复方党参对高原低氧大鼠脑细胞凋亡相关基因表达谱影响的分析

目的研究复方党参对模拟高原低氧条件下大鼠脑神经细胞凋亡基因表达谱的作用,从中药与生物体基因网络相互作用的角度,探讨复方党参的作用机制.方法将Wistar大鼠置于模拟海拔7000m的低压氧舱建立高原低氧大鼠脑细胞凋亡模型,于上舱前7d开始以复方党参液灌胃给药.提取空白对照组、低氧8d对照组、常氧复方党参组及低氧8d复方党参组大鼠脑组织总RNA,经逆转录合成cDNA探针,用[α-32P]标记探针,各自与Atlas cDNA Array膜杂交,经严格的冲洗后用磷屏检cDNA表达水平.获得的基因表达谱数据集采用自组图(SOMs)法分析.结果结果表明在模拟高原低氧条件下,导致神经细胞凋亡的基因(p53、bax、bad、bok、Hsp60)聚为一类(即表达行为相似).而具有抗凋亡功能的基因(bcl-2、bcl-xl、Hsp70、Hsp27、Hsp90、Hsc70、Rad)聚为一类.结论低氧可以启动细胞凋亡的线粒体途径,导致细胞死亡;而复方党参以凋亡相关基因网络中的多种成分为靶点,从不同层次上发挥抑制细胞凋亡的作用.     

自组织神经网络算法在低氧大鼠脑细胞凋亡相关基因表达谱分析中的应用

运用自组织神经网络算法分析复方党参对模拟高原低氧条件下大鼠脑神经细胞凋亡基因表达谱的作用 ,从中药与生物体基因网络相互作用的角度 ,探讨了复方党参的作用机制。将 Wistar大鼠置于模拟海拔 70 0 0 m的低压氧舱建立高原低氧大鼠脑细胞凋亡模型 ,于上舱前 7d开始灌复方党参液。提取空白对照组、低氧 8d对照组、常氧复方党参组及低氧 8d复方党参组大鼠脑组织总RNA,经逆转录合成 c DNA探针 ,用 [α-32 P]标记探针 ,各自与 Atlas c DNA Array膜杂交 ,经严格的冲洗后用磷屏检测 c DNA表达水平。获得的基因表达谱数据集采用自组织神经网络算法 (SOMs)分析。结果显示 ,低氧可以启动细胞凋亡的线粒体途径 ,导致细胞死亡 ;而复方党参以凋亡相关基因网络中的多种成分为靶点 ,从不同层次上发挥抑制细胞凋亡的作用。     

双环醇对刀豆蛋白A引起肝损伤小鼠肝脏基因表达谱的影响

本实验研究双环醇对刀豆蛋白A(concanavalin A，Con A)静脉注射引起免疫性肝损伤小鼠肝脏基因表达谱变化的影响，探讨双环醇肝保护作用的分子机制。小鼠于注射Con A 26.5 mg·kg^-1前24、 8及1 h分别口服双环醇250 mg·kg^-1。测定血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)及天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平，提取小鼠肝脏总RNA，经反转录用Cy3-dUTP和Cy5-dUTP分别标记制备cDNA探针。将cDNA探针与BiostarM-40S小鼠基因表达谱芯片进行杂交，经ScanArray 4000扫描仪扫描芯片并用GenePix Pro 3.0软件进行分析。双环醇可显著抑制刀豆蛋白A引起的血清ALT和AST升高。与刀豆蛋白A对照组相比，双环醇给药组有287条基因发生差异表达，占芯片基因总数的7.00%。其中166条基因表达量明显下调，121条基因表达量明显上调。表达变化的基因主要涉及代谢与细胞色素P450、应激与炎症凋亡、细胞周期调控、信号传导以及再生等相关功能。双环醇对刀豆蛋白A引起小鼠肝损伤肝脏基因表达谱变化具有一定的影响，此结果对今后深入研究双环醇的肝脏保护作用特点和临床应用具有重要意义。     

