小泛素样修饰物特异性蛋白酶3通过调节脂滴水平体外促进HepG2细胞丙型肝炎病毒复制

目的 探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响。方法 以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平。采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平。以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平。结果 在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV 核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2%,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4%,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01)。结论 在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制。     

青蒿琥酯在细胞水平抑制登革病毒的研究北大核心CSCD

目的研究青蒿琥酯在细胞水平抑制Ⅱ型登革病毒(DENV-Ⅱ)复制的效应。方法通过CCK-8法测定青蒿琥酯和利巴韦林对HepG2细胞的最大无毒剂量;通过空斑法、蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测评价青蒿琥酯抑制DENV-Ⅱ复制效应。结果 CCK-8试验测定青蒿琥酯和利巴韦林对HepG2细胞的最大无毒剂量分别为30μmol/L和50μmol/L。空斑试验显示青蒿琥酯能抑制DENV-Ⅱ粒子的释放(F=20.07,P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示青蒿琥酯和利巴韦林均能抑制DENV-ⅡRNA的复制(F值分别为9.928和107.2,均P<0.05),qPCR评价其半数有效抑制浓度(EC50)分别为28.89μmol/L和20.61μmol/L。蛋白免疫印迹试验显示青蒿琥酯能抑制DENV-Ⅱ包膜蛋白E的表达(F=24.23,P<0.05)。检测不同时间点给药,实时荧光定量PCR结果显示在病毒感染2 h后给药有抑制DENV-Ⅱ病毒复制效应(F=3.621,P<0.05)。结论青蒿琥酯能从细胞水平上抑制DENV-Ⅱ病毒的复制。     

肝组织及血ANXA2表达异常对肝癌诊断与鉴别的价值

目的分析乙肝病毒(HBV)感染相关原发性肝癌(PHC)组织及血膜联蛋白亚组分(annexin A2,ANXA2)水平及其临床价值。方法以自身配对法分别收集HBV相关肝癌术后的癌、癌旁和远癌组织,以免疫组化法分析肝组织ANXA2蛋白表达与细胞分布、荧光定量PCR检测ANXA2mRNA表达,以ELISA法定量肝病患者血ANXA2水平。结果肝癌组织ANXA2表达见于胞浆和胞膜,癌旁组织见于胞浆;癌组织ANXA2表达无论在蛋白还是mRNA水平都显著高于癌旁组织(P<0.001);肝癌患者血ANXA2水平显著高于良性肝病(F=498.221,P<0.001);伴肝外转移、门静脉癌栓患者血ANXA2明显异常;与中分化、低分化程度显著相关;HBV感染与非感染组间差异非常明显(t=6.820,P<0.001);如以血ANXA2≥18ng/ml为界,与AFP联合诊断肝癌阳性率达96.5%。结论 ANXA2过表达有助于PHC的诊断与鉴别。     

青蒿琥酯在细胞水平抑制登革病毒的研究

目的研究青蒿琥酯在细胞水平抑制Ⅱ型登革病毒(DENV-Ⅱ)复制的效应。方法通过CCK-8法测定青蒿琥酯和利巴韦林对HepG2细胞的最大无毒剂量;通过空斑法、蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR检测评价青蒿琥酯抑制DENV-Ⅱ复制效应。结果 CCK-8试验测定青蒿琥酯和利巴韦林对HepG2细胞的最大无毒剂量分别为30μmol/L和50μmol/L。空斑试验显示青蒿琥酯能抑制DENV-Ⅱ粒子的释放(F=20.07,P0.05)。实时荧光定量PCR结果显示青蒿琥酯和利巴韦林均能抑制DENV-ⅡRNA的复制(F值分别为9.928和107.2,均P0.05),qPCR评价其半数有效抑制浓度(EC_(50))分别为28.89μmol/L和20.61μmol/L。蛋白免疫印迹试验显示青蒿琥酯能抑制DENV-Ⅱ包膜蛋白E的表达(F=24.23,P0.05)。检测不同时间点给药,实时荧光定量PCR结果显示在病毒感染2 h后给药有抑制DENV-Ⅱ病毒复制效应(F=3.621,P0.05)。结论青蒿琥酯能从细胞水平上抑制DENV-Ⅱ病毒的复制。     

