mTOR及其下游信号通路在骨髓间充质干细胞氧化应激损伤中的变化及作用

目的 研究小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow stem cells,mBMSCs)在氧化应激损伤中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliatargetofrapamycin,mTOR)及其下游信号通路的变化及其作用.方法 从30只雄性健康昆明小鼠的股骨中分离、培养和扩增BMSCs.H2O2刺激mBMSCs建立氧化应激损伤模型.实验分为对照组(不予H2O2处理)、不同浓度H2O2(100、200、300、400、500、800、1 000 μmol/L处理mBMSCs)损伤组(n=5).采用MTT法检测24、48、72 h各组的细胞活力;倒置显微镜观察BMSCs的形态学改变;采用细胞核Hoechst33342染色观察凋亡细胞核形态;Western blot检测各组Bcl-2、Bax、mTOR及其下游蛋白以及蛋白的磷酸化的表达.结果 100～1 000 μmol/L浓度的H2O2作用mBMSCs24 h后,其形态学和病理学发生浓度依赖性的改变.H2O2浓度在100 ～ 300μmol/L时,随着H2O2浓度的增高,mBMSCs的mTOR、p70S6K、S6的表达水平有增高的趋势,磷酸化水平明显增高(P＜0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达增高(P＜0.01),凋亡蛋白Bax表达不明显(P＞0.05).H2O2浓度在400 μmol/L以上时,随着H2O2浓度的增高,p-mTOR、p-p70S6K、p-S6、BCL-2的表达水平降低(P＜0.05,P＜0.01),而mTOR、p70S6K、S6蛋白变化不明显,同时Bax的表达水平明显增高(P＜0.01).结论 一定强度的氧化应激可以降低mBMSCs存活率,促进细胞凋亡,其机理可能与抑制mTOR及其下游信号通路的活性和抗凋亡蛋白Bcl-2表达,促进凋亡蛋白Bax表达有关.     

OSI-027抑制mTOR信号通路减轻高氧诱导的幼鼠肺损伤

目的：探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）1/2双重抑制剂OSI-027对高体积分数氧（高氧）致sprague-dawley（SD）幼鼠肺损伤及纤维化的抑制作用。方法：72只3周龄SD幼鼠随机分为空气+生理盐水、高氧+生理盐水、高氧+雷帕霉素和高氧+OSI-027组,分别建立动物模型（各组n=18）。高氧干预采用90%氧气持续处理,生理盐水、雷帕霉素、OSI-027干预分别于观察期第1、3、6、8、10、13天经腹腔注射给药,在造模第3、7、14天取各组幼鼠测量体质量变化、肺湿干重比（wet/dry ratio,W/D）、肺组织病理学检查、肺损伤评分、肺泡间隔厚度测定、肺组织免疫组化和蛋白印迹检测mTOR及磷酸化核糖体S6蛋白激酶（pS6K1）蛋白在肺组织的分布和表达。结果：从时间因素看,各组幼鼠体质量（F时间=297.098,P=0.000）、mTOR免疫组化（F时间=379.978,P=0.000）、mTOR（F时间=166.991,P=0.000）和pS6K1（F时间=122.676,P=0.000）蛋白水平都随时间延长而增加。除空气组外,其余各组肺损伤评分（F时间=1410.362,P=0.000）、肺泡间隔厚度（F时间=356.312,P=0.000）、pS6K1免疫组化（F时间=57.992,P=0.000）都随时间延长而升高,肺W/D（F时间=28.915,P=0.000）第3、7天时升高,第14天时下降。从分组因素看,体质量（F分组=176.597,P=0.000）空气组明显高于其他组,肺W/D（F分组=28.484,P=0.000）和肺泡间隔厚度（F分组=296.223,P=0.000）空气组明显低于其他组,除第3天外,mTOR免疫组化（F分组=134.100,P=0.000）高氧组明显高于其他组,PS6K1免疫组化（F分组=234.697,P=0.000）、mTOR（F分组=59.377,P=0.000）和 PS6K1（F分组=101.837,P=0.000）蛋白印迹高氧组明显高于其他组,肺损伤评分（F分组=2 420.076,P=0.000）高氧雷帕组明显高于其他组,高氧OSI组明显低于高氧组和高氧雷帕组。结论：高浓度氧可激活肺组织mTOR信号途径;mTOR可能促进了高氧肺损伤纤维化的发生发展,其调控机制可能与抑制mTOR信号通路的活化有关。mTOR复合物1/2（mTORC1/2）双重抑制剂OSI-027能减轻高氧致SD幼鼠肺损伤及纤维化。     

