脂质体携载SOD的实验研究

本文采用去垢剂透析法成功制备出携载ＳＯＤ的脂质体（Ｌ－ＳＯＤ），其直径为１０２ｎｍ，对ＳＯＤ的包裹率为２１％，９０％以上酶活性存在于脂质体内部。将Ｌ－ＳＯＤ注射到大鼠静脉血中，其半衰期超过４ｈ，明显长于天然ＳＯＤ（８ｍｉｎ）。表明Ｌ－ＳＯＤ优于天然ＳＯＤ，具有临床应用前景。     

氧化修饰低密度脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞周期及增殖细胞核抗原的影响

应用流式细胞仪对氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）刺激动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖、细胞周期及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、Ｐ５３、Ｐ２７及ｃ－ｅｒｂＢ蛋白表达的影响进行了观察。结果发现：Ｏｘ－ＬＤＬ和天然低密度脂蛋白（Ｎ－ＬＤＬ）刺激培养人动脉ＳＭＣ细胞增殖时其Ｓ期细胞百分率增加，且Ｏｘ－ＬＤＬ的作用比Ｎ－ＬＤＬ强，表明Ｏｘ－ＬＤＬ和Ｎ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ细胞增殖时与Ｓ期细胞的增加有关；Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖的同时ＰＣＮＡ蛋白阳性率增加，而与Ｐ５３、Ｐ２７和ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白的表达无关。提示ＰＣＮＡ可能参与了Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ的细胞增殖作用；特异性蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂ＧＦ１０９２０３Ｘ能降低Ｏｘ－ＬＤＬ刺激ＳＭＣ增殖过程中ＰＣＮＡ的阳性率，表明该细胞增殖过程中ＰＣＮＡ表达的抑制可能与ＰＫＣ信号传递通路有关。     

天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人动脉平滑肌细胞形态的影响

在建立人主动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）体外培养方法的基础上，观察了各种天然和氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣ形态以及表型的影响。在氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ），氧化修饰高密度脂蛋白（Ｏｘ－ＨＤＬ）和氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）的作用下，ＳＭＣ形态发生以下变化：胞体变大，由梭形变为不规则多边形，突起细而长，而且“谷”、“峰”样生长方式也发生改变；ＬＤＬ和ｖＬＤＬ对ＳＭＣ的形态亦有影响，但不如氧化修饰脂蛋白明显；ＨＤＬ则无影响。电镜下观察，在ＯＸ－ＬＤＬ的诱导下，ＳＭＣ胞浆中的肌丝较对照组明显减少，而高氏器，内质网和线粒体则明显增多。上述结果说明，ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＯＸ－ＬＤＬ、ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ的致动脉粥样硬化作用可能与刺激ＳＭＣ表型由“收缩”型向“合成”型转化有关。     

氧化修饰低密度脂蛋白的蛋白组份可引起巨噬细胞线粒体膜的损伤

采用ＡＣＡＳ５７０测定小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位，观察了氧化修饰低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对巨噬细胞线粒体膜的损伤及其不同组份（ｍｏｉｅｔｙ）在致损伤中的作用。结果显示Ｏｘ－ＬＤＬ可使巨噬细胞线位体膜产生损伤，用ＧＳＨＰｘ模拟物ｅｂｓｅｌｅｎ清除Ｏｘ－ＬＤＬ上的脂氢过氧化物（ＬＯＯＨ）可使损伤减轻２０％。单独的脂质组份虽然含有大量的ＬＯＯＨ，但对巨噬细胞线粒体膜电位无显著影响，而单独的蛋白组份则可引起线粒体膜电位下降，其降低程度与Ｏｘ－ＬＤＬ清除ＬＯＯＨ后的降低程度相当，说明Ｏｘ－ＬＤＬ清除ＬＯＯＨ后对线粒体膜的损伤可能是由修饰的载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）产生的。     