珍菊降压片中药物配伍对大鼠肾脏表达谱的影响

目的研究珍菊降压片及组方中中药与西药部分对大鼠肾脏表达谱的影响,探讨其中西药物配伍的合理性。方法将24只Wistar大鼠随机均分成空白对照组、珍菊降压片复方低、高剂量组(200、800 mg.kg-1)、相应剂量西药组(4.4、17.8mg.kg-1)、复方高剂量相应剂量中药组(782 mg.kg-1)。连续灌胃给药13周后,分离肾脏,抽提、纯化总RNA,芯片杂交后进行扫描分析。结果与空白对照组相比,基因表达谱的改变顺序为复方低剂量组<中药高剂量组<西药低剂量组<复方高剂量组<西药高剂量组,复方低剂量与西药低剂量组的基因聚类结果显著分开,接近于空白对照组,复方高剂量组与西药高剂量组的基因聚类结果有一定比例的改变,但尚不能完全分开,各组间差异主要表现在离子通道、凋亡、信息传导途径等相关基因群的表达改变不同。结论珍菊降压片影响肾脏基因表达改变主要源于西药部分,中药配伍后可降低西药部分所引起的基因表达水平的改变,显示其一定的减毒作用。     

电磁场对肝癌细胞凋亡基因表达的影响

目的 研究电磁场对肝癌细胞凋亡基因表达的影响,探索电磁场在治疗原发性肝癌(肝癌)中的作用.方法 通过基因芯片技术检测经电磁场处理过的肝癌细胞系BEL-7402和胎肝细胞(I.-02)的凋亡基因表达情况,分析其凋亡基闪表达谱筹异.结果 在检测的54 614个探针组中,BEL-7402细胞经电磁场处理后促进凋亡基因明显(细胞色素C释放相关基因)上调,抑制凋亡基因表达下降.结论 电磁场能够促进肝癌细胞凋亡基因的上调,抑制凋亡基因表达下降,提示电磁场在促进肝癌细胞凋亡方面具有重要作用.     

阿魏酸钠对慢性低氧大鼠肺血管重建的影响及作用机制

目的研究阿魏酸钠对慢性低氧大鼠肺血管形态、p53及PCNA蛋白表达及细胞增殖与凋亡的影响。方法30只雄性SD大鼠采用随机单位组设计方法分为对照组、低氧组和联合治疗组,每组10只。采用常压间断低氧8h/d,连续21d的方法复制慢性低氧性肺动脉高压模型。对照组吸入空气（其他条件与低氧组相同）。联合治疗组大鼠腹腔注射15mg／（kg·d）的阿魏酸钠。观察阿魏酸钠对慢性低氧大鼠肺血管形态学指标、p53及增殖细胞核抗原PCNA基因蛋白表达、细胞的增殖与凋亡的影响。结果低氧21d后,低氧组管壁厚度占血管外径的百分比、管壁面积占血管总面积的百分比、增殖指数及p53基因表达较对照组均明显升高（P〈0．01）,管腔面积占血管总面积的百分比、凋亡指数较对照组明显降低（P〈0．01）;联合治疗组管壁面积占血管总面积的百分比、管壁厚度占血管外径的百分比、增殖指数及p53基因表达与低氧组相比明显降低,差别有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）。管腔面积占血管总面积的百分比、凋亡指数与低氧组相比明显升高,差别有统计学意义（P〈0．01）;联合治疗组除管腔面积占血管总面积的百分比、凋亡指数及p53基因表达与对照组差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）外,其他指标与对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论阿魏酸钠可抑制慢性低氧大鼠肺血管重建,其机制可能与抑制p53及PCNA基因的表达,导致细胞增殖被抑制、细胞凋亡被促进等有关。     

