喉鳞状细胞癌组织中Survivin基因与p15和p16基因表达的关系

OBJECTIVE:: To investigate the expression of Survivin (SVV) and its relationship with expression of p15, p16 in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). METHODS: Using strep avidin-biotin complex (SABC) method, we examined the expression of SVV, p15 and p16 gene in 48 LSCC tissus samples, 24 normal laryngeal mucosa tissus samples and 24 normal laryngeal tissus adjacent to the tumors samples. RESULTS: SVV was expression in 27 of 48 (56.3%) samples of LSCC and expression in 6 of 24 (25.0%) samples of normal laryngeal tissus adjacent to the tumors. Normal laryngeal mocosa tissus samples did not expressed SVV. Overexpression of SVV was related to the tumor site, grade, clinical stage and tumor prognosis (P < 0.05). The expression of SVV in LSCC was positive correlated with p16 expression( C = 0.52 P < 0.001), but not with p15 expression. CONCLUSION: SVV may play a role in the pathway of carcinogenesis and tumor progress. It is feasible for early diagnosis and prognosis estimation. Overexpression of SVV gene and de-activation of antioncogene p16 may be play synergetic roles in the carcinogenesis of LSCC.     

p16基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究

OBJECTIVE: To assess the anti-tumor effects of p16INK4A gene transfer in laryngeal squamous cell carcinoma. METHODS: A Complete p16INK4A gene was inserted into a replication-defective recombinant adenovirus (Ad-p16) and the tumor cells were infected with Ad-p16. Confirmation of p16INK4A protein expression after Ad-p16 infection was performed by Western Blotting. The therapeutic effects were evaluated both in in vitro and in vivo study. RESULTS: The replication-defective recombinant adenovirus can direct a high level of p16INK4A protein expression in laryngeal squamous cell carcinoma. Studies both in in vitro and in vivo experiments demonstrated that Ad-p16 treatment significantly inhibits the cell growth and the established tumors in nude mice. The mean value of tumor volumes among the Ad-p16, Ad-Lacz and phosphatic buffered saline(PBS) groups was (91.00 +/- 6.32) mm3, (137.00 +/- 9.62) mm3 and (144.00 +/- 13.87) mm3 respectively. Statistic analysis showed that there was a significant difference between the Ad-p16 group and the control groups (P < 0.05). No significant difference was found between Ad-lacZ and PBS groups, which indicated that the antitumor effects was not influenced by the adenovirus. CONCLUSION: These results demonstrate a significant antitumor effect of Ad-p16 against human laryngeal squamous cell carcinoma. This data also further support the potential application of Ad-p16 to treat the human head and neck cancer.     

喉鳞状细胞癌中Survivin基因的表达

目的探讨Survivin基因在喉癌和癌旁组织中的表达。方法应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测40例喉鳞癌病人(Ⅱ期4例,Ⅲ期10例,Ⅳ期26例)的喉癌组织、癌旁组织(离切缘0.3~0.5 cm)和远离切缘(>2 cm)的相对正常喉组织中Survivin的表达情况。结果Survivin在喉癌组织中强表达率62.5%,在近癌切缘的癌旁组织弱表达率为34.6%,在远离癌切缘的相对正常喉组织Survivin弱表达率为10.0%,三者之间有明显差异。结论Survivin基因在喉鳞癌组织中强表达,但在癌旁黏膜中阳性表达可随着离癌灶越远,表达越低。     

p63基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

p63基因是由Osada于1998年发现的另一个p53基因家族成员，定位于3q27-3q29。p63与p53蛋白具有非常相似的结构和功能，目前已被认为是一个候选抑癌基因。我们应用原位杂交方法分别检测喉鳞状细胞癌、癌旁增生组织、非典型增生组织和声带息肉中的p63基因表达程度，藉以探讨     

喉鳞状细胞癌中Survivin和PTEN基因的表达及临床意义

目的：探讨凋亡抑制基因Survivin和抑癌基因PTEN在喉鳞状细胞癌（LSCC）中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学Envision法检测71例LSCC标本中Survivin、PTEN蛋白的表达，并以10例声带息肉组织为对照。结果：Survivin蛋白在声带息肉中不表达；在71例LSCC中，53例（74．6％）表达阳性；Survivin阳性表达率与LSCC患者的年龄、性别、肿瘤大小均无相关性（均P〉0．05），均与肿瘤发生部位、临床分期、病理分级、淋巴结转移、预后有关（均P〈0．05）。PTEN蛋白在声带息肉中强表达（100%）；在71例LSCC中，33例（46．5％）表达阳性；PTEN阳性表达率与LSCC患者的年龄、性别、肿瘤大小、发生部位均无相关性（均P〉0．05），均与临床分期、病理分级、淋巴结转移、预后有关（均P〈0．05）。在LSCC组织中Survivin与PTEN的表达呈负相关（P〈0．05）。结论：Survivin、PTEN基凼的异常表达与LSCC的发生、发展及预后有关，可作为评价LSCC生物学行为的重要参考指标。二者在LSCC的发生、发展中起协同作用。     

