人主动脉夹层组织Myc associated factor X的表达及其生物学功能

目的 探究Myc associated factor X(MAX)在主动脉夹层中的表达情况及相关生物学功能。方法 通过RT-PCR和Western blot检测MAX在15例夹层主动脉中层组织中的表达情况。通过腺病毒载体转染人主动脉平滑肌细胞使其过表达MAX。通过CCK-8、细胞流式等实验技术明确过表达MAX对主动脉平滑肌细胞增殖、凋亡的影响。结果 夹层主动脉组织中MAX的mRNA和蛋白表达水平均明显高于正常主动脉组织。过表达MAX可以明显抑制主动脉平滑肌细胞的增殖,并促进其凋亡(P < 0.05)。结论 MAX通过调控主动脉平滑肌细胞的增殖、凋亡可能诱导其丢失并进而在主动脉夹层的发病中发挥作用。     

长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)对人绒毛膜癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将人绒毛膜癌细胞JEG-3随机分为空白对照组、空白载体组和LncRNA AFAP1-AS1过表达组。空白对照组细胞未做任何处理,空白载体组细胞转染空白载体,LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞转染LncRNA AFAP1-AS1过表达载体。分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的表达,采用细胞计数试剂盒-8实验、Transwell小室实验及流式细胞术检测JEG-3细胞的增殖、迁移和凋亡情况。结果 LncRNA AFAP1-AS1过表达组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组和空白载体组JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。LncRNA AFAP1-AS1过表达组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数显著低于空白对照组和空白载体组,细胞凋亡率显著高于空白对照组和空白载体组(P <0. 05);空白对照组与空白载体组细胞增殖能力、透过分子筛的细胞数及细胞凋亡率比较差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论 LncRNA AFAP1-AS1可上调人绒毛膜癌JEG-3细胞中Caspase-3、Caspase-9 mRNA及蛋白水平,对JEG-3细胞的增殖及迁移有抑制作用,同时可诱导其凋亡。     

过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 为了明确过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 将血管平滑肌细胞HA-VSMC分为正常对照组、NF-κB过表达组和空载组。通过构建NF-κB过表达载体,转染HA-VSMC细胞后,通过MTT检测各组HA-VSMC细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HA-VSMC细胞凋亡情况,WB 检测各组HA-VSMC细胞NF-κB相对表达情况。结果 通过酶切验证证明NF-κB过表达载体构建正确;成功转染HA-VSMC细胞后,MTT检测结果显示NF-κB被激活可以抑制HA-VSMC细胞增殖;流式检测细胞凋亡结果也证实NF-κB激活可以促进细胞凋亡。结论 NF-κB表达升高会抑制血管平滑肌细胞的增殖并促进血管平滑肌细胞的凋亡。     

腺病毒介导过表达ANT1基因诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡

目的利用腺病毒载体转染体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),研究过表达腺嘌呤核苷酸转位酶1(adenine nucleotide translocase 1,ANT1)对大鼠VSMCs凋亡的影响。方法用携带ANT1的腺病毒载体(Ad-ANT1)或空载体腺病毒载体(Ad-GFP)感染VSMCs,采用激光共聚焦观察Hoechst33258染色后细胞凋亡情况,流式细胞术检测Annexin V标记细胞凋亡率。Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果激光共聚焦观察转染Ad-ANT1后48 h细胞出现凋亡,且凋亡率[(13.40±1.14)%]与转染空载体对照组[(1.80±0.84)%]相比较差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞术检测转染Ad-ANT1后48 h细胞凋亡率[(10.66±1.75)%]明显高于转染空载体组细胞[(3.13±0.37)%](P<0.05)。Western blot结果显示转染Ad-ANT1后Bax蛋白表达明显高于转染空载体组,Bcl-2蛋白表达2组比较无明显差异。结论腺病毒介导过表达ANT1可诱导大鼠VSMC的凋亡,其机制可能通过上调Bax实现。     

