miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT通路促进肺癌细胞A549 对达沙替尼耐药

[摘要] 目的：探讨miR-103 靶向PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进肺癌细胞对达沙替尼（dasatinib,DASA）耐药的机制。方法：收集2014 年4 月至2018 年1 月昆明医科大学第一附属医院胸外科收治的资料完整的肺癌DASA耐药组织和不耐药组织各35 例。采用qPCR实验检测miR-103 在肺癌DASA耐药组织和细胞中的表达水平,同时,采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测敲降miR-103 对A549/DASA细胞增殖、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-103 与PTEN的靶向关系。进一步采用CCK-8、Transwell 和Wb实验检测miR-103 通过PTEN-PI3K/AKT信号通路对A549/DASA细胞恶性生物学行为的影响。结果：miR-103 在肺癌DASA 耐药组织和A549/DASA 细胞中均高表达（均P<0.01）。敲降miR-103 可显著抑制A549/DASA细胞的增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）。此外,双荧光素酶报告基因证实miR-103 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。进一步实验显示,过表达miR-103 通过靶向下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路进而显著促进A549/DASA细胞增殖、迁移和EMT（P<0.05 或P<0.01）,从而上调A549/DASA细胞对DASA的耐药性。结论：miR-103/PTEN/PI3K/AKT信号通路与肺癌DASA耐药性存在调控关系,敲降miR-103 可逆转A549/DASA对DASA耐药。     

PI3K/AKT信号通路相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究PI3K/AKT信号转导通路中PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌中的表达及其与疾病发生发展、预后的关系。方法用免疫组化SP法检测45例乳腺癌患者病理组织（观察组）和其中15例患者癌旁正常组织（对照组）中PTEN、PI3K、AKT表达情况,采用单因素回归分析对PTEN、PI3K、AKT蛋白在乳腺癌组织中阳性表达的相关因素进行分析。结果 PI3K、AKT在乳腺癌中的表达率分别为73.3%、75.5%,高于癌旁正常乳腺组织的33.3%、40%,差异具有统计学意义（P﹤0.05）;PTEN在乳腺癌中表达率为22.2%,低于癌旁正常乳腺组织的53.3%,但差异无统计学意义（P﹥0.05）;单因素回归分析结果显示,患者发病年龄对PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌组织中阳性表达无关（P﹥0.05）;组织学分级、临床分期、存在淋巴结转移是PTEN、PI3K、AKT在乳腺癌组织中的阳性表达的相关因素（P﹤0.05）。结论 PI3K/AKT信号通路可能参与了乳腺癌的发生与发展,PTEN蛋白表达缺失导致AKT、PI3K蛋白的过度表达,PI3K、PTEN、AKT蛋白表达的检测可能有助于预测乳腺癌的预后。     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

PI3K/AKT2在胃癌组织表达及其与临床病理特征和生存期的关系

目的探讨PI3K、AKT2在胃癌、癌旁组织中的表达,分析其表达水平与临床病理特征和预后的关系。方法用组织芯片和免疫组织化学法检测189例胃癌组织、54例癌旁组织、32例正常胃黏膜中PI3K、AKT2的表达。结果胃癌、癌旁组织和正常胃黏膜PI3K阳性表达率分别是76.7%、25.9%和25.0%。AKT2阳性表达率分别是75.7%、27.8%和37.5%。胃癌组织PI3K表达与有无淋巴结转移、浸润深度、分化程度和Lauren分型有关（P〈0.05）,与肿瘤大小无关（P〉0.05）。AKT2表达与肿瘤大小、有无淋巴结转移、浸润深度、分化程度、Lauren分型有关（P〈0.05）。单因素生存分析显示,PI3K、AKT2阳性组对胃癌患者生存期的影响有统计学意义（P〈0.05）,Cox多元回归分析显示,AKT2的异常表达可以作为影响胃癌预后的独立因素（P〈0.05）。结论 PI3K/AKT2细胞信号传导通路参与胃癌的发生、发展、浸润转移,是胃癌发生的晚期事件。AKT2的表达可以作为胃癌预后的独立指标。     

