类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞上CD28表达异常的研究

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节病变为主的全身性结缔组织炎症,为非器官特异性自身免疫性疾病,其疾病的发生发展与细胞免疫功能紊乱、T细胞异常活化和T细胞亚群的平衡失控密切相关。T细胞活化需要两种信号:第一信号为抗原特异性信号,即T细胞受体识别抗原提     

CD28-T细胞亚群在类风湿关节炎患者外周血和关节液中的表达

目的 探讨CD28-T细胞亚群在类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中的变化和意义。方法 随机选择RA患者45例,取新鲜抗凝外周血单个核细胞(PBMC),其中15例同时提取关节液单个核细胞( SFMC),以流式细胞技术检测CD28-T细胞数量及其表面可诱导共刺激分子(ICOS)的表达。2 组间比较用独立样本t检验。结果 ①与PBMC相比,RA患者SFMC中CD4+CD28+ ICOS+、CD4+CD28-ICOS+、CD8+ CD28+、CD8+ CD28+ ICOS+T细胞明显升高[(36±19)％与(15±8)％,t=-4.234,P＜0.01;(2.1±2.2)％与(0.6±1.4)％,t=-3.143,P＜0.01;(62±15)％与(47±18)％,t=-2.885,P＜0.01;(9±9)％与(3±3)％,t=-2.131,P＜0.05];CD8+CD28-T细胞明显降低[(38±15)％与(54±18)％,t=2.975,P＜0.01];CD8+ CD28- ICOS+、C1D4+CD28+和CD4+CD28-T细胞无明显变化（P＞0.05）。②同一RA患者SFMC与PBMC相比,CD4+CD28+ICOS+、CD8+ CD28+T细胞明显升高[(38±18)％与(16±10)％,t=-4.065,P＜0.01;(61±16)％与(41±21)％,t=-2.883,P＜0.01];CD8+ CD28-T细胞明显降低[(39±16)％与(59±21)％,t=2.949,P＜0.01]。③缓解期与活动期RA患者相比,PBMC中CD4+CD28-、CD8+ CD28-、CD28-ICOS+T细胞无明显变化（P＞0.05）。结论 RA患者关节液中CD28-T细胞亚群失衡和ICOS分子表达异常,可能是导致RA关节损伤的重要机制。     

类风湿关节炎外周血与滑液细胞CD147分子表达的研究

目的　为了探讨关节内CD14 7表达细胞的来源与类风湿关节炎 (RA)的关系 ,研究CD14 7分子在RA患者及正常健康人外周血与滑液细胞中的表达水平。方法　取 10例活动期RA患者用药治疗前后外周血、治疗前滑液及 10名正常健康对照外周血 ,外周血和滑液分离后细胞悬液采用双色免疫荧光标记 ,流式细胞术测量淋巴细胞 (CD3+ T)、CD14 + 单核细胞和中性粒细胞表达CD14 7阳性率及表达荧光强度水平。结果　①与正常对照相比 ,RA患者外周血CD3+ T淋巴细胞与CD14 + 单核细胞的表面CD14 7表达强度较高 (P <0 0 1) ,而其表达率比较差异无显著性。中性粒细胞表面CD14 7的表达率与表达强度与正常人相比差异均无显著性 ;②正常对照外周血细胞膜表面CD14 7的分子的表达在IFN γ刺激后有显著增多 ,而RA患者在刺激前后差异无显著性 ;③关节滑液中淋巴细胞、单核细胞与中性粒细胞上的CD14 7表达强度均比外周血细胞表达高 ,且淋巴细胞的表达率较高。结论　CD14 7在RA中各种炎细胞上均有较高表达 ,提示其在RA的病理损伤中起到重要作用。     

