFA诱导肝细胞脂质沉积,可能是通过上调AMPK,ACC蛋白磷酸化水平,下调SREBP1c,FAS mRNA表达而发挥作用。     

淫羊藿苷对去卵巢肥胖大鼠体质量和脂质代谢的影响

目的:探讨淫羊藿苷对去卵巢肥胖大鼠体质量和脂质代谢的影响。方法:50只雌性SD大鼠随机分为假手术组、去卵巢模型组及淫羊藿苷低(0.2 g/kg)、中(0.4 g/kg)、高(0.8g/kg)组,称量术后12 w大鼠体质量、摄食量;实验结束后检测大鼠脂肪比例、血糖及血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白(LDL-C)、TNF-α、IL-6和脂联素水平;Western blot检测大鼠肝脏腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)与乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及其磷酸化蛋白表达。结果:淫羊藿苷可降低去卵巢大鼠体质量、摄食量、脂肪比例及血清TG、CHO、LDL-C、TNF-α水平,提高血清脂联素含量及肝脏p AMPK和p ACC蛋白表达,降低肝组织ACC蛋白表达。结论:淫羊藿苷可改善去卵巢大鼠体质量增加和脂质代谢紊乱,其机制可能与调节肝脏脂联素-AMPK-ACC信号途径等有关。     

参苓白术散对高脂饮食诱导的NAFLD大鼠肝组织超微结构及AMPKα磷酸化的影响

目的:观察参苓白术散对高脂饮食建立的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肝组织超微结构和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)磷酸化的影响。方法:选用SPF级SD大鼠32只,随机分为4组:正常组、模型组、参苓白术散30g/kg剂量组、参苓白术散10g/kg剂量组,每组8只。采用高脂饲料喂养大鼠16周建立NAFLD大鼠模型,各药物干预组大鼠分别灌服30g/kg和10g/kg参苓白术散进行干预,16周后取血和肝组织样本,全自动生化仪检测血清和肝匀浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量;HE染色观察肝组织病理学变化;透射电镜观察肝细胞的超微结构改变;实时荧光定量RT-PCR法检测肝组织AMPKαmRNA表达水平;Western blot法检测肝组织AMPKα蛋白及其磷酸化AMPKα蛋白(p AMPKα)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠病理证实肝组织脂质蓄积严重,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著升高,肝组织AMPKαmRNA和p AMPKα蛋白水平显著降低,与模型组比较,参苓白术散30g/kg和10g/kg剂量组大鼠肝组织脂质蓄积明显改善,肝组织匀浆和血清TG、TC含量显著降低,肝组织AMPKαmRNA及p AMPKα蛋白水平显著上调,其中参苓白术散30g/kg剂量组疗效更好;但各组大鼠总AMPKα蛋白水平差异无统计学意义。结论:参苓白术散能够改善16周高脂饮食诱导的NAFLD大鼠脂肪代谢紊乱、减轻肝脏脂质蓄积,其作用机制可能与其激活AMPKαmRNA及其蛋白磷酸化水平有关。     

