多聚左旋精氨酸诱导NCI-H292细胞凋亡及其可能机制的分析

目的观察多聚左旋精氨酸(poly-L-arginine,PLA)诱导气道上皮细胞NCI-H292凋亡以及对细胞内BCL-2/Bax、Caspase 3表达的影响,从而揭示PLA参与哮喘气道损伤的机制。方法按PLA浓度不同分为对照组、10 mg/L组、20 mg/L组、40 mg/L组、60 mg/L组,流式细胞仪检测各组PLA作用24 h后NCI-H292细胞凋亡率;电镜下观察60 mg/L组PLA作用24 h后NCIH292细胞凋亡形态学改变;Western blot法检测各组PLA作用24 h后NCI-H292细胞内Bax、BCL-2及活性Caspase 3的表达。结果各组NCI-H292细胞凋亡率分别为(4.97±0.17)%、(7.82±0.21)%、(11.99±0.21)%、(29.52±0.55)%、(55.23±0.67)%(P0.05);电镜下PLA作用后NCI-H292细胞呈明显凋亡改变;Western blot检测出细胞中BCL-2/Bax表达降低(P0.05),活性Caspase 3表达增加(P0.05)。结论 PLA能引起气道上皮细胞凋亡,并下调BCL-2/Bax表达,上调活性Caspase3表达。     

HHT对鼻咽癌细胞caspase-8蛋白和mRNA表达的影响

为探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的caspase 8蛋白和mRNA表达的影响 ,分别用HHT 0 (对照 )、0 12 5、0 2 5、0 5和 1mg/L处理CNE 2Z细胞 8h ,采用Westernblot分析caspase 8的蛋白表达变化 ,半定量RT PCR检测caspase 8mRNA的表达改变。结果显示 :随HHT处理浓度的增加 ,caspase 8酶原 (32ku)的表达水平具有统计学意义的降低 (P <0 0 1) ,而caspase 8mRNA的表达水平具有统计学意义的增高 (P <0 0 1) ,当HHT浓度为1mg/L时出现活性裂解片段 (2 0ku)。结果提示 :HHT可使caspase 8酶原裂解 ,浓度依赖性地下调caspase 8酶原的蛋白表达和上调caspase 8mRNA的表达 ,HHT处理CNE 2Z细胞可能有caspase 8的活化     

白藜芦醇诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中caspase-3的活化

目的　探讨白藜芦醇 (Res)诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡过程中是否有caspase 3的活化。方法　用Western blot分析caspase 3酶原的变化 ,半定量RT PCR检测caspase 3mRNA水平的改变 ,比色法测定caspase 3的相对活性。结果　用0、2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol LRes处理CNE 2Z细胞 2 4h ,随药物浓度的增加 ,caspase 3酶原的蛋白水平减少 ,caspase 3的mRNA水平增加 (P <0 .0 1)。用 10 0 μmol LRes分别处理细胞 1、2、4、8、12、2 4h ,caspase 3活性于 2h开始升高 ,12h达高峰 (为对照组的6 .6倍 ,P <0 .0 1) ,2 4h仍高于对照组 (P <0 .0 1) ;用不同浓度的Res处理细胞 12h ,caspase 3活性呈浓度依赖性的升高。结论　Res诱导CNE 2Z细胞凋亡过程中有caspase 3的活化     