CD48在类风湿关节炎患者外周血CD8+T细胞上的表达及意义

目的探讨类风湿关节炎（RA）患者CD8^＋T细胞上CIM8的表达及意义。方法选择30例RA患者（RA组）和30名健康人（对照组），采用流式细胞仪测定两组外周血CD8^＋T细胞表面上CD48的平均荧光强度，分析RA患者CD48在CD8^＋T细胞上表达的临床意义。结果RA组CD48^＋CD8^＋T细胞表面平均荧光强度明显低于正常对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）。而两组CD48^＋CD4^＋T细胞的表面平均荧光强度差异无统计学意义。结论RA患者CD8^＋T细胞上CD48的表达低于对照组，CD48的表达减低使抑制性T细胞减少可能在RA的发病过程中起作用。     

类风湿关节炎患者CD+4T细胞亚群异常及其意义

为明确ＣＤ 4的Ｔ细胞亚群Ｔｈ1、Ｔｈ2之间的平衡在类风湿关节炎 (ＲＡ)发病中的意义 ,我们分别以干扰素 (ＩＦＮ) γ、白细胞介素 (ＩＬ) 4作为Ｔｈ1、Ｔｈ2亚群的代表性指标 ,用半定量反转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法测定ＲＡ患者外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)及滑膜组织中ＩＬ 4、ＩＦＮ γｍＲＮＡ水平 ,并探讨ＩＬ 4、ＩＦＮ γ表达与疾病活动的关系。一、材料和方法1.观察对象 :(1)ＰＢＭＣ观察组 :ＲＡ16例 ,来自 1997～1998年在解放军总医院住院的ＲＡ患者 ,诊断符合ＡＲＡ1987年修订标准。正常外周血标本 15例 ,来自该院…     

趋化因子受体CCR4在活动期类风湿关节炎患者外周血CD4+T细胞表达的研究

目的 探讨活动期类风湿关节炎(aRA)患者趋化因子受体CCR4在外周血CD4+T细胞的表达及其意义,并对该表达与血清重要细胞因子水平的相关性进行研究.方法流式细胞计数方法对12例aRA患者和10名健康对照者外周血CD4+T细胞表面CCR4的表达情况进行检测;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测患者血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10及干扰素(IFN)-γ的水平并记录患者相关临床及实验室资料.分析及评价aRA患者外周血淋巴细胞中CD4+CCR4+T细胞百分数(CD4+CCR4+T%)与TNF-α、IL-10、IFN-γ的血清水平及临床指标的相关性.结果 aRA组外周血CD4+CCR4+T%明显高于健康对照组(P＜0.01).aRA组血清TNF-α(P＜0.01)、IL-10(P＜0.01)及IFN-γ(P＜0.01)水平明显高于健康对照组.在检测的细胞因子中,aRA患者血清IL-10水平与CD4+CCR4+T%呈明显正相关关系(r＝0.66,P＜0.05).在临床指标中,CD4+CCR4+T%与aRA患者Lunsbury关节指数、血沉、C反应蛋白及血小板计数呈明显正相关关系(P＜0.05).结论 CCR4在CD4+T细胞趋化至病变关节过程中可能发挥重要作用;外周血CD4+CCR4+T%与血清IL-10水平密切相关;该百分数可以作为临床评价RA活动性的一个敏感指标.     

慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD28和CD137水平变化研究

目的　研究慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD2 8和CD1 37的表达特点及其在慢性肾炎免疫病理机制中的作用。方法　采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析 ,对 5 2例慢性肾炎患者外周血共刺激分子CD2 8、CD1 37和T淋巴细胞亚群的表达进行检测。结果　慢性肾炎患者T细胞亚群明显失衡 ,表现为CD4减少 ,CD8增加 ,CD4 CD8比值显著降低。共刺激分子CD2 8表达显著低于正常对照组 (P <0 0 1) ,且CD+4 CD+2 8T细胞和CD+8CD+2 8T细胞均显著减少 (P <0 0 1)。共刺激分子CD1 37表达显著高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论　慢性肾炎患者外周血T细胞亚群失衡和T细胞活化所必需的共刺激分子CD2 8、CD1 37异常表达 ,可能在慢性肾炎发生和病变进展中起着重要作用     