基于AMPK/ACC信号通路探讨夏枯草提取物调节ZDF大鼠脂代谢的机制

目的:观察夏枯草提取物(Prunellae Spica extracts,PS)对Zucker糖尿病肥胖(ZDF)模型大鼠肝腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/乙酰辅酶A羧化酶(ACC)信号通路的影响以探讨其改善大鼠脂代谢的机制。方法:32只雄性ZDF(fa/fa)2型糖尿病模型大鼠随机分为模型组、二甲双胍组(180 mg·kg~(-1)·d~(-1))和PS低、高剂量组(12.25,24.5 mg·kg~(-1)·d~(-1)),每组8只。8只Zuker Lean(ZL)大鼠设为正常组。于给药0,4,8周测体质量及空腹血糖。给药8周后,腹主动脉取血,离心抽取血清-20℃冻存,取肝组织-80℃冻存,及4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。放射免疫法测血清甘油三酯(TG),胆固醇(CHO),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及游离脂肪酸(FFA)。油红O染色观察肝细胞脂滴含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏AMPKα_2及ACC mRNA表达。免疫组化法测肝细胞磷酸化(p)-AMPKα蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TG,CHO,LDL-C及FFA升高,肝细胞脂滴增加,肝AMPKα_2 mRNA表达减少而ACC1和ACC2 mRNA表达增加,p-AMPKα蛋白表达减少(P0.05,P0.01)。与模型组比较,PS低、高剂量组可明显降低ZDF大鼠血清TG,CHO,LDL-C及FFA,减少肝细胞脂滴,上调肝AMPKα_2 mRNA且下调ACC1和ACC2 mRNA表达,上调p-AMPKα蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:PS能有效改善2型糖尿病ZDF大鼠肝脏脂代谢紊乱,其机制可能与调节肝AMPK/ACC信号通路有关。     

黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响

目的观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响。方法采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS(2.4 g·kg~(-1))灌胃给药,连续16周。测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)(Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)(Ser731)、蛋白激酶B(Akt)(Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P 0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P 0.05,P 0.01),AMPKα、n SREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P 0.05,P 0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P 0.05)。与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P 0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P 0.05,P 0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P 0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P 0.05)。结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗。     

胡黄连苷Ⅱ对体外H2O2诱导肝细胞（L-02）损伤Keap1Nrf2（ARE）抗氧化通路mRNA表达的影响

目的:研究在H2O2诱导发生的肝细胞(L-02)的氧化损伤过程中,胡黄连苷Ⅱ对抗氧化通路Keap1_Nrf2(ARE)信号蛋白的m RNA表达的影响。方法:用不同浓度胡黄连苷Ⅱ(0.5、5mmol/L)处理人正常肝细胞株(L-02)3h后,加入0.6mmol/L的H2O2作用1h造成氧化应激损伤,同时设对照组,采用荧光探针2,,7,-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧的含量,于24和48h通过实时荧光定量PCR技术检测各组细胞的Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1),核转录因子E2相关因子(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的m RNA的表达情况。结果:胡黄连苷Ⅱ预处理后,肝细胞内活性氧含量较模型组(仅H2O2作用后)明显减少(P<0.05),药物高浓度干预组Nrf2、HO-1的m RNA表达较模型组显著增高(P<0.05),且随浓度的提高而增加。结论:通过影响抗氧化通路Keap1_Nrf2(ARE),增加下游抗氧化蛋白表达,清除细胞内活性氧,可能是胡黄连苷Ⅱ发挥保护H2O2诱导的肝细胞损伤作用机制之一。     

基于TRPV1/AMPK通路探讨石榴皮总多酚对亚油酸诱导的人皮脂腺细胞脂质合成的影响

目的 探讨石榴皮总多酚（pomegranate peel polyphenols，PPPs）对亚油酸（linoleic acid，LA）诱导的永生化人皮脂腺SZ95细胞脂质合成的影响及其作用机制。方法 体外培养SZ95细胞，运用LA诱导构建脂质过度合成模型，采用CCK-8法检测不同质量浓度PPPs对SZ95细胞活力的影响；尼罗红染色检测细胞脂质合成情况；qRT-PCR检测瞬时受体电位香草酸亚型1（transient receptor potential vanilloid 1，TRPV1）、腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）mRNA表达；Western blotting检测TRPV1、AMPK、磷酸化AMPK（phosphorylated AMPK，p-AMPK）蛋白表达。采用siRNA进行细胞转染，观察沉默TRPV1后PPPs对LA诱导的SZ95细胞脂质合成及TRPV1/AMPK通路的影响。结果 1.25、2.5、5μg/mL的PPPs对SZ95细胞活性无明显影响，且均可显著抑制LA诱导的脂质过度合成（P<0.01），其中5 μg/mL PPPs的抑制效应最为明显。与对照组比较，模型组细胞脂质合成明显增加（P<0.01），TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）；PPPs对无LA诱导的SZ95细胞基础脂质合成无明显影响，TRPV1、AMPK mRNA表达水平升高（P<0.01），但TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平差异无统计学意义。与模型组比较，PPPs明显减少LA诱导下的SZ95细胞脂质合成（P<0.01），明显提高TRPV1、AMPK mRNA表达及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。沉默TRPV1显著增加了LA诱导下的SZ95细胞脂质合成（P<0.01），并显著减弱了PPPs对SZ95细胞脂质过度合成的抑制（P<0.01），显著降低其TRPV1、AMPK的mRNA及TRPV1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平（P<0.05、0.01）。结论 PPPs可有效抑制LA诱导的SZ95细胞脂质合成，其作用机制可能与TRPV1/AMPK通路有关。     