喉鳞状细胞癌和喉乳头状瘤中Survivin表达的意义

目的：探讨Survivin蛋白在喉鳞状细胞癌和成人喉乳头状瘤中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法对46例喉鳞状细胞癌、24例癌旁组织和20例喉乳头状瘤以及16例正常喉粘膜标本中Survivin的表达进行检测。结果：Survivin蛋白在喉癌组织、癌旁组织和喉乳头状瘤中的阳性表达率分别为71.74%（33/46）、33.33%（8/24）和40.0%（8/20）,在正常黏膜组织中没有表达,喉癌组中的阳性表达率分别显著高于正常组织、癌旁组织及喉乳头状瘤中的表达率（均P〈0.01）。且发生恶变的喉乳头状瘤Survivin蛋白均为阳性表达。但Sur-vivin阳性表达与喉癌的发生部位、分级、分期、淋巴结转移以及病理分级没有关联。结论：Survivin在喉癌组织中过度表达,参与了喉癌的形成,是喉癌形成的一个早期事件,可望成为预测成人喉乳头状瘤恶变的一个诊断方法。     

喉鳞状细胞癌组织中p63表达的临床意义

目的：探讨p63基因在喉鳞状细胞癌中的表达及其临床意义。方法：用免疫组织化学法检测63例喉鳞状细胞癌（喉癌组）及其45例癌旁组织（癌旁组）、24例转移淋巴结（转移淋巴结组）、40例未转移淋巴结（未转移淋巴结组）及25例喉非癌组织（非喉癌组）中p63基因的表达。结果：p63基因在喉鳞状细胞癌组织中均为细胞核阳性表达,喉癌组及转移淋巴结组的中、强阳性率为95．2％（60／63）和83．3％（20／24）;癌旁组及未转移淋巴结组中无中、强阳性表达;非喉癌组中1例乳头状瘤为弱阳性表达,其余均为上皮细胞或基底细胞核弱阳性表达。结论：p63可作为喉鳞状细胞癌有特异性的标记物,对喉鳞状细胞癌的早期诊断和鉴别诊断有重要意义。p63可能主动参与了调控喉鳞状细胞癌的发生过程,但在喉鳞状细胞癌的发展过程中处于被激活状态,可能在发展过程中发挥负反馈的作用。     

复发喉鳞状细胞癌相关基因表达谱研究

目的：筛选与复发喉鳞状细胞癌相关的基因。方法：用包含18000个cDNA的基因芯片法检测2例复发喉鳞状细胞癌标本的癌组织及喉正常黏膜组织mRNA表达谱，通过对比分析寻找与复发喉鳞状细胞癌相关的基因。结果：①重复且相差3倍以上差异表达基因共218个，其中喉癌组织表达上调的基因137个，表达下调的基因81个；②表达相差10倍以上的基因4个，分别为U02570、AW863712、AA523939和NM_014381。结论：复发喉鳞状细胞癌的发生是一个多基因表达失调的过程，可能主要与GTP酶活化蛋白及DNA错配修复有关。     

抑癌基因p15、Rb在喉鳞状细胞癌中表达的研究

目的 :研究抑癌基因p15、Rb蛋白表达对喉鳞状细胞癌诊断、治疗及预后判断的意义。方法 :用免疫组化SABC法检测喉癌组 45例石蜡标本与对照组 15例喉部正常或增生的黏膜上皮标本的 p15、Rb蛋白表达情况。结果 :喉鳞状细胞癌组p15蛋白阳性率 (48.9%)与对照组阳性率 (10 0 .0 %)比较 ,差异有极显著性意义 (P<0 .0 1) ;喉癌组中 0～Ⅱ期 p15蛋白阳性率 (6 6 .7%)与Ⅲ～Ⅳ期阳性率 (33.3%)比较 ,差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;喉癌组Rb蛋白阳性率 (88.9%)与对照组阳性率 (93.3%)比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;2× 2列联表 χ2 检验 ,p15、Rb蛋白表达无相关性 (P >0 .0 5 ) ;对照组中 ,p15蛋白的表达以鳞状上皮组织中远离基膜的棘层细胞、颗粒层细胞明显 ,而Rb蛋白的表达则以基底层细胞及近侧棘层细胞明显。结论 :抑癌基因 p15的表达缺失对喉鳞状细胞癌的发生、发展有一定的作用 ,p15蛋白的检测对喉鳞状细胞癌的治疗及估计预后有指导意义 ;喉鳞状细胞癌组织中 p15、Rb的蛋白表达无相关性 ;正常及增生的喉部鳞状上皮的细胞层次间 ,p15、Rb蛋白表达不一致 ,p15蛋白表达对细胞增殖有抑制作用。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在喉鳞状细胞癌中表达的研究

