miR-27b-3p通过靶向PLK2促进乳腺癌细胞的辐射抵抗

目的 研究miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗的影响。方法 通过检索基因表达（GEO）数据库，筛选分析miR-27b-3p在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的表达水平。利用实时荧光定量PCR技术分析其在不同乳腺癌细胞系中的表达水平。通过细胞克隆形成、免疫荧光和5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）检测技术评价miR-27b-3p对乳腺癌细胞辐射抵抗作用。采用荧光素酶报告基因技术确定miR-27b-3p的靶基因PLK2，并在乳腺癌细胞中进一步验证miR-27b-3p的辐射抵抗作用。结果 与正常乳腺组织和细胞相比，miR-27b-3p在乳腺癌组织（t=2.99，P<0.01）和乳腺癌细胞中表达水平显著上调（t=21.21、32.88，P<0.05）。尤其在抗辐射细胞MCF-7R中升高更加明显（t=25.63，P<0.05）。过表达miR-27b-3p增强了MCF-7细胞的克隆形成能力（t=10.32，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，miR-27b-3p对MCF-7增殖能力的保护效应逐渐凸显（t=8.77、8.26、8.03，P<0.05）；干扰miR-27b-3p则抑制MCF-7R细胞克隆形成数（t=40.00，P<0.05），且随着辐照剂量的增加，进一步削弱了MCF-7R细胞的增殖能力（t=8.54、8.32、8.23，P<0.05）。报告基因实验结果表明，PLK2是miR-27b-3p的直接靶标。过表达PLK2抑制了miR-27b-3p介导的乳腺癌细胞辐射抵抗（MCF-7：t=9.66，P<0.05；MCF-7R：t=6.42，P<0.05）。结论 miR-27b-3p可通过靶向PLK2提高乳腺癌细胞的辐射抗性。     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

FAM83A对胰腺癌细胞PANC-1干细胞样表型和放射敏感性的影响

目的 探讨FAM83A对胰腺癌细胞PANC-1干细胞样表型和放射敏感性的影响,旨在为胰腺癌靶向治疗提供新思路。方法 慢病毒感染构建稳定沉默FAM83A的PANC-1细胞株,qPCR和Western blot进行验证;流式细胞仪检测干细胞标记物CD133阳性的细胞数;肿瘤细胞成球实验检测PANC-1细胞成球能力;MTT检测吉西他滨对PANC-1稳转株细胞活力的影响;平板克隆形成实验检测X射线照射对PANC-1稳转株细胞增殖的影响;流式细胞术检测吉西他滨和X射线照射对PANC-1稳转株细胞凋亡的影响;Western blot检测PANC-1稳转株细胞中Wnt/β-catenin信号通路表达变化。结果 沉默FAM83A后PANC-1细胞中FAM83A蛋白表达（0.83±0.08）和mRNA表达（0.29±0.03）较阴性对照组FAM83A蛋白表达（1.95±0.19）和mRNA表达（0.98±0.09）显著降低（t=9.410、12.600,P<0.05）;沉默FAM83A后CD133阳性PANC-1细胞率（8.97±0.62）%较阴性对照组（21.60±2.60）%显著降低（t=8.184,P<0.05）,且细胞成球数（8±1）较阴性对照组（25±3）亦显著降低（t=9.311,P<0.05）,PANC-1细胞干细胞样表型显著被抑制;沉默FAM83A联合50 μmol/L吉西他滨处理PANC-1细胞72 h后细胞活力（32.33±3.05）%较吉西他滨处理组（63.06±5.98）%显著降低,细胞凋亡率（76.52±8.34）%较吉西他滨处理组（40.88±4.91）%显著增加,差异有统计学意义（t=6.378、7.929,P<0.05）;沉默FAM83A联合X射线照射后,PANC-1细胞活力（43.25±4.21）%较X射线照射组（78.13±7.98）%明显降低,细胞凋亡率（44.56±5.32）%较X射线照射组（15.15±1.95）%明显增加,差异有统计学意义（t=6.694、8.990,P<0.05）;沉默FAM83A后细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白Active-β-catenin表达降低,p-β-catenin表达增加,且细胞核中β-catenin表达也降低,差异有统计学意义（t=10.290、8.521、8.969,P<0.05）,而Total β-catenin无明显变化,细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性明显被抑制。结论 沉默FAM83A可能通过Wnt/β-catenin信号抑制胰腺癌细胞干细胞样表型,增强细胞对化疗药物吉西他滨及放射敏感性,FAM83A将可为胰腺癌临床治疗提供新靶点。     