干预膜联蛋白A4表达对结直肠癌细胞增殖、侵袭和转移能力的影响

目的探讨干预膜联蛋白(ANX) A4表达对结直肠癌HCT116细胞增殖、黏附、剥脱和侵袭的影响及机制。方法采用RT-PCR和Western印迹检测结直肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达情况。将HCT116细胞分为Control组(未转染)、NC组(转染阴性对照)和ANXA4组(转染si RNA-ANXA4),脂质体lipofectamineTM2000转染HCT116细胞,RT-PCR检测各组细胞中ANXA4 m RNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HCT116细胞增殖能力,黏附实验、剥脱实验和侵袭实验分别检测HCT116细胞的黏附能力、剥脱能力和侵袭能力,Western印迹检测ANXA4、埃兹蛋白(Ezrin)、骨桥蛋白(OPN)和细胞表面黏附分子(CD44v6)蛋白的表达。结果 HCT116细胞中ANXA4 m RNA和蛋白表达水平均显著低于NCM460细胞;与Control组相比,干扰ANXA4表达后,HCT116细胞的增殖能力受到抑制,同时黏附能力、剥脱能力和侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P0. 05); ANXA4组细胞中ANXA4 m RNA表达水平及ANXA4、Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达水平较Control组均显著减弱,差异有统计学意义(P0. 05);而NC组与Control组各指标差异无统计学意义(P0. 05)。结论干预ANXA4表达能够抑制结直肠癌HCT116细胞的增殖、黏附、剥脱和侵袭能力,其分子机制可能与下调Ezrin、OPN和CD44v6蛋白表达有关。     

伊蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白促进DENV-2早期感染BHK-21细胞作用研究

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法 1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞的粘附作用以及兔抗rAlb-34k2抗体的阻断效应。结果 1)免疫荧光法检测结果显示,热灭活rAlb-34k2蛋白处理组感染比值为0.40±0.023,未灭活组0.54±0.029,差异有统计学意义(P=0.001 1)。2)Western blot和免疫荧光法检测显示rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞均可发生粘附,且与BHK-21细胞的粘附具有剂量依赖性;特异性抗体不能阻断rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2细胞的粘附效应。结论 rAlb-34k2蛋白可与BHK-21等DENV多种靶细胞发生粘附作用,具有介导DENV-2吸附细胞,促进病毒入侵宿主的潜能。     

ANXA2 siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及ROS水平影响研究

目的探讨膜联蛋白A2(ANXA2) siRNA对非小细胞肺癌细胞能量代谢及活性氧(ROS)水平影响。方法以非小细胞肺癌细胞株A549为探讨对象,在细胞内转染ANXA2 siRNA和siRNA阴性对照,用qRT-PCR和Western blot法分别测定细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达,流式细胞术测定A549细胞凋亡,Western blot测定A549细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平,试剂盒测定A549细胞中己糖激酶(HK)活性、丙酮酸激酶(PK)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法测定ROS含量,生物发光法测定三磷酸腺苷(ATP)含量。结果 ANXA2 siRNA可以下调A549细胞中ANXA2 mRNA和蛋白表达水平。A549细胞转染ANXA2 siRNA后凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平表达上调,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性降低,ROS含量增加,ATP含量降低,与没有转染的A549细胞比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。A549细胞转染siRNA阴性对照后细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平没有变化,细胞中HK活性、PK活性、LDH活性、SDH活性也没有变化,细胞中ROS和ATP含量也没有变化,与没有转染的A549细胞比较,差异没有统计学意义(P 0. 05)。结论下调ANXA2细胞中ROS水平诱导非小细胞肺癌细胞凋亡并抑制细胞能量代谢。     

雷帕霉素脂质体对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞迁移的抑制作用

目的]探讨雷帕霉素脂质体(RL)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)迁移的影响及其与S100钙结合白蛋白A4(S100A4)相关的作用机制。 [方法]使用敲低S100A4基因的慢病毒转染HA-VSMC,随后加入嘌呤霉素筛选S100A4基因敲低的稳定株。50 mg/L ox-LDL处理HA-VSMC,加入不同剂量的RL(3、6及12 mg/L),观察处理前后对细胞迁移的影响。采用细胞划痕法、Transwell实验检测细胞迁移,Western blot检测S100A4、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、波形蛋白的表达。 [结果]ox-LDL处理细胞48 h后,与空白对照组相比,S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达明显升高(P＜0.05),细胞迁移速度明显加快(P＜0.05)。与ox-LDL组相比,不同剂量的RL处理48 h后显著抑制S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达并显著抑制细胞迁移(P＜0.05),其中6 mg/L、12 mg/L RL的抑制作用更明显(P＜0.05)。敲低S100A4基因后细胞迁移率显著降低(P＜0.05)。 [结论]RL能显著抑制ox-LDL诱导的HA-VSMC迁移,可能与RL下调S100A4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、COLⅠ及波形蛋白的表达相关。     