半胱氨酸蛋白酶-3抑制剂对大鼠缺血再灌流脑区神经元凋亡的影响

目的探讨半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)抑制剂z DEVD fmk对大脑皮层缺血再灌流区神经元凋亡的影响。方法制备大脑中动脉栓塞再灌流大鼠模型,于再灌流前向治疗组缺血侧脑室注射z DEVD fmk(7μg/kg)。采用Western印迹分析、TUNEL和免疫组织化学染色(SPAB法)等方法,检测各组颞顶叶皮层缺血再灌流区caspase3表达和活化、多(ADP核糖)聚合酶(PARP)表达和切割灭活及神经元凋亡。结果未治疗组(A组)、二甲基亚砜对照组(B组)、z DEVD fmk治疗组(C组),再灌流1h及24h缺血脑区的caspase3前体含量分别为16.7±3.0、11.5±3.0、47.5±3.5及76.1±3.5、71.3±6.4、88.2±5.5;12000caspase3切割片段含量分别为8.2±2.3、9.4±1.2、4.3±1.6及59.0±6.3、60.5±7.2、17.3±2.8;PARP含量分别为12.6±3.0、13.9±2.0、53.7±4.1及67.5±8.6、61.1±6.6、93.6±4.1;24000PARP切割片段含量分别为6.0±0.7、6.6±1.2、3.6±1.1及27.4±2.6、25.8±3.2、12.1±2.8(相对灰度值);凋亡神经元密度分别为83.3±7.5、84.3±5.7、45.7±4.0及197.4±11.8、185.2±11.2、99.1±5.8(个/0.1mm2,x±s)。3组各自再灌流不同时间点缺血脑区以上5种指标的差异均有统计学意义(P<0.05～0.001);C组再灌流各时间点缺血脑区以上5种指标与A组及B组对应时间点比较,差异也均有统计学意义(P<0.05～0.001),但A、B两组间比较差异无统计学意义(P>0.05);各组再灌流不同时间点这5种指标的变化彼此间均呈正相关(r=0.630～0.942,P<0.01)。各组缺血再灌流脑区表达PARP的细胞主要是神经元,但3组间比较其密度差别不大。结论再灌流激发的caspase3表达和活化异常增加使PARP过度切割灭活,是再灌流导致缺血脑区受损神经元凋亡的重要分子机制;z DEVD fmk可通过抑制caspase3活性和自活化,减少PARP切割灭活,阻止受损神经元凋亡。     

端粒酶RNA反义核酸降低鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平

目的:研究端粒酶活性抑制后鼻咽癌细胞p53蛋白表达水平的变化。方法:脂质体介导端粒酶反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫组化法检测端粒酶逆转录酶(hTRT)和p53蛋白表达水平。结果:端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量依赖性,流式细胞仪检测出现凋亡峰,反义寡核苷酸组hTRT和p53蛋白表达水平显著低于其它处理组及空白对照组(P＜0.01)。结论:端粒酶RNA反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性后可降低p53蛋白表达水平。     

骨形成蛋白-7对人肾小管上皮细胞株HK-2凋亡的影响

研究不同浓度的骨成形蛋白 7(BMP 7)对人近曲小管上皮细胞株HK 2凋亡的影响并初步探讨其可能的机制。应用Hoechst 332 5 8荧光染色、DNA电泳检测凋亡细胞的形态学和生化改变 ,流式细胞仪定量检测细胞的凋亡率 ,并观察凋亡特异性蛋白酶Caspase 3活性变化的情况。结果显示 ,HK 2细胞加入 1 0ng/mlTGF β处理 2 4h后 ,可明显抑制细胞生长并诱导细胞凋亡 ,呈现明显的凋亡形态学改变 ,胞核或核质内可见浓度致密的颗粒状荧光 ,DNA电泳呈现典型的“梯形条带” ,而预先加入 5 0ng/ml、 1 0 0ng/mlBMP 7共处理 2 4h后 ,可减轻TGF β对细胞的抑制作用 ,凋亡细胞亦减少 ,Caspase 3蛋白酶活性明显下降 ,细胞凋亡率下降。提示BMP 7对人肾小管上皮细胞凋亡的具有抑制作用 ,可能是通过抑制Caspase蛋白酶活性而实现的     