强直性脊柱炎患者外周血CD28 CD40共刺激通路相关分子的表达

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血淋巴细胞CD28和CD40共刺激通路相关分子的表达及其与免疫功能紊乱的关系。方法采用流式细胞仪检测69例AS初诊患者和50名健康对照者CD28、CTLA-4和CD40L在外周血CD3~ T细胞上的表达及CD80、CD86和CD40在CD19~ B细胞上的表达。用ELISA法测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM的水平。结果AS患者CD3~ T细胞上的CD28、CTLA-4和CD40L,CD19~ B细胞上CD86和CD40的表达均较正常对照组显著增高(P＜0．01),CD80在CD19 B细胞表达增高(P＜0．05)：AS患者血清中2种免疫球蛋白IgG、IgA的水平较正常对照组显著增高(P＜0．01)。结论AS患者CD28和CD40共刺激通路相关分子表达增强,机体处于免疫激活状态,CD28和CD40共刺激通路在AS的发病中可能起重要作用。     

类风湿关节炎患者外周血CD4 T细胞关节局部趋化机制

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4 T细胞比例变化情况及其对关节局部趋化的机制。方法流式细胞术分析RA患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4 T细胞的比例,并分析CD4 T细胞比例与RA疾病活动性评分系统(DAS28)评分间的关系。激光共聚焦方法检测RA患者滑膜局部浸润CD4 T细胞情况。流式细胞术分析RA患者CD4 T细胞表面趋化因子受体表达情况。结果与对照组相比,RA患者外周血PBMC中CD4 T细胞的比例显著降低(P0.01),且RA患者外周血CD4 T细胞比例与DAS28评分呈明显负相关(r=-0.753 0,P=0.001 2)。关节局部CD4 T细胞浸润的激光共聚焦结果显示,与对照组相比,RA患者滑膜中具有更多的CD4 T细胞浸润。趋化因子受体分析结果显示,RA患者外周血CD4 T细胞表面CCR5、CXCR1和CXCR3的表达显著升高(P0.01)。结论 RA患者外周血CD4 T细胞表面表达升高的CCR5、CXCR1和CXCR3可能参与外周血CD4 T细胞向滑膜局部的趋化。     

类风湿关节炎患者检测外周血CD83表达的临床意义

既往对类风湿关节炎 (RA)发病机制的研究侧重于淋巴细胞及抗原 ,对抗原提呈细胞在 RA发病中的作用则较少报道。近 1 0年来 ,树突状细胞 (DCs)逐渐成为免疫学研究的热点。为了解 DCs在 RA发病机制中的作用 ,2 0 0 1年 1月至 2 0 0 2年 1月 ,我们对 40例 RA患者 ,检测外周血中活化 DCs表面标志CD83 的表达 ,探讨其临床意义。现报告如下。1　资料与方法1 .1　临床资料　 40例 RA患者均符合美国风湿病学院 1 987年修订的 RA分类标准。其中男 8例 ,女3 2例 ;年龄 2 0～ 6 0岁 ,平均 3 7岁 ;病程 1～ 1 0年 ,平均为 5年。根据症状、体征及…     

类风湿关节炎患者滑膜树突状细胞的研究

目的　探讨滑膜树突状细胞在类风湿关节炎 (RA)中的作用。方法　采用免疫组织化学方法观察 2 5例RA滑膜中HLA DR抗原阳性表达细胞、S 10 0阳性CD1a阳性的树突状细胞(DC)的多少和分布情况。结果　 2 3例RA滑膜细胞HLA DR表达阳性 ,19例S 10 0表达阳性 ,16例CD1a表达阳性 ,其阳性例数的百分率均高于对照组。RA滑膜中HLA DR、S 10 0和CD1a标记阳性细胞数均明显高于对照组 ,其差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。结论　RA滑膜中DC和被激活的DC及HLA DR阳性细胞的存在和增多可能在RA病变局部递呈自身抗原的过程中起重要的作用 ,是RA自身免疫异常的重要的始发因素     

