荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

丙型肝炎病毒RNA非结构区套式聚合酶链反应

目的探讨不同引物对ＨＣＶＲＮＡ检出率的影响，立敏感的ＮＳ５区基因扩增技术。方法选择不同引物，采用非结构５（ＮＳ５）区套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）及联合式［ＨＣ非编码区（５′ＮＣＲ）与ＮＳ５联合］ＰＣＲ技术检测１０例抗ＨＣＶ阳性献血员及３７例输血后丙型肝患者的血清ＨＣＶＲＮＡ。结果１０例抗ＨＣＶ阳性献血员应用联合式ＰＣＲ，以ＮＳ５－３＋ＮＳ５－４、ＳＦ２＋ＮＳ５－４、Ｋ１＋ＮＳ５－４、ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物及套式ＮＳ５－１＋ＮＳ５－４引物扩增时，其ＲＮＡ检出率分别为５／１０、６／１０、７／１０、８／１０和９／１０；而３７例输血后丙型肝炎患者中３５例ＲＮＡ阳性，检出率为９５％，其中１８例１ｂ型和１９例２ａ型样品的检出率分别为１００％和８９％。结论ＨＣＶＮＳ５区的ＲＮＡ检出率与引物的选择有关     

血透患者检测抗HCV IgM的临床意义

为探讨丙型肝炎ＩｇＭ抗体测定在血液透析患者中的临床意义,采秀间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＨＣＶ ＩｇＭ。同时采用ＥＬＩＳＡ测抗ＨＣＶ ＩｇＧ,ＲＴ－ＰＣＲ法测ＨＣＶ ＲＮＡ,并进行比较。结果示６２例血液透析病人中,抗ＨＣＶ ＩｇＭ阳性２７例（４３．６％）,抗ＨＣＶ ＩｇＧ阳性２９例（４６．８％）,ＨＣＶ ＲＮＡ阳性３４例（５４．８％）,任一项阳性３７例（５９．７％）;抗ＨＣＶ ＩｇＭ与ＨＣＶ ＲＮＡ检测     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

207例乙肝患者血清HDV RNA和HBV DNA检测及其意义探讨

对２０７例急性，慢性，亚急重型乙型肝炎患者的外周血进行了丁肝病毒（ＨＤＶ）ＲＮＡ和乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的检测，结果检出ＨＤＶＲＮＡ阳性２８例（１３．５％）。其中，在抗－ＨＢｅ阳性者和ＨＤＶＲＮＡ检出率较高，为１８．９％，ＨＢｅＡｇ阳性者中的ＨＤＶＲＮＡ检出率较低，为７．９％，在本文２８例ＨＤＶＲＮＡ阳性的患者中６例（２１．４％）检出ＨＢＶＤＮＡ；而在其余１７９例ＨＤＶＲＮＡ阴性病例中，则有６５     

复合PCR检测乙型肝炎和丙型肝炎病毒

设计了ＨＢＶ和ＨＣＶ各一对引物，建立了复合ＰＣＲ，并对临床标本进行检测，５例ＨＢｓＡｇ和ＨＣＶ抗体均阳性者，其ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性；２０例单ＨＢｓＡｇ阳性标本，１１例单ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性，５例ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性；２０份单ＨＣＶ抗体阳性者，ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性，３例合并ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性；１０例慢性ＮＡＮＢ抗ＨＣＶ阴性肝炎标本８份ＨＣＶ－ＲＮＡ，１例ＨＢＶ－ＤＮＡ和     

改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒核酸

建立了改良二氧化硅吸附法检测丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的方法。将待检血清５０μｌ、二氧化硅悬液２０μｌ、裂解液３００μｌ（含硫氰酸胍、ＥＤＴＡ、ＴｒｉｔｏｎＸ—１００、Ｔｒｉｓ·Ｃｌ）混匀置室温６０分钟，病毒颗粒裂解释放的核酸吸附在二氧化硅颗粒上，经离心和双蒸水洗脱，所得ＨＣＶＲＮＡ模板以５＇ＮＣ区引物作套式聚合酶链反应扩增。使用该方法可检出１０μｌ血清中的ＨＣＶＲＮＡ。１１０份抗－ＨＣＶ阳性血清中ＨＣＶＲＮＡ的检出率为８２．７％。实验全过程约７小时，为丙型肝炎检测提供了快速、简便、灵敏的新方法。     