应用VPA调节组蛋白乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase的影响

目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)调节染色体组蛋白低乙酰化修饰对肿瘤细胞Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达及活性的影响,同时通过检测VPA与Caspase3、Caspase8、Caspase9特异性抑制剂协同作用后细胞凋亡的变化加以验证.方法:应用0.75~4.0 mmol/L VPA干预肝癌细胞HepG2、胃癌细胞BGC-823、乳腺癌细胞MCF-7 48小时后,流式细胞术分析细胞凋亡的变化;分光光度法检测Caspase3、Caspase8、Caspase9活性;流式细胞仪间接免疫荧光法定量分析Caspase3、Caspase8、Caspase9蛋白表达.结果:0.75~4.0 mmol/L VPA干预48小时后,FCM分析可见HepG2、BGC-823、MCF-7细胞凋亡率显著增加,与对照组比较差异有显著意义(P<0.001)并且呈剂量依赖趋势;HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达均被明显上调、活性升高,与对照组相比有显著差异(P<0.001);Caspase8活性及蛋白表达在HepG2、MCF-7细胞未见明显改变,BGC-823细胞仅轻度增加.VPA与Caspase3、9相应特异性抑制剂共同作用后,Caspase3、Caspase9活性被抑制,细胞凋亡率较VPA单独干预组显著降低(P<0.005);VPA与Caspase8特异性抑制剂共同作用组细胞凋亡率与VPA单独作用组比较无明显变化(P>0.05).结论:应用VPA干预组蛋白乙酰化修饰对HepG2、BGC-823、MCF-7细胞Caspase3、Caspase9蛋白表达及活性可起明显的调控作用;对Caspase8的调控作用则随肿瘤细胞来源及表型的不同而有所差异,但总体趋势不明显.     

Caspase 3反义核酸阻抑Aβ25～35诱导的细胞凋亡的研究

目的 :设计、合成Caspase 3mRNA反义寡核苷酸 ,并筛选出能阻抑Aβ2 5～ 3 5诱导的PC 12细胞凋亡的有效片段。方法 :针对Caspase 3mRNA不同区域设计出一系列 17～ 18 mer反义寡核苷酸 ,用脂质体导入PC 12细胞内 ,并用Aβ2 5～ 3 5诱导细胞凋亡。用AnnexinⅤ FITC/PI复染、流式细胞术检测观察凋亡早期细胞变化情况。结果 :针对Caspase 3mRNA编码起始区的反义寡核苷酸片段 (ASODN2 ,-6～ 12 ,5’ GTTGTTGTCCATGGTCAC 3’)导入PC 12细胞后 ,在Aβ2 5～ 3 5诱导下 ,AnnexinⅤ /PI复染、流式细胞仪检测见早期凋亡细胞较对照组及其它反义寡核苷酸组明显减少 (P <0 .0 5 ) ;且导入后Aβ2 5～ 3 5诱导凋亡细胞数与无诱导组相比未见明显增多 (P >0 .0 5 )。结论 :1.Caspase 3在Aβ2 5～ 3 5诱导的PC 12细胞凋亡中起重要作用 ;2 .Caspase 3mRNA的反义寡核苷酸片段 5’ GTTGTTGTCCATGGTCAC 3’能有效阻止Aβ2 5～ 3 5诱导的PC 12细胞凋亡     

hTR反义寡核苷酸对不同鼻咽癌细胞生长分化的影响

目的 :研究端粒酶反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 :脂质体介导反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株 ,用细胞体外增殖实验、免疫组织化学S P法 ,观察细胞生长分化的变化情况。结果 :针对端粒酶RNA模板区的反义寡核苷酸可抑制CNE1和CNE2Z细胞的增殖并呈剂量和时间依赖性 ,反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达高于其它处理组及空白对照组 (P <0 0 1) ,细胞形态趋向分化成熟。结论 :端粒酶反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞的生长 ,并促进细胞分化。     

汉黄岑素通过调节P53 信号通路增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性

目的:探究汉黄岑素增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性的作用机制。方法:体外培养CC细胞株,建立顺铂敏感性的CC细胞株CaSki/DDP并检测CaSki和CaSki/DDP的IC_(50)值,分为:空白对照组(Control)、贝伐单抗组(BVZ 2.5μg/ml)、顺铂组(DDP 10 mg/L)、低剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 5μmol/L)、中剂量汉黄岑素组(DDP10 mg/L+WG 10μmol/L)、高剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 20μmol/L)、P53抑制剂组(DDP+PFT-α)和汉黄岑素+P53抑制剂组(DDP+WG 20μmol/L+PFT-α)。使用CCK8检测细胞生长;使用蛋白质印迹法检测Ki67、PCNA Bcl-2、Bax、cytC、Caspase3、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、P62的表达水平;流式细胞术分析检测细胞凋亡;使用免疫荧光检测自噬LC3核转位;使用蛋白印迹法检测P53水平;使用P53抑制剂Pifithrin-α处理后,使用蛋白印迹法、CCK8、流式和免疫荧光检测P53水平和细胞生长、凋亡、自噬情况。结果:宫颈癌细胞株CaSki/DDP的IC_(50)值为50 mg/L;相比空白对照组,贝伐单抗组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平和细胞存活率显著降低(P0.05),Bax、cytC、Caspase3表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P0.05);相比顺铂组,使用汉黄岑素处理各组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平、细胞存活率显著降低,Bax、cytC、Caspase3表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性;相比P53抑制剂组,汉黄岑素+P53抑制剂组P53宫颈癌细胞凋亡率、单个细胞内LC3+荧光点数显著升高(P0.05),宫颈癌细胞存活率显著降低(P0.05)。结论:汉黄岑素可以通过调节P53信号通路增强宫颈癌细胞的自噬和凋亡,抑制其增殖,实现增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性,且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

