不同ELISA法对筛选单克隆抗体的影响

单克隆抗体(McAb)的筛选方法要求敏感性高、特异性强、快速简便。ELISA目前已成广为接受的一种筛选方法,其中以固相抗原筛选相应的McAb最常用。但一些文献指出当抗原吸附于固相载体表面时,那些位于和固相载体结合处的某些抗原决定簇由于未能暴露,因而就不可能筛选出识别这些抗原决定簇的McAb。我们在抗CEA McAb的筛选中,为了避免上述可能发生的漏选,采用固相多克隆CEA抗体,结合CEA抗原后,再用于筛选McAb的方     

吸附于聚苯乙烯上的捕捉抗体的物理及功能特性

以ELISA法为典型例子的固相免疫测定法(SPI)已成为医学领域的常规方法。最常用的固相支持物为96孔聚苯乙烯微滴定板。在SPI中,一种反应物固定于微滴定板上孔的内表面,通常采用被动吸附的方法。认为反应物与板的稳定结合依赖于二者疏水性相互作用。但在30年前就证明,蛋白质被动吸附于合成物的表面可导致其构象改变。     

B7-1单克隆抗体固相包被管的制备

Catt和Treger首次报道了物理吸附法制备固相抗体包被管并用于放射免疫分析。固相抗体包被管是将抗体包被在固相载体聚苯乙烯试管上,免疫反应时免疫复合物生成在固相表面,通过洗涤将未结合的部分去除而达到分离效果。其优点为：操作简便;分离完全、非特异结合低;     

膜渗滤亲和层析法的建立及在纯化尿HCG中的初步应用

作者报道一种亲和层析法并将其用于纯化人尿绒毛膜促性腺激素（HCG）。该方法是采用硝酸纤维素膜（NCM）作固相支持物吸附的抗体,用负压使待提液渗滤 NCM,在滤过的同时待提液中的相应抗原不断结合于 NCM上预吸附的抗体,再将抗原从NCM上解离,从而得到高纯度的抗原。结果表明用以提纯的HCG纯度达PAGE电泳单条带,免疫活性为9000IU/mg。故认为该法简便有效,可用于亲和层析纯化蛋白质。     

一种将低分子量半抗原直接结合在酶标板上的方法

在酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)中固定半抗原通常采用与蛋白分子相偶联或共价结合到固相载体上。这样的步骤既费时也可能影响其抗原性 ,导致不适当的抗原呈逆和定位 ,这里介绍一种将低分子量半抗原直接结合到聚苯乙烯板上的方法 :以Ｐ 氨基 Ｄ 苯丙氨酸与固相支持物ＥＬＩＳ     

固相放射免疫法测定单纯疱疹病毒Ⅱ型单克隆抗体

随着杂交瘤技术的发展和应用,测定杂交瘤细胞分泌的特异性抗体需要微量敏感而快速的方法,放射免疫测定可以满足这一要求。基于蛋白质能紧紧地吸附于某种类型的塑料上,固相放射免疫法最适合于测定细胞融合之产物。本文建立~(125)Ⅰ标记兔抗鼠免疫球蛋白固相放射免疫双抗原夹心法,对单纯疱疹病毒Ⅱ型单克隆抗体(抗HSV-2 McAb)的效价及特异性进行分析。     

多肽转移电泳时间探讨

转移电泳是将凝胶电泳分离的结果 ,通过电泳装置转移到固相支持物 (如硝酸纤维素膜 )上的一种电泳技术 ,可用于ＤＮＡ片断的分析 (Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ)、ＲＮＡ的分析 (Ｎｏｒｔｈ ｅｒｎｂｌｏｔ)和蛋白质的研究 (Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ)。由于转移到固相支持物上的样品可进行多种分析 ,且操作简便、灵敏度高和特异性强 ,目前广泛应用于生物化学、分子生物学和免疫学等研究领域。对低分子量蛋白质的转移电泳条件已趋成熟 ,且应用很多 ,而小分子多肽 (Ｍｒ在 2 5 0 0～ 16 0 0 0 )的转移电泳报道较少。又因在一定凝胶孔径下 ,Ｍｒ小…     

自制琼脂糖、4%琼脂糖珠及溴化氰

免疫吸附亲和层析法是将抗原或抗体共价偶联在固相支持物活化的琼脂糖珠上做成免疫吸附柱,来分离纯化相应的抗原或抗体。该固相的生物高分子可反复使用,是其很大的优点。但是所用试剂常为进口,为节省外汇,发扬自力更生精神,我们依本实验室条件分别自制了琼脂糖、4％琼脂糖珠及溴化氰,并用于甲胎蛋白的纯化,取得了良好的效果。 琼脂糖的制备:取广东汕头生产的生物     

微型-放射变应原吸附试验(mini-RAST):与测定IgE类抗体的其他类型RAST的比较

在做RAST时利用了不同的固相支持物做为变应原的载体。本文的研究是将变应原偶联到微晶型纤维素上,并将固相载体上的变应原和抗IgE的用量分别降到原来用量的1/10和1/4。结果提高了测定数种变应原(包括间链孢霉和黑麦草花粉提取物)IgE抗体的敏感性。作者将此方法定名为微型-RAST,以区别于应用较多量变应原和抗-IgE的大型-RAST。本实验共比较了三种不同类型的RAST:常规应用的RAST即大型-RAST、减少变应原和抗原用量的微型-RAST和将变应原偶联到纸片上的纸片     