基于mTOR/p70S6K信号通路探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的影响

目的:探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响。方法:将小鼠足细胞MPC5分为：对照组(5.5mmoL/L葡萄糖)、高糖诱导组(30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷低浓度组(2.5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷中浓度组(5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷高浓度组(10μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)。各组向RPMI 1640培养基中加入上述浓度的相应试剂或药物,培养72h。酶标仪测定各组MPC5细胞吸光度值,计算细胞活力;流式细胞仪测定各组MPC5细胞凋亡情况;鬼笔环肽染色观察各组MPC5细胞骨架形态;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别测定各组MPC5细胞mTOR、p70S6K信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果:对照组MPC5细胞骨架形态正常,细胞长轴呈线性分布,荧光染色明显;与对照组比较,高糖诱导组MPC5细胞骨架断裂,细胞萎缩,荧光染色黯淡,吸光度值、细胞活力显著降低,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平...     

链脲佐菌素致阿尔茨海默病模型大鼠脑内mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路的变化

目的：观察侧脑室（intracerebroventricular,ICV）注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）对大鼠脑内mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路的影响。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组,每组各15只,对照组于第1天和第3天ＩＣＶ注射生理盐水,模型组于第 1天和第3天侧脑室注射STZ（ICV-STZ,3 mg/kg） 建立AD模型。第 1 次注射后 36 d 采用 Morris 水迷宫检测2组大鼠空间学习和记忆能力的变化;Western blot检测2组大鼠大脑皮质和海马组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTORSer2448）、核糖体40S小亚基S6蛋白激酶（P70 ribosomal S6 protein kinase,P70S6K）、磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶（phosphorylated P70 ribosomal S6 protein kinase,p-P70S6KThr389）、胰岛素受体底物-1（insulin receptor substract-1,IRS-1）和磷酸化胰岛素受体底物-1（phosphorylated insulin receptor substract-1,p-IRS-1Ser636）蛋白的表达;HE染色观察2组大鼠大脑皮质和海马组织形态学的改变;甲硫素S染色观察2组大鼠脑内Aβ的沉积。结果：Morris 水迷宫结果显示 ICV-STZ 能明显降低大鼠目标象限停留时间[对照组：（55.945±9.447） s,模型组：（31.961±5.346） s,t=8.558,P=0.000]和穿越平台次数[对照组：（7.533±2.560）次,模型组：（2.867±1.506）次,t=6.086,P=0.000];HE染色可见：ICV-STZ大鼠大脑皮质和海马的部分细胞出现了明显的固缩和肿胀;甲硫素S染色发现：在ICV-STZ 处理后,大鼠脑内出现Aβ的大量沉积。Western blot结果表明：ICV-STZ能同时增加大鼠大脑皮质p-P70S6KThr389[对照组：（0.268±0.066）,模型组：（0.654±0.079）,t=-8.409,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组：（0.710±0.092）,模型组：（1.033±0.135）,t=-4.417,P=0.002]和海马p-P70S6KThr389[对照组：（0.405±0.064）,模型组：（0.732±0.077）,t=-7.339,P=0.000]、p-IRS-1Ser636[对照组：（0.498±0.093）,模型组：（0.836±0.102）,t=-5.496,P=0.001]蛋白的表达,但不影响大鼠大脑皮质和海马P70S6K、mTOR、p-mTORSer2448、IRS-1蛋白的表达。结论：ICV-STZ 能增加大鼠脑内mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路的激活,提示异常活化的mTOR/P70S6K/IRS-1信号通路可能参与了 AD 的发生发展。     

mTOR信号通路在神经胶质瘤干细胞样细胞中激活的意义研究

目的 分选神经胶质瘤C6细胞中的侧群(SP)细胞,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白对神经胶质瘤SP细胞的影响.方法 Hoechst33342染色流式细胞仪分选SP细胞,另取非侧群(NSP)细胞作为对照.荧光定量-PCR和Western blot分别检测mTOR基因和蛋白的表达.化学合成的双链SiRNA沉默mTOR基因的表达.结果 SP和NSP细胞中mTOR基因的2-△Ct值分别为(0.623±0.087)和(0.289±0.046),两者之间差异有显著性(P＜0.01),mTOR蛋白的表达在SP细胞也显著高于NSP细胞.化学合成的靶向SiRNA可以显著下调mTOR的表达(P＜0.01).SiRNA下调mTOR表达后,SP细胞在C6细胞中的比例从5.67±1.46％减少到1.33±0.26％(P ＜0.01).结论 神经胶质瘤SP细胞高表达mTOR,下调mTOR的表达可以减少SP细胞的比例.     