目的　探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在喉鳞状细胞癌 (简称鳞癌 )中的表达及其与之发生、发展的关系。方法　采用原位杂交方法检测 84例原发性喉鳞癌 (primarylaryngealsquamouscellcarcinoma ,PLSCC)、2 7例喉癌前病变不典型增生 (laryngealprecancerouslesion ,LPL)、10例声带息肉(vocalcordpolyp ,VCP)和 10例正常喉黏膜 (normallaryngealtissues ,NLT)石蜡标本组织细胞中KAI1mRNA的表达。结果　NLT、VCP、LPL和PLSCC 4种组织中KAI1阳性表达的积分吸光度值 ( x±s)分别为 (136 2 0 6 8± 36 6 75 5 )、(1336 74 5± 4 2 85 8 5 )、(90 36 8 8± 2 5 70 1 9)和 (6 7880 6± 2 8189 5 ) ,其中NLT组和VCP组之间差异无显著性 (t=0 14 2 ,P >0 0 5 ) ,NLT组和LPL组之间差异有显著性 (t =4 2 81,P <0 0 1) ;PLSCC组中KAI1表达普遍下调 ,且病理分化G1 2组阳性表达水平高于G3组 ;T1 2病变组高于T3 4组 ;颈淋巴结NO组高于N1及N1以上组 ;临床Ⅰ Ⅱ期组高于临床Ⅲ Ⅳ期组 (P值均 <0 0 1)。KAI1表达与患者性别无关 (P >0 0 5 )。结论　KAI1低表达在喉鳞癌的发生、发展中可能起着重要作用 ,可望作为喉鳞癌早期诊断、评估肿瘤细胞侵袭转移潜能及患者病程发展阶段的指标之一。     

喉及下咽鳞状细胞癌的ras基因突变热点的研究

目的：研究ｒａｓ基因第１２密码子在喉及下咽癌组织中的突变情况。方法：采取多聚酶链延伸反应－限制性片段长度多态性分析方法，对３７例喉癌、下咽癌手术标本进行三种ｒａｓ基因测定。结果：三种ｒａｓ基因的１２位密码子在喉癌及下咽癌组织中的突变率为３５．１％，其中Ｎ－ｒａｓ基因的１２密码子突变率为１６．２％，Ｋ－ｒａｓ鹤率为１３．５％，Ｈ－ｒａｓ基因的突变率为５．４％，其突变率与喉癌、下咽癌组织分化和分化程度     

Survivin、bcl-2和bax在喉鳞状细胞癌中的表达

目的探讨凋亡抑制基因survivin在喉鳞癌中的表达,及其与bcl-2、bax基因表达的相关性。方法应用SP免疫组织化学法检测45例喉鳞状细胞癌及10例正常喉黏膜组织中survivin,bcl-2及bax基因的表达。结果喉鳞状细胞癌组织中,Survivin的表达率为80%,显著高于正常喉黏膜组织的表达率20%(P<0.05)。Survivin蛋白表达与喉鳞状细胞癌的TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。Survivin表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P<0.05),而与bax蛋白表达呈负相关(P<0.05)。结论Survivin在喉鳞状细胞癌的发生、发展中起重要作用,可能成为喉鳞状细胞癌基因治疗的新靶点;Survivin基因可能与凋亡相关基因bcl-2、bax在喉鳞状细胞癌的发展中分别起协同和拮抗作用。     

喉鳞状细胞癌的体外原代培养

利用体外组织培养方法对１１组喉鳞状细胞癌标本进行原代培养。结果原代培养平时时间２月，培养成功率６３．６％（７／１１），并可继续传代，介绍了组织块培养和胰蛋白酶消化分离培养两种方法以及去除成纤维细胞的方法。讨论了喉鳞癌原代培养中的注意事项。     

