口腔癌细胞诱导的淋巴管内皮细胞基因表达谱的变化

目的探讨在口腔癌细胞影响下淋巴管内皮细胞分子表型的变化。方法利用体外共培养模型,将淋巴管内皮细胞与口腔癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中淋巴管内皮细胞的变化。应用Affymetrix U133 Plus 2.0基因芯片对肿瘤组织中淋巴管内皮细胞（TLEC）与淋巴管内皮细胞（LEC）基因表达的差异进行了检测和比较。并对功能相似的表达差异基因进行分类。结果差异基因表达谱共发现了677个基因表达差异在1倍以上,其中在TLEC中表达上调的基因有384条,下调的基因有293条。这些基因与细胞黏附、凋亡、运动、发育及血管生成有关。同时这些基因还参与细胞的信号传导、免疫应答、细胞代谢等过程。结论LEC与TLEC在分子水平是有差别的。以此为基础,可以针对淋巴管内皮细胞进行靶向阻断,达到治疗口腔癌淋巴道转移的目的。     

舌癌细胞淋巴道转移能力与淋巴管生成的关系

目的：诱导建立小鼠淋巴管良性肿瘤模型以及异种移植瘤模型,观察不同淋巴道转移能力的舌癌细胞对淋巴管生成的影响。方法：C57BL/6小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂,对诱导出的小鼠腹腔淋巴管瘤进行病理组织学鉴定。诱导的淋巴管瘤在纤维蛋白凝胶内应用Tca8113和LNMTca8113细胞条件培养基培养,倒置显微镜下观察淋巴管分支形成。此外,利用这2种细胞进行体外成瘤,免疫组化染色观察淋巴管生成情况。实验结果应用SPSS11.5软件包对数据进行分组t检验,Mann-Whitney U检验。结果：实验小鼠中膈肌腹腔面、肝脏表面可见边界清楚的散在分布白色肿瘤样组织,组织学病理证实为良性淋巴管瘤。与Tca8113细胞比较,在LNMTca8113细胞条件培养基作用下,从淋巴管瘤块长入纤维蛋白凝胶内的微淋巴管分支数目增加;在LNMTca8113肿瘤中,淋巴管密度显著提高。结论：小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂可稳定诱导小鼠腹腔淋巴管瘤,高淋巴道转移能力的舌鳞状细胞癌细胞对淋巴管生成具有更强的促进作用,适应淋巴道转移的需要。     

VEGFR3在不同临床分期舌癌癌周淋巴管中的表达

目的:研究血管内皮生长因子受体(VEGFR3)在舌癌淋巴转移中的作用,探索舌癌淋巴转移的机制。方法:采用免疫组化和RT-PCR技术,对90例不同分期的舌癌肿瘤进行VEGFR3的检测,与10例正常舌黏膜标本进行对照。采用SAS6.12软件进行单因素方差分析。结果:通过与正常组对照,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肿瘤中VEGFR3的表达无显著性差异(P>0.05),Ⅳ期肿瘤中VEGFR3的表达较正常对照组显著升高并具有显著性差异(P<0.05)。肿瘤各组间比较无显著性差异。转移组与非转移组之间也无显著性差异。结论:VEGFR3参与微淋巴管的生成,随着肿瘤的临床分期增高,其表达虽呈缓慢增高趋势,但尚不足以作为判定是否发生淋巴转移的客观指标。     

淋巴管内皮细胞标志物的研究进展

淋巴管道系统是循环系统的辅助组成部分，在维持体液平衡、新陈代谢以及免疫反应等方面具有重要的功能。此外，淋巴管还为肿瘤细胞的转移提供了通道。近年来，一些相对特异性的淋巴管内皮标志物相继问世，并应用于淋巴管生物学及肿瘤淋巴管生物学研究。本文就这方面内容作一综述。     

