低剂量环磷酰胺对Lewis肺癌小鼠CD4+CD25+Treg细胞功能的影响

目的：研究低剂量环磷酰胺（CTX）单次注射对Lewis肺癌小鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞功能的影响,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞与肿瘤发生、发展的关系。方法：将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下,建立Lewis肺癌模型,随机分成3组：CTX组、肿瘤组、单纯对照组。采用CTX单次注射,观测各组肿瘤体积动态变化;采用流式细胞术检测各组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测各组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平;采用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖功能;采用LDH释放法检测脾脏特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)细胞的杀伤活性。结果：与未治疗肿瘤组相比,CTX治疗可延缓荷19 d Lewis肺癌小鼠的肿瘤生长;CTX组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏Foxp3 mRNA表达水平明显低于肿瘤组（P< 0.05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞功能明显高于肿瘤组（P<0. 05）;CTX组小鼠脾脏T淋巴细胞杀伤活性比肿瘤组略高,但变化不显著（P>0.05）。结论：CTX单次注射可降低Lewis肺癌小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺Treg细胞的数量及Foxp3 mRNA表达,使T淋巴细胞增殖功能及脾细胞中CTLs杀伤功能增强。     

供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg对心脏移植小鼠体内B细胞功能的影响

目的 观察供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg对同种异系心脏移植小鼠受体B细胞功能的影响.方法 以Balb/c小鼠为供体、C57bl/6小鼠为受体建立小鼠心脏移植模型,于术前1 d、术后2周分别将供体抗原特异性的CD4+CD25+Treg (1×106)于尾静脉注入受体体内,术后1个月抽取小鼠外周血,分离B细胞,检测其在抗IgM抗体刺激下的增殖情况,检测小鼠外周血IgG、IgA水平,以判断应用CD4+CD25+Treg后小鼠体内B细胞功能状态.实验组:术前、术后2周使用CD4+CD25+Treg(n＝8);阳性对照组:术前、术后未使用CD4+CD25+Treg(n＝8);空白对照组:未移植小鼠(n＝8).结果 实验证实,实验组B细胞增殖水平最低,空白对照组其次,阳性对照组最高,3组差异均有统计学意义(P<0.05).外周血IgG、IgA水平检测证实,实验组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),二者明显低于阳性对照组(P<0.01).结论 经尾静脉注入CD4+CD25+Treg后心脏移植受体体内B细胞的功能可明显受到抑制,CD4+CD25+Treg可通过对B细胞的这一作用调节受体免疫状态,从而达到控制排斥反应,诱导免疫耐受的作用.     

自身免疫调节因子对CD4+CD25+Treg细胞的影响

目的：观察自身免疫调节因子（AIRE）对CD4+CD25+Treg细胞的影响,探讨其在外周免疫耐受中的作用及机制。方法：pEGFPC3-AIRE质粒通过脂质体介导转染RAW264.7细胞;通过流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的数量;采用半定量RT-PCR法检测Foxp3和转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达;采用ELISA法检测TGF-β1水平。结果：AIRE转染的RAW264.7细胞可直接或间接诱导CD4+CD25+Treg细胞的产生及Foxp3 mRNA表达增强(P<0.05)。结论：表达在外周抗原提呈细胞（APCs）上的AIRE可直接和（或）间接影响CD4+CD25+Treg细胞的诱导产生及功能,从而可能在外周免疫耐受中发挥重要作用。     