新型化合物BZ-1对大鼠实验性高原肺水肿的预防作用

目的研究新型化合物BZ-1对模拟高原低氧环境下大鼠肺水肿的预防作用及其可能机制。方法将48只SD大鼠随机分为平原对照组、高原低氧模型组及BZ-1低、中、高剂量组[50、100、200 mg/(kg·d)]、阳性对照组[西地那非50 mg/(kg·d)],每组8只。给药组灌胃BZ-1或西地那非,对照组及高原低氧模型组灌胃等体积溶媒,连续给药5 d后,除平原对照组外,均放置于复合环境模拟实验舱内,模拟海拔6 000 m高度72 h,出舱后将各组大鼠麻醉,右心导管法测定大鼠平均肺动脉压(m PAP),放血处死。取肺叶HE染色观察组织病理学变化,测定肺组织湿干比值、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性。结果与平原对照组相比,高原低氧模型组大鼠肺组织出现明显炎性渗出、水肿,肺W/D值和m PAP明显升高(P<0.05),组织匀浆中MDA升高(P<0.05),SOD、T-AOC、NOS活性明显降低(P<0.05),血清中NOS活性明显降低(P<0.05);与高原低氧模型组相比,BZ-1连续给药5 d,能改善肺水肿的病理状况,明显提高大鼠肺组织SOD、T-AOC、NOS活性及血清中NOS活性,降低m PAP、MDA、W/D值(P<0.05);与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BZ-1能明显降低肺W/D值、m PAP、MDA含量,提高SOD、T-AOC、NOS活性,减轻大鼠在模拟高原低氧环境所致的肺水肿,BZ-1降低肺动脉压的机制可能与其调节NOS活性有关,BZ-1抗氧化性可能与其自身结构有关。     

抗结核病药物利福平致大鼠肝脏损伤的基因表达谱分析

目的:利用基因芯片技术研究抗结核病药物利福平对大鼠肝脏毒性效应的分子机制。方法:20只Wistar大鼠随机分为对照组和利福平组,每组10只,分别灌胃给予利福平(100 mg.kg-1)和等体积生理盐水,连续14 d。以cDNA微阵列技术研究利福平对大鼠肝脏基因表达谱的影响,根据差异表达基因的生物学功能探讨利福平对大鼠肝脏的毒性机制。结果:利福平组与对照组杂交的表达差异基因共19个,其中上调基因11个,下调基因8个,功能已知基因18条,主要包括一些与肝药酶活性、氧化应激和特异性免疫等相关的基因。结论:利福平可导致大鼠肝脏基因表达谱明显变化。该研究对阐明利福平的肝损伤机制具有十分重要的作用。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的探讨血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法单侧肾切除大鼠ip STZ诱发糖尿病模型,每日ig苯那普利(10 mg·kg^-1),共12周。采用原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡情况,流式细胞术和免疫组化检测肾皮质凋亡相关基因Fas和Fas-L的表达。结果糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,Fas和Fas-L的表达亦显著增强;苯那普利治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Fas和Fas-L的表达减弱。结论苯那普利可能通过影响凋亡相关基因Fas和Fas-L的表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

吡那地尔对低氧低糖诱导神经细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨ATP敏感性钾通道(K_ATP)开放剂吡那地尔(Pin)对低氧低糖再复氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡的影响。方法　用电镜和流式细胞分析技术,检测原代培养的大鼠皮质神经细胞凋亡。结果　低氧低糖再复氧可诱导大鼠皮质神经细胞凋亡。Pin (10^-5,10^-6,10^-7mol·L^-1 ) 3个剂量组均能降低凋亡细胞百分率,以10^-5mol·L^-1 组效果最好。上述作用可被K_ATP特异性阻断剂格列苯脲(Gli)所拮抗。结论　Pin对低氧低糖再复氧诱导的大鼠皮质神经细胞凋亡有明显的抑制作用,提示KATP通道在调控细胞凋亡的过程中可能起着重要的作用。     

川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲致光感受器细胞损伤的保护作用及其机制

目的探讨川芎嗪对N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea，MNU)致大鼠视网膜损伤的作用。方法 大鼠生后47 d，腹腔注射不同剂量的川芎嗪注射液；50 d注射MNU 60 mg·kg^-1。测量视网膜总厚度；TUNEL和RT-PCR法分别检测细胞凋亡、c-jun和c-fos的表达。结果川芎嗪注射液可剂量依赖性地增加周边视网膜总厚度和降低凋亡指数，并抑制MNU诱导的即早基因表达。结论川芎嗪通过下调基因c-jun和c-fos的表达，抑制光感受器细胞凋亡，从而部分保护MNU引起的视网膜损伤。     