逆转录聚合酶链反应检测血清中丙型肝炎病毒RNA

本文用本所自己合成的引物，对３０份怀疑ＨＣＶ感染血清进行ＨＣＶＲＮＡＲＴ－ＰＣＲ检测。该３０份血清中，２２份抗－ＨＣＶ阳性，其中１８份ＨＣＶＲＮＡ为阳性，８份抗－ＨＣＶ阴性血清及怀疑阳性血清中，２份ＨＶＣＲＮＡ为阳性。结果提示，抗－ＨＣＶ抗体试剂盒用于检测急性ＨＣＶ感染有其不足之处，结合ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ的方法可提高急性ＨＣＶ感染的检出率。     

干扰素治疗前丙肝患者血清及外周血单个核细胞中HCV—RNA的检测

本文采用ＲＴ－ＰＣＲ方法对２６例干扰素治疗前丙肝患者血清ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测，并对１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性的标本进行外周血单个核细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ进行检测，发现２６例血清标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率为２６．９％，而１４例血清ＨＣＶ－ＲＮＡ阴性标本，其ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ有３例阳性，阳性率为２１．１％。因此，ＰＢＭＣ中ＨＣＶ－ＲＮＡ是丙肝病毒血症的又一个诊断指标，是否可作为干扰素疗效判断的     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

氯和二氧化氯灭活甲型肝炎病毒机理的研究

为探讨氯和二氧化氯灭活HAV机理及用PCR评价消毒效果的可行性,采用细胞培养、ELISA及大片段逐步步移RT-PCR方法对消毒前后HAV感染性、HAAg抗原性及HAV核酸全序列进行检测。结果,以含有效氯10 mg/L消毒液作用30 min,或含二氧化氯7.5 mg/L的消毒液作用10 min,对HAV感染性的灭活率均为100％,均可破坏HAV核酸5’非编码区;但检测两者HAAg抗原性P/N值分别为3.21(阳性)与2.02(阴性)。结果表明,HAV感染性的灭活与HAV核酸5’非编码区破坏是一致的,可用PCR技术检测HAV核酸5’非编码区以判定HAV灭活与否。     

一起B型流感爆发的调查分析

目的 调查在江苏省涟水县清华中学爆发的一起B型流感,分析其流行特征.方法 对流感个案调查表进行统计分析,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测患者咽拭子标本中的流感病毒核酸.结果 2006年2月23日至3月1日淮安市涟水县清华中学发生了一起B型流感爆发,共报告37例,罹患率为4.46%.病例年龄在13～17岁,男女病例比为6.4:1.用RT-PCR法从5例患者的咽拭子标本中检出B型流感病毒核酸,病毒分离检出2株维多利亚(Victoria)系B型流感病毒.结论 流感疫苗成份应考虑包含B/维多利亚系,流行季节要做好流感疫情监测工作.     

ROC曲线对ECLIA法预测HCV感染的最佳S/CO值的确定和分析

目的应用受试者工作特征(ROC)曲线分析丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性预测值≥95%的最佳S/CO值,以此临界值来限制临床上需要进行确证试验的患者数量。方法收集2017年2月至2018年6月该院门诊和住院患者经过电化学发光免疫分析(ECLIA)法初筛检测有反应性标本(S/CO≥1)167份,阴性标本(S/CO<1)10份,并进行HCV RNA和重组免疫印迹试验(RIBA)的补充确证试验,得到临床上可信的真阳性及假阳性标本,经ROC曲线分析得出结果。结果将初筛结果为1≤S/CO<10的54份标本进行双重确证试验后得到阳性标本17份(34.0%),阴性标本33份(占66.0%),不确定的4份标本(定期随访)。当S/CO≥10,经HCV RNA及RIBA双重确证后得到的结果均为阳性。经ROC曲线分析,得到曲线下面积(AUC)为0.971,此时的最佳诊断临界值为8.83。结论若ECLIA法检测结果显示"1≤S/CO<8.83",应提示为"有反应性标本",并注以阳性预测值≤95%,建议1个月后复查或进一步确证检测。     

江苏地区献血者隐匿性HBV感染情况调查

目的调查无偿献血人群中隐匿性乙型肝炎病毒的携带率,病毒载量与血清学标志物检出的关系。方法对无偿献血者血液进行ELISA检测后,再行HBV、HCV、HIV核酸检测(NAT)。ELISA阴性、NAT阳性样品再进行HBVDNA、HCV RNA、HIV RNA定量检测及HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb化学发光法检测。结果共检测51 248份献血者血液样品,检出41例隐匿性HBV感染者,其携带率为0.80‰;血浆HBV病毒载量均小于66IU/ml;HBcAb阳性者23例,占56.1%;HBcAb伴HBsAb阳性者14例,占34.1%;HBsAb阳性4例,占9.7%。HBsAb或伴HBcAb阳性组与单一HBcAb阳性组相比,HBV DNA含量的差异无统计学意义(P<0.05)。结论江苏地区无偿献血者中隐匿性HBV感染率约为0.80‰;其HBV病毒载量均较低,且血清学标志物的检出模式与病毒载量无相关性。     