降脂理肝汤对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型SREBP-1c通路的影响

目的:观察降脂理肝汤对油酸诱导的HepG2细胞中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)通路相关蛋白表达的影响,探讨降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝的可能机制。方法:采用油酸诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪肝细胞模型,降脂理肝汤4 mg/ml和阿托伐他汀0.005 mg/ml干预后,利用油红O染色定性定量检测细胞内脂质蓄积情况;试剂盒检测细胞内TG、TC和FFA水平;Western bolt观察和分析细胞p-SREBP-1c、SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达的变化。结果:油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积明显;细胞内TG、TC和FFA含量明显升高,细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平显著下调,SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达水平显著上调。降脂理肝汤和阿托伐他汀干预显著降低油酸诱导的HepG2细胞TG、TC和FFA含量。细胞SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达显著下调;此外,降脂理肝汤干预显著减少油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积,显著上调细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平。结论:降脂理肝汤可能通过抑制SREBP-1c通路干预NAFLD。     

交泰丸组分配伍改善小鼠胰岛素瘤B细胞脂质沉积的机制研究

目的：研究交泰丸中主要活性成分小檗碱（BBR）、肉桂酸（CA）及其配伍（BBR/CA）对软脂酸（PA）诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂质沉积的影响。方法：将细胞在PA的培养基中培养24 h,建立高脂诱导的细胞内脂肪沉积模型。分为模型组、BBR组、CA组、BBR/CA组、二甲双胍（Met）组,分别给予相应药物干预,另设对照组。油红O染色法评估细胞内脂肪沉积情况;酶法检测细胞内三酰甘油（TG）含量;使用Western Blotting和实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）及其下游脂肪生成和脂肪酸氧化基因的表达水平,包括脂肪酸合成酶（FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶（p-ACC）、肉碱酰转移酶-1（CPT-1）、固醇调节元件结合蛋白（SREBP-1c）。结果：PA诱导使NIT-1胰岛B细胞中脂肪沉积明显增加,TG含量显著升高,AMPK蛋白及其下游靶标（如p-ACC、CPT-1等）表达显著降低。同时,AMPK下游脂肪生成基因包括SREBP-1c mRNA、FAS和ACC蛋白表达显著增加。BBR单药和BBR/CA配伍处理优于CA单药,可显著逆转NIT-1胰岛B细胞中上述基因表达水平的变化。结论：在体外,交泰丸活性组分配伍可减少高脂诱导的NIT-1胰岛B细胞内脂肪沉积,其机制可能与减少脂肪合成和增加脂肪氧化有关。     