肿瘤细胞对CD4~+CD25~+Treg细胞数量和功能的影响

目的：探讨肿瘤细胞与免疫细胞相互作用对CD4+CD25+Treg细胞数量和功能的影响。方法：建立Lewis肺癌细胞与小鼠脾淋巴细胞共培养体系。Lewis肺癌细胞与不同浓度小鼠脾淋巴细胞共培养,分为4组：实验组Ⅰ（5×105个Lewis肺癌细胞与1×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅰ（1×106个淋巴细胞单独培养）、实验组Ⅱ（5×105个Lewis肺癌细胞
与2×106个淋巴细胞共培养）、对照组Ⅱ（2×106个淋巴细胞单独培养）;Lewis肺癌细胞与
淋巴细胞共培养不同时间,采用3个时间点：24、48和72 h;Lewis肺癌细胞培养上清与淋巴细
胞共培养,选择培养上清浓度为20%和50%。采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴
细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化,通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp
3 mRNA表达的影响。结果：与对照组比较,实验组Ⅰ 中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRN
A表达明显增强（P<0.05）,实验组Ⅱ中CD4+CD25+Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达无明
显变化（P>0.05）;Lewis肺癌细胞与淋巴细胞培养24及48 h可见CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3
mRNA表达明显升高（P<0.05）,而72 h后变化不明显;20%和50% Lewis肺癌细胞培养上清
均可明显提高CD4+CD25+Treg数量及Foxp3 mRNA表达（P<0.05）。结论：肿瘤细胞及其培养
上清可诱导CD4+CD25+Treg细胞数量增加、功能增强,由肿瘤细胞所引起的CD4+CD25+Treg细
胞产生及功能增强可能是肿瘤逃避免疫监视机制之一。     

哮喘患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与IL- 4,IL- 5的表达

目的:探讨哮喘患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞与IL- 4,IL- 5的水平变化及其相互关系.方法:采用流式细胞技术检测40例哮喘患者和40例健康对照者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞的表达水平,采用ELISA法检测外周血中IL- 4,IL- 5水平.结果:哮喘患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞低于健康对照者(P＜0.01);急性发作期哮喘患者外周血中CD4 CD25 调节性T细胞低于非急性发作期(P＜0.01);哮喘患者IL- 4,IL- 5的表达水平高于健康对照者(P＜0.05);急性发作期患者IL- 4,IL- 5的表达水平高于非急性发作期(P＜0.05);急性发作期哮喘患者外周血CD4 CD25 T细胞与IL- 4,IL- 5的表达水平呈负相关(r分别为-0.675,-0.767,P＜0.01).结论:CD4 CD25 调节性T细胞在哮喘的疾病活动中起着重要作用,是导致哮喘患者细胞免疫失调的重要原因.     

雌激素对CD4+CD25+Treg T细胞影响的研究进展

自身免疫性疾病是因为正常免疫耐受功能受损而导致免疫细胞及其成分对自身组织的结构和功能破坏,并出现引起一系列临床症状的一类疾病.其发病机制目前尚不完全清楚,临床治疗以免疫抑制剂为主,治疗效果不甚理想却出现很多毒副反应.     

人初始CD4+CD25+调节性T细胞的功能分析

目的:分离人CD4 CD25 Treg细胞,并进行功能分析。方法:应用免疫磁珠分离正常人外周血中CD4 CD25 Treg细胞,流式细胞仪检测细胞内因子IL-4、IFN-γ和IL-10表达,与CD4 CD25-T细胞共同培养,加或不加入中和抗体抗IL-10和抗TGF-β,检测其抑制功能。结果:CD4 CD25 Treg细胞约占正常外周血中CD4 T细胞的6%(2.4%￣18.9%,n=15),主要合成IL-10,能够以依赖剂量和非依赖IL-10和TGF-β方式抑制CD4 CD25-T细胞的增殖。结论:CD4 CD25 Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的T细胞亚群细胞。     

CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg调节性T细胞与移植肾长期存活的关系

[摘要] 目的 探讨肾移植术患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T 细胞( regulatory T cell , Treg) 百分含量,血清细胞因子IL-10的水平变化对移植肾远期存活的影响及其作用机制。 方法 肾移植术受者30例按肾移植术后恢复情况分为移植肾长期存活组16例,急性排斥组14例。健康志愿者20 例。分别检测外周血CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg 百分含量、血清IL-10 水平、血清肌酐水平,所得结果进行相关分析。 结果　移植肾长期存活组CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量较正常组及急性排斥组均显著升高。CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量和血清IL-10 水平呈正相关(r=0.604,p<0.05),移植肾长期存活组的血清肌酐水平明显低于急性排斥组,CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量和血清肌酐水平呈负相关（r=-0.534,p<0.05）。结论 CD4+CD25+Foxp3+ Treg 有可能参与移植术后受者对同种异体移植肾免疫耐受,与受者长期存活密切相关;外周血CD4+CD25+Foxp3+ Treg 百分含量可作为临床反映移植受者免疫功能状态的指标之一。     