miR-885-3p靶向AKT1对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响

目的 探究miR-885-3p对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响以及作用机制。方法 荧光定量PCR检测经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射后HT-29细胞中miR-885-3p的表达量;建立过表达miR-885-3p细胞株,功能试验探讨其对HT-29细胞放射敏感性的影响;生物信息学预测miR-885-3p下游调控的靶基因,双荧光素酶报告基因法进一步验证;上调和下调miR-885-3p表达量探讨miR-885-3p与靶基因丝苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）表达量的调控关系;慢病毒转染敲减AKT1表达量,观察其对HT-29细胞放射敏感性的影响;共转染miR-885-3p模拟物,探讨过表达AKT1对miR-885-3p诱导的HT-29细胞放射敏感性的影响。结果 miR-885-3p在放射诱导的HT-29细胞中表达上调（F=46.64,P<0.05）;过表达miR-885-3p和敲减AKT1可通过抑制HT-29细胞存活、促进其凋亡,从而增强HT-29细胞放射敏感性（t=12.33、12.95,P<0.05）,放射增敏比（SER）分别为1.602和1.946;抑制miR-885-3p可通过促进HT-29细胞存活、抑制其凋亡从而促进HT-29细胞放射抵抗（t=11.94,P<0.05）,SER为0.839;AKT1是miR-885-3p下游靶基因;过表达AKT1反转miR-885-3p增强HT-29放射敏感性的作用,SER为0.680。结论 miR-885-3p通过直接靶向AKT1增加结直肠癌HT-29细胞放射敏感性,为提高临床结直肠癌放疗敏感性提供一个靶点。     

姜黄素提高人胰腺癌PANC-1细胞放射敏感性的机制研究

目的 观察姜黄素对人胰腺癌PANC-1细胞放射敏感性的影响。方法 γ射线照射人胰腺癌PANC-1细胞,同时联合应用姜黄素处理细胞,通过MTT法检测PANC-1细胞增殖活性的变化,利用流式细胞仪观察PANC-1细胞周期和凋亡率的变化,采用RT-PCR和Western blot分析PANC-1细胞中P21表达的变化。结果 与γ射线照射组比较,γ射线联合应用姜黄素可以显著降低PANC-1细胞的增殖活性(t=6.72, P<0.01),同时影响细胞周期的变化,显著增加S期细胞(t=4.78, P<0.05),PANC-1细胞凋亡明显提高(t=6.58,P<0.01),并伴有P21蛋白和mRNA表达的变化(t=5.72、5.63, P<0.01)。结论 姜黄素可以显著提高人胰腺癌PANC-1细胞的放疗敏感性,这一特性与P21的表达有关。     