长链非编码RNA PCGEM1对肝癌Huh7细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA) PCGEM1对肝癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法构建LncRNA PCGEM1慢病毒沉默表达载体,培养人肝癌细胞系Huh7细胞至对数生长期,分为空白对照组、阴性对照组和观察组,空白对照组细胞未进行转染,阴性对照组细胞应用空慢病毒载体进行转染,观察组细胞应用LncRNA PCGEM1慢病毒沉默表达载体进行转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组肝癌细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达,细胞计数试剂盒-8检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况。结果 3组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA相对表达量比较差异有统计学意义(F=4.328、5.473、4.198,P<0.05);观察组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9mRNA相对表达量均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),空白对照组与阴性对照组细胞中LncRNA PCGEM1及Caspase-3、Caspase-9 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。转染24、48、72、96 h时,3组细胞增殖能力比较差异有统计学意义(F=4.126、4.572、5.218、5.379,P<0.05);观察组细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),空白对照组与阴性对照组细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组细胞迁移细胞数、细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=6.873、6.844,P<0.05),观察组迁移细胞数及细胞凋亡率显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);空白对照组与阴性对照组迁移细胞数、细胞凋亡率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝癌Huh7细胞中存在LncRNA PCGEM1表达,下调LncRNA PCGEM1的表达能抑制肝癌细胞增殖、侵袭及凋亡。     

耐辐射奇球菌pprⅠ基因对MMC诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的 探讨耐辐射奇球菌(DR)pprⅠ基因对丝裂霉素C(MMC)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法 细胞分为空白对照组(不干预)、未转染组(MMC处理)、空质粒转染组(pCMV-C-Flag+MMC)与pprⅠ基因转染组(pCMV-C-Flag-pprⅠ+MMC)。CCK-8、抗氧化酶相关试剂盒、TUNEL、JC-1荧光探针和qRT-PCR测定细胞存活率、氧化应激、细胞凋亡率、线粒体损伤、凋亡途径相关基因mRNA的表达。结果 与空白对照组比较,未转染组细胞存活率、线粒体膜电位、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)mRNA表达下降;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、Caspase-3、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)mRNA表达增加(P<0.05)。与未转染组比较,pprⅠ基因转染组细胞存活率、线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA表达增加;氧化应激反应、细胞凋亡率及Bax、Caspase-9、Caspase-3、PARP mRNA表达下降(P<0.05)。结论 耐辐射奇球菌pprI基因对丝裂霉素C诱导的H...     

长链非编码RNA HOTAIR调节PE滋养细胞功能的研究

目的 观察长链非编码RNA(lncRNA) HOX转义反录RNA(HOTAIR)在子痫前期(PE)胎盘组织中的表达及其对滋养细胞HTR 8/SVneo增殖、侵袭及凋亡能力的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测23例重度PE和23例正常产妇胎盘组织中HOTAIR mRNA表达水平.分别构建其封闭(si-HOTA IR)及过表达载体(pcDNA-HOTAIR),与其对照(si-NC及空载体)分别转染HTR-8/SVneo细胞24～48 h后,qRT-PCR检测细胞中HOTAIR mRNA表达水平验证干扰效率和过表达倍数.采用克隆形成实验和MTT法检测转染后细胞生长增殖能力,Transwell法检测转染后细胞迁移、侵袭能力改变.应用流式细胞技术检测转染后细胞凋亡改变,Western blot检测凋亡相关蛋白表达情况.结果 PE胎盘组织中HOTA IR水平高于正常组织(P＜0.05);pcDNA-HOTAIR组细胞HOTAIR mRNA过表达倍数为51.27; si-HOTAIR组HOTAIR mRNA表达被抑制超过95％,证明过表达和封闭均有效;pcDNA-HOTA IR组细胞增殖能力降低,si-HOTAIR组细胞增殖增加(P＜0.05);pcDNA-HOTAIR组细胞的穿膜细胞数低于对照组,si-HOTAIR组细胞穿膜数高于对照组(P＜0.05);pcDNA-HOTAIR组细胞凋亡增加,si-HOTA IR组凋亡被抑制(P＜ 0.05);pcDNA-HOTAIR组促凋亡蛋白Caspase-3表达增加,而si-HOTAIR组降低;抑凋亡蛋白BCL-2与之相反(P＜0.05).结论 HOTA IR可能通过抑制滋养细胞的增殖和侵袭能力,加速滋养细胞凋亡,从而参与PE的发生发展.     