舌癌毛细淋巴管的酶组织化学研究进展

舌癌发病率高且易向淋巴结转移，研究舌部淋巴管分布有助于了解舌癌的转移和预后，毛细淋巴管的形态学研究比较困难，毛细淋巴管内皮细胞在形态学上与毛细血管相似，常规染色在光镜水平难以区分，而淋巴管内皮细胞的核苷酸酶(5′-Nase)活性明显高于血管，在血管内皮细胞则具有高度活性的碱性磷酸酶(Alpase)，应用核苷酸酶-碱性磷酸酶双重染色法，可有效地显示舌部的淋巴管和毛细淋巴管的分布和走向。在肿瘤和正常组织交界区域的丝状乳头内含有丰富的毛细淋巴管，并与黏膜固有层内的毛细淋巴管汇合，结缔组织乳头内毛细淋巴管和黏膜固有层的毛细淋巴管，核苷酸酶活性有减低倾向。在肿瘤的中央部，结缔组织乳头及乳头内毛细淋巴管的分布，随上皮基底层形态的不规则变化而变化，且核苷酸酶活性显著下降，毛细淋巴管口径增大，舌部肿瘤组织周围的口径增大的新生淋巴管网，可能与舌癌易发生早期转移有关。     

激活淋巴管内皮细胞的PIK3CA等位基因和淋巴管表型

Activating PIK3CA alleles andlymphangiogenic phenotype of lymphatic endothelial ceils isolated from lymphatic malformations.Osborn AJ, Dickie P, Neilson DE, et al.Hum Mol Genet, 2014 Oct 6. 淋巴管畸形（LMs）是淋巴系统的先天发育畸形,由大量畸形的淋巴管内皮细胞（LECs）构成。本文旨在寻找并鉴定畸形LECs的内在缺陷。从LMs中提取CD31和平足蛋白（PDPN）阳性表达的细胞。     

淋巴管内皮细胞标志物的研究进展

淋巴管道系统是循环系统的辅助组成部分,在维持体液平衡、新陈代谢以及免疫反应等方面具有重要的功能.此外,淋巴管还为肿瘤细胞的转移提供了通道.近年来,一些相对特异性的淋巴管内皮标志物相继问世,并应用于淋巴管生物学及肿瘤淋巴管生物学研究.本文就这方面内容作一综述.     

肿瘤淋巴管生成的研究进展

侵袭和转移是恶性肿瘤患者致死的主要原因之一。近年来随着淋巴管内皮特异性标记物的出现,使得淋巴管生成开始成为研究肿瘤淋巴道转移的热点,肿瘤淋巴管生成及其在肿瘤转移中的作用越来越受到大家的重视,并有可能成为治疗肿瘤淋巴道转移的新靶点。该文阐述了淋巴管的结构和功能、淋巴管生成及淋巴管内皮标志物,重点论述了淋巴管生成与肿瘤转移的关系以及针对淋巴管生成的临床治疗策略。     

人淋巴管内皮细胞的分离和鉴定

目的:分离培养人淋巴管内皮细胞(LECs),为研究淋巴管新生在淋巴管瘤复发及肿瘤淋巴结转移中的作用奠定基础。方法:HE染色和免疫组织化学法了解人淋巴管瘤的组织病理特征;胶原酶消化法从淋巴管瘤组织中分离淋巴管内皮细胞;光镜和透射电镜观察淋巴管内皮细胞的形态和超微结构;MTT法检测细胞体外增殖。结果:HE染色显示舌淋巴管瘤中具有大量扩张的管腔,免疫组织化学染色显示管腔内皮细胞表达FLT-4、和LYVE-1;体外培养的淋巴管内皮细胞呈"铺路石"样外观;在透射电子显微镜下,观察到淋巴管内皮细胞特征性细胞器如weibel-palade小体、胞质小突和质膜小泡;MTT结果显示细胞于第3天开始进入增殖活跃期,第5天进入高峰期,第6、7天进入平台期;在Ⅰ型胶原凝胶中细胞形成管腔样结构。结论:应用胶原酶消化法可以有效的从淋巴管瘤组织中分离得到淋巴管内皮细胞。     

舌癌癌周毛细淋巴管的超微结构观察

目的 观察舌癌癌周毛细淋巴管的超微结构。方法 通过航向电镜对１０例舌癌癌周毛细淋巴管进行观察研究。结果 癌周毛细淋巴管不同程度地扩张,并出现大量内皮细胞连接的开放。结论 癌周毛细淋巴管的扩张及内皮连接的开放为肿瘤的转移提供了便利通道。     

VEGF-C能促进舌鳞癌淋巴转移吗?