Prevalence of hepatitis G virus RNA and antibodies to HGV envelope protein (anti-E2) in patients with liver injury in Japan]

To assess the role of hepatitis G virus (HGV) in acute and chronic liver diseases, we investigated the prevalence of HGV RNA and antibodies to HGV envelope protein (anti-E2) among patients with liver diseases diagnosed in our hospital from 1992 to 1997. Among 24 patients with acute hepatitis (HAV: 13, HBV: 2, HCV: 3, CMV: 1, non A-C: 5), only 1 patient with non A-C hepatitis (4%) were positive for HGV RNA and none was positive for anti-E2. Among 461 patients with chronic liver diseases (alcohol: 27, HBV: 74, HCV: 297, HBV + HCV: 10, non B non C: 14, autoimmune and metabolic: 39), 40 patients (alcohol: 1, HBV: 3, HCV: 33, HBV + HCV: 3) were positive for HGV RNA(9%) and 48 patients were positive for anti-E2(17%). In the patients with positive for anti-E2, only 8% were positive for HGV RNA. 98% of HGV RNA positive patients were infected with HBV or HCV, and especially 82% were infected with HCV. In patients with non A-C hepatitis, none was positive for HGV RNA, so HGV seems not to have important role in liver diseases.     

实时荧光逆转录PCR检测戊型肝炎病毒RNA的临床应用

目的 探讨实时荧光逆转录(RT)-PCR方法检测急性戊型肝炎患者血清戊型肝炎病毒(HEV)RNA的意义.方法 采用实时荧光RT-PCR方法,对HEV ORF3基因保守区进行扩增和检测.收集北京佑安医院住院和门诊434例急性戊型肝炎患者血清;甲型肝炎患者40例、乙型肝炎患者100例、健康献血员110名作为对照组;提取HEV RNA进行荧光RT-PCR检测.结果 434例急性戊型肝炎患者血清中232例(53.5%)为HEV RNA阳性.对照组血清HEV RNA检测均为阴性.与血清抗-HEV IgM检测比较,434例急性戊型肝炎患者HEV RNA检测的总符合率为67.1%,两种检测方法差异有统计学意义(Kappa=0.308,P=0.000).5例患者的首份血清检测为HEV RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,相继出现抗-HEV IgM阳性.急性戊型肝炎患者的血清HEVRNA的检出多在发病的2～10 d内.结论 荧光RT-PCR方法有较高的特异性,应用实时荧光RT-PCR方法能对Ⅰ和Ⅳ戊型肝炎病毒感染的患者血清中的RNA进行定性检测.在临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平.     

一起甲型病毒性肝炎暴发疫情的病原学诊断与基因分析

目的 查明引起2004年宁波局部地区甲型病毒性肝炎（甲肝）暴发疫情的病原并分析其基因特征。 方法 用酶联免疫吸附试验检测血清中的甲肝病毒IgM抗体（HAV IgM）和戊型肝炎病毒IgM抗体（HEV IgM），利用逆转录-聚合酶链反应（RT PCR）检测粪便样品中的HAV核酸（RNA）并扩增VP1基因，测序结果利用DNA star软件进行比对分析。 结果　172份血清样品中HAV IgM均为阳性，HEV IgM均为阴性。172份粪便样品中共检测到HAV RNA阳性样品74份，占43.0%。选择5份样品进行HAV VP1基因扩增并测序，测序结果经过比对后发现4株宁波株(NB2004-10、NB2004-11、 NB2004-51和 NB2004-71)的VP1基因是完全一致的；NB2004-75与以上4株的核苷酸的同源性为99.9％，氨基酸的同源性为99.7％；宁波株与HAV各基因型标准株比较， 与IA亚型毒株AH2的核苷酸和氨基酸的同源性最高， 分别为98.9％和99.7%～100.0％；与中国其他地区流行株比较，核苷酸和氨基酸的同源性波动于89.4%～96.7%和97.0％~100.0％。结论　引起这次肝炎暴发疫情的病原是甲肝病毒，其基因型为IA亚型，与日本株AH2、AH3亲缘关系最近，与中国其他地区流行株处于不同的进化簇上。