氧化修饰LDL及VLDL对兔主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1mRNA表达的作用

单核细胞趋化蛋白１（ＭＣＰ－１）是一种强的单核细胞趋化因子，在体外可由多种细胞分泌，包括血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）。本研究采用斑点杂交方法检测了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＸ－ＬＤＬ）、极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）及氧化修饰极低密度脂蛋白（ＯＸ－ＶＬＤＬ）对培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达的作用。结果表明，培养的ＳＭＣ可表达ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ，而且ＳＭＣ暴露于ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ后，其ＭＣＰ－１ｍＲＮＡ表达水平明显增高，分别增高约１１倍、６倍和２０倍。因此我们认为ＯＸ－ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＯＸ－ＶＬＤＬ可以刺激培养的兔主动脉ＳＭＣＭＣＰ－１ｍＲＮＡ的表达。     

云芝多糖对氧化修饰LDL抑制巨噬细胞一氧化氮产生的保护作用

通过测定巨噬细胞培养上清液中亚硝酸盐的含量和观察细胞内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ含量的变化，研究了云芝多糖（ＰＳＫ）对氧化修饰ＬＤＬ抑制脂多糖（ＬＰＳ）诱导的巨噬细胞ＮＯ产生的保护作用。结果显示：Ｏｘ－ＬＤＬ可抑制ＬＰＳ诱导的巨噬细胞ＮＯ产生，而正常（Ｎ－ＬＤＬ）和乙酰化ＬＤＬ（ＡＣ－ＬＤＬ）则没有抑制作用，非特异性免疫调节剂ＰＳＫ处理小鼠对Ｏｘ－ＬＤＬ引起的巨噬细胞ＮＯ产生量下降具有保护作用     

抗人氧化修饰低密度脂蛋白单克隆抗体的制备和生物学性质

用经Ｃｕ￣（２＋）氧化修饰４ｈ和２４ｈ的小鼠低密度脂蛋白（ｍｕｒｉｎｅＯ－ＬＤＬ）混合物免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，于融合前３天用经Ｃｕ￣（２＋）氧化修饰４ｈ和２４ｈ人低密度脂蛋白（ｈｕｍａｎＯ－ＬＤＬ）的混合物加强免疫，取免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤ＳＰ－（２／０）细胞融合，获得５株抗人氧化修饰低密度脂蛋白单克隆抗体，命名为ＨＯＬ－１、ＨＯＬ－２、ＨＯＬ－３、ＨＯＬ－４、ＨＯＬ－５。这些单抗均有较高的抗体效价，抗体类型为ＩｇＧ－（２ａ），单克隆抗体相加实验表明，ＨＯＬ－１、ＨＯＬ－３、ＨＯＬ－４识别Ｏ－ＬＤＬ的同一抗原位点，ＨＯＬ－２识别另一个，ＨＯＬ－５识别第３个。竞争性ＢＡ－ＥＬＩＳＡ实验显示：ＨＯＬ－１能够识别丙二醛修饰的ＬＤＬ（ＭＤＡ－ＬＤＬ）、乙酰化修饰的ＬＤＬ（Ａｃｅｔｙｌ－ＬＤＬ）和各种修饰度的Ｏ－ＬＤＬ，但与未修饰ＬＤＬ（ｎ－ＬＤＬ）无交叉反应。     

三种甲Za溶解剂在MTT比色法中的应用

研究ＭＴＴ比色法中三种甲Ｚａ溶解剂，异丙醇（ＩＳＯＰ）、１０％曲拉通－５０％异丙醇（ＴＲＩＴＯＮ－ＩＳＯＰ）和２０％ＳＤＳ（均加入１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ酸化）的应用效果。结果发现，在测定不同浓度的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）时，ＴＲＩＴＯＮ－ＩＳＯＰ与ＳＤＳ效果相当，而在测定不同浓度的Ｈｅｌａ细胞时，前者优于后者，而ＴＲＩＴＯＮ－ＩＳＯＰ和ＳＤＳ均优于ＩＳＯＰ。     