目的:观察血管内皮细胞生长因子C(vascualrendothelialgrowthfactor,VEGF-C)在舌鳞癌癌内及癌周淋巴管生成、淋巴转移中的作用。方法:以自行建立的过表达VEGF-C的舌鳞癌细胞株接种于裸鼠下肢股肌内(A组),设立对照组(B、C组),解剖观察肿瘤淋巴转移情况;RT-PCR、Western杂交检测移植瘤VEGF-C的表达情况;5’-核苷酸酶染色显示癌内及癌周淋巴管,并进行形态学测量。多组资料间的均数比较用方差分析,计数资料的比较用χ2检验。结果:各组移植瘤均接种成功,A组VEGF-C表达显著高于对照组,VEGF-C的表达强度对肿瘤生长无影响;大体解剖未发现引流区淋巴结转移,但A组的癌周淋巴管管径(128±16.7)μm、面积(104±8.5)μm2及密度(8.2±2.1)个/视野均高于对照组,分别为(96±9.5)μm,(74±6.4)μm2,(6.3±1.7)个/视野,有显著性差异(P<0.05);各组瘤内淋巴管多为闭锁结构,未进行形态学测量及图像分析。结论:过表达的VEGF-C能够诱导癌周淋巴管的增殖和扩张,但并未引起肿瘤淋巴转移,VEGF-C参与的淋巴管增殖只是肿瘤转移的步骤之一。     

血管内皮生长因子C 对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用

目的研究血管内皮生长因子C(VEGF-C)对舌鳞癌癌周淋巴管的促增殖作用.方法将VEGF-C高表达的舌鳞癌细胞株(A组)接种于发育至第6～8天的鸡胚绒毛尿囊膜(CAM),设立空白质粒转染组(B组)和空白对照组(C组),5′-核苷酸酶(5′-Nase)染色观察瘤周淋巴管,淋巴管形态学测量统计分析淋巴管数密度(LVD)、截面面积以及周长的变化.结果 3组在CAM上均能成瘤,肿瘤组织对周围CAM的侵袭较弱,瘤体组织内未见淋巴管的生成;瘤周淋巴管形态学测量分析发现A组癌周淋巴管的LVD、截面面积和周长均高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.01);B、C组之间差异无统计学意义(P>0.05).结论 CAM是研究淋巴管的较理想的模型;VEGF-C能够诱导癌周淋巴管扩张,这可能是VEGF-C增加舌鳞癌颈淋巴转移的机制之一.     

外周血VEGF表达水平与舌癌颈淋巴结转移关系的临床研究

目的 :探讨外周血VEGF表达水平与舌癌转移之间的关系以及临床意义。方法 :对舌癌患者外周血VEGF的表达水平进行ELISA检测 ,并对患者术后所有颈部淋巴结进行HE染色。结果 :转移组患者血清VEGF浓度为 ( 5 0 8.2 8± 14 .193 3 ) pg/ml ,无转移组患者血清VEGF浓度为 ( 13 0 .49± 6.2 5 41) pg/ml ,二者存在显著差异 (P <0 .0 1)。转移组患者术后血清VEGF浓度显著下降 ,为 ( 14 1.79± 5 .2 2 41) pg/ml,与术前存在显著差异 (P <0 .0 1)。结论 :舌癌患者血清VEGF浓度与颈淋巴结转移的发生有显著相关性 ,可以作为颈淋巴结转移的预测指标之一     

CCR7-CCL21 axis promotes the cervical lymph node metastasis of tongue squamous cell carcinoma by up-regulating MUC1