高三尖杉酯碱通过激活Caspase-3诱导T-淋巴细胞白血病细胞Molt-3凋亡

目的：研究高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）诱导Ｔ－淋巴细胞白血病细胞凋亡的作用机制。方法：采用流式细胞仪等技术对ＨＨＴ诱导Ｔ－淋巴细胞白血病细胞（Ｍｏｌｔ－３）的凋亡作用进行探讨。结果：ＨＨＴ诱导Ｍｏｌｔ－３凋亡,凋亡率与作用浓度和时间成正比;细胞被阻滞在Ｇ１期。ＨＨＴ作用２４ｈ后细胞内Ｃａｓｐａｓｅ－３活性增高,Ｃａｓｐａｓｅ－３抑制剂Ｚ－ＤＥＶＤ－ＦＭＫ能特异地阻断ＨＨＴ对Ｍｏｌｔ－３凋亡的诱导;Ｆａｓ     

阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞的凋亡诱导作用

目的:探讨阿司匹林诱导同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R/CNE2凋亡的作用及其机制。方法:采用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测并比较阿司匹林对CNE2R和CNE2细胞活力、细胞凋亡及凋亡相关蛋白procaspase-3、cleaved caspase-3、procaspase-9、procaspase-12、PARP、cleaved PARP、Bcl-2和Bax,以及PI3K p110α、Akt和p27蛋白水平的影响。结果:阿司匹林抑制同源不同辐射抗拒能力细胞CNE2R/CNE2的活力(阿司匹林对CNE2细胞作用24、48和72 h的IC50分别为6.18、3.92和3.06 mmol/L,对CNE2R细胞作用24、48和72 h的IC50分别为7.05、3.90和2.20 mmol/L,两者差异无统计学显著性)。阿司匹林作用48 h后,CNE2R细胞凋亡率升高,明显高于CNE2细胞(P0.05)。阿司匹林作用48 h后,CNE2和CNE2R细胞中procaspase-3、procaspase-9、procaspase-12和PARP的蛋白水平降低,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平升高(P0.05);PI3K p110α和Akt蛋白水平下降,Bcl-2水平降低,Bax水平升高,Bcl-2/Bax比值降低,p27水平升高(P0.05)。结论:阿司匹林对同源不同辐射抗拒能力鼻咽癌细胞株CNE2R和CNE2具有同等细胞活力抑制作用;并且可以诱导细胞凋亡,且对抗辐射细胞株CNE2R的凋亡诱导作用更明显。阿司匹林的抗癌作用可能与其影响PI3K/Akt信号通路及其下游蛋白的水平有关。     