ANXA2敲除的A549细胞系的构建及其对H1N1和H9N2流感病毒复制的影响北大核心CSCD

目的旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建ANXA2敲除的A549细胞,并探索ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。方法本研究设计了3对靶向ANXA2基因外显子的特异性sgRNAs,分别将sgRNAs构建到LentiCRISPRv2载体上获得重组质粒,与辅助质粒共转染293T细胞包装成慢病毒后感染A549细胞,通过嘌呤霉素压力及有限稀释法筛选ANXA2基因敲除的单克隆细胞株,用靶基因测序及Western-blot验证ANXA2的敲除效果,并通过CCK-8试验比较ANXA2敲除细胞和野生型A549细胞的细胞活力。再分别用人流感病毒WSN(H1N1)和禽流感病毒SD98(H9N2)感染ANXA2敲除和野生型A549细胞,经TCID_(50)检测ANXA2敲除对流感病毒复制的影响。结果成功获得了ANXA2敲除的A549细胞系,且与野生型A549细胞相比,细胞活力无显著差异;ANXA2敲除后WSN(H1N1)和SD98(H9N2)流感病毒的病毒滴度均升高,其中ANXA2对SD98(H9N2)流感病毒的影响要大于WSN(H1N1)。结论本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了ANXA2敲除的A549细胞,并发现ANXA2敲除促进了流感病毒的复制,本研究为流感病毒复制和致病机制的研究奠定了基础。     

葡萄糖转运促流感病毒复制的机制研究

目的探讨流感病毒H9N2复制与葡萄糖转运之间的潜在联系。方法 H9N2感染A549细胞后,检测葡萄糖转运对其复制的影响。感染H9N2后高通量测序检测调控此生理过程的潜在miRNA。通过过表达miRNA筛选影响葡萄糖转运的miRNA。miRDB在线分析和荧光素酶报告试验鉴定miRNA底物。结果 H9N2感染A549后,A549细胞葡萄糖转运水平上升(31.2±7.1 vs 123.5±24.9,t=6.138,P0.05)。葡萄糖转运抑制剂Phloretin处理A549后,H9N2复制水平显著下降(5.2±1.0 vs 1.6±0.2,t=6.035,P0.05)。葡萄糖转运激动剂Insulin处理A549后,H9N2复制水平显著上升(5.6±0.9 vs 14.3±2.5,t=5.493,P0.05)。高通量测序显示,H9N2感染后37种miRNA的表达发生显著变化。当敲低miR-345-3p时,A549细胞葡萄糖转运水平显著上升(25.4±5.3 vs 175.2±31.2 t=8.239,P0.05),H9N2的复制水平显著上升(5.2±0.9 vs 10.6±1.6 t=4.780,P0.05)。过表达miR-345-3p后,A549细胞葡萄糖转运水平显著下降(26.4±6.1 vs 4.7±0.2,t=6.159,P0.05),H9N2的复制水平显著下降(5.2±0.9 vs 1.1±0.1,t=7.583,P0.05)。miRDB在线分析显示,miR-345-3p潜在靶向74个基因。过表达miR-345-3p后,其中14个基因的表达发生6倍以上的变化。当敲低EH结构域蛋白2(EH Domain Containing 2,EHD2)时,H9N2的复制水平显著下降(4.6±0.9 vs 0.5±0.1,t=8.026,P0.05)。过表达miR-345-3p时,EHD2的表达水平下降;敲低miR-345-3p时,EHD2的表达水平上升。此外,miR-345-3p靶向EHD2的3′端非编码区。过表达miR-345-3p后,H9N2的复制水平显著上升(5.6±0.6 vs 16.3±3.2,t=5.653,P0.05),葡萄糖转运水平上升(35.1±7.0 vs 154.2±22.2,t=8.928,P0.05);敲低miR-345-3p后,H9N2的复制水平显著下降(6.0±0.3 vs 0.9±0.0,t=25.78,P0.05),葡萄糖转运水平下降(42.0±5.1 vs 11.1±3.1,t=9.208,P0.05)。H9N2感染并敲低miR-345-3p后,EHD2和GLUT4的相互作用减弱。敲低GLUT4后,H9N2的复制水平显著下降(4.8±0.2 vs 0.9±0.1,t=26.90,P0.05)。H9N2感染并过表达miR-345-3p后,EHD2和GLUT4的相互作用增强。敲低GLUT4的同时过表达EHD2后,H9N2的复制水平无显著变化(1.1±0.1 vs 1.1±0.0,t=0.6573,P0.05)。结论 H9N2通过降低miR-345-3p的表达使EHD2高表达,并增强EHD2与GLUT4的相互作用以促进葡萄糖的转运,最终促进自身基因组的复制。     