过表达miR-141-3p通过靶向下调PTEN并激活PI3K/Akt信号通路促进卵巢癌A2780 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的：探讨miR-141-3p 通过靶向PTEN并调控PI3K/Akt 通路对卵巢癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法：收集2014 年4 月至2017 年10 月河南省人民医院妇产科收治的资料完整的28 例卵巢癌患者肿瘤组织和相应的癌旁组织,采用qPCR检测卵巢癌组织和细胞系中miR-141-3p 的表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-141-3p 和PTEN的靶向关系;过表达或敲降miR-141 及PTEN基因后,采用CCK-8、Transwell 和Annexin V-FITC/PI 双染流式术检测卵巢癌A2780 细胞增殖、侵袭和凋亡水平,WB实验进一步检测miR-141-3p 对PTEN-PI3K/Akt 信号通路的调控作用。结果：miR-141-3p 在卵巢癌组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-141-3p 靶向作用于PTEN并下调其表达水平（P<0.01）。与对照组相比,敲降miR-141-3p 后A2780 细胞的增殖受到显著抑制（48 h 时,0.36±0.04 vs 0.82±0.06,P<0.05）、侵袭能力明显降低[穿膜细胞数（45.14±7.88）vs（215.32±16.04）个,P<0.01]、细胞凋亡率显著升高[ （9.29±0.65）% vs（1.85±0.26）%,P<0.01]。过表达PTEN显著抑制了A2780 细胞中p-Akt 的表达（均P<0.01）、抑制细胞增殖和侵袭能力（均P<0.01）而明显促进细胞凋亡（均P<0.01）,在过表达PTEN的同时过表达miR-141-3p 或添加IGF-1 后可逆转上述的变化。结论：miR-141-3p 能够促进A2780 细胞增殖、侵袭和诱导凋亡,其机制可能与靶向调控PTEN并激活PI3K/Akt通路有关。     

抑癌基因PTEN、PI3K、AKT在肺癌中的表达及临床意义

目的：探讨抑癌基因PTEN、PI3K、AKT在肺癌中的表达及临床病理学意义研究。方法采用免疫组化SP法检测PTEN、PI3K和AKT蛋白在62例肺癌组织和30例癌旁肺组织中的表达情况,并分析两者的相关性及与临床病理特征的关系,探讨其在肺癌中的作用机制。结果 PTEN mRNA在肺癌组织中表达明显低于癌旁组织,但PI3K mRNA和AKT mRNA在肺癌组织中表达则高于癌旁组织,差异均有统计学意义（P＜0．05）。 PTEN在肺癌组织中的阳性表达率为48．39％（30/62）,明显低于癌旁组织,而PI3K和AKT在肺癌组织中的阳性表达率分别为79．03％（49/62）和70．97％（44/62）,明显高于癌旁组织,差异具有统计学意义（ P＜0．01）。 PTEN、PI3K表达与肺癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及病理类型相关,而AKT表达与肺癌的TNM分期、淋巴结转移及病理类型相关（ P＜0．05）。 PI3K与AKT表达呈正相关（P＜0．05）,与PTEN表达呈负相关（P＜0．05）,AKT与PTEN表达呈负相关（P＜0．05）。结论抑癌基因PTEN在肺癌中的低表达和PI3K/AKT的高表达,提示了PTEN、PI3K及AKT可能促进了肺癌的发生、发展及转移,而PI3 K/AKT细胞信号通路在此过程中起重要作用,可为肺癌的基因靶向治疗提供一个新的方向。     

LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响

目的：观察应用PI3K抑制剂2- （4-吗啉基） -8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮 （LY294002） 对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶 （PI3K） /丝氨酸苏氨酸激酶 （AKT） 信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、 侵袭及凋亡等方面的影响。方法： 应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901, 通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、 基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、 基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 细胞周期素 （CyclinD1） 的表达情况。噻唑蓝比色法 （MTT） 和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、 侵袭、 凋亡等变化。结果： 与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、 MMP-2、 MMP-9、 Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达。LY294002组自第2天起生存率明显下降 （P<0.05）。Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组 （81.0±2.65）、 DMSO组 （81.3±1.52）、 LY294002组 （44.6±2.52）, 3组相比较差异具有统计学意义 （F=255.1, P=0.000）。LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期, S期减（P<0.05）, 早期凋亡的细胞数明显增多（F=149.66, P=0.000）。结论： LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂, 靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达, 在体外显著抑制细胞的增殖、 侵袭, 并促进细胞的凋亡, 因此为临床肿瘤防治提供了新思路, 针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径。     

胃癌细胞SGC7901凋亡的PI3K/Akt通路介导作用及雷帕霉素的作用机制分析

目的：分析雷帕霉素对胃癌细胞中PI3K/Akt蛋白表达的影响作用,以为临床治疗提供参考。方法将生长状态良好的胃癌细胞SGC7901随机分为4组：对照组,雷帕霉素低剂量组、中剂量、高剂量组（n=8）。采用DAPI染色法分析各组细胞的凋亡情况;采用免疫印迹法和Real-time PCR检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达。结果雷帕霉素低、中、高剂量组均可抑制细胞的增殖,差异具有统计学意义（P﹤0.05）;雷帕霉素下调了胃癌细胞中PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达,且与对照组比较,差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论雷帕霉素主要通过抑制PI3K、AKT及mTOR的过表达发挥肿瘤抑制作用。     