大鼠急性脊髓损伤后Bak基因的表达及其意义

目的探讨Bak基因在大鼠急性脊髓损伤(ASCI)中的表达及其意义。方法选取64只SD大鼠随机分为模型及对照两组,每组32只,模型组以改良Allen's法制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型,对照组只行椎板切开不损伤脊髓。分别于伤后3h、1、3、7d时(每个时间点8只)应用改良Tarlov评分法评价其神经功能;然后处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色,观察形态学改变和Bak基因表达的特点;并应用TUNEL方法检测神经细胞凋亡情况。其量的评定借助于麦克奥迪数码医学图像分析系统A(Motic.med6.0)软件,结果分别用累积光密度及细胞凋亡指数来表示。结果对照组大鼠下肢功能均无明显瘫痪,模型组大鼠下肢均出现不同程度功能障碍,对照组各时间点的Tarlov评分均高于实验组(P0.05)。对照组各时间点脊髓组织未见明显出血、水肿和细胞凋亡坏死,模型组各时间点脊髓组织均有不同程度出血、水肿、细胞凋亡及坏死。对照组未见明显Bak基因表达,模型组各时间点Bak基因表达均明显高于对照组(P0.05),模型组内Bak基因表达3h点出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。模型组内细胞凋亡3h点少量出现,1d增加,3d达高峰,7d明显减少。结论脊髓损伤激活Bak基因表达,从而诱导神经细胞凋亡,可能为其病情进展的重要机制之一。     

人参-附子药对不同配比对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:研究人参附子药对不同配比对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响,优选参附注射液中人参-附子药对改善慢性心力衰竭的最佳比例,阐明参附药对配伍与疗效的关系。方法:采用腹腔注射盐酸阿霉素(ADR)法建立大鼠慢性心力衰竭(CHF)模型,测定大鼠体重及心脏重量指数(HWI)的变化,HE染色后观察大鼠心肌组织切片病理损伤情况,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测其对抗凋亡基因(Bcl-2)、促凋亡基因(Bax)、细胞色素C(Cytc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)基因mRNA表达水平的影响。结果:参附注射液组与其药对不同配比组均能不同程度降低慢性心衰大鼠心脏重量指数,解缓心肌冲血程度,上调抗凋亡基因(Bcl-2)表达,下调促凋亡基因(Bax)、细胞色素C(Cytc)、Caspase-9和Caspase-3的表达,抑制线粒体途径心肌细胞的凋亡,其中,以人参-附子1:2配比组作用最强。结论:人参与附子配伍比例为1:2时,抗慢性心力衰竭线粒体途径心肌细胞凋亡的效果最佳,其可能是通过抑制Bcl-2的表达,上调Bax基因表达,来抑制细胞色素C(Cytc)释放,从而降低Caspase-9和Caspase-3的水平,最终抑制慢性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡,保护心肌,改善心功能。     

通关藤对U937细胞凋亡相关基因表达谱的影响

目的利用细胞凋亡基因芯片比较通关藤作用前后U937细胞基因表达谱的改变,探讨通关藤诱导U937细胞凋亡的可能机制。方法利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。提取经和未经50μL/mL通关藤处理的U937细胞的mRNA,逆转录为cDNA,然后用含89个目的基因的细胞凋亡基因芯片(APH-012)进行杂交,GEArray软件分析,通过比较得到通关藤处理前后表达有差异的基因。结果通关藤作用前后表达有差异的基因共36条(占芯片基因总数的44.4%),其中28条(28/89,31.5%)基因表达上调,8条(8/89,8.9%)基因表达下调。这些改变的基因主要包括肿瘤坏死因子配体和受体家族、bcl-2家族、caspase家族、P53家族成员。结论通关藤主要通过上调促凋亡基因及下调凋亡抑制基因来诱导U937细胞凋亡,其中死亡受体途径活化可能在凋亡过程中发挥重要作用。     

慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A_2和CYP2E_1的影响研究

目的研究慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A2和CYP2E1的影响。方法将大鼠随机分为对照组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组、低氧28d组,低氧处理结束24h后,常规腹腔注射麻醉,摘取眼球血液2ml制备血清,并测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性;取新鲜肝组织以制备微粒体和提取核糖核酸(RNA),并以RT-PCR进行基因片段扩增以检测大鼠肝脏细胞色素CYP3A2、CYP2E1的mRNA表达水平。结果慢性间断性低氧对血清ALT、AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肝脏ERD、ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155.5%、42.2%;同时,CYP3A2、CYP2E1mRNA的表达水平也分别增加了220.5%、102.8%。结论慢性间断性低氧能显著增加大鼠肝脏ERD、ANH活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP3A2和CYP2E1的基因表达水平有关。     