香烟烟雾提取物对兔气道平滑肌细胞毒性损伤及对一氧化氮生成的影响

目的探讨吸烟对气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的影响。方法分别以０、５％、１０％和３０％的香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）孵育兔ＡＳＭＣ，测定其细胞存活率、丙二醛（ＭＤＡ）含量、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出及一氧化氮（ＮＯ）稳定代谢终产物亚硝酸盐（ＮＯ－２）水平。用ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ检验及直线回归作统计学分析。结果在４８ｈＣＳＥ显著增加了ＡＳＭＣ的ＮＯ－２释放（１０％、３０％ＣＳＥ分别较对照组增加７５．７％和１１５．３％，Ｐ＜０．０１）；降低了细胞存活率，增加了细胞ＭＤＡ含量和ＬＤＨ漏出（Ｐ均＜０．０１），毒性损伤指标与ＮＯ－２的释放高度相关（ｒ分别为－０．７２１、０．７０６和０．７７３，Ｐ均＜０．０１）。结论吸烟可能对ＡＳＭＣ具有直接损伤作用，ＣＳＥ可能通过ＮＯ介导气道炎症损伤过程。     

氧化修饰低密度脂蛋白对巨噬细胞线粒体膜的损伤及云芝多糖的保护作用

采用ＡＣＡＳ５７０测定小鼠腹腔巨噬细胞线粒体膜电位及细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ），观察了氧化修饰低密度脂蛋白（ＯＣ－ＬＤＬ）对巨噬细胞线粒体膜的损伤及云芝多糖（ＰＳＫ）的保护作用。结果发现ＯＸ－ＬＤＬ可使巨噬细胞线粒体膜电位消失，细胞内ＬＰＯ含量升高。而正常ＬＤＬ和乙酰化ＬＤＬ对线粒体膜电位的影响较小。非特异性免疫增强剂ＰＳＫ能降低巨噬细胞内ＬＰＯ含量，对ＯＸ－ＬＤＬ引起的巨噬细胞线粒体膜损伤有保护作用。     

L－SOD对阿司匹林诱发大鼠急性胃粘膜损伤的保护作用 Ⅲ．组织SOD，GSH－Px，MPO与MDA含量的测定

本文检测粘膜抗氧化酶ＳＯＤ、谷胱甘肽过氧化酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）及中性粒细胞产生的髓过氧化物酶（ＭＰＯ）的活性及组织中丙二酰二醛（ＭＤＡ）含量，旨从另一侧面探讨它们与损伤的关系及Ｌ－ＳＯＤ的保护机理。     

聚乙二醇修饰超氧化物歧化酶的基础研究

目的研究聚乙二醇修饰的超氧化物歧化酶基本特性的改变。方法以聚乙二醇为修饰剂,对猪红细胞超氧化物歧化酶进行共价修饰。比较超氧化物歧化酶修饰前后在免疫原性,血浆存留时间,抗酶水解能力等方面的改变。结果聚乙二醇的修饰,使超氧化物歧化酶的免疫原性消失,体内作用时间延长,抗酶水解能力增强。结论聚乙二醇修饰的超氧化物歧化酶稳定性较高。     

低抗凝活性肝素修饰超氧化物歧化酶的药代动力学研究

用高碘酸钠活化低抗凝活性肝素（ＬＡＡＨ）修饰猪血红细胞Ｃｕ，Ｚｎ－ＳＯＤ，制成ＬＡＡＨ（ＩＯ４）－ＳＯＤ。给兔１次静注修饰ＳＯＤ１００００ｕ／ｋｇ，药－时数据符合双室模型，经计算机求出药代动力学参数。修饰ＳＯＤ的分布半衰期和消除半衰期比修饰前延长至１．９和８．６倍。小鼠腹腔注射修饰ＳＯＤ２００ｕ／ｇ，酶活性主要分布于肝和肾，并能通过血脑屏障。     

L－SOD对阿司匹林诱发大鼠急性胃粘膜损伤的保护作用 Ⅱ．血流量与血管通透性的观察

本文应用计算机反射分光光度法检测胃粘膜血流量（ＧＭＢＦ），利用Ｅｖａｎｓ蓝观察血管通透性的改变，旨在探讨Ｌ－ＳＯＤ的粘膜保护作用与血管因素之间关系。     

Response of superoxide dismutase, catalase, and ATPase activity in bacteria exposed to acetamiprid