小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠肝细胞脂质沉积的干预作用

目的探讨小檗碱对高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）大鼠脂质代谢紊乱及肝细胞脂质沉积的影响。方法SPF级雄性SD大鼠45只,适应性喂养1周后,随机分为正常组、模型组、小檗碱组,每组各15只。除正常组给予维持期饲料外,其余两组均采用高脂饮食喂养复制大鼠NAFLD模型,在施以造模因素的同时,小檗碱组灌胃盐酸小檗碱进行干预,8周后行HE、油红O染色进行模型鉴定,分离肝细胞,Typan blue染色和FCM对肝细胞分别进行活性和纯度鉴定;全自动生化分析仪检测血清及肝组织脂质情况;实时定量PCR法检测肝细胞肝X受体（liver X receptor,LXR）、脂肪酸合成酶（fatty acid synthetase,FAS）表达水平;Western blot法检测肝细胞LXRα、FAS蛋白表达水平。结果高脂饮食诱导成功建立NAFLD实验动物模型,每只大鼠获得纯化后的肝细胞（6.0~7.5）×108个/肝,经Typan blue染色的细胞活力均在95%以上,FCM检测纯度均在90%以上;与正常组比较,模型组肝细胞LXRα、FAS mRNA及蛋白的表达水平均显著升高（P<0 01）;与模型组比较,小檗碱组LXRα、FAS mRNA及蛋白表达水平明显下调（P<0.01）。结论LXRα/FAS 通路是NAFLD脂质平衡代谢紊乱重要的信号通路,小檗碱通过调控肝细胞LXRα/FAS通路使NAFLD大鼠肝细胞脂质沉积恢复,可能是小檗碱抗NAFLD的重要机制之一。     

姜黄素及其衍生物对磷酸三苯酯引起HepG_2细胞脂质累积的保护作用

目的:探究姜黄素及其衍生物二脱甲氧基姜黄素对磷酸三苯酯引起肝细胞脂质累积的保护作用及潜在机制,并比较二者的效果。方法:用不同浓度的磷酸三苯酯、姜黄素、二脱甲氧基姜黄素作用HepG_2细胞24 h后,MTT检测三者的细胞毒性,选择后续实验浓度。总胆固醇、甘油三酯试剂盒检测细胞中脂质含量;油红O染色观察脂滴累积;实时荧光定量PCR检测脂质代谢相关基因表达。结果:磷酸三苯酯可升高细胞甘油三酯含量,增加细胞中的脂滴累积,该效应可被二脱甲氧基姜黄素及姜黄素逆转。姜黄素可抑制磷酸三苯酯诱导升高的DGAT2 mRNA表达,二脱甲氧基姜黄素可抑制DGAT2、ACC、FAS mRNA的表达。结论:姜黄素及其衍生物二脱甲氧基姜黄素可能通过抑制脂肪酸合成和甘油三酯生成等途径抑制磷酸三苯酯诱导的脂质累积,二脱甲氧基姜黄素的作用效果更为明显。     

黄芪散对高脂血症大鼠AMPK/ACC/CPT1通路的影响

探讨黄芪散治疗饮食诱导的高脂血症大鼠的作用机制。将40只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芪散低,高剂量组(1,2 g·kg-1),阳性立普妥组(2 mg·kg-1)。正常组饲以基础饲料,其他组饲以高脂饲料。造模8周后,灌胃相应药物13周,检测各组大鼠血清中空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠肝脏及骨骼肌病理变化;Real-time PCR和Western blot法检测肝脏和骨骼肌中AMPK信号通路相关分子(AMPK,ACC,CPT1A,SREBP2,HMGCR)的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,模型组大鼠FPG,TC,TG,LDL-C的含量最高,肝脏和骨骼肌病理损害最明显。黄芪散和立普妥给药后,血糖血脂显著下降,肝脏和骨骼肌的损伤有明显改善,除SREBF2和HMGCR的mRNA和蛋白表达降低,其他AMPK信号通路相关mRNA和蛋白表达量显著增加,且黄芪散作用效果优于立普妥。结果表明,黄芪散可能通过调控AMPK信号通路,增加脂肪酸氧化,抑制胆固醇合成来改善高脂血症。     