膜联蛋白A2在病毒性社区获得性肺炎中的表达及意义

目的 分析病毒性社区获得性肺炎(CAP)患者外周血单个核细胞(PMBCs)中膜联蛋白A2的表达差异,为病毒性肺炎治疗提供新思路。方法 选取2016年1月至2018年1月我院住院治疗的病毒性CAP患者50例为病毒组,细菌性CAP患者47例为细菌组,同时选取健康体检者48例为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)法测定患者PBMCs中膜联蛋白A2 mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹(Western-blot)方法检测患者PBMCs中膜联蛋白A2蛋白的表达水平,分析病毒组中ANXA2表达的差异性。结果 病毒组中单一病毒感染40例,混合病毒感染10例。单一病毒感染中流感病毒(30%)感染比例最高,其次为鼻病毒和冠状病毒,7例混合病毒感染包含了流感病毒。病毒组和细菌组的膜联蛋白A2 mRNA表达高于对照组,且病毒组膜联A2 mRNA的表达高于细菌组,有统计学意义(P<0.05),冠状病毒组ANXA2的mRNA和蛋白的表达较细菌性CAP组和对照组均增加,有统计学意义(P<0.05)。结论 ANXA2可能通过更多的途径及机制参与病毒性肺炎的发生,ANXA2在冠状病毒感染中的...     

Expression and clinical significance of S100A12 and sRAGE in vivo of patients with systemic solerosis

目的 观察系统性硬化症(SSc)患者体内S100A12和可溶性晚期糖基化终产物受体(sRAGE)蛋白和基因表达水平,探讨这两种炎症性蛋白在疾病发病过程中的作用.方法 选择肢端型SSc (lSSc)31例、弥漫型SSc (dSSc) 40例和正常人50例,运用ELISA方法检测血浆中S100A12、sRAGE的含量,采用Real-time PCR法检测外周血细胞中这两个因子mRNA相对表达水平,并与临床表现和实验室指标进行相关分析.结果 两种类型SSc患者血浆S100A12和sRAGE水平均高于对照组(P均＜0.05).两种类型SSc患者血浆S100A12和sRAGE的浓度均呈正相关(r =0.583,P＜0.01;r=0.662,P＜0.01).两种类型SSc患者外周血细胞S100A12 mRNA相对表达量均高于对照组(P均＜0.05).伴有肺部累及或肌肉累及的SSc患者血浆S100A12水平明显高于无上述器官累及者(P＜0.05);伴有肺部累及或肾脏累及的SSc患者血浆sRAGE水平高于无上述器官累及者(P＜0.05).抗UIRNP抗体、抗组蛋白抗体、抗RNA聚合酶Ⅲ抗体阳性的SSc患者血浆S100A12水平明显高于阴性组,而抗着丝点抗体阳性的SSc患者血浆S100A12和sRAGE水平均低于阴性组(P＜0.05).结论 S100A12和sRAGE在SSc患者体内表达显著升高,提示患者体内存在异常的炎症反应,且这两种蛋白含量与某些临床实验室指标有一定关系.     

RNA干扰诱导肝癌HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响

目的:探讨载体介导的RNA干扰技术诱导HepG2细胞凋亡对丹参酮ⅡA药物敏感性的影响.方法:应用靶向细胞周期E(cyclin E)基因的siRNA真核表达载体转染HepG2细胞诱导凋亡,再以丹参酮ⅡA处理48h(cyclinE siRNA+丹参酮ⅡA组),同时设立cyclin EsiRNA组、无义siRNA组、丹参酮ⅡA组以及空白对照组,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率,吖啶橙荧光染色检测细胞凋亡形态,Western blot法观察细胞Caspase-3蛋白表达.结果:单用cyclinE siRNA质粒转染或丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞,细胞凋亡率显著高于空白对照组(P＜0.01),2μg/ml剂量凋亡率分别达到21.6%、23.6%.cyclinE siRNA质粒转染预诱导再经丹参酮ⅡA处理,HepG2细胞G0～G1期比例显著增高,S期、G2～M期细胞所占有比例明显下降;与单用cyclinE siRNA质粒转染、丹参酮ⅡA两组比较,细胞凋亡率分别增高了1.81和1.61倍,比两组合计增高0.35倍,Caspase-3蛋白表达水平分别增高了0.91倍和0.66倍.结论:通过cyclinE siRNA质粒转染诱导的HepG2细胞凋亡可提高丹参酮ⅡA药物敏感性,其机制与增强凋亡控制相关基因表达有关.     