应用CD4+CD25+Treg细胞诱导大鼠肾移植免疫耐受的研究

目的 应用供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞诱导移植免疫耐受,抑制大鼠肾移植慢性排斥反应.方法 以SD、Wister大鼠分别为供、受体建立同种异体肾移植慢性排斥反应动物模型;受体脾细胞悬液同供体肾组织抗原孵育培养,诱导获得对供体抗原的特异性;采用MACS法分选具有供体抗原特异性的CD4 CD25 T细胞,FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞及CD4 CD25 Treg细胞纯度;获得之供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞于同种异体肾移植术后2、4、6、8、10周,分别经尾静脉注射入受者体内(实验组,n=12),选取未注射组为对照(n=12).观察两组移植肾脏存活时间;术后第10、40、80天MTT法检测比较两组受体脾细胞对供体抗原刺激反应程度;术后第10、20、40、60、80天分别监测各组血肌酐水平.结果 FACS流式细胞法检测分选的CD4 CD25 T细胞得率为4.13%,分离纯度为73.34%;CD4 CD25 Treg细胞纯度为65.22%.所分选之CD4 CD25 Treg细胞成功获得供体抗原特异性,对供体抗原的抑制率(IR)为85.4%.移植肾存活时间:治疗组移植肾存活时间为(98.83±6.66)d,显著长于对照组的(78.25±4.71)d,组间差异有统计学意义(P＜0.05);术后第40、80天治疗组脾细胞对供体抗原刺激反应程度均明显低于对照组,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).术后第20、40、60、80天对照组血肌酐指标明显高于治疗组,同治疗组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 供体抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞可特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应,有效抑制了移植肾慢性排斥反应的发生.     

胸腺五肽对胃癌化疗患者CD4+CD25+Treg细胞的影响及临床意义

目的:探讨胸腺五肽对胃癌化疗患者CD4+CD25+Treg细胞的影响方法:60例进展期胃癌患者随机分为A组和B组应用流式细胞术检测化疗前1天及化疗后7天患者外周血Treg细胞比值应用SAS 8.2软件进行统计学分析结果:①胃癌患者Treg细胞比值高,有统计学意义(P＜0.05);②化疗后Treg细胞比值与化疗前相比,A组升高,有统计学意义(P＜0.05);B组无统计学意义(P＞0.05)结论:胃癌患者外周血Treg细胞水平升高,提示其可能在肿瘤发展过程中起着重要作用胸腺五肽能降低Treg细胞比值,减轻化疗的毒副作用,改善机体免疫功能,值得在临床推广使用     

悬浮红细胞对CD4+CD25+Treg细胞分化的影响

目的 体外观察悬浮红细胞对异体T淋巴细胞向CD4+ CD25+ Treg细胞分化的影响.方法 采用Ficoll密度梯度离心法和免疫磁珠法从人外周血中分离纯化出CD3+T淋巴细胞,给予CD3/CD28抗体刺激,并分别与异体非去白悬浮红细胞或去白悬浮红细胞混合培养72 h.采用流式细胞仪检测各组培养体系中CD4+ CD25+Treg细胞的比例.采用实时荧光定量PCR检测各组Foxp3 mRNA的表达情况.采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组细胞上清中促炎细胞因子[白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)和干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)]和抗炎细胞因子[白细胞介素10(interleukin-10,IL-40)和转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)]的水平.结果 与阴性对照组(细胞培养液组)比较,非去白悬浮红细胞和去白悬浮红细胞组CD4+ CD25+ Treg细胞比例明显增加,功能基因Foxp3 mRNA表达也明显增高;1L-2和IFN-γ促炎细胞因子分泌减少,IL-10和TGF-β抗炎细胞因子分泌增多(P＜0.01).而与去白悬浮红细胞比较,非去白悬浮红细胞作用更加明显(P＜0.05).结论 悬浮红细胞可能通过调节促炎/抗炎细胞因子平衡诱导异体T淋巴细胞向CD4+ CD25+ Treg分化,而悬浮红细胞内残留的白细胞可能在其中起了关键作用.     