This study aims at investigating the potential role of MUC1 in CCR7-CCL21 axis-induced metastasis of tongue squamous cell carcinoma (TSCC).TSCC patients were selected for epidemiologic trends. The expression of CCR7 and MUC1 was detected via immunohistochemistry. SCC15 and CAL27 cells were induced by CCL21 and specific antibody to CCR7. Gene and protein expression was detected using qRT-PCR and western blotting. Migration and invasion capacities of TSCC cells were determined using wound healing and Transwell invasion assays.The male:female ratio of 78 patients was 1.6:1. Metastasis rate of cervical lymph nodes (CLNs) was 42.3%. CLN metastasis significantly correlated with T staging (P = 0.026), clinical staging (P = 0.024), and depth of invasion (DOI, P = 0.001). DOI significantly influenced CLN metastasis (P = 0.033, OR = 10.919) of TSCC, as did CCR7 (P = 0.041) and MUC1 (P = 0.026). The consistency of CCR7 and MUC1 expression was fairly good (Kappa = 0.683, P < 0.001). Reduced survival was significantly associated with higher expression of CCR7 (P = 0.039) and MUC1 (P = 0.030). CCL21 up-regulated MUC1 in SCC15 cells, which was inhibited when CCR7 was blocked. MUC1 positively correlated with TSCC cell migration and invasion.CCR7-CCL21 axis might promote CLN metastasis of TSCC by up-regulating MUC1. CCR7 and MUC1 show promise as potential biomarkers for TSCC treatment.     

短发夹RNA干扰血管内皮生长因子对舌癌耐药细胞移植瘤的影响

目的 研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达对人舌癌耐药细胞Tca-顺铂(Cisplatin,DDP)移植瘤的影响及可能机制.方法 以人舌癌Tca8113细胞系为亲本诱导建立耐药Tca-DDP细胞系,将其接种于裸鼠背侧皮下,建立移植瘤模型.模型动物分为4组,即空白对照组(非转染)、空载体组(转染空质粒载体)、无关片段组(转染无关对照质粒)、干扰质粒组(转染靶向VEGF的shRNA表达载体),每组6只,每3天以脂质体为载体作瘤体内及瘤周多点注射.观测移植瘤生长曲线,转染l0次后取瘤体称重,免疫组化法检测移植瘤微血管密度,原位杂交法检测移植瘤VEGFmRNA,免疫组化技术检测移植瘤VEGF、多药耐药蛋白P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、B细胞淋巴瘤-白血病因子2(B cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)及胞外信号调节激酶2蛋白(extracellular signal-regulated kinase 2,ERK-2).结果 干扰质粒组的瘤体生长明显受到抑制(P＜0.05),移植瘤重量(0.4781±0.0860)g及微血管密度(7.35±1.31)个/视野,低于其他3组(P＜0.05),且VEGF的mRNA及蛋白、P-gp、bcl-2及ERK-2的相对表达量分别为(0.0767±0.0234)、(0.1301±0.0433)、(0.1517±0.0184)、(0.1218±0.0251)及(0.1178±0.0291),表达均显著减少(P＜0.05).结论 RNA干扰抑制VEGF的表达,可抑制人舌癌Tca8113耐药细胞移植瘤的生长及血管生成,下调P-gp、bcl-2及ERK-2表达水平,提示靶向抑制VEGF可能是治疗耐药舌癌途径之一.

Abstract：

Objective To study the in vivo interference effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) short hairpin RNA (shRNA) on xenografts of drug-resistant tongue cancer cells. Methods Drugresistant tongue caner cells Tca/Cisplatin(DDP) were injected subcutaneously into nude mice to establish xenograft models, which were randomly divided into non-transfected group, mock control group, control group transfected with scrambled sequence plasmid, interference group transfected with VEGF-shRNA expression plasmid. Liposome-mediated plasmid transfection was done in the latter three groups every three days. Xenografts were observed and tumor growth curve was measured. After the 10th transfection, tumors were anatomized and weigh. Microvessel density was detected by immunohistochemical staining. In situhybridization assay was used to test VEGF mRNA, and immunohistochemistry to test VEGF, P-glycoprotein ( P-gp), B cell lymphoma/leukemia-2 ( bcl-2 ) and extracellular signal-regultaed kinase 2 (ERK-2) protein. Results Tumor growth in VEGF-shRNA interference group was significantly slow. Tumor weight was (0.4781 ±0.0860) g, microvessel density (7.35 ± 1.31)/view, VEGF mRNA(0.0767 ±0.0234), VEGF protein (0.1301 ± 0.0433 ), P-gp (0.1517 ± 0.0184 ), bcl-2 ( 0.1218 ± 0.0251 ) and ERK-2 protein (0.1178 ±0.0291 ) in VEGF-shRNA interference group; all of them were less than those in the other three groups( P ＜ 0.05 ). Conclusions Inhibition targeting VEGF may become a potential therapy for drugresistant tongue cancer.     