番石榴叶总三萜调控mTOR/S6K1通路减轻糖尿病肾病大鼠肾损害的实验研究

目的:观察番石榴叶总三萜(TTPGL)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损害的治疗作用,并探讨其对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)通路的调控作用.方法:采用醋酸脱氧皮质酮-盐制剂皮下注射联合高脂饲料喂养对50只SD大鼠建立糖尿病肾病(DN)模型,建模成功后采用随机数字表分为缬沙坦组,TTPG...     

曲克芦丁通过AMPK/mTOR通路介导自噬反应减轻阿霉素诱导的NS大鼠肾脏损伤

目的 探讨曲克芦丁(TRO)通过AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路介导自噬反应减轻阿霉素(ADM)诱导的肾病综合征(NS)大鼠肾脏损伤的作用机制。方法 建立ADM诱导的NS大鼠模型。将60只SPF级SD大鼠随机分为对照组(Control组)、模型组(Model组)、低剂量TRO组(TRO-L组,50 mg/kg)、高剂量TRO组(TRO-H组,100 mg/kg)、高剂量TRO+AMPK抑制剂Compound C组(TRO-H+CC组,100 mg/kg TRO+20 mg/kg CC),每组12只。收集造模前后大鼠24 h尿液检测尿蛋白含量。利用全自动生化分析仪检测大鼠血清中白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)的含量。HE染色观察各组大鼠肾组织病理学变化。ELISA法检测各组大鼠肾组织中SOD、MDA含量。TUNEL染色观察大鼠肾脏组织的细胞凋亡。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测大鼠肾脏组织中的AMPK和mTOR mRNA表达水平;Western Blot检测大鼠肾脏A...     

PI3K/AKT/mTOR信号通路在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌的发生过程中存在磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/m TOR)信号通路的激活,该通路的异常激活可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤侵袭和转移。PI3K/AKT/m TOR通路靶向抑制剂对卵巢癌显示出一定的疗效,目前该靶向药物的临床试验已开展,并显示出良好的安全性和有效性。针对PI3K/AKT/m TOR的靶向药物将为卵巢癌的治疗指明新方向。     

shRNA对EC9706细胞 p70S6K表达的影响

目的:观察核糖体40 s小亚基S6蛋白激酶(p70S6K)特异性短发夹RNA(shRNA)对EC9706细胞p70S6K表达的影响.方法:根据GenBank p70S6K的mRNA序列,设计并合成p70S6K特异性的shRNA序列,退火形成双链后插入pSIREN-RetroQ-DsRed-Express载体,构建表达载...     

基于p53/mTOR信号通路探究电针干预缺血性脑卒中大鼠血管新生的机制

目的 探讨电针干预对缺血性脑卒中大鼠血管新生的影响及其相关机制.方法 实验设置假手术组(仅切颈、分离血管)、缺血性脑卒中组(造模)和电针组(造模+电针治疗,每日治疗1次,治疗7d结束),每组20只.测定大鼠电针治疗前、治疗结束后24 h内神经行为学评分;HE染色观察脑组织病变;测定微血管密度;Western blot法...     

黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法黄杞苷(5、10、20、40、80和160μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20μmol·L^-1)预处理细胞12 h, H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf...     