氧葡萄糖剥夺-再恢复后抑制小胶质细胞TLR9激活对神经元的保护作用

目的:观察氧葡萄糖剥夺-再恢复(OGDR)后小胶质细胞BV-2 Toll样受体9(TLR9)激活对神经元凋亡的影响。方法:对BV-2细胞或TLR9-siRNA转染的BV-2细胞进行OGDR处理4 h后,将细胞上清添加至OGDR处理4 h的小鼠原代皮层神经元中,继续正常培养24 h后,倒置显微镜下观察神经元形态变化,TUNEL染色检测神经元凋亡,Western blotting检测神经元caspase-3蛋白的表达。实验分为正常BV-2组、negative control-siRNA组、TLR9-siRNA组、OGDR组、OGDR+NC-siRNA组、OGDR+TLR9-siRNA组和对照组(神经元OGDR后不添加BV-2细胞上清)。结果:OGDR后神经元胞体肿胀,折光性下降,出现空泡样变,轴突变细、扭曲、断裂。TUNEL染色各组均可见绿染凋亡小体。与对照组比较,其它组的caspase-3蛋白表达升高(P0.05);与正常BV-2组比较,OGDR组和TLR9-siRNA组的caspase-3蛋白表达升高(P0.05);OGDR+TLR9-siRNA转染组与TLR9-siRNA转染组和OGDR组比较,caspase-3蛋白表达下降(P0.05)。结论:OGDR后BV-2细胞TLR9激活致神经元凋亡增多,caspase-3蛋白表达升高;抑制TLR9表达后,神经元损伤减轻。     

SARI基因促进急性髓性白血病细胞凋亡机制的探讨

目的：通过慢病毒载体过表达SARI（Suppressor of AP-1,regulated by IFN）基因,探讨SARI基因促进急性髓性白血病（Acute myeloid leukemia,AML）细胞凋亡的分子机制。方法：构建SARI基因过表达的慢病毒载体,感染AML细胞HL-60和NB4,应用实时荧光定量PCR和Western blot对感染后细胞进行过表达的鉴定。两株AML细胞均设空白对照组（CON组）、空载体对照组（NC组）及SARI组,应用Western blot检测SARI过表达后两株AML细胞组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bcl-xl、Bax和凋亡途径相关蛋白CytoC、Caspase8、Caspase9、Caspase3、Actived-Caspase3、PARP的表达变化。结果：SARI组细胞的SARI mRNA和蛋白表达水平均显著高于CON组和NC组（P＜0.05）,表明SARI过表达成功。SARI过表达的HL-60和NB4细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl表达均下调,促凋亡蛋白Bax表达上调。CytoC表达增加,Caspase8、Caspase9、Caspase3剪切激活,Actived-Caspase3上调,PARP下调,PARP剪切体上调。结论：SARI基因促进AML细胞凋亡可能是通过激活外源性凋亡途径及与外源性凋亡途径交叉的内源性凋亡途径。     

维生素C对MPP+致帕金森病细胞模型中PC12细胞凋亡的影响

目的　探讨维生素C（Vit C）对MPP+致帕金森病细胞模型中PC12细胞凋亡的影响及作用机制。 方法　培养神经细胞株PC12细胞,将其分为单纯帕金森病组（MPP+组）和Vit C治疗组（Vit C组）,Vit C组加入250 μmol/L Vit C孵育6 h,之后向两组均加入100 μmol/L MPP+,在体外模拟帕金森病的神经损伤,孵育12 h后,利用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测LDH变化;TUNEL法检测鼠脑神经元凋亡情况,并利用Western-blot检测神经元中c-Caspase3和Caspase表达情况。 结果　与MPP+组比较,Vit 　C能明显减轻帕金森病PC12细胞凋亡,显著改善细胞生存环境; TUNEL检测结果显示,Vit C能明显减少PC12细胞凋亡。同时,Western-blot结果提示Vit C下调c-Caspase3蛋白的表达,组间差异有统计学意义( P<0.05)。 结论　Vit C可以直接抑制c-Caspase3表达,减少细胞凋亡,可能对帕金森病造成的细胞凋亡具有一定的拮抗作用。     