喉鳞状细胞癌组织中骨桥蛋白和p53的表达及其临床意义

目的 研究人喉鳞状细胞癌（LSCC）及其癌旁相对正常组织中骨桥蛋白 (OPN)和p53表达水平,并探讨两者的相互关系及其临床病理学意义。方法 采用免疫组织化学SP法,对44例LSCC及癌旁组织手术切除标本常规制作石蜡包埋切片,检测OPN和p53的表达,结合喉癌患者的临床病理学特征进行分析。结果 ①44例喉癌组织中OPN和p53表达阳性率分别为75.0%（33例）和65.9%（29例）,癌旁相对正常组织中分别为13.6%（6例）和2.3%（1例）;②OPN的表达与颈部淋巴结转移、临床分期、病理组织学分级有关,与性别、年龄、原发部位无相关性;③OPN和p53的表达呈显著正相关（r＝0. 360,P＝0.016）。结论 OPN在喉癌组织中的表达高于癌旁相对正常组织,可能参与了喉癌的发生、发展和转移,有可能成为判断预后的重要生物学标记物。     

抑癌基因PTEN在喉鳞状细胞癌和转移淋巴结中的表达

目的研究抑癌基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘、声带息肉、转移淋巴结和无转移淋巴结中的表达,探讨其在喉鳞状细胞癌发生、发展和转移中的作用和意义,探讨喉鳞状细胞癌和转移淋巴结在分子水平的差异.方法采用免疫组织化学SP法检测了57例喉鳞状细胞癌患者的病理标本,随机抽取的27例癌旁安全切缘、22例声带息肉与57例标本中18例淋巴结转移阳性的喉状细胞鳞癌、转移淋巴结、无转移淋巴结中PTEN的表达进行检测和统计分析.结果PTEN在喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘和声带息肉中的阳性率分别为89.5%(51/57)、88.9%(24/27)和95.5%(21/22),三者之间无显著性差异(P＞0.05),但喉鳞状细胞癌、癌旁安全缘中PTEN的阳性表达程度较声带息肉中为低,有显著性差异(P＜0.01);PTEN的阳性表达在不同性别、年龄、发病部位、分化、T分期、临床分期、淋巴结转移组间未见显著性差异(P＞0.05).无转移淋巴结中均未见PTEN的表达,18例转移淋巴结阳性患者喉鳞状细胞癌和转移淋巴结中PTEN的阳性率均为94.4%(17/18),但转移淋巴结中PTEN的表达强度较喉鳞状细胞癌高,差异有显著性(P＜0.05).结论在喉鳞状细胞癌发生的过程中,PTEN可能发生部分变异,属喉鳞状细胞癌癌变的早期分子事件,但与喉鳞状细胞癌的进展无关.喉鳞状细胞癌与转移淋巴结在分子水平存在差异.     

CDK4和p16在喉鳞状细胞癌中的表达

目的:探讨CDK4、p16在喉鳞状细胞癌中的表达。方法:采用免疫组织化学SP法检测30例喉鳞状细胞癌组织和20例癌旁组织中CDK4和p16的表达情况,并分析二者分别与喉鳞状细胞癌临床分期和病理分级的关系。结果:在喉鳞状细胞癌中CDK4、p16的表达率分别为63.3%、46.7%,在癌旁组织中CDK4、p16的表达率分别为25%、90%。CDK4在喉鳞状细胞癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),与病理分级、临床分期均无显著相关性(P>0.05);p16在喉鳞状细胞癌中的表达低于癌旁组织(P<0.05),与病理分级有相关性(P<0.05),与临床分期无显著相关性(P>0.05);CDK4与p16的表达呈负相关(rs=-0.786,P<0.05)。结论:p16的低表达和CDK4的高表达可能在喉鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用,且p16的低表达可能作为判断肿瘤恶性程度的指标。     

垂体肿瘤转移基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨喉鳞状细胞癌中垂体肿瘤转移基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)蛋白表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测56例喉鳞癌及13例喉正常黏膜中PTTG的表达,分析PTTG表达与喉鳞癌临床病理指标之间的关系。结果 PTTG蛋白在喉鳞癌组织中的阳性表达率为64.3%,在喉正常黏膜细胞中的阳性表达率为23.1%(P<0.05);PTTG的阳性表达及其强度与喉鳞癌临床病理指标之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG基因蛋白阳性表达及其强度可做为判定喉鳞癌生物学行为及其预后的参考指标之一。