慢性乙型肝炎患者外周血Treg细胞对DC细胞的抑制作用

目的 检测慢性乙型肝炎患者外周血中Treg细胞的比例,并探讨其对DC细胞的免疫抑制作用.方法 抽取慢性乙型肝炎(CHB)患者和正常对照组的外周血,流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例以及DC细胞表面CD80和人白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)的表达;在DC培养的不同时间内加入不同比例CHB患者的Treg细胞,检测DC对淋巴细胞增殖功能的影响;检测DC培养的不同时间内加入不同比例CHB患者的Treg细胞后培养上清中细胞因子白细胞介素-10(IL-10)和肿瘤转化因子-β(TGF-β)的表达.结果 正常人外周血中Treg(CD4+CD25+Foxp3+)细胞的比例为(4.12±1.36)％,CHB患者外周血中Treg细胞的比例为(10.54±3.27)％,CHB患者外周血中的Treg细胞比例明显高于正常组,差异有统计学意义;CHB患者表面分子CD80的表达为(60.12±5.23)％,HLA-DR的表达为(61.21±4.28)％;而正常组的CD80的表达为(84.13±4.33)％,HLA-DR的表达为(86.57±3.82)％,CHB患者DC细胞表面分子CD80和HLA-DR的表达均显著低于正常组,差异有统计学意义;经Treg细胞处理后,DC细胞刺激淋巴细胞的增殖能力下降,淋巴细胞增殖的抑制率较正常组均显著升高;Treg细胞与DC细胞比例为1∶1、1∶10以及1∶100时,IL-10和TGF-β的表达均显著高于正常组,并且随着Treg细胞的比例增高,细胞因子的水平也相应增高,差异有统计学意义.结论 CHB患者外周血中Treg细胞比例增高,可能是通过诱导IL-10和TGF-β的表达抑制DC细胞的免疫功能.     

CD4+CD25+Treg细胞在复发性自然流产中的作用及意义

目的 探讨复发性自然流产患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达特点及其相关临床意义。方法 选取2015年3月至2017年7月在我院妇产科就诊的复发性自然流产妇女100例作为复发性自然流产组(RSA组),另选择同期在我院妇产科就诊的正常妊娠产妇50例作为对照组(正常妊娠组)。采用流式细胞术检测两组外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,并对两组结果进行比较分析。结果 复发性自然流产组CD4+CD25+Treg细胞表达水平为(5.06±1.35)%,显著低于正常妊娠组的(10.43±2.59)%(P0.05)。结论 复发性自然流产患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平较正常孕产妇显著降低,提示CD4+CD25+Treg细胞参与了复发性自然流产的发生、发展过程。通过检测CD4+CD25+Treg细胞表达水平变化可为复发性自然流产的发病机制提供新的思路,为临床诊疗提供更多的治疗方法。     

脓毒症患者CD4~+CD25~+调节性T细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与机体细胞免疫状态的关系及其检测的临床意义。方法将脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组:脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例。所有入选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组血中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平变化。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高,严重脓毒症组次之,脓毒症组最低,三组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+较正常对照组明显升高(P<0.05),CD8+较正常对照组差异不明显(P>0.05)。严重脓毒症组和脓毒症休克患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较正常对照组明显降低(P<0.05),CD8+较正常对照组改变不明显(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达增加,可能导致CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低,免疫抑制加强。提示CD4+CD25+调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用,对评估患者预后有临床价值。     

脓毒症患者血中CD4+CD25+调节性T细胞水平与机体细胞免疫状态的相关性研究

目的：探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与细胞免疫的关系。方法以2013年7月~2014年6月浙江省温岭市第一人民医院收治的脓毒症患者53例为观察组。将观察组患者按病情分为脓毒症组(18例)、严重脓毒症组(21例)、脓毒症休克组(14例);按28 d预后情况分为死亡组(16例)和存活组(37例)。另选取25名健康者为对照组。用流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg及T细胞亚群水平并进行组间比较。结果 CD4+CD25+Treg表达率院脓毒症休克组跃严重脓毒症组跃脓毒症组跃对照组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平院脓毒症组跃对照组跃严重脓毒症组跃脓毒症休克组,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD8+水平各组间差异无统计学意义(P跃0.05)。死亡组CD4+CD25+Treg表达率明显高于存活组(P<0.05);CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明显低于存活组(P<0.05);CD8+水平两组间差异无统计学意义(P跃0.05)。结论脓毒症患者Treg细胞水平增高,可能导致T淋巴细胞亚群水平降低,在预测患者预后方面有一定作用。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿科临床的实用价值