shRNA Twist基因对人绒毛膜癌细胞JEG-3增殖、侵袭和凋亡的影响

目的观察shRNA Twist基因对人绒毛膜癌细胞JEG-3增殖、侵袭和凋亡的影响。方法以人源性绒毛膜癌细胞为种子细胞,构建shRNA-Twist小干扰RNA载体,通过慢病毒转染绒毛膜癌细胞,根据转染慢病毒质粒的不同分成3组,即空白对照组、空白质粒组和shRNA干扰组。RT-qPCR和Western Blot检测Twist和凋亡蛋白caspase-3和caspase-9的表达。Transwell法检测人绒毛膜癌细胞侵袭能力,CCK-8法检测人绒毛膜癌细胞增殖能力,AV-PI试剂盒检测人绒毛膜癌细胞凋亡水平。结果 RT-PCR结果显示,空白质粒组的Twist的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(1.011±0.125);shRNA干扰组的Twist的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(0.377±0.021),高于空白质粒组的mRNA表达水平(P <0.05)。Caspase-3和Caspase-9的mRNA含量具有同样的趋势。Western-Blot结果显示,空白质粒组和shRNA干扰组的的Twist蛋白相对表达量(与空白对照组相比)分别为(7.211±0.934... 更多     

Rab26诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡并抑制其迁移

目的 研究调控Rab26蛋白表达对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响.方法 常规培养HeLa细胞,分别将含有Rab26 cDNA全长的真核表达载体(过表达组)、含有Rab26 siRNA序列的真核表达载体(siRNA组)瞬时转染HeLa细胞,同时设立正常细胞组及空载体转染组作为对照.转染48 h后,分别用RT-PCR和Westem blot检测各组细胞中Rab26的mRNA及蛋白表达水平;采用流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡率;同时采用划痕实验检测各组细胞迁移速度.结果 与正常细胞组及空载体转染组相比,过表达组HeLa细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.05),而siRNA组细胞中Rab26 mRNA及蛋白表达水平显著下调(P＜0.05),过表达组HeLa细胞凋亡率增高并抑制细胞迁移速度(P＜0.01),siRNA组则促进细胞迁移(P＜0.05).结论 Rab26与HeLa细胞的凋亡及细胞迁移有关,故调控Rab26的表达有望成为治疗宫颈癌的新靶点.     

多囊蛋白-1在急性主动脉夹层发病机制中的作用

目的 探讨多囊蛋白-1(PC-1)在急性主动脉夹层(AD)发病机制中的作用及分子机制。方法 收集2019年10月至2020年1月于郑州大学第一附属医院行主动脉弓置换术的6例急性AD患者的病变主动脉组织标本作为AD组,另选择6例非主动脉疾病的器官捐赠者的正常主动脉组织标本作为对照组。采用Western blot法检测主动脉组织中PC-1、凋亡相关蛋白及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的磷酸化位点的表达,SM22α免疫荧光/DNA末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法双标染色法检测主动脉平滑肌细胞(VSMC)凋亡情况。结果 对照组和AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.07和0.72±0.04,AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量显著低于对照组(t=7.614,P<0.01)。对照组和AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度分别为59.03±4.57和71.26±8.25,AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度显著高于对照组(t=3.178,P<0.05)。AD组受试者主动脉组织中cleaved c...     

靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达 对HepG2 肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨靶向PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG2 肝癌细胞体外增殖与凋亡的影响。 方法 利用基因重组技术构建PDCD5-Caspase-3 融合基因,克隆到带有EGFP 基因的GV358 慢病毒表达载 体,与辅助质粒共同转染293T 细胞,通过同源重组,获得融合基因重组慢病毒PDCD5-Caspase-3。体外 转染人肝癌HepG-2 细胞72 h 后,Western bolt 检测肝癌HepG-2 细胞中PDCD5 蛋白和Caspase-3 蛋白表 达,CCK-8 法检测PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达对HepG-2 肝癌细胞增殖的影响,流式细胞术观察其 对细胞凋亡的影响。结果 PDCD5-Caspase-3 融合基因过表达可增加HepG-2 肝癌细胞中PDCD5 蛋白和 Caspase-3 蛋白合成（P <0.05）;与对照组或空白组相比,转染72 h 后实验组细胞增殖能力下降（P <0.05）; 与对照组或空白组比较,转染72 h 后实验组细胞凋亡率增加（P <0.05）。结论 促凋亡基因PDCD5 和 Caspase-3 联合表达可抑制HepG2 肝癌细胞增殖,并促进其凋亡,可作为肝癌治疗潜在靶点。     

Kiss-1与结肠癌SW480细胞增殖的关系

目的以结肠癌细胞SW480为模型,初步探讨Kiss-1基因过表达与结肠癌细胞增殖的关系。方法采用脂质体转染的方法将Kiss-1/pEGFP-N1重组质粒转染至SW480细胞,上调结肠癌细胞中Kiss-1的表达水平,经G418筛选出稳定表达株;根据细胞分为3组：阴性对照组（转染pEGFP-N1空载体）、实验组（转染pEGFPN1-Kiss1）及空白对照组（未转染）。Western blot检测转染后细胞中Kiss-1表达量的变化;采用CCK8试验分析Kiss-1对SW480细胞增殖的抑制效果。结果成功将pEGFP-N1-Kiss-1重组质粒转染至SW480结肠癌细胞,western blot检测出阴性对照组和空白对照组中显示Kiss-1低表达,实验组Kiss-1表达量增加,CCK8试验表明实验组细胞增殖率明显低于对照组（P〈0.05）。结论 Kiss-1可抑制结肠癌细胞的增殖率。     

MiR-4262经Kaiso-β-catenin途径抑制宫颈癌Hela细胞的增殖

分析miR-4262抑制宫颈癌细胞增殖的Kaiso-β-catenin机制。将miR-4262表达载体pGL3-miR-4262表达载体瞬时转染Hela宫颈癌细胞株作为miR-4262组,以未转染Hela细胞和转染pGL3空载体细胞分别作为空白组和阴性组,分析各组细胞的增殖情况,免疫印迹法分析各组细胞中细胞凋亡蛋白、Kaiso、β-catenin及Axin蛋白的表达。结果显示:与空白组和阴性组相比,miR-4262组细胞的抑制率明显升高(P<0.05),Bax和Caspase3表达明显升高而Bcl2表达明显降低(P<0.05),且Kaiso、β-catenin表达明显升高而Axin表达明显降低(P<0.05)。因此,miR-4262能明显抑制宫颈癌细胞的增殖,且其作用可能与调节Kaiso-β-catenin信号通路蛋白表达有关。     

SPARCL1基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteines like 1,SPARCL1)基因对肝癌SMMC 7721细胞增殖与凋亡的影响。方法: 将肝癌SMMC 7721细胞随机分为5组,即空白对照组,pIRES2 ZsGreen组,pIRES2 ZsGreen SPARCL1组,阴性 siRNA组和SPARCL1 siRNA组,空白对照组不转染,其余4组分别转染pIRES2 ZsGreen空质粒、pIRES2 ZsGreen SPARCL1、阴性 siRNA及SPARCL1 siRNA;蛋白质印迹法检测SPARCL1蛋白表达,同时联合荧光显微镜检测转染效果;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。 结果： 蛋白质印迹和荧光镜结果同时证实转染效果良好。MTT结果显示5组细胞抑制率差异有统计学意义(F=55.45,P＜0.01),pIRES2 ZsGreen SPARCL1组增殖抑制率明显高于其余4组(P＜0.05);SPARCL1 siRNA组细胞增殖抑制率低于其余4组(P＜0.05)。流式细胞结果显示pIRES2 ZsGreen SPARCL1组凋亡率明显高于其余4组 (P<0.05);SPARCL1 siRNA组凋亡率明显低于其余4组(P＜0.05)。结论： 过表达SPARCL1抑制肝癌细胞SMMC 7721生长和促进凋亡,沉默SPARCL1则反之。     

过表达miR-124a对J774.1细胞中TNF-α和IL-6表达水平及细胞周期的影响

目的：探讨miR-124a对类风湿关节炎（RA）细胞模型小鼠巨噬细胞J774.1细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）表达水平及细胞周期的影响,阐明miR-124a在RA中的作用机制。方法：取对数生长期J774.1细胞,以1×10⁶mL^-1均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,当细胞融合度达到60%时进行感染,实验分为miR-124a过表达组（感染miR-124a腺病毒载体）、空载腺病毒组（感染阴性病毒液）和空白对照组（不做任何处理）。ELISA法检测感染48 h后3组细胞上清液中TNF-α和IL-6的表达水平,RT-PCR法检测感染48 h后J774.1细胞中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平,流式细胞术检测感染48 h后3组细胞细胞周期变化。结果：感染48 h后,与空白对照组和空载腺病毒组比较,miR-124a过表达组细胞上清中TNF-α和IL-6表达水平明显降低（P=0.038,P=0.042;P=0.043,P=0.044）,miR-124a过表达组细胞中TNF-α和IL-6 mRNA表达水平明显降低（P=0.001,P=0.002;P=0.001,P=0.003）,G₁期细胞百分率明显升高（P=0.01）,S期和G₂期细胞百分率明显降低（P<0.01）。结论：miR-124a感染小鼠巨噬细胞J774.1后可使细胞的炎性因子表达水平下降,抑制细胞增殖,miR-124a有望成为RA治疗的新靶点。     

Let-7a过表达对结肠黏液腺癌细胞LS-174T增殖及侵袭性的影响

目的：研究let-7a过表达对结肠黏液腺癌LS-174T细胞增殖及侵袭性的影响。方法：构建let-7a过表达慢病毒载体并感染结肠黏液腺癌LS-174T细胞,设立空白对照组（A组,不进行病毒转染）;转染空病毒组（B组,只含有EGFP,浓度1×107 TU/L）;C1转染组（C1组,浓度1×106 TU/L）：转染hsa-Let-7a（含let-7a病毒和EGFP）;C2转染组（C2组,浓度1×107 TU/L）;C3转染组（C3组,浓度1×108 TU/L）。通过倒置荧光显微镜观察各组感染效率;RT-qPCR检测各组细胞中let-7a基因表达水平;MTT法检测各组细胞增殖活力;Transwell侵袭和划痕实验测评估细胞的侵袭和迁移能力;RT-qPCR和Western blot分析TGF-β1 mRNA和蛋白水平的表达。结果：倒置荧光显微镜观察各组细胞48 h绿色荧光表达情况,C3组荧光表达最强,感染效率可达90%以上,与初始病毒浓度成正相关（P＜0.05）;MTT检测结果显示各组OD值均随时间延长而增高,在第0、第1天,5组OD值差异无统计学意义（P＞0.05）,第2、第3、第4天,与A组比,C组的OD值增幅明显降低（P＜0.05）;各组细胞let-7a基因表达水平行RT-qPCR检测结果显示,与A组比,C组let-7a的基因表达水平显著升高,且转染细胞let-7a的表达水平与含let-7a的慢病毒浓度梯度呈正相关（P＜0.05）,而RT-qPCR及Western blot检测显示let-7a过表达后TGF-β1 mRNA和蛋白水平逐渐降低（P＜0.05）。侵袭和划痕实验结果表明,let-7a的过表达降低了LS-174T细胞的侵袭和迁移能力,且与初始病毒浓度成负相关（P＜0.05）。结论：Let-7a过表达对LS-174T细胞增殖活力有明显抑制作用,可通过下调TGF-β1含量而抑制细胞的侵袭和转移。     

SSAT2通过抑制HIF-1α表达增强肾癌Caki-1细胞化疗敏感性

目的探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制。方法经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1(D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1%氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率;MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率。结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P<0.05)。阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)%,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)%、(56.8±7.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一。     

过表达Plk-1对gemcitabine诱导的胰腺癌细胞化疗敏感性的影响

目的观察Plk-1基因过表达对gemcitabine诱导胰腺癌细胞AsPC-1化疗敏感性的影响。方法①将携带有人外源性Plk-1基因的真核表达质粒转染AsPC-1细胞系设为处理组,转染空载体设为对照组,无处理组设为空白组,转染24 h后,提取细胞总RNA和总蛋白,利用RT-PCR法及Western blot鉴定AsPC-1细胞内Plk-1基因和蛋白表达水平。②采用流式细胞术检测转染组细胞凋亡的改变。③不同浓度gemcitabine作用于转染细胞,MTT法测定转染48 h后细胞增殖能力。结果①测序结果表明成功的从AsPC-1细胞总RNA中扩增Plk-1基因。RT-PCR结果表明：未转染组AsPC-1细胞组、转染空载体pcDNA3.1组及pcDNA3.1/Plk-1组24 h各组细胞内Plk-1 mRNA相对量分别为（2.14±0.16）、（2.18±0.15）、（2.58±0.18）,转染pcDNA3.1/Plk-1组与其他各组相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。Western blot结果显示：未转染组AsPC-1细胞组、转染空载体pcDNA3.1及pcDNA3.1/Plk-1组24 h各组细胞内Plk-1基因的蛋白表达水平为（0.989±0.018）、（1.022±0.021）、（1.243±0.143）,转染pcDNA3.1/Plk-1组与其他各组相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。②在gemcitabine作用下,pcDNA3.1/Plk-1转染组细胞凋亡率明显低于未转染组及空载体转染组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。③AsPC-1/Plk-1转染组细胞的生长抑制率亦明显高于未转染组及空载体转染组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论胞浆过表达Plk-1活性分子可明显降低gemcitabine诱导的AsPC-1细胞凋亡,增强其对化疗药物的耐受性。