S100A4/Mts1在低氧诱导肺动脉平滑肌增殖中的作用机制

目的探讨S100A4/Mtsl在低氧诱导肺动脉平滑肌增殖中的作用机制。方法大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)分为对低氧刺激组及AG490干预组;免疫荧光分别检测常氧组、低氧刺激组及AG490干预组RPASMCs细胞S100A4/Mtsl的表达情况,Westernblot分别检测三组细胞的S100A4/Mtsl、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果低氧0hS100A4/Mtsl在胞浆中极少表达,低氧刺激后胞浆及胞核中明显表达;S100A4/Mtsl、p-JAK2、p-STAT3蛋白在低氧刺激8h比低氧刺激0h表达明显升高(P<0.05),AG490干预低氧刺激8h组三种蛋白的表达较低氧刺激8h组显著下降(P<0.05)。结论低氧刺激下S100A4/Mtsl基因在PAMSCs增殖中发挥重要作用,并且可被AG490抑制。     

Lin28对胃腺癌细胞株增殖周期的影响及机制

目的:通过检测可以调控微小RNA(microRNA)生成的RNA结合蛋白Lin28在不同分化程度胃腺癌细胞中的表达水平,探讨了Lin28对胃癌细胞周期的影响及其可能的机制。方法:用RT-PCR法在RNA水平检测Lin28的表达,免疫荧光染色分析Lin28蛋白和人细胞角蛋白18(CK-18)在细胞中的共表达情况,分别应用RNA干扰技术敲减Lin28,及细胞转染技术过表达Lin28,比较Lin28表达水平变化前后细胞周期调控相关蛋白的变化情况,碘化丙啶(propidiumiodide,PI)染色检测细胞周期变化。结果:Lin28在高分化胃腺癌细胞株MKN28中的RNA和蛋白水平均低表达,而在低分化胃腺癌细胞株MKN45中均高表达;Lin28与肿瘤干细胞的常见标志物CK-18共表达于极少数胃癌细胞中;敲减了Lin28的MKN45细胞株S期则明显增加,而G1期比对照组相应地减少。相反,Lin28过表达导致S期明显减少,而G1期比对照组相应增加。Westernblot检测发现,敲减了Lin28的MKN45细胞株细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)蛋白发生明显的上调,抑制其活性的蛋白p21和p27水平降低;而MKN28获得Lin28后,CDK2水平有所下调,p21和p27表达水平上调。结论:Lin28参与胃癌细胞分化和细胞周期相关的调控,且对细胞周期抑制蛋白p21/CDK2,p27/CDK2也发挥着一定的调节作用。     

环氧合酶-2基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响

目的观察足细胞环氧合酶-2(COX-2)基因敲低对足细胞凋亡及podocin蛋白表达的影响,以进一步探讨足细胞凋亡的分子机制。方法将条件永生性小鼠足细胞株随机分为阴性转染组、5μL siRNA组、10μL siRNA组、15μL siRNA组。经诱导分化成熟,在siRNA干扰48 h后用半定量RT-PCR和Western bolt分别检测足细胞COX-2 mRNA及蛋白表达水平,用流式细胞仪检测足细胞凋亡水平。将10μL siRNA组分别设立足细胞正常对照组、足细胞COX-2基因敲低组和足细胞阴性转染对照组三个亚组,用Western bolt检测podocin蛋白、BAX蛋白及BCL-X1蛋白的表达水平。结果与阴性转染组比较,随着干扰浓度的增加,COX-2 mRNA及蛋白表达逐渐减少,而足细胞的凋亡率逐渐升高,15μL的siRNA组凋亡率明显增高。足细胞COX-2基因敲低组podocin蛋白表达显著低于足细胞阴性转染对照组(P<0.05)。与足细胞阴性转染对照组相比,足细胞COX-2基因敲低组BAX蛋白表达显著上调,而BCL-X1蛋白表达稍有下调。结论敲低COX-2基因表达可以导致足细胞凋亡,且随着siRNA干扰浓度的增加,足细胞凋亡率逐渐增加。在干扰浓度为10μL时,足细胞podocin蛋白的表达下调。BAX蛋白上调及BCL-X1蛋白下调参与了足细胞的凋亡。     