高原低氧环境对二甲双胍多次给药后在2型糖尿病大鼠体内药动学影响

目的:探讨高原低氧环境对二甲双胍在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)大鼠体内多次给药后药动学参数的影响。方法:采用LC-MS/MS法,Gemini C₁₈(75 mm×3 mm, 3μm)色谱柱进行分离,流动相为乙腈-水-甲酸(85∶15∶0.1,v/v/v),流速0.4 mL·min^-1,进样量为2μL,内标为雷尼替丁。12只T2DM大鼠随机分为平原组和高原组,连续灌胃给药二甲双胍7 d,qd,并于d 7给药前和给药后0.083,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,4,6,8,12,24 h采集血样进行检测,使用DAS 2.0软件对血药浓度-时间数据进行模拟拟合以计算药动学参数。结果:与平原组大鼠相比,高原低氧环境下大鼠体内二甲双胍的T_max、清除率(CL_Z/F)和平均滞留时间(MRT)分别延长了29.03%,33.25%和44.98%(P<0.05),同时AUC增加了46.22%(P<0.01)。结论:高原低氧环境下二甲双胍多次给药后在...     

异丙肾上腺素对大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响

目的　研究异丙肾上腺素(isoprenaline, Iso)诱导大鼠急性心肌缺血与心肌细胞凋亡相关基因表达的关系。方法　sc大剂量Iso建立大鼠急性心肌缺血模型。RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas,CPP32,Bcl-2和Bax在心肌的表达。并用同样方法,观察苦豆碱(aloperine, Alo, 20 mg.kg^-1)和普萘洛尔(propranolol, Prop, 2 mg.kg^-1)对急性心肌缺血大鼠心肌细胞凋亡相关基因表达的影响。结果　急性心肌缺血模型大鼠心肌的Fas,CPP32和Bcl-2基因表达显著增加,Bax变化不明显;Alo和Prop能降低缺血心肌中Fas和CPP32基因的表达,增加Bcl-2基因的表达,且Prop对Bax表达有下调作用。结论　sc大剂量Iso可诱导大鼠心肌细胞凋亡相关基因异常表达;Alo和Prop对该模型大鼠心肌相应基因的异常表达亦有影响。     

天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的分子机制研究

目的利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制。方法提取药物处理前后HeLa细胞总RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-Ⅰ表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePixPro3·0软件分析。结果两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞凋亡密切相关的NOP56、TN-FSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调,与细胞黏附及细胞间相互作用相关的COL9A3、MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下调。结论天花粉蛋白可以引起HeLa细胞中多个基因的表达改变,基因芯片技术进一步揭示了其诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。     

复方聚维酮碘片长期给药对大鼠甲状腺功能的影响

目的:观察复方聚维酮碘片(CPI)长期给药对大鼠甲状腺功能的影响。方法:Wistar大鼠每天口腔给予CPI 0.4和4.0mg·kg^-1·d^-1,连续给药30d。采用放射免疫法测定血清甲状腺激素(T₃和T₄)含量。结果:CPI组大鼠的甲状腺指数、血清T₃和T₄水平与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:CPI长期口腔给药对大鼠甲状腺功能无明显影响     

志苓胶囊对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞凋亡及h-TERT、CD44表达的影响

目的研究志苓胶囊(抗癌复方Ⅱ号)对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446诱导凋亡作用机制以及对细胞黏附分子表达的影响。方法将志苓胶囊按其不同的中西药成份配制成相应的中药组、西药组和复方组,与NCI-H446共培养后,倒置显微镜观察、Hochest33258荧光染色法检测凋亡细胞,RT-PCR、Western blot、流式细胞仪分别检测bcl-2、bax、hTERT基因mRNA和相应蛋白表达水平变化以及黏附分子CD44的表达变化。结果NCI-H446经不同的药物组处理后,倒置显微镜、Hochest33258荧光染色可观察到细胞凋亡形态学改变,bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平均有不同程度下降,bax基因表达水平则有不同程度增强,复方组改变最明显,各药物组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。中药组和西药组hTERT基因和蛋白表达水平未见明显改变,复方组表达水平下调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。各药物组CD44表达水平降低,其中复方组降低水平最明显(P<0.01)。结论志苓胶囊可能通过下调NCI-H446细胞bcl-2、hTERT基因和CD44分子表达,增强bax基因表达,从而诱导NCI-H446细胞凋亡,抑制细胞黏附、转移。