类风湿关节炎外周血CD19和CD27标记的B淋巴细胞亚群及其相关性研究

目的研究类风湿关节炎(RA)外周血中B淋巴细胞亚群(未活化B细胞、记忆性B细胞和浆母细胞)的分化状态及其与自身抗体和临床表现的关系。方法选择RA患者60例,根据临床表现和用药后的反应分为缓解期、活动期与难治型3组。健康献血者24名作为对照。采用流式细胞仪检测研究对象外周血中未活化B细胞(CD19~ CD27~-)、记忆性B细胞(CD19~ CD27~(dim))和浆母细胞(CD19~ CD27~(high))的比率,分析这3组B细胞亚群和CD19平均荧光强度与类风湿因子(RF)、抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体和抗环瓜氨酸(CCP)抗体及临床表现的关系。结果①RA与正常对照比较未活化B细胞和浆母细胞明显升高,而记忆性B细胞明显下降(P＜0．05)；缓解组和难治组的未活化B细胞比率明显升高(P＜0．05),记忆性B细胞比率明显降低(P＜0．05)；活动组和难治组中的浆母细胞比率明显升高(P＜0．05)。②RA患者CD19平均荧光强度与血沉、C反应蛋白、日常生活能力呈正相关,浆母细胞亚群比率与关节肿胀指数正相关。③未活化B细胞、记忆性B细胞及浆母细胞亚群与RF、抗CⅡ抗体和抗CCP抗体无明显关系。结论RA患者外周血中存在着B细胞亚群的紊乱,以浆母细胞和未活化B细胞的比率升高,记忆性B细胞比率下降为特征,浆母细胞比率在活动性和难治性RA患者中明显升高且与关节肿胀指数正相关,B细胞在RA发病机制中发挥着重要作用。     

Methyl-vitamin B12 blocks the CD28 co-stimulatory pathway in human T cells and its possible therapeutic application for T cell-mediated diseases,including rheumatoid arthritis

Abstract

The effects of metyl-vitamin B12 have been examined on human T cell activation induced by stimulation of T cell receptor (TCR)-CD3 and an accessory molecule, CD28. When T cells in the presence of 10% mitomycin-treated non-T cells were stimulated with anti-CD3 mAb at the optimal concentration, methyl-B12 did not inhibit T cell proliferation. However, when T cells were stimulated with the suboptimal concentration of anti-CD3 and anti-CD28 mAbs, methyl-B12 exhibited potent inhibition of T cell proliferation. Methyl-B12 did not affect cell surface expression of the CD3 and CD28 molecules of T cells. Methyl-B12 inhibited a 29 kDa protein tyrosine phosphorylation that was specifically induced by anti-CD3 and anti-CD28 mAbs. Similarly, T cell proliferation of patients with rheumatoid arthritis (RA), which is representative of T cell-mediated disease was inhibited by methyl-B12, when T cells were stimulated by anti-CD3 and anti-CD28 mAbs. These results suggest that methyl-B12 modulates lymphocyte function through blockade of the CD28 signaling pathway and that methyl-B12 may have T cell inhibitory activity that is applicable for treating patients with RA.     

Methyl-vitamin B12 blocks the CD28 co-stimulatory pathway in human T cells and its possible therapeutic application for T cell-mediated diseases, including rheumatoid arthritis