miR-129对阿尔茨海默病细胞模型的调控作用

目的探究miR-129的表达水平与阿尔茨海默病(AD)的相互关系。方法用β淀粉样蛋白(Aβ)取新生SD大鼠原代海马神经元细胞培养,Aβ处理神经元细胞复制AD模型,将培养的原代细胞分为对照组、模型组、miR-129敲低组、miR-129过表达组、miR-129敲低+Aβ处理组、miR-129过表达+Aβ处理组、淀粉样前体蛋白(APP)siRNA组。Q-PCR和Western印迹检测基因和蛋白水平;膜联蛋白(Annexin)V/碘化丙啶(PI)双染色法检测细胞凋亡,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力。结果与对照组相比,模型组miR-129表达水平显著降低,细胞凋亡率显著增高,细胞活力显著减弱(P0.05);而过表达miR-129能够显著降低凋亡率,增加细胞活力,起到保护神经元细胞的作用,敲低miR-129则起不到保护作用;通过抑制Aβ前体可以有效减少模型组的凋亡率,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-129参与了AD的发病过程,且过表达miR-129可以有效减少对于脑神经元细胞的损伤。     

SDC-1调控TGF-β1/THBS1信号通路对肝纤维化进程的影响

目的 探究多配体蛋白聚糖-1(SDC-1)在肝纤维化进程中的作用机制。方法 选择2021年4月至2023年4月于三二〇一医院住院治疗并行肝穿刺活体组织病理检查的102例慢性乙型肝炎患者作为研究对象。采集患者的空腹静脉血,采用ELISA法检测患者血清SDC-1的表达水平,并比较不同肝纤维化分期患者血清SDC-1表达水平的差异。观察经转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化的LX-2细胞中SDC-1表达水平的变化,以及敲低SDC-1表达对活化的LX-2细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血小板反应蛋白1(THBS1)表达水平及细胞增殖、细胞周期的影响。结果 随着肝纤维化程度逐渐加重,慢性乙型肝炎患者血清SDC-1的表达水平呈升高趋势（P<0.05）。与阴性对照（NC）组相比,TGF-β1组α-SMA、SDC-1蛋白及其m RNA的相对表达量均显著升高,细胞增殖活性显著增强,G1期细胞占比显著降低,S期和G2期细胞占比显著升高（P均<0.05）。与NC小干扰RNA(si RNA)组相比,SDC-1si RNA组α-SMA、TGF-β1、THBS1蛋白及其m RNA的相对表达...     

γδT细胞在急性铜绿假单胞菌肺炎宿主免疫中的作用研究

目的:探究γδT细胞在急性铜绿假单胞菌肺炎宿主早期天然免疫中的作用。方法:建立急性铜绿假单胞菌肺部感染小鼠模型,分别设野生对照组、野生感染组、免疫球蛋白(Ig)G感染组、抗γδT细胞受体(TCR)感染组,应用流式细胞术测定产白介素(IL)-17-γδT细胞在肺内的表达。应用抗γδTCR抗体耗竭小鼠体内γδT细胞,通过实时定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肺内IL-17A、IL-17F mRNA和蛋白水平的表达,并评估肺内细菌负荷以及病理改变。结果:1在急性铜绿假单胞菌肺部感染8 h后,小鼠肺内产IL-17-γδT细胞的表达明显增加。2小鼠在感染8 h后,抗γδTCR组小鼠肺内IL-17A的mRNA和蛋白水平较IgG对照组明显下降(P     

热疗联合组织因子靶向治疗对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究热疗联合组织因子(TF)靶向治疗对人大肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法培养SW620细胞株,分为对照组、TF敲低组、热疗组和联合处理组,采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞法检测细胞周期、Western-blot方法检测CDC25A、Cyclin E的蛋白含量。结果热疗组、TF敲低组、联合处理组的MTT值、G0/G1期比例、S期比例以及CDC25A、Cyclin E含量均低于对照组,且联合处理组的MTT值、G0/G1期比例、S期比例以及CDC25A、Cyclin E低于热疗组、TF敲低组;热疗组、TF敲低组、联合处理组的G2/M期比例高于对照组,且联合处理组的G2/M期比例高于热疗组、TF敲低组。结论热疗联合组织因子靶向治疗有助于抑制细胞增殖、促进细胞凋亡并使细胞周期停滞于G2期,是处理人大肠癌的理想方法。