过表达miR-29c靶向抑制AKT2增强肝癌HepG2细胞放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-29c靶向AKT2对肝癌细胞HepG2放射敏感性的影响。方法 RT-PCR检测人正常肝THLE-3细胞和肝癌HepG2细胞中miR-29c表达。给予不同剂量（0、2、4、6和8 Gy）的X射线照射后,RT-PCR检测HepG2细胞中miR-29c表达变化。经生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测miR-29c与AKT2的靶向关系。采用脂质体2000将miR-29c mimic/AKT2基因重组质粒和miR-29c inhibitor/慢病毒载体AKT2 shRNA转染至HepG2细胞中,并给予不同剂量X射线照射后,克隆形成实验和MTT实验检测miR-29/AKT2对HepG2细胞存活率和细胞活力的影响。结果 与THLE-3细胞相比,HepG2细胞中miR-29c明显降低,差异有统计学意义（t=17.816,P<0.05）;HepG2经2、4、6和8 Gy X射线照射后,细胞存活率较THLE-3细胞显著降低（t=4.541、6.823、7.218、9.363,P<0.05）,HepG2细胞中miR-29c表达显著下降（t=5.599、9.262、10.470、10.873,P<0.05）。miR-29c过表达可降低HepG2细胞存活率和细胞活力（t_存活率=4.307、7.668、7.668、6.894,P<0.05;t_细胞活力=3.443、8.116、13.434,P<0.05）;反之,抑制miR-29c表达则升高HepG2细胞存活率和细胞活力（t=4.003、6.713、7.141,P<0.05;t_细胞活力=4.282、5.113,P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明,AKT2是miR-29c的靶基因,Western blot检测结果显示,miR-29c可负向调控AKT2蛋白表达。沉默AKT2后,HepG2细胞的存活分数及细胞存活率趋势与miR-29c过表达相一致;反之,AKT2过表达则与抑制miR-29c表达相一致。结论 miR-29c可通过靶向AKT2增加肝癌细胞HepG2放射敏感性。     

miR-141过表达增强人食管癌细胞的放射敏感性

目的 研究miR-141对食管癌细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 将miR-141 mimic或miR-对照转染到食管癌KYSE-150细胞中,分别使用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-141和增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。CCK-8,流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放射敏感性变化。结果 随放射剂量的增加,食管癌细胞中miR-141表达逐渐降低（t=2.57~8.96,P<0.05）。miR-141过表达抑制了细胞的增殖和克隆形成能力,促进了KYSE-150细胞凋亡,使得放射敏感性增高（t=3.24,P<0.05）。此外,与对照组相比,miR-141过表达显著抑制KYSE-150细胞中的Ki67和Bcl-2蛋白表达（t=6.56、8.24,P<0.01）,并促进Bax蛋白表达（t=3.24,P<0.01）,进一步证实了miR-141增强食管癌细胞的放射敏感性。结论 miR-141通过调控细胞增殖和凋亡相关蛋白表达增强食管癌细胞的放射敏感性。     

TLR2下游辐射防护关键miRNA筛选及miR-21功能验证

目的 筛选Toll样受体2（Toll-like receptor 2, TLR2）通路下游与辐射防护调控相关的关键miRNA,并探讨miR-21功能。方法 以⁶⁰Co γ射线对野生型（wild type, WT）、TLR2 KO小鼠分别进行6.0、7.0、8.0 Gy全身照射,观察小鼠生存情况;通过转录组测序筛选骨髓细胞内TLR2通路下游关键miRNA,并通过QT-PCR验证其表达。过表达/敲低该miRNA后检测其生物学功能。结果 6.0、7.0、8.0 Gy全身照射后,TLR2 KO小鼠较WT小鼠辐射敏感性增加（χ²=4.490、13.100、7.928,P<0.05）,骨髓移植实验证明TLR2 KO小鼠辐射敏感性增加与照射后骨髓细胞损伤有关（χ²=4.291,P<0.05）。转录组测序筛选到差异基因55个（[log2 Fold Change]>0.95,Q<0.05）,其中上调基因28个,下调基因27个;定量PCR实验确定TLR2 KO（t=9.420,P<0.01）与MyD88 KO（t=10.700,P<0.01）小鼠骨髓细胞内miR-21表达下调。PAM3CSK4刺激后小鼠骨髓细胞内白介素6（IL-6）（t=13.790,P<0.05）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）（t=14.280,P<0.05）表达量上调且依赖于TLR2。miR-21过表达可以促进EL4（t=5.951,P<0.05）和NIH/3T3（t=4.786,P<0.05）辐射后细胞活力,抑制WT小鼠（t=4.842,P<0.05）和TLR2 KO小鼠（t=10.520,P<0.05）BMCs辐射后细胞凋亡。miR-21敲低后降低EL4（t=4.815,P<0.05）和NIH/3T3（t=4.042,P<0.05）辐射后细胞活力。结论 miR-21在TLR2辐射防护进程中具有关键调控作用,其作用机制可能与上调IL-6与TNF-α有关。     