基于LKB1/AMPK/PGC-1α的泽泻汤改善非酒精性脂肪肝作用机制研究

以棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的脂质堆积细胞模型和高脂诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)动物模型,探讨泽泻汤(Zexie Decoction)体内外改善NAFLD的药效,以LKB1/AMPK/PGC-1α通路为切入点探讨其可能作用机制。MTT结果显示泽泻汤对HepG2细胞活力无影响,泽泻汤剂量依赖性下调PA诱导的肝细胞培养基谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平,降低高脂饮食(high-fat diet,HFD)小鼠血浆ALT、AST及肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平。尼罗红染色观察PA诱导的细胞内脂质沉积,PA诱导的肝细胞脂质蓄积显著增加,体外细胞脂质堆积模型诱导成功,泽泻汤有效改善PA诱导的肝细胞脂质堆积;小鼠肝脏油红染色结果同样表明,泽泻汤剂量依赖性减少HFD小鼠肝脏脂质堆积。线粒体膜电位染色显示泽泻汤能够逆转PA诱导肝细胞损伤引起的线粒体膜电位的下降;同时泽泻汤激活PGC-1α上调其靶基因ACADS、CPT-1α、CPT-1β、UCP-1、ACSL-1、NRF-1等的表达;Western blot及免疫组化结果显示泽泻汤可体内外上调LKB1、p-AMPK、p-ACC、PGC-1α蛋白表达水平。综上所述,泽泻汤能够有效改善NAFLD,其机制可能与调控LKB1/AMPK/PGC-1α通路相关。     

肉苁蓉苷F通过AMPK/ACC通路抑制C2C12细胞成脂分化

目的 探讨肉苁蓉苷F(Cis)抑制C2C12细胞成脂分化的效应及可能机制。方法 C2C12细胞随机分为空白组、模型组、Cis低(1μmol/L)、中(10μmol/L)、高剂量(100μmol/L)组。CCK8检测细胞增殖率;油红O染色观察细胞内脂滴形成的动态变化;qRT-PCR检测生肌决定因子(Myod)、过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)mRNA表达水平,Western Blot检测AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、结蛋白(Desmin)蛋白表达。结果 各剂量Cis作用72h对C2C12细胞无明显毒性。与空白组相比,模型组细胞内脂滴在d8时显著增加,PPARγ mRNA和ACC蛋白表达明显升高,Myod mRNA和AMPK、Desmin蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,Cis干预后,C2C12细胞内脂滴明显减少,PPARγ mRNA表达下调,Myod mRNA表达上调,10μmol/L Cis作用8天可显著下调ACC蛋白表达,上调AMPK、Desmin蛋白表达(P<0.05)。结论 Cis可能通过调控AMPK/ACC通路抑制...     

土茯苓有效成分落新妇苷抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞的增殖、迁移及表型转换

目的：探讨土茯苓有效成分落新妇苷对大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖、迁移及表型转换的影响及其可能的机制。方法：采用CCK-8法检测不同浓度（10、25、50μmol/L）落新妇苷对血小板衍生因子-BB（PDGF-BB）(20ng/ml)诱导的VSMCs增殖的影响；划痕实验用于检测落新妇苷对PDGF-BB（20ng/ml）诱导的VSMCs迁移能力影响；免疫印迹法检测落新妇苷作用后的PCNA、α-SMA、OPN、AMPK及其磷酸化蛋白表达水平；流式细胞术检测落新妇苷作用后对VSMCs凋亡的影响。结果：与对照组（NC）相比，落新妇苷显著抑制了PDGF-BB诱导的VSMCs增殖(^*P<0.05,^**P<0.01)、迁移、表型转换。此外，落新妇苷激活了腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号。结论：我们首次发现落新妇苷可以显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs过度增殖和迁移，机制上，其可能与AMPK的激活有关。该研究为临床上血管介入术后再狭窄的防治提供了参考。     