钙依赖中性蛋白酶和半胱天冬酶-3在辛伐他汀诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的:观察辛伐他汀(simvastatin)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡及可能参与其中的凋亡信号通路的研究, 探讨他汀类药物可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用机制。方法:体外培养VSMC, 荧光分光光度仪检测钙依赖中性蛋白酶(calpain)活性;Western印迹杂交法检测半胱天冬酶-3(caspase-3)的激活;基因组DNA凝胶电泳、流式细胞仪PI/AnnexinV双重染色等鉴定细胞凋亡。结果:30μmol/Lsimvastatin刺激8h后, calpain活性显著高于对照组(P<0.05, n=4), 12h后达对照的3倍以上(P<0.01);caspase-3的20kD活性亚基在30μmol/Lsimvastatin刺激12h后直至48h均可检测到, 而对照组及simvastatin刺激2h均未见caspase-3的20kD条带;calpain特异性抑制剂PD150606可显著抑制simvastatin诱导的VSMC凋亡, 100μmol/LPD150606与30μmol/Lsimvastatin共同刺激细胞24h后, 流式细胞仪检测凋亡率为9.5%±1.9%, 显著低于simvastatin单独刺激的24.2%±1.7%(P＜0.01, n=4)。DNA梯度现象亦被抑制。同时PD150606也能有效抑制simvastatin诱导的caspase-3激活。结论:Simvastatin诱导大鼠VSMC凋亡可能是通过calpain并进而激活caspase-3来达到的。     

小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其机制研究

 目的:探讨小檗碱与育亨宾对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的影响及其作用机制。方法: 采用盲肠结扎穿孔（CLP）构建小鼠脓毒症模型,分为假手术（sham）组、CLP组、CLP+小檗碱组、CLP+育亨宾组、CLP+小檗碱与育亨宾合剂组。CLP术后2 h灌胃给予相应药物,20 h后取脾脏,用TUNEL和流式细胞术检测小鼠脾细胞凋亡,酶荧光法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9的活性变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Fas、Bim、Bcl-2和Bax的表达。结果: (1) CLP组脾脏TUNEL阳性细胞百分率显著高于sham组（P＜0.05）,CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组凋亡细胞百分率显著低于CLP组（P＜0.05）。(2) 流式细胞仪检测显示CLP组凋亡的脾细胞及T淋巴细胞明显多于sham组(P＜0.05),CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组凋亡的脾细胞及T淋巴细胞明显少于CLP组 (P＜0.05) 。(3) CLP+育亨宾与小檗碱合剂组、CLP+育亨宾组脾细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性均低于CLP组(P＜0.05);而CLP+小檗碱组脾细胞caspase-9活性也低于CLP组 (P＜0.05)。(4) CLP+育亨宾与小檗碱合剂组胞浆Fas、Bim、Bax表达均低于CLP组,CLP+育亨宾组胞浆Fas表达低于CLP组,CLP+小檗碱治疗组胞浆Bim、线粒体Bax表达均低于CLP组。结论: (1) 小檗碱与育亨宾合用可通过阻断内、外源性凋亡途径抑制脓毒症小鼠脾细胞凋亡,特别是T淋巴细胞凋亡。(2) 育亨宾主要通过抑制Fas的表达、进而阻断内、外源性凋亡途径减少脓毒症诱导的脾细胞凋亡。(3) 小檗碱可抑制脓毒症小鼠脾细胞线粒体凋亡途径,但对脓毒症小鼠脾细胞凋亡的抑制作用并不明显。     

Rabies virus-induced apoptosis involves caspase-dependent and caspase-independent pathways

Previously, it has been shown that the laboratory attenuated rabies virus CVS-B2C, but not the wild-type virus SHBRV, induces apoptosis in mice and the induction of apoptosis is mediated by viral glycoprotein. Induction of apoptosis by CVS-B2C limits the spread of the virus in the CNS. In the present study, we characterized the pathways by which CVS-B2C induces apoptosis. BSR cells were infected with CVS-B2C or SHBRV and harvested at different time points for detection of apoptosis by immunofluorescence and flow cytometry. Apoptosis was detected only in cells infected with CVS-B2C, but not SHBRV. Caspase activity and expression of several apoptotic proteins were analyzed by fluorometric assay and Western blotting. Activation of caspase-8 and -3, but not of caspase-9, was observed in CVS-B2C-infected cells. In addition, the level of expression of Apaf-1 did not change. Furthermore, PARP was cleaved confirming activation of downstream caspases. All these data suggest that CVS-B2C infection activates the extrinsic, but not the intrinsic, apoptotic pathway. In addition, AIF, a caspase-independent apoptotic protein was up-regulated and translocated from the cytoplasm to the nucleus post-infection, suggesting that apoptosis induced by CVS-B2C also involves the activation of a caspase-independent pathway.