tankyrase 1反义逆转录病毒抑制人舌癌Tcca-8113细胞增殖的实验

目的研究反义tankyrase1逆转录病毒对舌癌细胞系TCCA-8113的端粒酶活性调节及对细胞生长的抑制作用,探讨以tankyrase1为靶点的舌癌基因治疗的可能性。方法构建含反义tankyrase1的逆转录病毒并转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒,感染舌癌TCCA-8113细胞。采用RT-PCR检测tankyrase1表达,端粒酶重复扩增法(telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性,绘制生长曲线了解细胞生长状态,倒置显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果反义tankyrase1逆转录病毒作用后的舌癌细胞tankyrase1表达下降,端粒酶活性及细胞生长受到明显抑制,细胞出现凋亡。结论反义tankyrase1对舌癌TCCA-8113细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制作用,有可能以tankyrase1为靶点对舌癌进行基因治疗。     

舌癌cNO患者哨位淋巴结检测方法的比较

目的：探索舌癌哨位淋巴结（sentinel node，SN）检测的理想方法，比较术前核素扫描＋术中亚甲蓝示踪法和术中γ探头检测法的应用价值。方法：分别采用术前核素扫描＋术中亚甲蓝示踪法（A组）和术中γ探头检测法（B组），对临床NO（clinically NO，cNO）舌癌患者各20例进行SN检测，以颈清扫标本常规病理检查及随访中淋巴结复发与否为评价颈部淋巴结转移状况的金标准，比较2种方法检测SN的有效性；采用SPSS12．0软件包进行χ^2检验。结果：A组SN检出率为100％（20／20），隐匿性淋巴结转移的发生率为25％（5／20），SN活检评价颈淋巴结转移状况的准确率为95％（19／20），假阴性1例，阴性预测值均为94％（15／16）。B组SN检出率为95％（19／20），隐匿性颈淋巴结转移率为15％（3／20），SN活检评价颈淋巴结转移状况的准确率和阴性预测值均为84％（16／19），假阴性3例，假阴性率为16％（3／19）。2组SN检出率、阴性预测值无统计学差异，P〉0．05。结论：舌癌SN检测方法中，术中γ探头检测法并不优于术前核素扫描＋术中亚甲蓝示踪法，后者简便易行，有较高的实用价值。     

舌癌cN0患者哨位淋巴结检测方法的比较

目的:探索舌癌哨位淋巴结(sentinel node,SN)检测的理想方法,比较术前核素扫描 术中亚甲蓝示踪法和术中γ探头检测法的应用价值。方法:分别采用术前核素扫描 术中亚甲蓝示踪法(A组)和术中γ探头检测法(B组),对临床N0(clinically N0,cN0)舌癌患者各20例进行SN检测,以颈清扫标本常规病理检查及随访中淋巴结复发与否为评价颈部淋巴结转移状况的金标准,比较2种方法检测SN的有效性;采用SPSS12.0软件包进行χ2检验。结果:A组SN检出率为100%(20/20),隐匿性淋巴结转移的发生率为25%(5/20),SN活检评价颈淋巴结转移状况的准确率为95%(19/20),假阴性1例,阴性预测值均为94%(15/16)。B组SN检出率为95%(19/20),隐匿性颈淋巴结转移率为15%(3/20),SN活检评价颈淋巴结转移状况的准确率和阴性预测值均为84%(16/19),假阴性3例,假阴性率为16%(3/19)。2组SN检出率、阴性预测值无统计学差异,P>0.05。结论:舌癌SN检测方法中,术中γ探头检测法并不优于术前核素扫描 术中亚甲蓝示踪法,后者简便易行,有较高的实用价值。