大黄素改善脂多糖引起的胰岛素抵抗机制研究

目的观察大黄素（emodin）对脂多糖（LPS）引起的炎症与胰岛素抵抗改善的机制。方法在分化成熟的C2C12骨骼肌细胞中加入脂多糖,孵育不同时间,复制体外胰岛素抵抗模型;加入不用浓度大黄素孵育,用RT-PCR方法检测细胞中炎症因子的mRNA表达情况,用免疫蛋白印记技术检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路中细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）ERK和Phos-phor-ERK的表达情况,同时检测大黄素对AMPK和ACC的影响以及对氧消耗的影响。结果①大黄素呈剂量依赖性抑制脂多糖引起的IL-6、TNF-αmRNA表达;②大黄素呈剂量依赖抑制MAPK信号通路中ERK的磷酸化激活;③大黄素能激活C2C12骨骼肌细胞中AMPK和ACC的磷酸化;④大黄素抑制分化成熟的C2C12骨骼肌细胞的氧消耗。结论大黄素可抑制LPS引起的MAPK通路中ERK的激活,进而抑制炎症因子IL-6、TNF-α的分泌;同时可抑制分化成熟的C2C12细胞的氧消耗,激活AMPK和ACC,从而促进葡萄糖转运,最终改善炎症引起的胰岛素抵抗。     

祛湿化瘀方通过调节AMPK活性改善高脂饮食诱导的实验性脂肪肝肝脏脂肪代谢

目的:研究祛湿化瘀方对高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝AMPK蛋白活性及其相关脂肪代谢靶蛋白活性的影响,以探讨该方防治实验性脂肪肝的作用机制。方法:采用高脂饲料饮食诱导大鼠脂肪肝模型,造模大鼠给予高脂饮食4周后,按随机数字表随机分为模型组及祛湿化瘀方组,分别灌胃给予饮用水及中药祛湿化瘀方4周。实验8周末取材后观察:1)肝组织三酰甘油(Triglyceride,TG)、游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)含量,2)肝组织病理变化(HE染色、油红染色),3)肝组织腺苷酸活化的蛋白激酶(AMP-Activated K inase,AMPK)及磷酸化AMPK、肝组织总蛋白及核蛋白固醇调节元件结合蛋白-1c(Sterol Regulatory Element Binding Protein-1c、SREBP-1c)、肝组织总蛋白及核蛋白碳水化合物反应元件结合蛋白(Carbohydrate Response Element Binding Protein、ChREBP)含量、肝组织乙酰辅酶A羧化酶(Acety1 Co A Carboxylase,ACCase)及磷酸化ACC蛋白含量,4)肝组织AMPKα1、AMPKα2、SREBP-1、ACCα、SREBP-1c及ChREBP基因表达水平。结果:1)模型组肝组织TG、FFA含量显著升高,肝组织出现明显大泡样脂肪变性;模型组肝组织AMPK蛋白磷酸化水平降低、核蛋白SREBP-1与ChREBP表达增加、ACC蛋白磷酸化水平降低蛋白活性升高。2)祛湿化瘀方组肝组织TG、FFA含量较模型组显著降低,肝组织炎症及脂肪变性程度减轻;祛湿化瘀方能显著升高肝组织AMPK、ACC蛋白磷酸化水平、降低核蛋白SREBP-1及ChREBP含量。结论:祛湿化瘀方通过调节AMPK活性及其相关靶蛋白活性改善高脂饮食诱导的大鼠脂肪肝肝脂肪代谢,这可能是该方有效防治实验性脂肪肝的重要作用机制之一。     