INTRODUCTION Organisms with aerobic metabolism face constant risk from reactive oxygen species (ROS), including superoxide radical (O2-), hydroxyl radical (.OH), and hydrogen peroxide (H2O2). The high toxic superoxide anion seriously disrupt normal metabolism through oxidative damage to cellular components. One of the most serious damaging effects on cells is the peroxidation of membrane lipids that may severely affect the functional and structural integrity of biological membranes, le…     

镉对大鼠心肌SOD活性、LPO水平及心肌细胞超微结构的作用

染镉组大鼠饲以含镉鼠饲料，对照组饲以普通鼠饲料。于第１２周末处死。取出心脏，部分做组织匀浆用于测定ＳＯＤ活性及ＬＰＯ水平；另一部分做超薄切片供电镜观察。结果表明：①染镉组ＳＯＤ活性显著低于对照组（Ｐ＜０．０１）；ＬＰＯ水平却明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）。②染镉组大鼠心肌细胞内，部分线粒体肿胀、嵴断裂，甚至变成含有絮状物的大泡。部分肌丝排列紊乱或断裂。本文认为心肌超微结构的改变除由于镉的直接作用外，尚与镉所致ＳＯＤ活性下降以及质膜脂质过氧化水平升高有关。     

肝素修饰人血SOD在家兔血液中的稳定性及在小鼠体内的抗凝血作用

报道了肝素修饰的人血ＳＯＤ在家兔血液中的稳定性及在小鼠体内的抗凝血作用。与天然ＳＯＤ相比，修饰酶在血液中的稳定性明显提高，半衰期由天然ＳＯＤ的１０ｍｉｎ延长至６２ｍｉｎ，同时修饰酶仍保持肝素的抗凝血作用。     

人血超氧化物歧化酶的化学修饰

应用右旋糖苷及聚蔗糖对人血SOD进行化学修饰。人血SOD分别经右旋糖苷及聚蔗糖两种修饰剂共价修饰后,仍保留其紫外、荧光吸收特性及SOD的酶活性。人血SOD修饰物的抗胃蛋白酶酶解能力、热稳定性、耐酸性均有显著提高。     

心肌缺血-再灌注损伤与氧自由基关系的研究

目的:探讨氧自由基与心肌缺血-再灌注损伤的关系。方法:采用在体大鼠心肌缺血-再灌注模型,于结扎冠状动脉前3m in,静注超氧化物歧化酶(SOD)75U/kg或等体积生理盐水(N S),观察心肌缺血-再灌注状态下心电图、心肌丙二醛(MDA)、SOD及Ca2+的变化。结果:在缺血期,8/20动物发生心律失常。再灌后,缺血再灌组全部动物发生室性心律失常,其中90%为新发生或再灌后加重的心律失常,室性早博、室速、室颤发生率分别为100%、80%和40%;心肌MDA含量明显高于假手术组(P<0.01);SOD活性从11.4±2.9降至6.9±1.6mm o l/m in.g.port(P<0.01),Ca2+含量由1.6±0.1增至2.0±0.2μm o l/g(P<0.01)。结论:心肌缺血-再灌注损伤与再灌后产生大量氧自由基有关。SOD可使室性心律失常发生率明显减少;降低MDA和Ca2+的含量。     

聚乙二醇修饰尿酸酶的研究(英文)

目的:为了降低尿酸酶的免疫原性并提高其稳定性,利用PEG修饰剂对尿酸酶进行修饰,以期获得性质更优的治疗痛风的药物。方法:用相对分子质量为40kD,活化基团为羟基琥珀酰亚胺的PEG修饰剂对尿酸酶进行修饰,并比较修饰前后在酶解稳定性、pH稳定性及温度稳定性方面的差异,以及PEG修饰对体内半衰期,免疫原性的影响。结果:发现PEG修饰后尿酸酶的酶解稳定性显著提高,PEG化尿酸酶保留了原有尿酸酶80%的活性,体内半衰期从45min延长至696min。PEG化尿酸酶与抗体的结合能力为原型蛋白的1/8。体内的免疫原性也明显降低。结论:化学修饰后的尿酸酶可望成为潜在的治疗痛风的有效药物。