试管固相放射免疫技术研究中有关问题的探讨

本文报告了试管固相放射免疫分析技术的最新研究进展及评价，其中主要包括固相载体活化，以共价键结合取代物理吸附，抗体或抗原固相制备最佳条件和新型测定模式等。研究结果表明，试管固相是一种换代技术，为实现分析技术自动化创造了条件。     

用菌体抗原筛选霍乱弧菌单克隆抗体的ELISA

<正> 众所周知,ELISA常用作筛选和鉴定可溶性抗原单克隆抗体(McAb)的常规方法。但对颗粒性抗原的淋巴细胞杂交瘤产生的McAb,则缺少准确、敏感、微量、快速的筛选和鉴定的检测系统。Stocken(1979)Nachamkin(1981)曾将细菌等细胞性抗原贴附于微孔塑料板上进行固相免疫测定。我们在     

碱性磷酸酶免疫斑点法的应用

免疫斑点法(Dot Immunobinding As-say,DIBA)近年来已广泛用于免疫学上的各种测定。其原理是利用硝酸纤维膜(NC)为固相支持物,进行抗原抗体反应。结合在NC上的抗体——酶结合物通过将底物分解成不溶性产物而沉积,形成斑点。待测抗体(或抗原)含量的高低可通过斑点颜色的深浅判断。近年来常用的是辣根过氧     

DNA芯片技术原理及在遗传学研究中的应用

人类基因计划的提出促进了许多新的分子生物学技术的产生和发展，ＤＮＡ芯片技术是在固相支持物上寡核苷酸联合合成，照相平版印刷样模具制造、共聚焦显微镜的荧光自动扫描等技术基础之上发展起来的，能够在且水平进行基因表达研究     

基因芯片技术在医学研究中的应用

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上 ,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于基因表达谱的分析、突变检测 ,克隆选择和文库筛选等研究工作 ,同时在人类疾病的检测 ,预防等方面也具有广阔的应用价值 ,在未来的生命科学领域中必将发挥重要作     

CEA免疫放射分析法固相载体的比较

<正> 免疫放射分析(Immunoradfometricassay,简称IRMA)多采用固相分离。本文以CEA免疫放射分析法比较了包括聚苯乙烯试管、聚苯乙烯珠及羟基微球二种物理吸附一种共价偶联固相载体的优劣。     

用酶标Ig交叉反应性单抗作间接ELISA检测肾综合征出血热(HFRS)病毒抗体

<正> 自Tkachenko等和Gavrilovskaya等应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HFRS病毒抗体以来,ELISA在HFRS的诊断与血清流行病学调查上的应用得到不断的发展。1986年,柴瑞珍等建立了ELISA抗IgM固相法检测人血清中的IgM抗体,但若用于不同种属血清的检测则需选用不同的固相包被抗体。本文在制备了Ig交叉反应性单抗(McAb)的基础上,制备了可用于人、猪、兔血清IgG检测的酶标McAb,建立了检测人、猪、兔血清中HFRS病毒抗体的ELISA间接法。     

细胞培养酶免疫法在检测和分析大肠癌细胞McAb中的应用

由于细胞表面抗原的提纯较难,检测抗细胞类抗原McAb常采用全细胞作抗原。一些学者多采用细胞悬液离心干燥法制备全细胞固相抗原,用免疫酶法进行McAb检测。由于细胞悬液包底,不均匀,以致影响结果的观察。本文报道在制备抗大肠癌HR_(8348)细胞McAb中,将HR_(8348)细胞直接培养于微板孔中,利用其贴壁单层生长的特性,制成包被均     

基因芯片技术

基因芯片技术是同时将大量的探针分子固定到固相支持物上,借助核酸分子杂交配对的特性对DNA样品的序列信息进行高效的解读和分析。它可用于基因表达谱的分析、突变检测、多态性分析、基因测序和基因组文库作图等研究工作,同时在人类疾病的检测、预防等方面也具有广阔的潜在应用价值,在未来的生命科学领域中必将发挥重要的作用。     

单克隆抗体双夹心纸模金银染色法检测疟疾循环抗原的初步研究

本文首次报道用McAb双夹心纸模金银染色法检测疟疾病人血清中的疟原虫循环抗原获得成功。将McAb吸附于硝酸纤维膜上,与待检血清反应后加入胶体金标记的第二McAb,再置银显影液中显影,阳性反应呈黑色斑点。用本法检测间日疟疾和恶性疟疾病人血清各15份,阳性率分别为86.6％和     

单克隆抗体的免疫测定技术

抗血清是多克隆性的不均一抗体,单克隆抗体则与其相反,它的化学和免疫学性状是均一的,对一种抗原决定簇有很高的特异性.而且可以长期连续获得同一单克隆抗体(McAb).下面介绍应用McAb设计的新免疫测定技术.一、双侧同时结合法(Simultaneoustwo Site):双侧结合法(夹心法)一般是被检材料(包括被检抗原)和固相抗体及标记抗体的反应分两阶段进行.用针对抗原上不同的抗原决定簇的两种McAb同时与