The effects of metyl-vitamin B12 have been examined on human T cell activation induced by stimulation of T cell receptor (TCR)-CD3 and an accessory molecule, CD28. When T cells in the presence of 10% mitomycin-treated non-T cells were stimulated with anti-CD3 mAb at the optimal concentration, methyl-B12 did not inhibit T cell proliferation. However, when T cells were stimulated with the suboptimal concentration of anti-CD3 and anti-CD28 mAbs, methyl-B12 exhibited potent inhibition of T cell proliferation. Methyl-B12 did not affect cell surface expression of the CD3 and CD28 molecules of T cells. Methyl-B12 inhibited a 29 kDa protein tyrosine phosphorylation that was specifically induced by anti-CD3 and anti-CD28 mAbs. Similarly, T cell proliferation of patients with rheumatoid arthritis (RA), which is representative of T cell-mediated disease was inhibited by methyl-B12, when T cells were stimulated by anti-CD3 and anti-CD28 mAbs. These results suggest that methyl-B12 modulates lymphocyte function through blockade of the CD28 signaling pathway and that methyl-B12 may have T cell inhibitory activity that is applicable for treating patients with RA.     

Frequencies of circulating IL-17-producing CD4+CD161+ T cells and CD4+CD161+ T cells correlate with disease activity in rheumatoid arthritis

Abstract

Objective. Rheumatoid arthritis (RA) is a common autoimmune disease that is primarily driven by effector T cells, particularly Th17 cells, which are mainly contained within CD4+CD161+ T cells. Thus, we aimed to explore whether the frequencies of circulating IL-17-producing CD4+CD161+ T cells and CD4+CD161+ T cells were correlated with RA disease activity.

Methods. The surface phenotype and cytokine production of blood were analyzed by flow cytometry in 52 RA patients and 17 healthy controls. The disease activity was evaluated by the 28-joint disease activity score.

Results. The frequencies of circulating IL-17-producing CD4+CD161+ T cells and CD4+CD161+ T cells were increased in RA patients, and they were elevated in patients with active disease status compared to patients with low disease status. Furthermore, their frequencies were positively correlated with disease activity parameters. Receiver operating characteristic curve analysis revealed that IL-17-producing CD4+CD161+ T cell levels were able to distinguish disease activity with 60.7 % sensitivity and 87.5 % specificity, while CD4+CD161+ T cell levels showed 92.9 % sensitivity and 66.7 % specificity.

Conclusion. These results support the hypothesis that Th17 cells are involved in the pathogenesis of RA and suggest that circulating CD4+CD161+ T cells are a potential biomarker of RA disease activity.     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对类风湿关节炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞亚群的调节作用

目的 观察活动期类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4+D25+FOXP3+调节性T细胞数量和比例的变化,探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFRⅡ-Fc)对调节性T细胞亚群的调节作用.方法 ①选择40例活动期中重度RA患者,按随机、双盲、平行、安慰剂对照的原则分为TNFR Ⅱ-Fc+甲氨蝶呤联合治疗组和甲氨蝶呤对照治疗组,共治疗12周,采用流式细胞术分析并比较2组患者治疗前后外周血CD4+CD25+ FOXP3+调节性T细胞的表达比例,并同期选择40名健康体检者作平行比较.②比较2组患者治疗不同时期疼痛视觉模拟评分法(VAS)、28个关节疾病活动指数(DAS28)、健康评估问卷(HAQ)平均分.计量资料组间比较采用配对t检验.结果 ①活动期RA患者外周血CD4+CD25+FOXP3+细胞比例显著低于健康对照组[(5.4±1.4)％与(7.5±1.5)％,P＜0.01 ];TNFRⅡ-Fc+甲氨蝶呤联合治疗12周后,CD4+CD25+ FOXP3+细胞比例显著高于治疗前[(7.0±1.2)％与(5.2±1.6)％,P＜0.01].联合治疗组CD4+CD25TOXP3+细胞比例增高的幅度显著高于甲氨蝶呤治疗组[(7.0±1.2)％与( 5.6±0.7)％,P＜0.01].②治疗12周后,联合治疗组VAS评分、DAS28评分、HAQ平均分均优于甲氨蝶呤组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TNFRⅡ-Fc联合甲氨蝶呤治疗的疗效优于单纯甲氨蝶呤治疗,TNFRⅡ-Fc可提高活动期RA患者血中CD4+CD25+调节性T细胞比例,可能是其治疗RA的一个重要机制.