程序性细胞死亡4基因增强胰腺癌细胞放射敏感性的研究

目的 探讨程序性细胞死亡4（PDCD4）对胰腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法 收集胰腺癌组织及对应的癌旁组织,采用RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。以人胰腺癌细胞Sw1990为研究对象,细胞转染PDCD4过表达载体（pIRES2-PDCD4组）、空载体（pIRES2组）,同时以只加入转染试剂的细胞为未转染组,RT-PCR和Western blot检测PDCD4表达水平。细胞经放射处理后,流式细胞术检测细胞凋亡情况,细胞克隆实验检测细胞放射敏感性,Western blot检测细胞中β-连环蛋白、Wnt信号通路下游靶基因c-myc、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）表达水平。结果 胰腺癌组织中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（t=4.869、9.208,P<0.05）。pIRES2-PDCD4组细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平均明显高于未转染组（t=9.074、18.927,P<0.05）。照射处理后,pIRES2-PDCD4组细胞凋亡率及细胞中Cleaved Caspase-3水平均明显高于未转染组（t=3.670、4.086,P<0.05）,而细胞中β-连环蛋白、c-myc表达水平均明显低于未转染组（t=9.242、17.644,P<0.05）。pIRES2-PDCD4组放射敏感性高于未转染组,增敏比为1.843。结论 PDCD4能够增加胰腺癌细胞放射敏感性,促进胰腺癌细胞凋亡,作用机制可能与Wnt信号通路有关。     

沉默Rev1基因对人结肠癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨沉默Rev1基因对人高分化结肠癌细胞THC8307 X射线照射后增殖、凋亡的影响。方法 利用RNA干扰技术将Rev1基因的特异性片段转染THC8307细胞,用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后细胞中目的基因的表达;实验分空白对照组、阴性对照组、Rev1 siRNA组。分别给予0、6 Gy X射线照射,运用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同时段（0、24、48、72、96 h）细胞增殖情况,并绘制增殖曲线;流式细胞仪（FCM）检测不同剂量X射线处理后的细胞凋亡;Western blot检测各组PCNA、γ-H2AX、P53、Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 与空白对照组相比,6 Gy X射线照射后,沉默Rev1基因组细胞增殖速率明显降低（t=7.53,P<0.05）,凋亡明显增加（t=6.23,P<0.05）,增殖细胞抗原（PCNA）表达下降（t=4.39,P<0.05）,γ-H2AX表达升高（t=5.48,P<0.05）,P53表达升高（t=5.09,P<0.05）、Bax表达升高（t=3.32,P<0.05）、Bcl-2表达降低（t=6.13,P<0.05）。结论 沉默Rev1基因,抑制了X射线作用下的结肠癌细胞THC8307的增殖,促进了凋亡,增加了其对X射线的放射敏感性。     

miR-124靶向STAT3改善脑恶性胶质瘤细胞辐射敏感性

目的 研究miR-124在放射敏感及耐受的脑恶性胶质瘤细胞LN229和LN229R中的表达以及miR-124对细胞放射敏感性的影响,并深入探讨miR-124调控LN229R细胞放射敏感性的作用机制。方法 将miR-124模拟物（miR-124）及阴性对照（miR-NC）,STAT3过表达质粒（STAT3）及pcDNA3.1质粒（pcDNA）单独或共转染到放射抵抗的胶质瘤细胞LN229R中。qRT-PCR检测LN229和LN229R细胞中miR-124的表达;克隆形成实验分析不同放射剂量下LN229R细胞的生存率以及敏感性相关参数值;流式细胞术分析LN229R细胞的凋亡情况;生物信息学预测miR-124和STAT3的靶向关系,并利用双荧光素酶报告分析加以验证;Western blot分析STAT3的蛋白表达水平。结果 与LN229组（1.02±0.09）相比,miR-124在LN229R细胞中的表达水平（0.32±0.03）显著降低,差异有统计学意义（t=12.780,P<0.05）;与miR-NC组（0.95±0.06）相比,转染miR-124模拟物可促进LN229R细胞中miR-124的表达（4.02±0.39）（t=13.476,P<0.05）;8 Gy照射条件下,miR-124过表达组癌细胞的生存率（0.003±0.000 4）显著低于miR-NC组（0.033±0.005 0）（t=5.655,P<0.05）,细胞凋亡率（22.34±2.42）%显著高于miR-NC组（4.69±0.51）%（t=12.361,P<0.05）;STAT3是miR-124的靶基因;外源回补STAT3可逆转miR-124对LN229R细胞生存的抑制作用。结论 miR-124通过靶向STAT3改善LN229R细胞的放射敏感性。     