丙戊酸钠通过激活miR-34c-5p/ATG4B信号通路抑制SH-SY5Y细胞自噬

目的探讨丙戊酸钠（VPA）对SH-SY5Y细胞中miR-34c-5p/ATG4B信号通路的激活作用及对自噬的影响。方法人神经 母细胞瘤细胞SH-SY5Y用含10%胎牛血清的DMEM培养基常规培养,然后使用不同剂量VPA处理SH-SY5Y细胞24 h,采用 定量PCR分析VPA处理对ATG4B mRNA与miR-34c-5p表达的影响,免疫印迹法分析VPA处理对ATG4B蛋白表达的影响,将 含ATG4B启动子片段的报告质粒转染SH-SY5Y细胞,然后通过荧光素酶报告基因系统分析VPA处理对ATG4B启动子活性的 影响,用VPA单独或联合转录抑制剂放线菌素D分别处理SH-SY5Y细胞不同时间,定量PCR分析检测不同处理对ATG4B mRNA稳定性的影响,用VPA单独或联合miR-34c-5p抑制剂处理细胞24 h,通过检测不同处理对ATG4B表达变化的影响,进 而判断miR-34c-5p在VPA下调ATG4B表达中的作用,同时通过Western blot检测不同处理对LC3-II表达的影响,分析细胞自 噬水平变化。结果VPA可剂量依赖性降低SH-SY5Y细胞中ATG4B的mRNA和蛋白水平（P<0.05）。VPA处理不影响SHSY5Y 细胞中ATG4B的启动子活性（P>0.05）,但显著下调其mRNA的稳定性（P<0.05）。同时,VPA处理明显增强SH-SY5Y细 胞中miR-34c-5p的表达水平（P<0.05）。使用miR-34c-5p抑制剂与VPA联合处理SH-SY5Y细胞,可逆转VPA对ATG4B表达的 下调作用。VPA处理还下调了SH-SY5Y细胞中LC3-II的表达水平（P<0.05）。结论VPA可能通过激活miR-34c-5p/ATG4B信 号通路而抑制SH-SY5Y细胞自噬。     

银杏内酯对过氧化氢损伤的皮层神经元和SH—SY5Y细胞亲环蛋白A（CypA）表达的影响

目的：研究银杏内酯（ginkgolides,Gin）对过氧化氢（H2O2）诱导的皮层神经元及SH-SY5Y细胞（神经母细胞瘤细胞）损伤的保护作用及其机制。方法：在培养1周的小鼠皮层神经元培养基中加入H2O2,建立神经元氧化损伤模型,用同样方法建立SH-SY5Y细胞氧化损伤模型。采用MTT比色法检测细胞活力,Western Blot技术分析亲环蛋白A的表达变化。结果：H2O2可诱导神经元和SH-SY5Y细胞损伤,使细胞活力降低,可下调亲环蛋白A的表达;Gin预处理12 h可提高细胞活力,可使亲环蛋白A表达增加。结论：Gin可抑制H2O2引起的神经元及SH-SY5Y细胞损伤,该保护作用与其上调亲环蛋白A的表达有关。     

鲜姜有效部位对H2O2致血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用

目的研究鲜姜有效部位对离体培养的血管内皮细胞ECV-304氧化损伤的保护作用。方法取健康大鼠每日ig不同剂量(200、400、800mg/kg)鲜姜有效部位或洛伐他汀(40mg/kg),共4d,取含药血清作为受试药物。采用H2O2建立离体培养的ECV-304细胞氧化应激的损伤模型,测定细胞存活率、内皮细胞培养液中LDH、MDA水平及细胞中MDA水平。结果鲜姜有效部位含药血清能够显著提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率,降低受损内皮细胞培养液中LDH,并减少细胞培养液及细胞中MDA。结论鲜姜有效部位具有较强的抗氧化能力及内皮细胞保护作用,可减轻内皮细胞的氧化损伤。     

二甲双胍激活Nrf2通路对PC12细胞H2O2氧化损伤的机制研究

目的：研究二甲双胍对H2O2诱导的PC12 细胞损伤可能的保护作用机制。方法：使用CCK-8法检测二甲双胍对PC12细胞的细胞活力;建立H2O2损伤PC12细胞的细胞模型,使用CCK-8法和LDH法检测二甲双胍对PC12细胞生存率和LDH释放量,采用Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测二甲双胍对PC12细胞的凋亡和ROS水平情况。qPCR和Western blot法检测二甲双胍对Nrf2/HO-1通路mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA沉默Nrf2检测二甲双胍对H2O2诱导细胞的保护作用。结果：二甲双胍在浓度0.5、1和2 mmol/L下对PC12细胞不表现毒性作用。预处理二甲双胍可对H2O2造成的PC12细胞损伤产生浓度依赖性保护作用和降低LDH。同时,二甲双胍降低H2O2造成的细胞凋亡和ROS水平。二甲双胍能激活细胞内Nrf2/HO-1通路起到抗氧化保护作用。结论：二甲双胍预处理后通过激活细胞内Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导的 PC12 细胞损伤具有保护作用。     