CD4+CD25+Treg细胞可分为天然性Treg细胞和获得性/诱导性Treg细胞。在病毒感染过程中,CD4+CD2+5Treg细胞维持机体对病毒的免疫耐受状态,促进病毒感染并导致其慢性化。CD4+CD2+5Treg细胞在幼年特发性关节炎的发病过程中发挥重要作用。哮喘患儿血CD4+T淋巴细胞表面的烟碱样乙酰胆碱受体(nAChRα7)表达增加,CD4+CD2+5FoxP3+Treg细胞明显减少。特发性血小板减少性紫癜患儿体内存在自身反应性T细胞的活动及细胞因子的紊乱,CD4+CD25highFoxP3+Treg细胞数量减少。体内外有效诱导、扩增和控制CD4+CD2+5Treg细胞的技术将会为相关儿科疾病的治疗提供崭新思路和有效方法。     

CD4+ CD25+调节性T细胞在铜绿假单胞菌慢性肺部感染中的变化及其意义

目的 探讨CD4 CD25 调节性T细胞(CD4 CD25 Treg细胞)在铜绿假单胞菌(PA)慢性肺部感染中的变化及意义.方法 60只雄性SD大鼠随机分为PA感染组和空白对照组.将PA包被的硅胶管置人大鼠一侧主支气管建立慢性肺部感染模型,对照组置入无菌硅胶管.28 d后,荧光激活细胞分类(FACS)检测外周血CD4 CD25 Treg细胞数量,ELISA检测血清白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β)水平,RT-PCR检测脾脏Foxp3 mRNA表达,肺组织行HE染色观察组织病理学变化.结果 PA感染组Treg/CD4 T淋巴细胞的百分比明显高于对照组[(19.79±6.45)%比(5.15±0.47)%,P＜0.05].PA感染组血清IL-10和TGF-β水平均显著高于对照组[IL-10:(231.52±54.48)pg/mL比(35.43±23.56)pg/mL,P＜0.05;TGF-β:(121.05±7.98)pg/mL比(36.02±8.94)pg/mL,P＜0.05].PA感染组Foxp3 mRNA相对含量较对照组显著升高[(0.80±0.044)比(0.25±0.054),P＜0.05].HE染色见PA感染组肺组织有大量淋巴细胞聚集,纤维增生明显,脓肿形成.结论 CD4 CD25 Treg细胞在PA慢性肺部感染时数量增多、功能增强,对感染慢性化形成有重要影响.     

CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞和Foxp3 mRNA在婴幼儿喘息中的表达及意义

目的探讨婴幼儿喘息CD4+CD25+、CD4+CD25hig调节性T细胞(Treg)和叉头/翼状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达及意义。方法采用流式细胞术检测51例首次喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg和CD4+CD25hig Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3mRNA的表达量,酶联免疫吸附法(ELASA)检测总IgE水平,并与正常婴幼儿对照。结果喘息婴幼儿外周血CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg占CD4+T细胞的百分比分别为(6.31+2.96)%和(3.52+1.46)%,均明显低于健康对照组(P<0.01);特应征喘息组CD4+CD25+Treg、CD4+CD25higTreg及Foxp3mRNA表达均低于非特应征喘息组(P<0.05)。喘息患儿CD4+CD25higTreg百分率及Foxp3mRNA表达与血清总IgE之间呈显著负相关(r=-0.75,r=-0.61,P<0.01),而CD4+CD25+Treg百分比与血清总IgE存在正相关(r=0.36,P<0.05)。结论 CD4+CD25+Treg、CD4+CD25hig Treg及Foxp3mRNA在婴幼儿喘息的发病中起重要作用。