lncRNA GAS5通过下调miR-223的表达提高结肠癌细胞的放射敏感性

目的 探究生长特异抑制物5（lncRNA growth arrest-specific 5,lncRNA GAS5）通过靶向调控miR-223的表达对结肠癌细胞的放射敏感性的影响。方法 采用荧光定量PCR（qPCR）检测多种结肠癌细胞系中lncRNA GAS5的表达量,选择表达量较低的作为后续研究对象;细胞克隆实验检测过表达lncRNA GAS5对结肠癌SW480细胞放射敏感性的影响;通过生物信息学数据库starBase以及双荧光素酶报告基因实验预测以及验证lncRNA GAS5的靶基因miR-223;qPCR检测miR-223在多种结肠癌细胞系中的表达量,以及过表达lncRNA GAS5对SW480细胞中miR-223表达量的影响。结果 与人正常结肠上皮细胞（NCM460）相比,lncRNA GAS5在结肠癌SW480、LOVO、HT-29、SW620细胞系中的表达量显著降低（t=15.25、8.69、14.42、11.62,P<0.05）,其中在SW480细胞中的表达量最低;过表达lncRNA GAS5或者下调miR-223显著降低细胞的存活分数（8 Gy时lncRNA GAS5：t=13.51,P<0.05;anti-miR-223：t=14.93,P<0.05）,促进凋亡（lncRNA GAS5：t=8.30,P<0.05;anti-miR-223：t=7.32,P<0.05）,增加结肠癌细胞放射敏感性;生物信息学分析显示,lncRNA GAS5 3''端序列中包含与miR-223的结合位点,过表达/下调lncRNA GAS5后,miR-223的表达量下降/上升。结论 lncRNA GAS5通过靶向调控miR-223的表达促进结肠癌细胞凋亡、抑制其存活,从而提高结肠癌细胞的放射敏感性。     

放疗对血清miR-150-5p和miR-23a-3p表达水平的影响

目的 通过采集肿瘤患者放疗前后外周血,探讨照射对人外周血血清miR-150-5p、miR-23a-3p表达的影响,以期为寻找辐射生物标志物提供科学依据。方法 以2021年10月至2022年3月63例行放疗的肿瘤患者为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法,检测患者放疗前后外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达水平。比较两种miRNAs放疗前后在患者外周血血清中的差异表达变化,分析其与肿瘤类型等因素的关系。结果 放疗后,患者外周血血清miR-150-5p与miR-23a-3p的相对表达量明显低于放疗前(t=4.97,Z=-2.77,P<0.05)。不同的肿瘤类型中,乳腺癌、食管癌和其他消化道肿瘤患者放疗后miR-150-5p的相对表达量降低(t=3.47、2.47、2.87,P<0.05),消化道肿瘤患者放疗后miR-23a-3p相对表达量下降(Z=-1.99,P<0.05)。在放疗前、后miR-150-5p的表达改变均不受性别、年龄、化疗和肿瘤类型等因素影响(P>0.05),而miR-23a-3p的表达改变在放疗后受性别、年龄和化疗等因素影响(t=2.04、 -3.34、-2.29,P<0.05)。结论 放疗可影响肿瘤患者血清中miR-150-5p的表达,其有作为辐射生物学标志物的潜力。     

长链非编码RNA PRMT5-AS1调控电离辐射诱导肝癌细胞铁死亡机制的研究

目的 探讨长链非编码RNA PRMT5-AS1对电离辐射诱导的肝癌细胞铁死亡的影响。方法 在MHCC-97H细胞中构建PRMT5-AS1过表达模型,在HepG2细胞中构建PRMT5-AS1敲低模型。使用X射线照射,吸收剂量为10 Gy,剂量率为3 Gy/min。采用Western blot和qRT-PCR实验检测基因表达水平。采用台盼蓝染色流式细胞术检测PRMT5-AS1表达对受照肝癌细胞脂质过氧化以及铁死亡的影响。采用CCK-8实验检测PRMT5-AS1表达水平对电离辐射照射后肝癌细胞死亡的影响。双荧光素酶报告实验检测let-7c-5p与PRMT5-AS1和SLC7A11之间结合作用。结果 MHCC-97H细胞中过表达PRMT5-AS1能够显著降低电离辐射引起的细胞死亡(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:27.57% vs.18.30%,t=14.94,P<0.05)。HepG2细胞中敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射引起的细胞死亡(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:17.26% vs.28.26%,t=13.63,P<0.05)。过表达PRMT5-AS1能够明显抑制由电离辐射诱导的细胞内脂质活性氧(ROS)水平增加(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:17.01% vs.12.52%,t=12.80,P<0.05),敲低PRMT5-AS1可显著增加电离辐射诱导的脂质ROS水平增加(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:14.54% vs.17.72%,t=5.93,P<0.05)。CCK-8实验结果表明,过表达PRMT5-AS1能够显著抑制Erastin诱导的细胞活性降低(对照组vs. PRMT5-AS1过表达组:87.92% vs.109.06%,t=2.87,P<0.05),敲低PRMT5-AS1则促进Erastin抑制细胞活性(对照组vs. PRMT5-AS1敲低组:82.56%vs.60.58%,t=38.35,P<0.05)。Western blot和荧光定量PCR结果表明,过表达PRMT5-AS1能够明显提高SLC7A11的蛋白和mRNA水平(t=26.24,P<0.05),敲低PRMT5-AS1后SLC7A11的蛋白和mRNA水平均显著降低(t=5.60,P<0.05)。荧光素酶报告基因实验表明PRMT5-AS1与let-7c-5p之间存在相互作用(t=9.74,P<0.05)。PRMT5-AS1可以与let-7c-5p形成ceRNA网络,靶向调节SLC7A11。let-7c-5p能够逆转由过表达PRMT5-AS1引起的SLC7A11表达水平增加、脂质ROS水平和细胞死亡减少(t=3.01、4.11,P<0.05),而敲低SLC7A11能够逆转PRMT5-AS1引起的脂质ROS抑制和细胞死亡减少(t=21.35、7.15,P<0.05)。结论 长链非编码RNA PRMT5-AS1通过PRMT5-AS1/let-7c-5p/SLC7A11轴抑制电离辐射诱导肝癌细胞铁死亡的发生。     

CDT1基因过表达对辐射诱发基因组不稳定肝细胞HL-7702凋亡及细胞周期的影响

目的 研究CDT1基因过表达对辐射诱发基因组不稳定肝细胞凋亡及细胞周期的影响.方法 选择基因组不稳定肝细胞HL-7702,利用慢病毒介导的过表达技术,上调辐射诱发基因组不稳定肝细胞中CDT1基因的表达,通过流式细胞术研究CDT1基因过表达对细胞周期及细胞凋亡的影响;利用实时荧光定量PCR方法,检测CDT1基因上调后p53、ATM、ATR、Bcl-2、Caspase-3基因的表达变化.结果 慢病毒介导的过表达能有效上调HL-7702细胞中CDT1基因的表达(t=15.56, P<0.05),与阴性对照组相比,CDT1基因的上调能够导致基因组不稳定肝细胞HL-7702凋亡率升高(t=4.19, P<0.05);CDT1基因的过表达能诱发基因组不稳定肝细胞p53、Bcl-2基因的表达显著下调(t=-4.21、-2.06, P<0.05),同时,ATM基因上调,ATR和Caspase-3基因下调,但差异均无统计学意义.结论 CDT1基因的过表达通过参与非p53依赖的凋亡途径以及细胞周期检查点适应性对基因组不稳定性进行调控.