颈内动脉弯曲与颅内动脉瘤发生的相关性研究

目的：观察颈内动脉弯曲在颅内动脉瘤患者中的发生情况,探讨其与颅内动脉瘤发生是否存在相关性。方法：应用病例对照研究方法,回顾性分析177例动脉瘤患者（包括破裂动脉瘤患者及未破裂动脉瘤患者）及164例非动脉瘤患者（对照组）的一般病例资料,并通过颈部CT血管造影（computed tomogrphy angiography,CTA）影像资料将每例患者颈内动脉弯曲程度分为迂曲（tortuosity）、折曲（kinking）、襻曲（coiling）。先对动脉瘤组与对照组间颈内动脉弯曲程度及一般资料进行单因素分析,再将单因素分析中具有统计学意义的因素纳入多因素logistic回归分析,最后对颅内动脉瘤相关特征与颈内动脉弯曲程度的相关性进行分析。结果：折曲在动脉瘤组及对照组中分别为47例（26.6%）及26例（15.9%）,单因素分析显示折曲与颅内动脉瘤发生显著相关（P=0.016）,多因素回归分析结果显示折曲是影响颅内动脉瘤发生的独立因素（P=0.002,OR=2.573,95%CI=1.426~4.641）。在颅内动脉瘤相关特征与颈内动脉弯曲相关性分析中,颈内动脉弯曲与颅内动脉瘤是否破裂、大小及个数无相关性。结论：颈内动脉折曲改变是颅内动脉瘤发生的影响因素之一。     

PI-3K在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶(PI-3K)在H2O2诱导PC12细胞凋亡中的作用.方法 采用H2O2诱导PC12细胞制作凋亡模型,通过MTT法、Hoechst/PI荧光双染及流式细胞术分析使用PI-3K特异抑制剂LY294002预处理对H2O2诱导PC12细胞凋亡作用的影响.结果 100 μMH2O2处理PC12细胞24 h,细胞出现明显凋亡;LY294002预处理1 h后凋亡细胞数增多(P＜0.05).结论 PI-3K对H2O2诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用.     

舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨舒芬太尼后处理通过细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）介导的p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）信号传导通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的影响,阐明舒芬太尼后处理对大鼠MIRI的保护作用。方法：72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注（I/R）组、二甲基亚砜（DMSO）组、PD组（缺血末到再灌注开始后15min给予20 μmol·L^-1ERK的抑制剂PD98059）、舒芬太尼后处理组（Sufen组）和Sufen+PD组。除假手术组外,其余各组大鼠均缺血30min后再灌注2 h。于缺血前即刻（T0）和再灌注30min（T1）、60min（T2）、90 min（T3）、2h（T4）时记录心率（HR）、平均动脉压（MAP）,再灌注末测定大鼠心肌梗死面积,采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平。结果：与T0时比较,T1~T4时I/R组、Sufen组、DMSO组、PD组和PD+Sufen组大鼠MAP和HR降低（P<0.05）;与假手术组比较,其余各组大鼠HR降低（P<0.05）,MAP升高（P<0.05）;与I/R组比较,T3时Sufen组大鼠HR降低（P<0.05）,MAP升高（P<0.05）。与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌梗死面积明显减少（P<0.05）;与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌梗死面积明显增加（P<0.05）。与假手术组比较,I/R组、Sufen组和DMSO组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均进一步升高（P<0.05）;与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌组织中的p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。结论：舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠MIRI起保护作用,可改善MIRI大鼠的心功能指标,减少心肌梗死面积。     

褪黑素对过氧化氢诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化应激的改善作用及其机制

目的:研究褪黑素对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞分为对照组、H2O2组、不同浓度褪黑素组和2-苯基-N-乙酰色胺(Luzindole)组.对照组为正常培养SH-SY5Y细胞,H2O2组加入...     

APE/Ref1在H2O2诱导耳蜗螺旋神经节细胞氧化损伤过程中的表达

目的 研究氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor 1, APE/Ref-1)在过氧化氢(H2O2 )诱导耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells, SGCs)氧化损伤过程中的表达.方法 原代培养离体大鼠SGCs,采用免疫荧光和Western blot方法检测APE/Ref-1在H2O2诱导SGCs 氧化损伤过程中的表达.台盼蓝染色法计算SGCs氧化损伤过程中的死亡率. 结果 APE/Ref-1在体外正常培养SGCs细胞质和细胞核均有表达,细胞核较强.H2O2浓度≥60 μmol/L 时, SGCs死亡率显著升高,APE/Ref-1在细胞核表达明显减弱,与对照组相比差异具有统计学意义(P＜ 0.05). 结论 APE/Ref-1在氧化环境下SGCs细胞核表达减少,细胞死亡率升高,提示氧化环境下细胞活性降低可能与APE/Ref-1表达减少有关.