lncRNA 00707 通过miR-613 调控胃癌MGC-803、SGC-7901 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的:探讨长链非编码RNA 00707（lncRNA 00707）和微小RNA-613(miR-613)对胃癌细胞增殖和转移的调控作用及其相关机制。方法：收集2014 年1 月至2018 年6 月青海省人民医院肿瘤外科89 例原发性胃癌组织及癌旁组织标本以及胃癌MGC-803、SGC-790、BGC-823 细胞,采用qPCR实验检测胃癌组织和细胞系中lncRNA 00707、miR-613 的表达水平。分别建立lncRNA00707 低表达和过表达细胞模型,采用CCK-8 实验检测MGC-803、SGC-7901 细胞增殖能力,Transwell 法检测MGC-803、SGC-7901 细胞迁移和侵袭能力。用双荧光素酶基因报告实验验证lncRNA 00707 与miR-613 的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中lncRNA 00707 呈明显高表达(P<0.01),lncRNA 00707 表达水平与WHO分期呈正相关(P<0.05);与正常细胞系GES-1 相比,胃癌细胞系中lncRNA 00707 表达明显上调(P<0.05)。敲低lncRNA 00707 可明显抑制SGC-7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05);lncRNA 00707 过表达可明显提高MGC-803 细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。与阴性对照组相比,lncRNA00707 过表达显著降低了miR-613 荧光素酶报告载体的荧光素酶活性,而下调MGC-803 和SCG-7901 细胞中lncRNA 00707,miR-613 的表达显著增加（均P＜0.01）。结论：lncRNA 00707 在胃癌组织和细胞系中发挥促癌效应,其可以通过抑制miR-613 而促进胃癌MGC-803 和SCG-7901细胞的增殖和转移。     

miR-34a regulates cisplatin-induce gastric cancer cell death by modulating PI3K/AKT/survivin pathway

The purposes of this study were to determine the expression profiles of microRNA-34a (miR-34a) in human gastric cancer cell line (SGC-7901) and cisplatin-resistant cell lines (SGC-7901/DDP), and to establish the correlation between miR-34a expression profile and the sensitivity of human gastric cancer cell to cisplatin-based pattern, thereby providing new methods and strategies for treating gastric cancer. Gastric cancer cell line (SGC-7901) and cisplatin-resistant cell line (SGC-7901/DDP) were cultivated in vitro, respectively. Quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and Western blot were utilized to determine the expression profiles of miR-34a and survivin in both gastric cancer cell lines. With miR-34a mimic and miR-34a inhibitor transfected into SGC-7901 and SGC-7901/DDP for 48 h, post-transfection changes of miR-34a expression was determined; the effects of miR-34a ectopic expression on the viability of cisplatin-induce gastric cancer cell were assayed by the MTT method. The effects of miR-34a ectopic expression on apoptosis of cisplatin-induce gastric cancer cell were determined by Annexin V/propidium iodide (PI) double staining method and flow cytometry. The effects of miR-34a ectopic expression on the AKT and p-AKT expression of cisplatin-induce gastric cancer cells were determined by Western blot and flow cytometry with the PI3K pathway inhibitor Wortmannin. As shown by qRT-PCR and Western blot analyses, the expression of miR-34a in cisplatin-resistant cell lines decreased significantly in comparison to that of SGC-7901 cell line (p?<?0.05), while significant up-regulation of survivin expression was also observed (p?<?0.05). Compared with the control group, the expression of miR-34a increased significantly in SGC-7901 cells transfected with miR-34a mimic for 48 h (p?<?0.01). After miR-34a inhibitor transfection, the expression of miR-34a decreased significantly (p?<?0.05). The viability of cisplatin-induce gastric cancer cells increased significantly (p?<?0.05) with significant decrease of apoptosis after miR-34a expression inhibition, as demonstrated by MTT and flow cytometry with miR-34a over-expression, the viability of cisplatin-induce gastric cancer cells decreased significantly (p?<?0.05), with significant apoptosis increase (p?<?0.05). As shown by Western blot and flow cytometry, in comparison to the control group, Wortmannin could inhibit miR-34a inhibitor and DDP induced up-regulation of p-AKT significantly (p?<?0.05) and stimulated apoptosis. In conclusion, miR-34a expression was down-regulated in cisplatin-resistant cell lines. miR-34a over-expression could improve the sensitivity of gastric cancer cells against cisplatin-based chemotherapies, with PI3K/AKT/survivin signaling pathway possibly involved in the mechanism.     

Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响研究

目的 探讨Gab2基因在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及对AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2表达的影响.方法 采用RT-PCR及Western Blot检测胃癌组织和癌旁组织中Gab2的表达.培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别用Gab2小干扰RNA(Gab2-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染细胞,以空脂质体转染的细胞作为对照组,各组细胞培养48 h.应用Western Blot检测细胞中Gab2、AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达的变化,CCK-8检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力.结果 胃癌组织中Gab2的mRNA及蛋白表达水平均明显高于癌旁组织(P﹤0.01);Gab2-siRNA组Gab2蛋白表达水平明显低于对照组(P﹤0.01);siRNA-NC组细胞的存活率、凋亡率、迁移数及AKT、p-AKT、Bax、Bcl-2蛋白表达与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);Gab2-siRNA组细胞的AKT蛋白表达与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05),细胞的存活率、迁移数及p-AKT、Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(P﹤0.01),细胞凋亡率及Bax蛋白表达明显高于对照组(P﹤0.01).结论 Gab2在胃癌组织高表达,沉默Gab2的表达能显著抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖和迁移,并通过调节Bax、Bcl-2蛋白表达促进细胞凋亡,其可能的机制与AKT信号通路的调控有关.     

PRMT5在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响

背景与目的:蛋白精氨酸甲基转移酶5(protein arginine methyltransferase 5,PRMT5)是一种能调控细胞周期的酶,对细胞分裂周期有影响,可以通过调控细胞分裂周期影响细胞的增殖与凋亡。探讨PRMT5在胃癌中的表达及对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移能力的影响。方法:采用蛋白质印迹法(Western blot)检测2016年5月-2019年1月在海南省肿瘤医院确诊为胃癌并进行手术治疗的患者的胃癌组织及其癌旁组织(距离癌组织>5 cm)标本(共88例)中的PRMT5的表达,分析PRMT5相对表达量与胃癌临床特征的关系;用PRMT5小干扰RNA(PRMT5-siRNA)和阴性对照(siRNA-NC)转染人胃癌细胞系SGC-7901,以未转染的SGC-7901细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和Western blot检测转染后细胞中PRMT5 mRNA表达和蛋白水平;采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖;采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡;采用划痕实验检测细胞迁移能力;采用Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;采用Western blot检测cleaved caspase 3、磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)和磷酸化AKT(phosphorylated-AKT,p-AKT)蛋白表达。结果:PRMT5在胃癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01);PRMT5表达水平与胃癌的病理学分级、分期、淋巴结转移有关(P均<0.05);转染后siRNA-NC组和对照组PRMT5 mRNA和蛋白表达量、胃癌细胞的增殖率、凋亡率、cleaved caspase 3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量、划痕愈合率、细胞侵袭数差异均无统计学意义(P>0.05),转染后siRNA-NC组和对照组PRMT5 mRNA和蛋白表达量、胃癌细胞增殖率、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达量、划痕愈合率、细胞侵袭数均高于PRMT5-siRNA组,而凋亡率、cleaved caspase 3低于PRMT5-siRNA组(P均<0.05)。结论:PRMT5在胃癌组织中表达明显升高,其表达水平与胃癌的发生、发展、转移恶化密切相关,下调PRMT5的表达可明显减弱胃癌细胞的增殖、迁移能力,同时促进胃癌细胞的凋亡。     

二氢青蒿素通过PTEN/PI3K/Akt通路抑制胃癌细胞的增殖

  目的  探讨二氢青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)通过PTEN/PI3K/Akt通路对人胃癌细胞株SGC7901细胞周期的影响及其分子机制。  方法  不同浓度(6.25、12.5、25、50、100μmol/L)DHA作用SGC7901细胞24、48、72h后, 细胞计数法检测SGC7901细胞增殖的情况。不同浓度DHA作用SGC7901细胞24 h后, 流式细胞术测定细胞周期的分布; RT-PCR和Western blotting分别测定cyclin D1、P27的mRNA和蛋白的表达水平; Western blotting测定PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平。分别以PTEN特异性小干扰RNA(PTEN-siRNA)及无关序列对照siRNA(non-specific siRNA, NS-siRNA)转染细胞, 加入100μmol/L DHA, 作用SGC7901细胞24 h后, Western blotting测定cyclin D1、P27、PTEN、PI3K、p-Akt的表达水平。  结果  DHA剂量和时间依赖性抑制SGC7901细胞的增殖, 使细胞周期阻滞于G1期(P < 0.05)。RT-PCR和Western blotting分析结果显示, 100μmol/L DHA作用SGC7901细胞24 h后, cyclin D1 mRNA和蛋白表达显著下降, P27 mRNA和蛋白表达显著上升(P < 0.05)。PTEN的蛋白表达显著增加, PI3K和p-Akt的表达水平逐渐下降(P < 0.05)。敲低PTEN表达后, DHA对PI3K和p-Akt的表达水平的影响明显减弱, 与此同时, cyclin D1表达水平升高, P27表达有所下降(P < 0.05)。  结论  DHA通过抑制PTEN/PI3K/Akt信号通路的活化, 影响细胞增殖相关基因cyclin D1和P27的表达, 进而使细胞阻滞于G₀/G₁期, 抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖。