离子色谱法测定人血白蛋白制品中辛酸钠的含量

目的:建立离子色谱法测定人血白蛋白制品中辛酸钠的含量。方法:样品加淋洗液[甲醇-乙腈-1.0 mmol·L^-1盐酸(20∶42∶38)]沉淀蛋白,离心取上清液,过滤后直接进样,以庚酸为内标。采用Dionex InPac^TM NS1分析柱(250 mm×4 mm, 10μm)与Dionex InPac^TM NG1保护柱(35 mm×4 mm, 10μm),流速1.0 mL·min^-1,ASRS 300膜抑制器,化学抑制,再生液为5 mmol·L^-1四丁基氢氧化钠溶液,电导检测器检测,柱温30℃,进样量25μL。结果:辛酸峰与内标峰间的分离度>1.5;辛酸钠在0.38～2.52 mmol·L^-1范围内线性关系良好,r=0.999 5(n=6);重复性试验的RSD为1.1%(n=6);平均加样回收率为97.4%,RSD为1.8%(n=9);定量限与检测限分别为0.19 nmol与0.09 nmol;国内外7家企业20批人血白蛋白制品中辛酸钠含量范围为0.0...     

人血白蛋白制品铝残留量的追踪研究

目的:通过对我国人血白蛋白制品在执行2005年版中国药典前后的铝残留量状况的追踪分析,并与进口人血白蛋白比较,以提高国内人血白蛋白制品的质量。方法:采用原子吸收分光光度法检测人血白蛋白制品中的铝残留量。结果:国内压滤法生产的人血白蛋白制品合格率为98.6%以上,离心法为96.8%,比执行前的合格率平均提高了56.2%。结论:在执行2005年版中国药典仅仅一年的时间内,国内生产厂家通过对工艺的优化改进,人血白蛋白制品铝残留量的控制基本符合标准。     

比色法测定人血白蛋白含量

双缩脲比色法测定人血白蛋白含量,浓度在4～20mg之间,与吸收度呈良好的线性关系,r=0.99996,回收率为99.88%(n=35),CV=1.74%.该法43℃水浴保温5min,快速、简便,经与凯氏定氮法比较,结果基本一致.     

离子选择电极测定注射用头孢他啶中碳酸钠的含量

用离子选择电极法测定注射用头孢他啶中碳酸钠的含量。方法：采用Mettler Toledo MA235/pH离子计及Nernst钠离子选择电极,根据Nernst方程,钠离子的电位与其浓度（活度）的对数成线性的关系,通过简单的电位测量,由钠离子标准工作曲线直接测得注射用头孢他啶中钠离子的浓度。结果：该方法的最大误差约6％,精密度（RSD）为1．07％,线性工作范围为10^-1-10^-3mol/L。本方法与原子吸收分光光度法的测定结果一致。结论：离子选择电极法简便、经济、快速、准确,易于推广,可代替原子吸收分光光度法用于注射用头孢他啶中碳酸钠含量的测定。     

人血白蛋白中辛酸钠含量与热稳定性试验相关性研究

人血白蛋白注射液系水溶性胶体无菌制剂。其特点是既易溶于水又存在自发性絮凝的趋向,并易受多种理化因素影响而变性,从而失去生理活性。辛酸钠的加入不仅使加热灭活病毒成为可能,同时也提高了贮存期的稳定性。热稳定性试验正是衡量产品外观质量的重要指标之一。本文着重考察了辛酸钠含量、生产工艺与热稳定之间的关系,现将结果报告如下。1　仪器及试剂人血白蛋白注射液,上海生物所(Ａ),某省血液制品所(Ｂ1～Ｂ3);辛酸钠(ＣＲ,北京化工厂);恒温水溶箱ＨＨ.Ｗ21.600,标准号ＷＳ2-269-79;全自动凝胶层析仪ＡＭ90-1;灯检仪ＹＢ-Ⅱ型等。2　实验…     

原子吸收光谱法测定人血白蛋白制剂中的痕量铝

目的:建立快速测定人血白蛋白制剂中痕量铝的新方法。方法:采用具有横向加热石墨炉原子化器系统和纵向塞曼效应背景校正的原子吸收光谱仪测定了人血白蛋白中的痕量铝。结果:本方法的特征量为39.7 pg,检出限为0.51 ng·mL~(-1),RSD 为8.2%,回收率为90.2%～103.2%。结论:该方法操作简单,灵敏度高且结果准确可靠。     

应用ICP—MS快速测定人血白蛋白中铝残留量

目的：建立ICP—MS测定人血白蛋白中铝残留量的方法。方法：样品用去离子水直接稀释，以Li（6）为内标元素，采用标准曲线法测定。ICP—MS参数为：功率1．35kW，载气流速1．18L·min^-1，采样深度7mm，全定量分析模式。结果：铝离子浓度在0—50μg·L^-1范围内呈良好的线性关系（r=0．9999），平均回收率为101．4％。对ICP—MS法和GF～AAS法的测定结果进行t检验，2种方法没有差异。结论：本方法简便、快捷和准确，可作为人血白蛋白中铝残留量测定方法之一。     

火焰光度法测定人血白蛋白中钠离子含量的不确定度评定

目的:建立火焰光度法测定人血白蛋白中钠离子含量的不确定度评定方法,探讨影响钠离子含量测定的不确定度分量.方法:对火焰光度法测定人血白蛋白中钠离子含量的全过程进行分析,建立不确定度的数学模型,分析测量不确定度的来源并对各分量进行量化分析和评估,合成标准测量不确定度,给出扩展测量不确定度报告.结果:火焰光度法测定人血白蛋白...     

气相色谱法测定人血白蛋白原液中辛酸钠含量

目的 ：建立气相色谱法测定人血白蛋白半成品中辛酸钠的含量。方法： 色谱条件：色谱柱KB-INNOWAX（30m×0.32mm×0.5μm）;气化室温度250℃;柱温190℃;检测器温度250℃;载气为氮气,柱流速3.0mL?min-1; 氢气流速40mL?min-1;分流比10:1,乙酸乙酯为萃取剂（溶剂）。进行了专属性、重复性、线性、溶液稳定性、准确度、定量限方法学验证。结果： 该气相色谱法辛酸峰拖尾因子1.10,理论板数为21251,与相邻峰分离度为5.1且未受其他峰干扰。重复性RSD为0.74%;线性范围在157～785μg?mL-1;溶液在24h内稳定,峰面积RSD为1.01%;平均回收率及RSD分别为96.72%±0.93%、0.96%,定量限为5.23μg。结论： 本文建立的气相色谱法测定人血白蛋白半成品中辛酸钠的含量,操作简便、准确。     

石墨炉原子吸收光度法测定硫糖铝中铝的含量

目的建立石墨炉原子吸收分光光度法（GFFAAS）测定硫糖铝中铝的含量。方法采用石墨炉原子吸收光谱法测定硫糖铝中铝的含量,采用标准曲线法。结果铝在2～20ng.mL-1范围内,吸光度与浓度呈良好的线性关系。回归方程A=0.0145C-0.003,r=0.9975（n=5）。结论本方法简便、快速、准确,能很好的测定出硫糖铝中铝的含量。     

人血白蛋白的蛋白质含量测定能力验证结果与分析

目的：对全国血液制品批签发授权药检机构及相关生产企业或单位实验室的人血白蛋白蛋白质含量检测能力进行评价。方法：选择符合要求的人血白蛋白产品作为原料进行合并、除菌、分装。制备后按照《中国药典》2015年版三部蛋白质含量（凯式定氮）测定,组织协作标定后确立指定值。均一性和稳定性监测合格后按能力验证要求发放样品。以多中心协作标定结果作为评价参加者能力验证结果的依据。结果：能力验证样品确立的指定值及其参考范围为（193.30±5.08） g·L^-1,参加本次能力验证的药检机构或企业实验室共13家,10家实验室结果为优秀,1家实验室为合格,2家实验室为不满意。整体满意率为84.6%,优秀率76.9%,不合格率15.4%。结论：国内血液制品的7家批签发授权药检机构能力验证结果均为优秀,部分企业实验室能力验证结果为满意,但也有个别实验室测定结果出现偏差,参加者应调查并改进。     

光阻法检测人血白蛋白、静注人免疫球蛋白中的不溶性微粒

目的对人血白蛋白、静注人免疫球蛋白中的不溶性微粒进行检查研究。方法按照《中国药典》2010年版三部中不溶性微粒检查法-光阻法进行检测。结果样品不经稀释,即可用于检测。液体制剂混匀后静置2min即可消除气泡,冻干制剂则需静置2~4h方可脱气。10μm粒子的回收率为98.5%,25μm粒子的回收率为100.1%。共检测人血白蛋白130批、静注人免疫球蛋白（pH 4）103批、冻干静注人免疫球蛋白（pH 4）44批,均符合规定。结论《中国药典》2010年版三部附录中的＂不溶性微粒检查法＂可用于人血白蛋白、静注人免疫球蛋白的检测,抽检的样品均能达到新版药典的要求。     

人血白蛋白对鲎试验干扰作用的定量分析

目的:分析不同浓度人血白蛋白注射液对鲎试验生化反应干扰程度的量变关系。方法:将人血白蛋白注射液稀释成不同浓度,并加入已知的标准内毒素,用动态浊度标准曲线法定量检测所加内毒素的回收率,测绘稀释-回收率曲线,计算不同浓度人血白蛋白注射液的干扰作用。结果:标准曲线方程Y=0.486X 2.8251 r=0.9977,标准曲线平均回收率为(100.1±6.04)%。精密度测定RSD 8.0%-15.0%。人血白蛋白注射液的稀释-回收率曲线呈两个时相,快速相和慢速相。结论:内毒素的回收率随着白蛋白浓度的减少而增加,人血白蛋白注射液稀释8倍时,回收率已达到87%,基本上已无干扰。     

人血白蛋白实施国家批签发制度后的质量评价

目的通过分析我国人血白蛋白制品在执行国家批签发制度前后的质量和问题,评价国内人血白蛋白制品目前的质量状况。方法采用资料审查和试验室检测,对2002-2008年人血白蛋白的部分关键项目的结果作质量趋势分析。结果6年中我所对人血白蛋白888批记录摘要进行了资料审查,其中831批做试验室检测,平均合格率98．6％。结论目前国内人血白蛋白制品质量总体稳定,国家批签发制度的实施促进了该制品的生产和检定愈加规范,但也存在一些问题有待解决。     

人血白蛋白在烧伤休克复苏中的有效性和安全性研究

目的 考察白蛋白在烧伤休克复苏中的有效性和安全性,为白蛋白的合理使用提供理论基础。方法 采用回顾性病例对照研究的方法,收集浙江大学医学院附属第二医院2011年1月—2018年12月烧伤科住院患者中需要进行抗休克液体复苏的患者信息,根据烧伤的严重程度分为中重度烧伤组（20%<烧伤面积≤50%）、特重烧伤组（烧伤面积>50%）,根据是否使用白蛋白复苏分为白蛋白组、非白蛋白组。主要结局指标为死亡率,次要结局指标为住院天数、呼吸机使用情况、复苏液体使用情况和并发症发生情况。结果 20%<烧伤面积≤50%的患者和烧伤面积>50%的2组患者白蛋白组与非白蛋白组的死亡率、住院天数、呼吸机使用例数、液体使用情况及并发症发生情况均无统计学差异;白蛋白组患者的机械通气天数高于非白蛋白组（P=0.003）,但多因素方差分析结果显示,这与白蛋白的使用无关;在患者住院期间,没有发现由于人血白蛋白的使用而引发的明显不良反应。结论 在烧伤休克患者液体复苏的过程中,人血白蛋白的使用对治疗结局的改善不明显,但也没有发生明显的不良反应。     

凯氏定氮法测定人血白蛋白中蛋白质含量的不确定度评价

目的：对凯氏定氮法测定人血白蛋白中蛋白质含量的不确定度进行评价。方法：建立不确定度计算模型,对测定中的各影响因素进行考察。结果：量化了各不确定度分量并计算出合成不确定度为0．62％,取k=2,得扩展不确定度为1．2％,人血白蛋白中蛋白质含量为（104．7±1．2）％。结论：测定总氮时样品的稀释和量取以及实际消耗硫酸滴定液体积、测量重复性、硫酸滴定液的浓度标定和稀释是凯氏定氮法测定人血白蛋白含量不确定度的主要因素,通过分析上述不确定度分量对试验进行优化,可使测定结果更加可靠。     

Stability of Human Serum Albumin During Bioprocessing: Denaturation and Aggregation During Processing of Albumin Paste

Purpose. To assess the impact of various bioprocessing steps on thestability of freshly precipitated human serum albumin (HSA) obtainedfrom pooled human plasma.Methods. After initial precipitation of HSA from plasma, the resultantpaste is either (a) lyophilized or (b) washed with acetone and thenair-dried in order to obtain a dry powder. The structure of HSA wasexamined using Fourier transform infrared (IR) spectroscopy. Theextent of aggregation of redissolved HSA was measured using bothdynamic light scattering and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE).Results. Both lyophilization and air-drying perturb the secondarystructural composition of HSA, as detected by infrared (IR) spectroscopy.Upon dissolution of dried paste, most of the protein refolds to anative-like conformation. However, a small fraction of the protein moleculesform soluble aggregates that can be detected by both dynamic lightscattering and SDS-PAGE. The level of aggregation is so low that itcould not be detected in the bulk by either circular dichroism orIR spectroscopy. The lyophilized protein, which appears to be moreunfolded in the solid state than the acetone washed/air-dried material,exhibits a higher level of aggregation upon dissolution.Conclusions. There is a direct correlation between the extent ofunfolding in the solid state and the amount of soluble aggregate presentafter dissolution. Moreover, the presence of the aggregates persiststhroughout the remainder of the purification process, which includesdissolution, chromatography, sterile filtration and viral inactivationsteps. Analytical methods used to monitor the stability ofbiopharmaceuticals in the final product can be used to assess damage inflictedduring processing of protein pharmaceuticals.     

顺铂对阿霉素与人血清白蛋白结合的相互作用光谱研究

目的 研究顺铂对阿霉素与人血清白蛋白结合的相互作用。方法 采用荧光光谱法研究不同浓度顺铂对阿霉素与人血清白蛋白结合的相互作用。结果 顺铂与阿霉素对人血清白蛋白都有猝灭作用。顺铂对白蛋白的猝灭方式为动态猝灭,而阿霉素对白蛋白的猝灭方式为静态猝灭。结论 温度为17℃和37℃时,阿霉素与白蛋白的结合常数分别为2.13×104,2.76×10^4 L.mol l,2者的结合位点数为1。当加入不同浓度的顺铂后,阿霉素与白蛋白的结合常数有所变化,而结合位点数仍然为1。     

荧光光谱法研究安非他酮与人血清白蛋白的相互作用

目的 研究安非他酮与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的相互作用。方法 通过荧光光谱法研究安非他酮对HSA的荧光猝灭光谱和同步荧光光谱的影响。由Stern-Volmer方程确定安非他酮对HSA的荧光猝灭机制,双对数方程确定反应结合位点和结合常数。根据热力学方程讨论两者间主要的作用力类型。结果 荧光猝灭光谱显示,安非他酮对HSA有猝灭作用,在17 ℃和37 ℃时的猝灭速率常数分别为5.714 8×10³和3.126 1×10³ L·mol^-1·s^-1,反应前后的焓变和熵变均<0,结合点数为1。结论 安非他酮对HSA的猝灭过程为静态猝灭,二者间的结合力主要为氢键和范德华力。     

Recombinant Human Serum Albumin Dimer has High Blood Circulation Activity and Low Vascular Permeability in Comparison with Native Human Serum Albumin

Purpose Human serum albumin (HSA) is used clinically as an important plasma expander. Albumin infusion is not recommended for critically ill patients with hypovolemia, burns, or hypoalbuminemia because of the increased leakage of albumin into the extravascular spaces, thereby worsening edema. In the present study, we attempted to overcome this problem by producing a recombinant HSA (rHSA) dimer with decreased vascular permeability and an increased half-life. Methods Two molecules of rHSA were genetically fused to produce a recombinant albumin dimer molecule. The pharmacokinetics and biodistribution of the recombinant proteins were evaluated in normal rats and carrageenin-induced paw edema mouse model. Results The conformational properties of this rHSA dimer were similar to those for the native HSA (the HSA monomer), as evidenced by the Western blot and spectroscopic studies. The biological half-life and area under the plasma concentration–time curve of the rHSA dimer were approximately 1.5 times greater than those of the monomer. Dimerization has also caused a significant decrease in the total body clearance and distribution volume at the steady state of the native HSA. rHSA dimer accumulated to a lesser extent in the liver, skin, muscle, and fat, as compared with the native HSA. Up to 96 h, the vascular permeability of the rHSA dimer was less than that of the native HSA in paw edema mouse models. A prolonged plasma half-life of the rHSA dimer was also observed in the edema model rats. Conclusions rHSA dimer has a high retention rate in circulating blood and a lower vascular permeability than that of the native HSA.