黄秋葵醇提物中2种成分对肝细胞糖异生及AMPKα磷酸化的影响

目的观察黄秋葵醇提物中槲皮素和异槲皮苷对肝细胞糖异生及磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6Pase)的影响,并探讨其机制。方法体外培养小鼠原代肝细胞,以乳酸和丙酮酸为糖异生底物。予不同浓度槲皮素、异槲皮苷干预24 h后,葡萄糖氧化酶法测定培养液上清葡萄糖浓度,RT-PCR法检测PEPCK、G6Pase、AMPKαmRNA表达,Western blot法检测总AMPKα、AMPKαThr172磷酸化水平。结果与空白组比较,糖异生诱导组上清葡萄糖浓度显著升高(P0.01);槲皮素和异槲皮苷干预后,80μmol/L槲皮素组、异槲皮苷组显著低于糖异生诱导组(P0.01);糖异生诱导组PEPCK、G6Pase AMPKαmRNA相对表达显著升高(P0.01);80μmol/L槲皮素组、异槲皮苷组PEPCK、G6Pase表达显著低于糖异生诱导组(P0.05)。Western blot显示,80μmol/L槲皮素组、异槲皮苷组AMPKαThr172磷酸化水平均较糖异生诱导组增加。结论黄秋葵醇提物中槲皮素和异槲皮苷呈剂量依赖性地抑制体外培养原代肝细胞糖异生及其关键酶基因转录,AMPKαThr172磷酸化可能与两者抑制糖异生机制有关。     

穴位埋线对围绝经期大鼠脂质代谢的影响及机制研究

目的:探讨穴位埋线法对围绝经期大鼠脂质代谢的影响及其机制。方法:利用双侧卵巢切除(OVX)的方法制备围绝经期大鼠模型,SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌激素组和埋线组,每组10只。比较各组大鼠体质量变化、子宫系数、大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)及肝脏组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPKα)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)及磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠体质量明显升高、子宫系数却明显降低、血清中TC、TG、LDL含量均升高,而HDL含量下降、肝脏组织中p-AMPKα、p-ACC表达均有所下降,具有显著性差异(P0.01)。经穴位埋线治疗后,大鼠体质量明显降低、子宫系数升高、血清中TC、TG、LDL含量均降低,而HDL含升高、肝脏组织中p-AMPKα、p-ACC表达均有所升高,具有显著性差异(P0.05,P0.01)。结论:穴位埋线法能够改善围绝经期大鼠脂质代谢紊乱,其可能的机制是通过激活AMPK信号通路,促进AMPKα、ACC磷酸化实现的。     

川芎嗪与黄芪甲苷配伍对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

摘要：目的：研究川芎嗪与黄芪甲苷及不同浓度配伍对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）氧化损伤模型的保护作用及机制。方法：建立H2O2诱导损伤模型,将细胞分为十七组,空白对照组、过氧化氢(0.2mmol/L)模型组,川芎嗪（40,80,160μg/mL）剂量组、黄芪甲苷（10,20,40μg/mL）剂量组及两两配伍组,MTT法检测不同浓度川芎嗪、黄芪甲苷及其配伍对氧化损伤人脐静脉内皮细胞的增值影响,筛选出最佳配伍比例;检测最佳配伍组MDA含量和SOD活性,Annexin V- FITC/PI 染色荧光显微镜观察细胞凋亡率, Western Blot 检测 p- Akt 和Akt 蛋白的表达 ,RT-PCR检测AKt mRNA的表达。结果： 与模型组相比,川芎嗪与黄芪甲苷不同浓度配伍组均能提高细胞存活率,且川芎嗪（80μg/mL）剂量组 黄芪甲苷（40μg/mL）剂量组具有极显著差异(P<0.001);川芎嗪、黄芪甲苷配伍组降低细胞MDA含量(P<0.001),提高细胞SOD活力(P<0.001)。同时,川芎嗪、黄芪甲苷配伍组能降低细胞凋亡率（P<0.01）,上调 p-Akt/Akt蛋白（P<0.01）,上调Akt基因mRNA的表达（P<0.001）。结论：川芎嗪（80μg/mL） 黄芪甲苷（40μg/mL）对 H2O2诱导的 HUVECs氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的 HUVECs 凋亡,其机制与 PI3K/Akt 信号通路有关